臨床PCR檢測的標準化 衛(wèi)生部臨床檢驗中心李金明 標準化 standardization 的概念 Standard 文字Standards 物質(zhì)Standardization 通過對測定方法和檢測程序的規(guī)范化 使測定結(jié)果的量值可溯源至同一標準物質(zhì)或參考方法 從而使測定結(jié)果在不同方法 不同試劑及不同的實驗間具有可比性 標準物質(zhì) 測定方法和檢測程序標準化之間的關(guān)系 為什么要進行標準化 通過標準化以改善實驗室測定的準確度 從而提高不同的實驗室間結(jié)果的可比性 缺乏標準化 則不同試劑 不同方法 不同實驗室間的測定結(jié)果就無法一致 沒有可比性 也無法對一種方法 一種試劑進行適當?shù)脑u價 標準化的先決條件 檢測物的同一性標準品的同一性 標準化組織 世界衛(wèi)生組織 WHO 生物學(xué)標準化專家委員會 TheExpertCommitteeonBiologicalStandardisation ECBS 負責建立生物物質(zhì)的國際標準及參比材料 國家生物學(xué)標準和質(zhì)控物研究所 NationalInstituteforBiologicalStandardsandControl NIBSC WHO通過其提供國際標準品 一些區(qū)域和地區(qū)性組織 美國CDC CAP NIH國際性科學(xué)協(xié)會 IFCC 國家臨床實驗室標準化委員會 NationalCommitteeofClinicalLaboratoryStandardisation NCCLS 以及美國和加拿大臨床化學(xué)協(xié)會 AmericanSocietiesforClinicalChemistryandCanadianSocietiesforClinicalChemistryandCanadian AACC和CSCC 等 組織編寫一些臨床檢驗的導(dǎo)則等文件 標準品和質(zhì)控品 1 可提供標準品的國際標準化組織有 WHO生物學(xué)標準化專家委員會 ECBS 英國國家生物學(xué)標準和質(zhì)控物研究所 NationalInstituteforBiologicalStandardsandControl NIBSC 美國CDC和CAP 國家衛(wèi)生研究所 NIH IFCC等 國內(nèi)有中國藥品生物制品檢定所 衛(wèi)生部臨床檢驗中心 標準品和質(zhì)控品 2 在美國臨床PCR檢驗試劑方法用于臨床必須有FDA批準 在德國監(jiān)督機構(gòu)為INSTAND 在國內(nèi)試劑批準文號由SFDA負責 僅使用標準品并不能保證PCR測定結(jié)果的可比性 但其在保證PCR測定質(zhì)量中的重要性卻是不可替代的 標準品和質(zhì)控品 3 標準品和質(zhì)控品的功能 可用作臨床檢測的校準物 可用來評價試驗的有效性 作為室內(nèi)質(zhì)控樣本 作為室間質(zhì)評樣本 國際標準品分級 可分為第一 第二和第三等三個等級 一級標準數(shù)量有限 可使用10 20年 是凍干品 內(nèi)含載體蛋白 一級標準可用來校準第二和第三級標準 國際標準品 IS 中作為第一級標準 二級標準可用來維持校準 國內(nèi)標準品分級 一級和二級 標準品和質(zhì)控品 4 標準品的單位 病毒核酸國際標準品均以IU L表示 有關(guān)標準品單位和溯源的問題 長度單位的確定和溯源舉例 標準品定值的測定方法 參考方法 決定性方法 Definitivemethod 是一個具有高精密度及沒有系統(tǒng)偏差的參考方法 參考方法 Referencemethod 應(yīng)有低測定下限 不受非特異干擾及不與相關(guān)的化合物發(fā)生交叉反應(yīng) 同時還應(yīng)該容易得到 為保持參考方法的有效性 有必要建立一個參考實驗室的網(wǎng)絡(luò) 國際單位 InternationalUnits 的由來 國際單位 Internationalunits IU 定義 國際標準的應(yīng)用目的是為測定提供一個通用的標準單位 使用相同的測定生物學(xué)單位來指定標準品或工作校準品的單位 核酸檢測國際標準 項目研制者發(fā)布年編號濃度HBVDNANIBSC199997 746106IU mlHCVRNANIBSC199796 790105IU mlNIBSC200596 798105IU mlHIV 1RNANIBSC199897 656105IU 瓶HAVRNANIBSC200300 560105IU mlB19DNANIBSC200099 800106IU ml 病毒核酸檢測國家標準 項目研制者發(fā)布年編號濃度HBVDNANCCL2005GBW E 0900311 03 106IU mlNCCL2007GBW09151HCVRNANCCL2005GBW E 0900321 29 105IU mlNCCL2007GBW09152 測定方法的標準化 一個測定方法的組成 1 核酸提取方法 2 擴增及產(chǎn)物分析方法 3 如果靶核酸 還有反轉(zhuǎn)錄過程 核酸提取方法 對抑制物去除的有效性 簡便性 擴增及產(chǎn)物分析方法 實時熒光PCRPCR ELISA等 擴增檢測條件 循環(huán)條件 試劑等 的理想化 內(nèi)標的設(shè)置 假陰性質(zhì)控的最有效的方法反轉(zhuǎn)錄試劑的效率