全血血清中全氟辛酸的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法Determinationofperfluorooctanoicacidinwholebloodand2025-09-10發(fā)布江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)發(fā)出布版ⅠDB32/T5193—2025前言 Ⅲ 2規(guī)范性引用文件 3術(shù)語(yǔ)和定義 4原理 5試劑和材料 6儀器和設(shè)備 8分析步驟 9方法的定量限和回收率 DB32/T5193—2025Ⅲ本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由江蘇省衛(wèi)生健康委員會(huì)提出并組織實(shí)施。本文件由江蘇省衛(wèi)生健康標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本文件起草單位：南京醫(yī)科大學(xué)、生態(tài)環(huán)境部南京環(huán)境科學(xué)研究所、蘇州市疾病預(yù)防控制中心。DB32/T5193—20251全血/血清中全氟辛酸的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本文件描述了全血/血清中全氟辛酸（PFOA）的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本文件適用于人、嚙齒類動(dòng)物（如大鼠、小鼠等）全血/血清樣本中全氟辛酸的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法WS/T661靜脈血液標(biāo)本采集指南3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理全血/血清樣本經(jīng)含甲酸的乙腈溶液、正己烷和二氯甲烷萃取凈化后，有機(jī)相氮吹至近干，復(fù)溶后上機(jī)測(cè)定；采用液相色譜分離，質(zhì)譜檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)保留時(shí)間、特征離子豐度比定性，采用同位素內(nèi)標(biāo)法定量分析。5試劑和材料除另有規(guī)定外，所有試劑均為色譜純，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。5.1試劑5.1.3乙酸銨（CH3COONH4）。5.1.7標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：全氟辛酸（PFOA，C8HF15O2，CAS號(hào)335?67?1）純度≥98%?；蚴褂檬惺塾凶C標(biāo)準(zhǔn)溶液。5.1.8同位素內(nèi)標(biāo)物質(zhì)：全氟辛酸同位素內(nèi)標(biāo)（13C4?PFOA，CAS號(hào)960315?48?4）質(zhì)量濃度為2mg/L。2DB32/T5193—20255.2溶液配制5.2.1甲酸-乙腈溶液移取2mL甲酸用乙腈定容至100mL，混勻，配制成2%甲酸?乙腈溶液。5.2.2乙酸銨水溶液：c（CH3COONH4）=2mmol/L稱取154mg乙酸銨，用水溶解，定容至1000mL，混勻。5.2.3乙腈-乙酸銨溶液根據(jù)需要取適量乙腈和乙酸銨水溶液，按體積比1∶1進(jìn)行混勻。5.2.4標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：ρ（PFOA）=100mg/L稱取10.0mgPFOA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇溶解，定容至100mL，混勻，避光，0℃~4℃冷藏可保存60d，使用前恢復(fù)至室溫并搖勻。5.2.5標(biāo)準(zhǔn)中間溶液1：ρ（PFOA）=0.1mg/L移取適量PFOA標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用甲醇稀釋配制成質(zhì)量濃度為0.1mg/L的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液1。臨用現(xiàn)配。5.2.6標(biāo)準(zhǔn)中間溶液2：ρ（PFOA）=0.01mg/L移取適量PFOA標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用甲醇稀釋配制成質(zhì)量濃度為0.01mg/L的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液2。臨用現(xiàn)配。5.2.7內(nèi)標(biāo)工作溶液：ρ（13C4?PFOA）=0.2mg/L將內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液按需要用甲醇溶解，混勻，避光，0℃~4℃冷藏可保存60d。使用前恢復(fù)至室溫，并搖勻。5.3材料5.3.1離心管：15mL、2mL，聚丙烯材質(zhì)。5.3.2容量瓶：10mL、100mL，聚丙烯材質(zhì)。5.3.3進(jìn)樣瓶：2mL，聚丙烯材質(zhì)。6儀器和設(shè)備6.1電子天平：分度值不大于0.01mg。6.2渦旋振蕩器。6.3氮吹濃縮裝置。6.4高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速可達(dá)12000r/min。6.5超聲波清洗儀。6.6低溫冰箱：溫度可達(dá)-20℃。6.7液相色譜?串聯(lián)質(zhì)譜儀：液相色譜具備梯度洗脫功能，三重四極桿質(zhì)譜儀配有電噴霧離子源，具備多反應(yīng)監(jiān)測(cè)功能。6.8一般實(shí)驗(yàn)室常用儀器和設(shè)備。DB32/T5193—202537樣品7.1樣品采集和保存全血/血清樣品按照WS/T661的規(guī)定進(jìn)行獲取，樣品如無法及時(shí)檢測(cè)，全血樣品應(yīng)于2℃~8℃冰箱保存，周期不超過7d；血清樣本應(yīng)于-20℃冰箱中冷凍保存，保存周期不超過3個(gè)月。7.2試樣的制備7.2.1全血甲酸?乙腈溶液渦旋混勻，超聲5min，加入1mL正己烷和1mL二氯甲烷，渦旋萃取1min，4000r/min轉(zhuǎn)速離心5min，轉(zhuǎn)移上層全部有機(jī)相至新的離心管中；重復(fù)上述操作，將兩次上層有機(jī)相混合。將收集的萃取液在40℃水浴溫度下氮吹至近干，用200μL乙腈?乙酸銨溶液復(fù)溶，混勻后將溶液轉(zhuǎn)移至2mL離心管中，12000r/min離心5min，取上清，待液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。7.2.2血清取200μL血清于15mL離心管中，加入20μL內(nèi)標(biāo)工作溶液，渦旋混勻；加入1mL甲酸?乙腈溶液渦旋混勻，超聲5min，加入1mL正己烷和1mL二氯甲烷，渦旋萃取1min，4000r/min轉(zhuǎn)速離心5min，轉(zhuǎn)移上層全部有機(jī)相至新的離心管中；重復(fù)上述操作，將兩次上層有機(jī)相混合。將收集的萃取液在40℃水浴溫度下氮吹至近干，用200μL乙腈-乙酸銨溶液復(fù)溶，混勻后將溶液轉(zhuǎn)移至2mL離心管中，12000r/min離心5min，取上清，待液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。8分析步驟8.1儀器參考條件8.1.1液相色譜柱：C18色譜柱，柱長(zhǎng)100mm，內(nèi)徑2.1mm，粒徑1.8μm或其他等效色譜柱。8.1.2流動(dòng)相：流動(dòng)相A為乙腈；流動(dòng)相B為乙酸銨水溶液。8.1.3流速：400μL/min。8.1.5進(jìn)樣體積：5.0μL。8.1.6離子源模式：ESI負(fù)離子模式；氣簾氣壓力35.0psi；噴霧電壓-4500V；霧化溫度550℃;霧化氣壓力55psi；輔助氣壓力60psi。8.1.7梯度洗脫程序見表1。表1梯度洗脫程序時(shí)間/min流動(dòng)相A/%流動(dòng)相B/%0.0010901.0010905.0090107.0090104時(shí)間/min子離子m/z移取適量PFOA標(biāo)準(zhǔn)中間溶液1和標(biāo)準(zhǔn)中間溶液2于2mL進(jìn)樣瓶中，并分別加入10μL同位素內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，用乙腈一乙酸銨溶液稀釋制得系列標(biāo)準(zhǔn)溶液(現(xiàn)配現(xiàn)用)。各溶液全氟辛酸的質(zhì)量濃度依次為0.5μg/L、1.0μg/L、5.0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L,內(nèi)標(biāo)物質(zhì)量濃5圖2全氟辛酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)色譜圖8.3試樣測(cè)定按本方法儀器條件測(cè)定試樣溶液，試樣色譜峰的保留時(shí)間與對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的相對(duì)誤差應(yīng)控制在±5%范圍內(nèi)。在扣除背景的質(zhì)譜圖中，所有特征離子均被檢出，且試樣定性離子豐度/定量離子豐度的比值與對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中定性離子豐度/定量離子豐度的比值滿足表3規(guī)定的要求，則可判定試樣含全氟辛酸。表3相對(duì)離子豐度的最大允許偏差記錄目標(biāo)化合物定量離子與內(nèi)標(biāo)化合物色譜峰的峰面積，采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行定量分析。試樣溶液中被測(cè)物的響應(yīng)值應(yīng)位于標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)，超出范圍的試樣需稀釋后重新測(cè)定。8.4空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按照與試樣相同的制備和分析步驟進(jìn)行測(cè)定。8.5結(jié)果計(jì)算全血/血清中全氟辛酸含量按公式(1)計(jì)算，計(jì)算結(jié)果需扣除空白值。式中：P——樣品中PFOA的質(zhì)量濃度，單位為微克每升6DB32/T5193—20259方法的定量限和回收率9.1定量限全血取樣量為500μL，定容體積為200μL時(shí)，全氟辛酸的定量限為0.5μg/L。血清取樣量為200μL，定容體積為200μL時(shí)，全氟辛酸的定量限為0.5μg/L。9.2回收率血清中全氟辛酸的添加質(zhì)量濃度為1.0μg/L時(shí)，