廣西pcr上崗證考試題及答案一、單選題（每題2分，共20分）1.PCR技術(shù)中，哪個(gè)步驟是將DNA模板變性成單鏈？（）A.變性B.退火C.延伸D.合成答案：A2.在PCR反應(yīng)中，哪個(gè)酶負(fù)責(zé)合成新的DNA鏈？（）A.逆轉(zhuǎn)錄酶B.限制性內(nèi)切酶C.聚合酶D.連接酶答案：C3.PCR反應(yīng)中，哪個(gè)組分負(fù)責(zé)提供引物？（）A.模板DNAB.引物C.聚合酶D.核苷酸答案：B4.PCR技術(shù)中，哪個(gè)步驟是將引物與模板DNA配對(duì)？（）A.變性B.退火C.延伸D.合成答案：B5.PCR反應(yīng)中，哪個(gè)組分負(fù)責(zé)提供能量？（）A.模板DNAB.引物C.聚合酶D.核苷酸答案：D6.PCR技術(shù)中，哪個(gè)步驟是將新合成的DNA鏈延伸？（）A.變性B.退火C.延伸D.合成答案：C7.PCR技術(shù)中，哪個(gè)組分負(fù)責(zé)提供緩沖液？（）A.Mg2+B.引物C.聚合酶D.反應(yīng)緩沖液答案：D8.PCR技術(shù)中，哪個(gè)組分負(fù)責(zé)提供啟動(dòng)PCR反應(yīng)所需的金屬離子？（）A.Mg2+B.引物C.聚合酶D.反應(yīng)緩沖液答案：A9.PCR技術(shù)中，哪個(gè)組分負(fù)責(zé)提供DNA模板？（）A.模板DNAB.引物C.聚合酶D.核苷酸答案：A10.PCR技術(shù)中，哪個(gè)組分負(fù)責(zé)提供合成DNA鏈所需的原料？（）A.模板DNAB.引物C.聚合酶D.核苷酸答案：D二、填空題（每題2分，共20分）11.PCR技術(shù)中，變性步驟的溫度通常設(shè)置在°C左右。答案：94-9612.PCR技術(shù)中，退火步驟的溫度取決于的Tm值。答案：引物13.PCR技術(shù)中，延伸步驟的溫度通常設(shè)置在°C左右。答案：7214.PCR技術(shù)中，一個(gè)完整的PCR循環(huán)包括、和三個(gè)步驟。答案：變性、退火、延伸15.PCR技術(shù)中，常用的聚合酶是。答案：Taq聚合酶16.PCR技術(shù)中，DNA模板的濃度應(yīng)該保持在ng/μl左右。答案：10-10017.PCR技術(shù)中，引物的濃度應(yīng)該保持在μM左右。答案：0.1-118.PCR技術(shù)中，Mg2+的濃度應(yīng)該保持在mM左右。答案：1.5-3.019.PCR技術(shù)中，核苷酸的濃度應(yīng)該保持在mM左右。答案：20020.PCR技術(shù)中，反應(yīng)緩沖液的體積應(yīng)該保持在μl左右。答案：10-20三、簡(jiǎn)答題（每題10分，共20分）21.請(qǐng)簡(jiǎn)述PCR技術(shù)的原理。答案：PCR技術(shù)是一種體外擴(kuò)增特定DNA序列的方法，通過(guò)反復(fù)的變性、退火和延伸三個(gè)步驟，實(shí)現(xiàn)DNA模板的指數(shù)級(jí)擴(kuò)增。在變性步驟中，DNA模板被加熱至94-96°C，使雙鏈DNA解鏈成單鏈；在退火步驟中，溫度降低至引物的Tm值附近，使引物與單鏈DNA模板配對(duì)；在延伸步驟中，溫度保持在72°C左右，聚合酶沿著模板DNA合成新的DNA鏈。22.請(qǐng)簡(jiǎn)述PCR技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)。答案：PCR技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)包括：1)高度特異性，可以精確擴(kuò)增目標(biāo)DNA序列；2)高度靈敏度，可以檢測(cè)極低豐度的DNA模板；3)高度可重復(fù)性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定可靠。PCR技術(shù)的缺點(diǎn)包括：1)容易受到污染，需要嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)操作和環(huán)境控制；2)引物設(shè)計(jì)要求較高，需要考慮引物的Tm值、GC含量等因素；3)擴(kuò)增產(chǎn)物可能存在非特異性擴(kuò)增，需要通過(guò)凝膠電泳等方法進(jìn)行驗(yàn)證。四、實(shí)驗(yàn)操作題（每題10分，共20分）23.請(qǐng)描述PCR反應(yīng)體系的配制步驟。答案：1)取一個(gè)無(wú)菌的PCR管；2)向PCR管中加入10-20μl的反應(yīng)緩沖液；3)加入1-5μl的模板DNA；4)加入0.1-1μM的引物；5)加入200μM的dNTPs；6)加入1.5-3.0mM的Mg2+；7)加入0.5-2.0U的聚合酶；8)加入適量的無(wú)菌水，使總體積達(dá)到50μl；9)輕輕混勻PCR反應(yīng)體系；10)加蓋密封PCR管。24.請(qǐng)描述PCR反應(yīng)的程序設(shè)置步驟。答案：1)設(shè)置變性步驟，溫度94-96°C，時(shí)間15-30秒；2)設(shè)置退火步驟，溫度引物的Tm值附近，時(shí)間15-30秒；3)設(shè)置延伸步驟，溫度72°C，時(shí)間1kb的DNA模板需要1分鐘；4)設(shè)置循環(huán)次數(shù)，通常為25-35個(gè)循環(huán)；5)設(shè)置最終延伸步驟，溫度72°C，時(shí)間5-10分鐘；6)設(shè)置保持溫度，通常為4°C。五、論述題（每題20分，共20分）25.請(qǐng)論述PCR技術(shù)在分子生物學(xué)研究中的應(yīng)用。答案：PCR技術(shù)在分子生物學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用，包括：1)基因克?。和ㄟ^(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增特定基因序列，可以將其克隆到載體中，用于后續(xù)的表達(dá)、功能研究等。2)基因表達(dá)分析：通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR（qPCR）技術(shù)，可以定量分析基因的表達(dá)水平，研究基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制。3)基因突變檢測(cè)：通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增特定基因序列，可以檢測(cè)基因的突變、插入和缺失等變異。4)病原體檢測(cè)：通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增病原體的特異性DNA序列，可以實(shí)現(xiàn)病原體的快速、準(zhǔn)確檢測(cè)。5)遺傳病診斷：通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增與遺傳病相關(guān)的基因序列，可以進(jìn)行遺傳病的基因診斷。6)親子鑒定：通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增個(gè)體的特異性DNA序列，可以進(jìn)行親子關(guān)系的鑒定。7)法醫(yī)學(xué)應(yīng)用：通過(guò)PCR技術(shù)擴(kuò)增個(gè)體的特異性DNA序列，可以進(jìn)