北京市中醫(yī)院分子雜交技術(shù)考核一、選擇題（每題2分，共20題）1.分子雜交技術(shù)中，常用的標(biāo)記探針不包括以下哪一種？A.放射性同位素標(biāo)記B.生物素標(biāo)記C.FITC熒光標(biāo)記D.甲基紫杉醇標(biāo)記2.在Northernblot實驗中，用于檢測RNA片段大小的凝膠是？A.聚丙烯酰胺凝膠B.瓊脂糖凝膠C.氯化聚乙烯凝膠D.聚氯乙烯凝膠3.以下哪種方法不屬于原位雜交技術(shù)？A.脈沖場凝膠電泳（PFGE）雜交B.腳本原位雜交（SISH）C.熒光原位雜交（FISH）D.基因芯片雜交4.在分子雜交實驗中，雜交溫度過高可能導(dǎo)致？A.雜交效率降低B.非特異性結(jié)合增加C.探針降解D.以上都是5.以下哪種試劑常用于RNA的固定？A.甲醛B.戊二醛C.甲醇D.乙酸6.在Southernblot實驗中，用于轉(zhuǎn)移DNA片段的設(shè)備是？A.電轉(zhuǎn)移槽B.離心機C.超聲波儀D.磁力攪拌器7.原位雜交技術(shù)中，雜交后常用的洗滌步驟是？A.低溫洗滌B.高溫洗滌C.逐步升溫洗滌D.甲醇洗滌8.在熒光原位雜交（FISH）中，常用的熒光染料是？A.DAPIB.Cy3C.EthidiumbromideD.Hoechst332589.分子雜交技術(shù)中，探針的標(biāo)記方法不包括？A.堿性磷酸酶標(biāo)記B.辣根過氧化物酶標(biāo)記C.生物素標(biāo)記D.金屬離子標(biāo)記10.在RNA原位雜交中，常用的封阻試劑是？A.膽固醇B.乙醇C.甲醛D.脫氧核糖核酸二、填空題（每空1分，共10空）1.分子雜交技術(shù)的基本原理是__________與__________之間的堿基互補配對。2.Northernblot實驗主要用于檢測__________的大小和表達(dá)水平。3.原位雜交技術(shù)可分為__________和__________兩種主要類型。4.熒光原位雜交（FISH）常用于檢測__________和__________。5.分子雜交實驗中，探針的標(biāo)記方法主要有__________、__________和__________。6.RNA原位雜交中，常用的固定方法包括__________和__________。7.Southernblot實驗中，DNA片段的轉(zhuǎn)移方法主要是__________。8.分子雜交技術(shù)中，雜交后常用的洗滌試劑是__________和__________。9.原位雜交技術(shù)中，雜交溫度的選擇應(yīng)根據(jù)__________和__________確定。10.脈沖場凝膠電泳（PFGE）雜交主要用于檢測__________。三、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述分子雜交技術(shù)的原理及其在醫(yī)學(xué)診斷中的應(yīng)用。2.比較Northernblot和Southernblot實驗的異同點。3.簡述熒光原位雜交（FISH）在腫瘤診斷中的應(yīng)用。4.分析RNA原位雜交技術(shù)在中醫(yī)藥研究中的潛在應(yīng)用。四、論述題（每題10分，共2題）1.詳細(xì)說明分子雜交技術(shù)在病原體檢測中的應(yīng)用及其優(yōu)缺點。2.結(jié)合北京市中醫(yī)院的實際情況，探討分子雜交技術(shù)在中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究中的意義。答案與解析一、選擇題答案與解析1.D甲基紫杉醇標(biāo)記不屬于分子雜交技術(shù)中常用的探針標(biāo)記方法。2.BNorthernblot實驗中，RNA片段通常通過瓊脂糖凝膠電泳分離。3.D基因芯片雜交屬于高通量雜交技術(shù)，不屬于原位雜交。4.D雜交溫度過高會導(dǎo)致探針與靶序列結(jié)合不牢固，降低雜交效率，并增加非特異性結(jié)合。5.A甲醛常用于RNA的固定。6.ASouthernblot實驗中，DNA片段通過電轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移到尼龍膜上。7.C原位雜交技術(shù)通常采用逐步升溫洗滌以提高特異性。8.BCy3是常用的熒光染料之一。9.D金屬離子標(biāo)記不屬于探針的常用標(biāo)記方法。10.D脫氧核糖核酸（DNA）不是RNA原位雜交的封阻試劑。二、填空題答案與解析1.探針；靶序列2.RNA3.脈沖場凝膠電泳雜交；熒光原位雜交4.染色體定位；基因表達(dá)分析5.放射性同位素標(biāo)記；生物素標(biāo)記；熒光標(biāo)記6.甲醛固定；甲醇固定7.電轉(zhuǎn)移8.變性劑（如SSC）；乙醇9.探針的Tm值；靶序列的GC含量10.大片段DNA（如染色體）三、簡答題答案與解析1.分子雜交技術(shù)原理及其應(yīng)用-原理：分子雜交技術(shù)基于核酸堿基互補配對原則，利用標(biāo)記的探針（DNA或RNA）與靶序列（DNA或RNA）結(jié)合，通過檢測信號進行分析。-應(yīng)用：在醫(yī)學(xué)診斷中，可用于病原體檢測（如病毒、細(xì)菌）、基因表達(dá)分析、腫瘤標(biāo)志物檢測等。2.Northernblot與Southernblot的異同點-相同點：均基于核酸雜交原理，用于檢測核酸片段。-不同點：Northernblot檢測RNA，Southernblot檢測DNA；Northernblot使用瓊脂糖凝膠，Southernblot使用聚丙烯酰胺凝膠；Northernblot需預(yù)雜交封閉背景。3.FISH在腫瘤診斷中的應(yīng)用-FISH可用于檢測染色體數(shù)目異常（如非整倍體）、基因擴增（如HER2基因擴增）、腫瘤靶向治療指導(dǎo)等。4.RNA原位雜交在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用-RNA原位雜交可分析中藥成分對細(xì)胞基因表達(dá)的影響，為中藥作用機制研究提供依據(jù)。四、論述題答案與解析1.分子雜交技術(shù)在病原體檢測中的應(yīng)用-應(yīng)用：可通過核酸雜交檢測病原體DNA或RNA，如PCR-雜交聯(lián)用技術(shù)可提高檢測靈敏度。-優(yōu)點：特異性高、靈敏度高。-缺點：操作復(fù)雜、耗時