摘要 本研究通過對不同大熊貓圈養(yǎng)單位的人工乳配方，以及黑熊，成都麻羊等動物 初乳的初步分析，選定了大熊貓代用乳配方；檢測了由大熊貓母親育幼的大熊貓初 生幼仔腸道菌群的建立及組成情況；應(yīng)用生化的方法測定了大熊貓幼仔血清中y 一 球蛋白含量：將收集到的健康成年大熊貓血清凍干，并進行了凍干血清微生物培養(yǎng)、 動物口服等安全試驗。為提高大熊貓初生幼仔免疫力的研究奠定了一定的基礎(chǔ)。 研究結(jié)果： 1 、通過對圣迭哥動物園、北京動物園以及成都大熊貓繁育研究基地的人工乳的配方， 以及黑熊成都麻羊和大熊貓初乳中粗蛋白、粗脂肪、乳糖、礦物質(zhì)元素的含量進行 分析，通過比較檢測結(jié)果，認為成都大熊貓繁育研究基地的人工乳配方比較適合大 熊貓幼仔。此配方為：山羊初乳：熊貓奶粉( p a n d am i l k ) ：去離子水= 3 ：l ：6 ( 質(zhì)量 比) 2 、大熊貓幼仔腸道f 常菌群與其它動物相比比較特殊，厭氧菌的檢出率和含量相對 較低。l 一3 j 同齡大熊貓幼仔腸道正常菌群中以大腸埃希氏菌、糞鏈球菌為主。這期 間糞便中菌群組成為較單純，基本沒有什么變化，在2 5 同齡時才檢測到乳桿菌，但 僅是微量。截止2 月齡沒有發(fā)現(xiàn)雙歧桿菌，腸道菌群也基本沒有變化。 3 、雙縮脲法測定大熊貓初生幼仔血清中總蛋白量，電泳分析不同蛋白比例，發(fā)現(xiàn)y 一球蛋白含量極低，截止1 9 周齡最高僅為1 9 9 1 ，為成年大熊貓的2 2 6 2 ，y 一球 蛋白僅占血清總蛋白4 1 ，而成年大熊貓此數(shù)據(jù)為1 2 0 9 ：1 3r 齡死亡的一只幼 仔y 一球蛋白含量僅為0 4 9 1 ，為成年大熊貓的4 7 6 ，y 一球蛋白占血清總蛋白 1 5 ，證明大熊貓初生幼仔免疫力低下。根據(jù)檢測結(jié)果確定了計算大熊貓幼仔添加 成年大熊貓血清量的公式：添加劑量：7 5 m l l o o g 體重幼仔體重5 0 x6 m g m l - 7 - 5 0 8 ，4 m g m l 4 、健康成年大熊貓的血清凍干處理后進行微生物培養(yǎng)、哺- l 4 , 鼠口服等安全試驗， 證明口服凍干后的血清不會造成試驗動物腹瀉或發(fā)育不良等負面影響。 關(guān)鍵詞：大熊貓初生幼仔人工乳腸道正常菌群凍干血清免疫添加劑 前言 營養(yǎng)與免疫是營養(yǎng)學(xué)與免疫學(xué)相結(jié)合的一門新興學(xué)科。營養(yǎng)素具有免疫功能是 本世紀營養(yǎng)學(xué)、醫(yī)學(xué)及免疫學(xué)極富成就的發(fā)現(xiàn)之一。在此方向上人們投入的研究力 量不斷加強，隨著研究的深入，人們對能量與免疫、脂類與免疫、礦物質(zhì)微量元素 與免疫、維生素與免疫等問題都有了較為深刻的認識，并應(yīng)用于我們的生活中，對 提高人類生活質(zhì)量起了重要作用。同時應(yīng)用于家畜的飼養(yǎng)實踐中，對防治應(yīng)激、預(yù) 防疾病、提高畜禽生產(chǎn)力方面也起到了重要作用。營養(yǎng)、免疫和感染三者的互作關(guān) 系是動物機體健康和營養(yǎng)狀態(tài)的核心。主動免疫需要大量的能量和蛋白質(zhì)參與免疫 活性細胞的分裂分化和效應(yīng)性分子免疫球蛋白的合成( d r e w ，1 9 9 9 ) 。因此，動物機 體的營養(yǎng)狀態(tài)對啟動強而有效的免疫應(yīng)答至關(guān)重要。縱使輕微的某單一營養(yǎng)成分的 缺乏也會嚴重損害免疫功能。免疫反應(yīng)也影響到動物機體的營養(yǎng)需要，除合成淋巴 細胞時蛋白質(zhì)需要增加養(yǎng)分外，免疫介質(zhì)的釋放也會顯著改變基礎(chǔ)代謝。因此，營 養(yǎng)和免疫是密切關(guān)聯(lián)的互作系統(tǒng)，應(yīng)把二者作為整體，而不是作為互不相干的獨立 因素來研究。 母乳為哺乳動物新生幼仔提供營養(yǎng)和能量來源，能為幼仔的生長發(fā)育提供全面、 均衡的營養(yǎng)，能促進機體功能的成熟。不僅如此，其所含的免疫物質(zhì)、激素、生長 因子、細胞因子等能將母親與初生幼仔在生物化學(xué)、免疫功能之問的聯(lián)系建立起柬， 還能影響胃腸道發(fā)育，對預(yù)防初生幼仔疾病、過敏反應(yīng)等起保護作用，為任何代乳 品所不及，所以母乳是動物初生幼仔包括人嬰兒的最佳天然食物。母乳與新生兒免 疫是一個非?；钴S的研究領(lǐng)域。用功能性免疫球蛋白和其它免疫刺激物質(zhì)對營養(yǎng)成 分平衡的人工乳進行強化，并將這種方法作為新生仔畜的免疫性保護手段，這對提 高動物健康和改善生產(chǎn)性能是- - h p 常有前途的方法。 1 初乳的生物學(xué)意義 初乳通常呈黃色，粘度較大，略偏酸性。泌乳開始后如何劃定初乳的時間范圍， 還很不統(tǒng)一，乳業(yè)生產(chǎn)中習(xí)慣把第一周的牛奶稱為初乳，但現(xiàn)在明顯地傾向于根據(jù) 乳中各組分組成的濃度和活性來區(qū)分初乳和常乳。 新生的哺乳幼仔，胃腸道未發(fā)育完全，消化、吸收機能不健全，體內(nèi)只有非常 有限的糖、脂、維生素和微量元素的貯備，通常缺乏母源抗體和應(yīng)變能力，難以抵 抗環(huán)境因子( 物理的、化學(xué)的和生物學(xué)的) 的作用。而此時的初乳，包含有保證其生 2 存和生長所需的所有物質(zhì)，因此具有獨特的生物學(xué)意義。 概括的說，乳和初乳對于新生哺乳幼仔有三方面的功能：提供能量和生物合 成前體物的營養(yǎng)性功能；提供特異的和非特異的免疫保護的防御機能；傳達母 源神經(jīng)與內(nèi)分泌的調(diào)節(jié)信號功能。因此把乳僅看作是新生哺乳幼仔單純的營養(yǎng)源的 觀點已顯陳舊，特別是初乳在哺乳幼仔生長發(fā)育早期，在為幼仔提供免疫保護和傳 達代謝信息方面有特殊的貢獻?；谶@樣的認識，對初乳的生化性質(zhì)研究以及深度 刀+ 發(fā)成了當(dāng)前的熱點。 2 初乳的成分及作用 2 1 初乳的成分 初乳和常乳的劃分是根據(jù)乳中各組分的濃度和活性。初乳一般指母畜分娩后 3 5 d 所分泌的乳汁，它的化學(xué)成分和物理性質(zhì)都與常乳有很大區(qū)別。母乳作為初生 幼仔唯一的營養(yǎng)源要為幼仔的發(fā)育提供能量、蛋白質(zhì)、脂肪酸、維生素和礦物質(zhì)元 素等。因為初生幼仔的消化和調(diào)節(jié)系統(tǒng)尚未發(fā)育完全，并且受出生后新環(huán)境應(yīng)激的 影響，所以初乳含有比常乳高得多的養(yǎng)分，如豐富的維生素和球蛋白等，特別是含 有一些初生動物健康生長所必需的生長因子( 見表1 ) ，這些成分對初生動物接受被動 免疫、被動提高抗病力、促進胃腸道的迅速生長有關(guān)鍵作用。初乳的蛋自質(zhì)、脂肪、 灰分和密度均高于常乳，隨著泌乳期的延長而下降，初乳成分逐漸接近常乳水平( 見 表2 ) ；p h 和乳糖的變化規(guī)律與之正相反。牛初乳中c a 、n a 、m g 、c l 、f e 、z n 、c u 的 含量均高于常乳幾倍，甚至幾十倍，但是k 和p 的含量較常乳低。 2 2 初乳的作用 2 2 1 初乳的營養(yǎng)作用 新生幼仔生長初期，初乳不僅為其提供營養(yǎng)，由于其含有較高濃度的生物活性 物質(zhì)，也成為刺激器官快速生長發(fā)育的重要物質(zhì)之一。b u r r i n ( 1 9 9 5 ) 等的研究表明， 喂初乳可增強仔豬消化能力。喂初乳的犢牛血清總蛋白質(zhì)含量和白蛋白的含量均較 高( d a n i e k ，1 9 9 4 ) 。初乳中的生長因子和激素能調(diào)節(jié)新生幼仔胃腸道發(fā)育，也能調(diào)節(jié) 消化道的消化和吸收功能。b u h h e r 等( 1 9 9 8 ) 的研究表明，初乳使牛小腸絨毛變長，延 長喂初乳的時間，改變了小腸的形態(tài)，提高了小腸的吸收力。 2 2 2 初乳的免疫作用 關(guān)于哺乳動物的大量研究證明，初生幼仔可以通過吃初乳獲得被動的免疫力。 初乳中被確認的免疫物質(zhì)越來越多，如免疫球蛋白、免疫活性細胞及非抗體保護蛋 白等。乳汁中的免疫物質(zhì)對幼仔具有兩種完全不同的保護作用。種是初乳吸收進 入幼仔循環(huán)系統(tǒng)后，提供被動的可以預(yù)防微生物侵入的循環(huán)抗體。第二種是不被吸 收的乳汁，在消化道內(nèi)提供一種被動的能保護腸管疾病的局部免疫力，其中l(wèi) g g 、i g a 和i g m 都具有保護哺乳動物小腸的作用( 李蜀眉1 9 9 9 ) 。初乳中的免疫球蛋白能夠有 效地被新生幼仔吸收與初乳本身的特點及新生幼仔小腸細胞的發(fā)育程度有關(guān)。關(guān)于 這個問題，有些人提出過一些見解( n k r e t e c h m e r ，1 9 8 4 ) ： ( 1 ) 初乳中含有豐富的胰蛋白酶抑制劑，有間接阻止各種蛋白酶水解免疫球蛋白的作 用( t a p p r ，1 9 7 9 ；s a i k k u ，1 9 7 9 ) ； ( 2 ) 免疫球蛋白是糖蛋白，糖可做為外殼對免疫球蛋白起保護作用： ( 3 ) 初乳的緩沖量大，具有減少免疫球蛋白在胃中變性的傾向； ( 4 ) 免疫球蛋白的氨基酸排列順序很特殊，沒有胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶所起 作用的肽鍵。 表1 初乳中某些生k 岡子的含目j j _ ( n g m 1 ) t a b l e it h ea m o u n to f s o m e g r o w t hf a c t o r si nt h ec o i o s t r u m sa n dm i l k s 表2 牛初乳部分成分與常乳的比較( 初乳成分為常乳成分的百分數(shù)) t a b l e2t h e c o m p a r i s o no f c o m p o s i t i o n o f c o l o s t r u m sa n dm i l k 2 3 初乳中免疫球蛋白的功能及來源 初乳和常乳中免疫球蛋白的含量不同( 見表3 ) ，乳中的免疫球蛋白包括i g g 、i g a 和i g m 等。人和兔初乳中主要的免疫球蛋白為i g a ，占初乳中免疫球蛋白總量的8 9 8 ， 也含有較高濃度的i g m 。其中i g a 對酸堿和蛋白酶的水解作用有較強的抵抗力，因此 能在消化道中保持其抗體活性，當(dāng)其進入消化道后可附著在消化道粘膜表面，以防 止病原體吸附到腸壁上，達到了排菌的作用( w e l k e rw a ，1 9 7 6 ；w e l k s hj k ，1 9 7 9 ) 。 牛、豬初乳中免疫球蛋白主要為i g g 。約占免疫球蛋白總量的8 0 ，這與牛、豬胎盤 的特殊結(jié)構(gòu)使母體血液中免疫球蛋白不能直接進入胎兒有關(guān)。豬初乳中i g g 具有保護 乳腺和向幼仔提供被動免疫力的雙重作用。這些免疫球蛋白直接來源于母體血液循 環(huán)，因此，它們屬于那些專一對付母體曾遭遇的病原體的免疫球蛋白。假如新生幼 仔所處生活環(huán)境與母體相同，那么這些免疫球蛋白就能為幼仔提供所需要的專一性 免疫保護。而且出于i g g 的半衰期較長( 1 4 天) ( b o u r n e 年dc a r t i s ，1 9 7 3 ) ，因此，仔 畜體內(nèi)來源于母體的l g g 的濃度可以在幾周內(nèi)維持較高的濃度( k u m a r ，1 9 9 8 ) 。 豬的常乳中i g a 含量較高，而初乳中i g g 的含量占主導(dǎo)地位。初乳與常乳中免疫 球蛋白的生理來源截然不同。母豬初乳中絕大部分i g g 和4 0 的l g a 直接由母豬血液 中轉(zhuǎn)移而來( f r a n c k 等，1 9 7 5 ) 。母豬乳腺上皮細胞的特殊受體負責(zé)將i g g d q 血液轉(zhuǎn)入 初乳( b r a n d o n 等，1 9 7 1 ) 。豬分娩后2 4 4 8 小時后由血液轉(zhuǎn)入乳中的免疫球蛋白急劇 下降，在產(chǎn)后第3 天，乳中9 0 的i g a f l t o 的i g g 均由乳腺中聚居的b 細胞產(chǎn)生和提 供。這些b 細胞屬于粘膜免疫系統(tǒng)( b r o w n 等，1 9 7 5 ) 。所以，初乳中的免疫球蛋白主 要由系統(tǒng)性免疫系統(tǒng)來提供，而常乳中的免疫球蛋白主要由粘膜免疫系統(tǒng)來提供。 表3 牛乳和豬乳中免疫球蛋白的含量( m g m 1 ) t a b l e 3t h ea m o u n to fi m m u n o g l o b u l i n si nt h em i i ko fc o wa n ds o w 引臼b u r t o n 等( 1 9 8 9 ) 2 4 初乳中含有的其他保護和調(diào)節(jié)因子 2 4 1 免疫細胞 初乳中的免疫活性細胞有許多種，如t 淋巴細胞、b 淋巴細胞、臣噬細胞及嗜中 性顆粒細胞等，這些細胞能分泌特異的i g a 抗體，產(chǎn)生干擾素，或者表現(xiàn)直接的吞噬 作用，這對免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育成熟的新生幼仔十分重要( c r a g o ，1 9 7 5 ：單虎等，1 9 9 8 ) 。 試驗證明，母豬初乳中的淋巴細胞可被仔豬消化道吸收，增強仔豬的免疫力。r i e d e l c a s p a r i ( 1 9 9 1 ) 也認為活的初乳淋巴細胞能通過腸壁，初乳白細胞是初乳加強新生犢 牛被動免疫的主要成分。 2 4 2 非抗體保護蛋白 初乳中含有若干種非抗體保護蛋白，如抗胰蛋白酶因子，可保護免疫球蛋白不 被降解；乳鐵蛋白對鐵有高度親合力，可降低細菌對鐵的利用從而成為一種抑菌蛋 白；乳過氧化物酶系統(tǒng)對革蘭氏陽性菌和陰性菌都有廣泛的抑制作用( 鄒恩湘等， 1 9 8 9 ) 。這些非抗體保護蛋白可以彼此結(jié)合成復(fù)合體，或者與免疫球蛋白( 如i g g ) 相 結(jié)合，其結(jié)果使有關(guān)成分穩(wěn)定性增加，或產(chǎn)生出更強的抗菌效應(yīng)。 2 4 3 各種生長因子 初乳中含大量的生物活性物質(zhì)，主要是多肽性生長因子和類固醇激素，基本分 為四類； ( 1 ) 類固醇激素，如雌二醇、腎上腺皮質(zhì)激素、皮質(zhì)酮、皮質(zhì)醇等； ( 2 ) 肽類和蛋白質(zhì)激素，如促性腺激素、促甲狀腺素、胰島素、生長激素等： ( 3 ) 前列腺素； ( 4 ) 多肽生長因子，如i g f 、e g f 、t g f 、n g f 、e p o 、i l 等( 汪玉松和鄒思湘，1 9 9 5 ) 。 其可能的生物學(xué)作用見表4 。 表4 乳中生物活性物質(zhì)和可能的生物學(xué)功能 t a b l e 4g r o w t h s t i m u l a t i n gs u b s t a n c e si nm i l ka n dt h e i rp o s s i b l ef u n c t i o n 3 新生幼仔吸收外源性免疫球蛋白的意義和機制 哺乳動物的新生幼仔即便它的自身免疫系統(tǒng)已經(jīng)比較完善，仍要從母親那旱獲 得抗體來被動提高免疫力?？贵w的這種被動傳遞主要通過胎盤或初乳進行傳遞。母 源抗體傳遞給胎兒的方式取決于胎盤的類型( 表5 ) 。靈長類為血絨毛膜胎盤，這種類 型的胎盤允許l g g 由母體傳遞給胎兒，但i g m 、i g a 或i g e 則不能通過胎盤。狗、 貓為絨毛內(nèi)皮胎盤，這種類型的胎盤允許部分i g g ( 5 - l o ) 通過，所以狗、貓的幼仔 也主要由初乳獲得被動免疫力。偶躥類家畜為結(jié)締組織絨毛膜胎盤，豬、馬為上皮 絨毛膜胎盤，母源抗體不能通過這兩種胎盤傳遞給胎兒，在幼仔出生時血清和腸道 分泌物中均不合免疫球蛋白。所以這兩種動物就必須通過吮食初乳來獲得被動的免 疫力( t i z a r d ，1 9 7 7 ) 。由于不同的動物具有不同的轉(zhuǎn)移抗體的方式，所以這些動物的 仞乳中i g g 、i g a 、i g m 的相對含量也不盡相同。 無論是對于保護胃腸道、還是系統(tǒng)免疫力，通過乳腺轉(zhuǎn)移免疫力對于各種哺乳 動物的幼仔都是至關(guān)重要的。 各種家畜，腸道通透性的選擇性和通透時間長短各不相同。腸壁對蛋白質(zhì)的通 透性在剛出生時為最高，然后迅速降低，大約在2 4 h 后降至最低水平。在初生的最 初幾個小時免疫球蛋白在新生幼仔的小腸內(nèi)沒有任何選擇性地通過小腸粘膜細胞 的胞飲作用被新生動物吸收。l o g a h 等的研究指出。在出生后1 2 天內(nèi)，幼仔腸道 不僅能夠吸收同類動物的i g g ，也能吸收異類動物的i g g ，如奶牛初乳的i g o 在新 生羔羊的腸道中與羊初乳中i g g 有同樣快的吸收力。單虎等( 1 9 9 8 ) 的研究也指出， 太湖豬仔豬在哺喂牛初乳之后約8 h ，血液中就出現(xiàn)了較高水平的牛i g g 。 幼畜血清中免疫球蛋白水平一般在1 2 1 4 h 達到最高峰，以后隨著腸關(guān)閉( g u t c l o s s u r e ) 現(xiàn)象的出現(xiàn)，吸收終止。但嚙齒類動物卻有所不同，他們由腸道選擇性地吸 收i g g 的過程可持續(xù)2 0 天。 腸關(guān)閉的時間長短因動物品種的不同和免疫球蛋白種類的不同而不同。引起腸 關(guān)閉的機制還不清楚。對任何一種動物，只要在一定時間內(nèi)喂給初乳就能引起腸關(guān) 閉；應(yīng)激也能引起腸關(guān)閉；給大鼠注射可的松還能引起腸道提前封閉 ( k r e t e c h m er 1 9 8 3 ) 。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，新生仔畜小腸粘膜細胞的徽絨毛上覆蓋著大量密集 的液泡，出生后這些含有液泡的細胞逐漸擠靠微絨毛的頂端部位，同時微絨毛褶窩 內(nèi)的細胞有絲分裂增加，促進了細胞移向微絨毛頂端大約出生后的3 天之內(nèi)，吸收 上皮細胞完全被成熟的上皮細胞所代替，腸關(guān)閉現(xiàn)象完成( s i m p o s o n m o r g a n ，1 9 7 2 ： s t a l e ya n d b u s h ，1 9 8 5 ：t r a n h a i ra n d r o b i n s o n ，1 9 8 9 ) 。還有報道說，隨時陽j 增長， 腸道上皮細胞逐漸成熟和腸道菌群逐漸建立起來，使得腸道吸收外源免疫球蛋白的 能力逐漸降低直至消失( c h a p p u i s ，1 9 9 8 ) 。 4 幼仔被動免疫失敗的原因 初生幼仔獲得的從母體傳遞來的抗體，在增強幼仔抵抗感染能力方面起著重要 的作用。( f e l s b u r g ，1 9 9 0 ：s t o k e s ，1 9 8 9 ；s h i f r i n e ，1 9 7 1 ) 。母獸初乳中免疫球蛋白 成功的傳遞給幼仔的前提條件有以下幾個：1 、母獸初乳中必須有足夠大濃度的免疫 球蛋白：2 、幼仔吸收消化足夠量的初乳：3 、免疫球蛋白通過腸道由初乳中被吸收 進幼仔血液。以上3 個條件中任何一個發(fā)生問題都會影響母獸初乳中免疫球蛋白的 被動傳遞。 生產(chǎn)中總會出現(xiàn)由于母獸或幼仔的原因，或生產(chǎn)上的某些失誤而導(dǎo)致以上3 個 前提條件難以滿足，如有些優(yōu)良的種母畜母性不好，基本不帶仔，就會導(dǎo)致幼仔吃 不上或不能及時吃到初乳。大熊貓的實際生產(chǎn)中也經(jīng)常出現(xiàn)母獸棄仔或不帶仔的現(xiàn) 象使幼仔吃不到初乳或不能及時吃到、吃足初乳，從而造成抗體被動轉(zhuǎn)移的失敗。 襲5 胎赧類型與免接球蛋矗通過胎盤或斯乳進行母癸傳遞的笑系 表5r e l a t i o n s h i pb e t w e e np l a c e n t a l t y p ea n d t r a n s f e r o f i m m u n e g l o b u l i n s f r o m d a m t o f o e t u j n e w b o r nv i ap l a c e n t ao rc o o s t r u m 引臼t i z a r do _ 缺乏+ = 存在+ + _ 士耍來源+ + + = 唯一來源 5 配方奶及免疫添加裁的應(yīng)用 5 1 嬰兒配方奶 母駝喂養(yǎng)是為嬰j l 健康生長積發(fā)育提供理想食品的堆佳方法，假由于個人、社 會等外界因素的影響使母親的母乳不足或沒有母乳的情況客觀存在。在母乳不足或 沒有母乳的情況下，以前人佛用牛乳直接喂養(yǎng)嬰l 代替母乳，但兩卷的內(nèi)在成分存 在很大差異。母乳中蛋自質(zhì)主要是乳清蛋白，乳清蛋白與酪蛋白比率為6 。4 ，牛乳 中酷蛋自占總蛋白7 8 以上，高酪蛋白含量不利于嬰兒消化吸故。母乳中脂肪主要 是不飽和脂肪酸，并且臺有大量人體必需脂肪酸如亞油酸、亞麻酸和花生四烯酸 f a a ) 。牛乳多是飽程脂肪酸，不利充分消化吸收。乳耱和礦物質(zhì)含量也存在差異， 牛乳咿物質(zhì)含量高，會增加嬰兒腎功能負擔(dān)，對嬰兒健康生長不利。為了使缺乏母 乳喂養(yǎng)的嬰j l 健康生長，人們茬牛乳的基礎(chǔ)上調(diào)整其能量稚營養(yǎng)索，如去除部分酪 蛋白和飽和脂肪酸，添加部分乳清蛋白和不飽和脂肪酸，增加乳糖，降低礦物質(zhì)含 量，添加微量元素、維生器、某些氨基酸和其他成分，佳之與母乳接近，適合嬰l 的營養(yǎng)需要和消化吸收而研制出母乳的替代品嬰兒配方奶粉。從菜種意義上說嬰 l 配方奶粉的發(fā)展歷程就是模仿母乳他的過程。 隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，嬰兒配方奶粉大致經(jīng)歷如下過程： ( 1 ) 第一代嬰凡配方奶粉階段t 簡單的向牛乳或煉乳加水稀釋，有利于消化t 在牛乳中添加谷物、豆?jié){、蔗糖。 以增加熱量。 ( 2 ) 第二代嬰兒配方奶粉階段( 現(xiàn)階段配方嬰兒奶粉) ； 添加外源物質(zhì)，調(diào)節(jié)牛乳成分比例，如調(diào)節(jié)酪蛋白與清蛋白比例：提高不飽和 脂肪酸比例；強化缺乏的維生素、礦物質(zhì)：牛乳中添加脫鹽乳清粉、淀粉糖、維生 素、礦物質(zhì)、植物油、?；撬帷⒌途厶?、d h a ，提高腸道內(nèi)雙岐桿菌數(shù)量，促進喂 養(yǎng)嬰兒神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育。 ( 3 ) 第三代嬰兒配方奶粉( 完善階段) ： 以乳清蛋白( 如d 乳球蛋白) 水解物為基礎(chǔ)，經(jīng)抑菌處理添加免疫活性物質(zhì)，保 證嬰兒正常生長發(fā)育的營養(yǎng)需要，提高喂養(yǎng)兒機體免疫力和抗感染力。 雖然隨著技術(shù)的發(fā)展，配方奶粉的成分與母乳越來越接近，但目前還沒有一種 產(chǎn)品能與母乳成分完全一致。 s 2 免疫添加劑的應(yīng)用 實際生產(chǎn)中經(jīng)常會因為母獸母性不強不愿哺乳，或初乳不足，或者幼仔身體太 弱等原因而導(dǎo)致幼仔難以吃到足夠初乳，通常會用牛乳或奶粉的方法進行補救，這 樣做雖然可以起到一定的作用，但存在很多問題。其一是牛乳對于其他的動物來說 消化性存在差異，很多動物直接飼喂牛乳會引起腹瀉，甚至死亡。其二是牛乳與其 他動物的初乳相比所含營養(yǎng)成分不同，即使幼仔喂牛乳后存活下來，對其以后的生 長發(fā)育和生產(chǎn)性能也會產(chǎn)生影響。其三是牛乳中不含免疫球蛋f l ( 抗體) ，這是造成 補喂牛乳的動物死亡的一個重要原因。 用免疫球蛋白對代初乳和斷奶后的日糧進行強化，來解決代初乳中免疫球蛋白 缺乏的問題。大量關(guān)于大型動物的研究資料證明，血清中的i g g 濃度是用來評價幼仔 抵抗感染的最好的指標，( b a l d w i n ，1 9 9 1 ；c l a b o u g h ，1 9 9 1 ：r e ad e ，1 9 9 6 ；g a l e ， 1 9 9 8 ：v i i r t a l a ，1 9 9 9 ) 。所以在應(yīng)用外源免疫球蛋白的時候，多以添d i i g g 來強化代 初乳。r a i n a r d ( 1 9 8 6 ) 報道，血清免疫球蛋白可在體外抑制大腸桿菌的生長：d r e w ( 1 9 9 9 ) 也報道，血清免疫球蛋白可抑制輪狀病毒的生長，這表明，m 清中免疫球蛋白可在 機體局部( 腸道) 抑制腸道病原菌的侵襲。 應(yīng)用豬血清免疫球蛋白的試驗結(jié)果表明，血清免疫球蛋白對人工飼養(yǎng)的豬確實 可以提供腸道的局部保護作用( m c e a l l u m 等，1 9 7 7 ) 。 d r e w 和o w e n ( 1 9 8 8 ) 報道，從動物血液中提取免疫球蛋白制成人工初乳喂給新生 o 羔羊和初生仔豬，可使羔羊的死亡率由1 9 降到7 ，仔豬的死亡率山1 7 降到5 ， 能有效防止幼仔的各種傳染性疾病，并能促進幼畜的生長發(fā)育。 提純血清中的i g g 有多種方法，如鹽析法、凝膠過濾、離子交換層析、親和層析 以及高效液相色譜等方法。不同方法各有優(yōu)缺點，應(yīng)根據(jù)純度要求，技術(shù)力量和實 驗室具體條件加以選擇。 提取i g g 的步驟比較繁瑣，要求條件嚴格，而且容易在提純操作中造成免疫球蛋 白變性和污染，并且生產(chǎn)實際中要應(yīng)用到的i g g 量較大，實驗室設(shè)施來提純的小劑量 i g g 難以滿足生產(chǎn)需要。b u r t o n ( 1 9 8 1 ) 、h e a t h ( 1 9 8 5 ) _ 手l l v e v m ，t l ( 1 9 9 1 ) 等將血清或i g g 純品添加到人工乳中或注射到幼仔體內(nèi)，有效提高了新生幼仔的抗病力，減少了傳 染性疾病的發(fā)生，并提高其成活率和育成率。w e l l 等( 1 9 7 4 ) 總結(jié)出的注射血清法可以 提高鼻分泌液的抗體滴度，從而提高抗呼吸道病毒感染的能力。j u l i ek 等( 2 0 0 1 ) 將 貓血清皮下注射和腹腔注射到未食初乳的初生貓體內(nèi)，有效的提高了初生貓血清中 的i g g 水平。a r t h i n g t o nj d 等( 2 0 0 2 ) 飼喂牛血清給初生犢牛，與飼喂初乳的犢牛進行 對照，出生后2 4 h 檢測結(jié)果，飼喂牛血清的犢牛對i g g 的吸收率要高于飼喂初乳組， 得病率也相對較低。h u n te 等( 2 0 0 2 ) 、q u i g l e yj d 等( 2 0 0 2 ) 的研究也證明將牛血清給 犢?？诜?，有效的提高了犢牛的抗病力。 但應(yīng)用血清也存在缺點，如血清不易保存，易污染，而且適口性差，所以至今 尚未形成新產(chǎn)品。 6 大熊貓的概況 眾所周知，大熊貓( a i l u r o p o d a m e l a n o l e u e a ) 是中國特產(chǎn)瀕危珍稀動物，被認為是 哺乳類多樣性的重要組成部分，同時大熊貓又具有很高的觀賞和科研價值。由于大 熊貓繁殖力低、棲息環(huán)境不斷縮小和割裂、遺傳交流中斷、人為干擾等原因，野外 大熊貓的數(shù)量急劇減少，已瀕臨滅絕。應(yīng)當(dāng)說大熊貓淪為瀕危物種的原因是多方面 的，其中之一便是它自身遺傳因素和繁殖存活率低下對擴大種群數(shù)目的影響。 太熊貓懷孕的前2 3 時間胚胎在子宮內(nèi)游離而不著床，新生幼仔發(fā)育極不完全。 體重僅為母親的1 9 0 0 ，從而大大降低幼仔對環(huán)境的適應(yīng)能力。大熊貓幼仔在初生時 本身免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善，對外界致病因素的抵抗能力很差，極易感染疾病且治愈 率很低，最終導(dǎo)致死亡。 近十年來，大熊貓的育幼工作取得了很大進展，如雙胞胎育幼成功、人工輔 助育幼及全人工育幼等方法的引入，大大地提高了大熊貓幼仔的成活率，但從整體 來看，大熊貓幼仔的成活率依然較低，在1 9 9 0 年以蒔，大熊貓幼仔到半歲的存活率 為僅3 3 9 1 ，1 9 9 0 年以后達到6 6 8 8 ，總計為5 2 7 9 ；特別是人工輔助育幼及全 人工育幼幼仔容易患各種感染性疾病，成活率明顯低于全母獸哺育幼仔，以在成都 動物園及成都大熊貓繁育研究基地出生的大熊貓幼仔為例，在1 9 9 4 年以后出生并發(fā) 生死亡的共有1 0 只大熊貓幼仔，其中9 0 為人工輔助以及全人工育幼仔，其中有 6 0 死于各種感染性疾病，另外4 0 死于各種意外事故，( 如被母獸壓死、出生h , t 目p 已死亡及不明原因的呼吸驟停等) 。就是在目前已存活的大熊貓中，在其育幼過程中 也有多例發(fā)生是過呼吸道、消化道感染后經(jīng)搶救成活。可見提高大熊貓初生幼仔免 疫力成為提高大熊貓存活率的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。 全人工育幼難究其原因，除大熊貓初生幼獸的自身免疫水平非常低外( 王平等， 1 9 8 0 ；1 9 8 3 ；m o n t a l ir j 等，1 9 9 0 ) ，主要由于大熊貓初乳尚遠不能滿足育幼需要， 而人工初乳中特異性免疫物質(zhì)還不能從根本上得到解決( 鐘順隆等，1 9 9 3 ) 。目前對 大熊貓?zhí)ケP的類型還沒有進行過系統(tǒng)研究，其胎盤屬于那種類型還沒有一個定論， 但大熊貓幼仔通過哺喂初乳而獲得堅強免疫力在大熊貓育幼生產(chǎn)中已成為共識。北 京動物園在人工初乳中首次加入一定劑量的免疫球蛋l(fā) 白( i g g 、i g a 、i g m ) ，全人工育 幼未食過母體初乳的大熊貓初生幼獸，獲得了一定的效果( 劉維新等；1 9 9 3 ) ，間接 證明了母體初乳的重要性，但所加抗體物質(zhì)的種類和含量也僅根據(jù)多年人工育幼經(jīng) 驗和大熊貓初生幼獸的生物學(xué)特點，缺少理論依據(jù)。盡管用大熊貓剩余初乳配制成 人工乳哺育幼獸獲得了成功( 鐘順隆等，1 9 9 6 ) ，但由于大熊貓初乳的采集具有相當(dāng) 大的危險性，而且又需要產(chǎn)仔的同步性以及足夠的產(chǎn)乳量，此方法尚難以滿足生產(chǎn) 需要。因此目前大熊貓全人工或人工輔助育幼面臨的最大問題之就是如何提高幼 仔的免疫力。 7 國內(nèi)外概況 目前，在人類以及動物如馬、狗上，人們都曾研制出血液球蛋白以補充自身的 免疫球蛋白不足來增強對疾病抵抗力。在人，免疫球蛋白的替補療法已成為一種常 規(guī)的手段，有人對1 5 例極低體重兒應(yīng)用0 5 0 7 9 k g 體重靜脈注射人血球蛋白，可 以起到明顯的防止感染作用，卻無明顯的副作用。對體重小于1 5 0 0 9 ，胎齡小于3 4 周的高危新生兒，每月應(yīng)用o 5 9 k g 體重免疫球蛋白預(yù)防，其感染的發(fā)生率、敗血 癥發(fā)生率和病死率均較未應(yīng)用預(yù)防組有明顯的減低。有人提出大熊貓初生幼仔類似 于人類的早產(chǎn)兒，王成東等檢測了大熊貓血液及乳中免疫球蛋白種類與含量，華盛 頓國家動物園r i c h a r d j 等采用電泳技術(shù)檢測了初生大熊貓幼仔的血清，發(fā)現(xiàn)球蚤白 帶較少，在注射了成年大熊貓血液中提耿的球蛋白后，其球蛋白帶明顯增多，但是 由于注射了大熊貓球蛋白的幼仔在子宮內(nèi)已發(fā)生感染，大熊貓幼仔僅存活三天后死 亡。因此國內(nèi)外目前尚無系統(tǒng)的關(guān)于注射用大熊貓血液球蛋白的研制與應(yīng)用研究。 8 本研究的目的和意義 對大熊貓這一古老物種而言。，靠母乳哺育固然相當(dāng)理想，它不僅含有幼仔生長 發(fā)育所需要的營養(yǎng)物質(zhì)，而且還含有特異性的免疫物質(zhì)，成為幼仔最早獲得的被動 免疫。但事實證明，靠大熊貓初乳來哺育初生幼仔己遠遠不能滿足育幼工作的需要， 將大大阻礙大熊貓圈養(yǎng)繁殖增加數(shù)量、擴大種群和延緩滅絕。為此有關(guān)學(xué)者進行了 諸多嘗試，如給大熊貓幼仔口服人血球蛋白補充外源性抗體，補充山羊、貓、狗仞 乳，但都未收到預(yù)期效果。究其原因可能因為提供抗體的物種與大熊貓相比物種差 距太大，不同物種對不同疾病的易感性不同，因此用其它物種提供的抗體并不能對 大熊貓幼仔提供有效的保護。另一方面，比如采用人血球蛋白，本柬應(yīng)肌注，但因 來源于異種蛋白，可能會導(dǎo)致過敏反應(yīng)而只能口服，但是人血球蛋白在消化道中容 易被消化酶破壞而起不到應(yīng)有的作用。因此采用同種抗體柬被動提高大熊貓幼仔的 免疫力成了唯一的選擇。 在選擇大熊貓的免疫添加劑的問題上，準備選用大熊貓血清來提供被動免疫用 的i g g ，因為提純i g g 的過程對操作環(huán)境要求嚴格，在操作過程中可能由于條件的 變化或控制不嚴格而造成i g g 變性、污染等，血清處理過程中微量的藥物殘留對脆 弱的大熊貓幼仔可能都將是致命的。而且大熊貓血清量有限，目前的提純i g g 的方 法并沒有專門針對大熊貓的，還需要進行條件摸索，所以很容易造成對寶貴大熊貓 血清的浪費。在不充分了解大熊貓的血液生理生化機理以及生長發(fā)育機理的情況下， 應(yīng)用大熊貓血清作為免疫添加劑是一個較好的選擇，因為來自母親血清中的除抗體 之外的其它物質(zhì)，如自蛋白等通過腸道進入幼仔血液，可能也會對幼仔的某些機能 提供一定幫助。 本研究的目的是尋找與大熊貓母乳成分相似的代用乳飼喂幼仔，減少對幼仔脆 弱腸道的刺激，并提供足夠的營養(yǎng)。目前在大熊貓的育幼實踐中發(fā)現(xiàn)通過調(diào)整某些 奶粉的成份可以模擬大熊貓母乳成份。不同單位采用了不同配方，但是不清楚哪種 配方更接近大熊貓母乳，目前已經(jīng)收集了相關(guān)配方，進行比較研究，以確定與大熊 貓母乳成分相似的代用乳配方。 選擇合適的血清處理方法，在繁殖季節(jié)，在麻醉健康成年大熊貓進行采精和配 種時抽血，分離血清保存，并檢測成年大熊貓和初生幼仔血清中各蛋白組成的含量， 確定以f f 清作為免疫添加劑的添d nt = j j 量，為大熊貓仞生幼仔實際應(yīng)用血清制品以被 動提高大熊貓幼仔的免疫力做好前期準備。 試驗一大熊貓初生幼仔腸道正常菌群的檢測 1 試驗?zāi)康?圈養(yǎng)條件下，大熊貓幼仔及亞成體易患腹瀉，人t 孚l , f f ：養(yǎng)的個體以及脫離母乳 喂養(yǎng)進入亞成年生長期的個體，出于食物及環(huán)境條件改變，腹瀉發(fā)病率更高，這與 不清楚大熊貓幼仔腸道f 常菌群組成情況有密切關(guān)系。特別是不了解仞生大熊貓幼 仔生長過程中腸道正常菌群的“演替”情況，對這一階段薩確防治疾病、確保幼仔 成活等造成一定困難。 成都大熊貓繁育研究基地2 0 0 3 年繁殖的大熊貓由于母獸母性好、育幼經(jīng)驗豐富 且均為單胎，所以人工干預(yù)育幼少，幾乎為全母親育幼。幼仔可以說是在人工圈養(yǎng) 條件下所能達到的最好的育幼條件下生長的，這為我們研究初生幼仔腸道正常菌群 提供了很好的機會。 本試驗的目的就是檢測大熊貓初生幼仔腸道f 常菌群的組成及建立過程，為今 后評價新的代用乳效果和腹瀉病的診斷打下基礎(chǔ)。 2 材料方法 2 1 供試動物 成都大熊貓繁育研究基地2 0 0 3 年出生的3 只幼仔，健康，采樣i 口未迸行過抗生素 處理，主要食物為母乳。 2 2 標本采集 用無菌器械采集幼仔糞便后，立即放入預(yù)先消毒滅菌、稱重、裝有i m l d h 7 4 硫 1 4 乙醇酸鹽( 0 1 5 硫代乙醇酸鈉，0 1 1 磷酸氧二鈉，0 i 氯化鈉，00 0 9 氯化鈣) 轉(zhuǎn) 運r 勺塑料離心管中，振搖均勻，稱重，計算標本的蓐量。直刻拿到實驗室進行檢 驗。每只幼仔自出生后每天取樣，但由于是母獸療幼，所以母獸會舔拭幼仔肛周刺 激排便并吃食幼仔糞便，所以不可能每滅在從母獸處墩出時都采集到糞樣。 2 3 培養(yǎng)基 b l o o dh e a r t i n f u s i o f i ( b h i ) 培養(yǎng)基，麥康凱瓊脂平皿、乳桿菌培養(yǎng)基等，以 上培養(yǎng)基均為商品化成品。 2 4 微生物培養(yǎng)及鑒定 2 4 1 微生物培養(yǎng) 根據(jù)稱重結(jié)果將待檢糞便用生理鹽水稀釋成1 0 。稀釋度，從中取0 i m 加o 9 m l 塵理赫水稀釋搖勻此為l o 。稀釋度，此方法連續(xù)稀釋到直至l 0 “。 用滴點法接種于r h t 培養(yǎng)基上( 4 8 滴m ) ，每份樣品，每個濃度接種：3 滴。以上操 作均在無菌條件下完成。3 7 。c 下倒置培養(yǎng)4 8 h 。培養(yǎng)后根據(jù)菌落的外觀、顏色等進行 初步鑒定，然后再分別接種到麥康凱、乳酸卡t 菌培養(yǎng)基等專性培養(yǎng)基上培養(yǎng)。后根 據(jù)初步具體的檢測結(jié)果將部分稀釋液直接滴點接種于不同專性培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)。 其中麥康凱平皿培養(yǎng)需氧下3 54 c 培養(yǎng)2 4 h ，乳桿菌菌培養(yǎng)基為厭氧3 7 。c 培養(yǎng)4 8 h 。 2 4 2 細菌的形態(tài)學(xué)鑒定 取出培養(yǎng)皿，觀察各培養(yǎng)基上菌落生長情況，挑選相同菌落進行計數(shù)、染色， 生化鑒定按伯杰氏細菌鑒定手冊( 第九版) 及- - 般細菌常用鑒定方法進行。 3 結(jié)果 檢測結(jié)果見附表。 從檢測結(jié)果可以看出：l 、初生大熊貓幼仔腸道中菌群以大腸埃希氏菌、糞鏈球 菌為主，1 開齡幼仔的糞便中檢測到了大腸埃希氏菌和表葡萄球菌，2 r 齡時即可檢 測到糞鏈球菌。從整個檢測結(jié)果可以看出表皮葡萄球菌可能為環(huán)境污染，辦或因為 母獸舔拭幼仔從而使幼仔肛周或排便時帶有表葡菌，而非幼仔腸道內(nèi)的菌群。2 、卜3 5 閂齡大熊貓幼仔腸道中的優(yōu)勢菌為大腸埃希氏菌、糞鏈球菌。這期間糞便中菌群較 為單純，基本沒有什么變化，在2 5 閂齡時爿檢n n - 卡t 菌，但也是微量。3 、應(yīng)用抗 生素使幼仔腸道內(nèi)菌群完全消失。在6 天后可檢測到大腸埃希氏菌，但與其它幼仔相 比，菌群組成中比較單一，沒有糞鏈球菌。 4 討論與分析 1 、在】1 齡的大熊貓幼仔糞便中即州檢測到大腸埃希氏菌，其麗群米源。叮能為 母獸懷抱幼仔不停舔拭，從而使口腔中細菌進入幼仔消化道：也口j 能因為幼仔在母 獸懷抱中時或吃食初乳時環(huán)境中的細菌進入口腔從而進入消化道。幼仔糞便中的菌 群組成很單一，以大腸埃希氏菌為主，糞鏈球菌次之，這與以前關(guān)r 成年大熊貓和 大熊貓幼仔腸道f 常菌群的報道相似( 張志和、何光昕1 9 9 5 ，1 9 9 7 ：) 。在2 5 同齡后 出現(xiàn)乳桿菌，但含量很低，此后又進行了不定期的檢測，發(fā)現(xiàn)在此后較長f i e f j 內(nèi)( f i o d ) 除去有時可檢測到表皮葡萄球菌、萘瑟氏菌等過路菌外，糞便菌群組成基本沒有變 化。在整個試驗中一直沒有發(fā)現(xiàn)雙歧桿菌，這與文獻所報道幼仔腸道菌群以雙歧桿 菌為最優(yōu)勢菌不同( 張志和、何光聽，1 9 9 7 ) ，原因不清楚。而且厭氧菌含量雖然后 來有所增長，但不是主要的組成部分，這與成年大熊貓腸道中需氧菌檢出量及檢出 率相對較高，而厭氧菌的種類及數(shù)量相對較少相吻合( 張志和，1 9 9 5 ) 。 2 、微生念學(xué)研究表明，盡管人和動物胃腸道l f 常菌群的原籍苗及需氧菌和厭氧 菌的比例有一定的差異，但其中9 5 以j i 的細菌為生理性號性厭氧菌( 魏曦，1 9 8 5 ； 康白，1 9 8 8 ) ，但本試驗中大熊貓仞塵幼仔腸道中菌群組成卻不同，排除系統(tǒng)和偶然 誤差，客觀上可能這就是大熊貓該f 1 齡段的腸道菌群的特點，也可能與其消化道短， 進食頻繁、腸道蠕動快等原因有關(guān)。 3 、從微生態(tài)學(xué)角度出發(fā)，f 常情況下處于微生念平衡之中的正常菌群成員是不 致病的，但不利的內(nèi)外環(huán)境因素破壞了生態(tài)平衡，造成其中一種或數(shù)種菌優(yōu)勢繁殖， 則成為致病菌( 條件性致病菌) ：或使其中數(shù)量少，但f 常情況下因其它微生物的拮 抗或機體免疫屏障等方面的作用不足以致病的致病菌大量生長繁娘，電可引起機體 發(fā)病。本試驗中采集到一只幼仔( 6 同齡) 在應(yīng)用抗生素后的糞便，經(jīng)培養(yǎng)無細菌生長， 證剛抗生素己將腸道內(nèi)的菌群全部殺滅，在6 d 后采集糞便再做培養(yǎng)，僅發(fā)現(xiàn)大腸埃 希氏菌，與相似同齡的其它幼仔相比組成較單一，證明腸道內(nèi)菌群在被全部殺滅后 重新慢慢建立起來。對人及動物的大量研究已經(jīng)證實，菌群失調(diào)是某些疾病特別是 腹瀉病的本質(zhì)病因，在圈養(yǎng)條件下大熊貓辦是如此，腹瀉病列大熊貓幼仔的威脅尤 其大( 仇秉興，1 9 8 4 ；馮文和等，1 9 8 7 ：胡錦矗，1 9 8 8 ；鐘順隆等，1 9 9 3 ) 。腸道菌 群的建立與個體、遺傳、環(huán)境、食物等因素有關(guān)，所以在應(yīng)用抗生素后菌群被嚴重 破壞，在重新建立菌群的過程中難免會因食物組成、食量、環(huán)境等的改變而造成某 些菌群的失調(diào)從而導(dǎo)致腹瀉等疾病。對初生幼仔建矗k 期的腸道埔群峪測制度，尤 其足在試用新的食品配方或 = r 4 喂力式時這種制度刈f 幼和疾病珍斷虹具有重要意 義。在抗生素的應(yīng)用上，應(yīng)根據(jù)各病的具體情況選擇弄目應(yīng)敏感抗生素，以免造成腸 道菌群被大部分或全部破壞從而加大菌群失調(diào)的危險。 4 、影響f 常菌群的因素很多，除技術(shù)、遺傳、食物等因素外，同齡及采樣時削 與測定結(jié)果密切相關(guān)。在一般情況卜，大熊貓母獸哺育時常常將幼仔糞便舔食掉， 且幼仔排便時i 刈不固定，多導(dǎo)致無法采樣，使同齡及采樣時| h j 刈測定結(jié)果的影響無 法控制，致使試驗定量檢測結(jié)果的波動較大。如果條f t ：允許還應(yīng)擴大試驗樣本數(shù)， 并對菌群定位等作進一步研究。 附表：檢測結(jié)果 備注：表示沒檢測山。十為6 曰齡時所檢測的樣本岡為在取樣的前一大發(fā)生腹瀉麻刪抗 e 素治療，經(jīng)檢測糞便中無細菌。12 曰齡檢測的是與6 日齡時檢測的同一只幼仔。 試驗二大熊貓代用乳的選擇 1 試驗?zāi)康?為了能配制出與母乳成分盡可能千目似的人： 乳，使大熊貓幼仔可以從人工乳中 獲得生長所需的營養(yǎng)并狹得舉強免疫力，國內(nèi)外的大熊貓研究人負對大熊貓乳汁成 分作了一定的研究，對大熊貓乳汁成分有了一定的了解，但山于所能得到的用于研 究的乳樣的量比較少，實驗得不到重復(fù)，得出的結(jié)論受個體差異，采樣時問等具體 因素的影響，很難當(dāng)作權(quán)威結(jié)論來應(yīng)用，但這些研究也為人工乳的配制打 f 了一定 的基礎(chǔ)。目自h 可以肯定的是大熊貓乳的成分與幾種常見乳差異還是比較大，如表1 表l 兒種常見乳與人熊貓乳營養(yǎng)成分的比較( w ) t a b l e lc o m p a r i s a t i o no f n u t r i t i o n a lc o m p o s i t i o n ga m o n gc o m m o nm i l k sa n dg i a n tp a n d am i l kf w 、 乳樣 w a t a t c pe el a ca s hc apg e 人熊貓( g i a n tp a n d a ) 8 4 3 50 873 3 10 7o 8 90i 2 40 1 0 51 0 1 人熊貓( g i a n tp a n d a ) 70 5 o 2 9 8 8 2 人h u n m a n i i58 1349 l0 0 2 3 30 0 1 151 0 l 成都麻芋g o a t 5 2 966 64 0 30 1 6 0 12】0 2 狗d o g 7 5 41 l ，29 63 10 7 303 2 502 2 21 6 4 奶牛c o w 8 723 5374 907 l0 1 2 10 0 9 57 5 引口劉選珍( 1 9 9 6 ) 黑熊( s e l e n a r c t o st h i b e t a n u s ) 與大熊貓均屬食肉目熊超科的物種，但對大熊貓與熊 科物種間的親緣關(guān)系及其分類地位仍有眾多爭議。o b r i e n 等( 1 9 8 5 ) 根據(jù)對大熊貓 和熊科物種的染色體( 包括x 染色體在內(nèi)) g 帶帶型分析，并結(jié)合分子方面的證據(jù)， 認為人熊貓介于熊和浣熊之b j ，更接近熊。：e 希成等( ) 9 8 8 ) 從免疫學(xué)角度探討火熊 貓的親緣關(guān)系，認為大熊貓與黑熊更接近。 黑熊與大熊貓的初生幼仔部十分弱小，且生長發(fā)育在初期相當(dāng)長段時陽j 都依 賴母乳。可能二者的乳中都富含某些對發(fā)育不成熟幼仔的生長發(fā)育有幫助的因子。 國外對黑熊、北極熊等熊的乳汁進行過研究，發(fā)現(xiàn)其乳汁成分與大熊貓有定的相 似性，如乳糖含量相對較低，蛋白含量高( o l a v e ，1 9 9 3 ) ，以及認為乳中某些特殊結(jié) 構(gòu)的寡糖對免疫功能有一定的刺激作用等( t a d a s u ，2 0 0 0 ；t a d a s h i ，2 0 0 0 ) 。綜上所述， 我們有必要把黑熊乳當(dāng)作- i 中考慮的代用乳選擇，并在前人研究工作的基礎(chǔ)上，更加 深入的分析大熊貓與黑熊初乳及常乳的成分，對比二者的相似性及區(qū)別。 同時，綜合國內(nèi)外專家針對大熊貓的研究，以及國內(nèi)外對大熊貓人工育幼的實 踐經(jīng)驗，我們得到其它l 個大熊貓人工乳的配方。如北京動物園報道的在初乳期( 出 生后1 3 天) 哺喂幼仔人t 乳，取得較好效果，初乳期人工乳基礎(chǔ)配方為熊貓奶粉 ( p a n d am i l k ) ：狗初乳= 1 ：1 ( 質(zhì)量比) ：還有圣迭哥動物園的配方：狗奶f , a ( g s b i l a c p o w d e r ) ：人嬰兒奶粉( e n f a m i lp o w d e r ，l o w i r o n ) ：水= l ：1 ：6 ( 體積比) ；以及基r 成都 大熊貓繁育研究基地現(xiàn)用配方所做的修改：l l i 羊仞乳：熊貓奶粉( p a n d am i l k ) ：去離 子水= 3 ：1 ：6 ( 質(zhì)量比) ，分別記為人工乳i 、人i 乳2 、和人工乳3 。 本試驗的目的在于，分析現(xiàn)有配方以及