一、引言紫外可見光光譜儀（UV-VisSpectrophotometer）是基于物質(zhì)對(duì)紫外光（____nm）和可見光（____nm）的選擇性吸收原理，用于定性分析（化合物結(jié)構(gòu)鑒定）、定量分析（濃度測(cè)定）、純度檢查（雜質(zhì)含量分析）及反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究的重要實(shí)驗(yàn)室儀器。其核心功能是通過測(cè)量樣品的吸光度（A），結(jié)合朗伯-比爾定律（\(A=\varepsilonbc\)）實(shí)現(xiàn)對(duì)物質(zhì)的精準(zhǔn)分析。規(guī)范的操作流程與注意事項(xiàng)是保證測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性、延長(zhǎng)儀器壽命及保障操作人員安全的關(guān)鍵。本文以通用型UV-Vis光譜儀（如ShimadzuUV-2600、PerkinElmerLambda950等）為例，詳細(xì)闡述操作規(guī)程與注意事項(xiàng)。二、操作規(guī)程（一）開機(jī)前準(zhǔn)備1.環(huán)境核查儀器需放置在平穩(wěn)、干燥、通風(fēng)的臺(tái)面，避免強(qiáng)光直射（如陽光）、劇烈震動(dòng)（如靠近離心機(jī)）及腐蝕性氣體（如鹽酸揮發(fā)物）。環(huán)境溫度保持15-30℃，相對(duì)濕度≤70%（濕度超標(biāo)時(shí)需開啟除濕機(jī)，防止光學(xué)部件受潮）。2.電源與耗材檢查確認(rèn)電源插座接地良好（三線插頭），電壓穩(wěn)定（波動(dòng)≤±5%）；若使用穩(wěn)壓器，需提前10分鐘開啟預(yù)熱。準(zhǔn)備空白溶劑（如蒸餾水、乙醇，純度≥分析純，且在測(cè)定波長(zhǎng)范圍內(nèi)無吸收）、樣品溶液（提前溶解、過濾去除顆粒物）及比色皿（石英比色皿用于紫外區(qū)，玻璃比色皿用于可見光區(qū)，需提前配對(duì)，吸光度差≤0.005）。3.儀器外觀檢查檢查主機(jī)、鍵盤、顯示器等部件是否完好，樣品室門是否關(guān)閉，比色皿架是否在位，無異物（如紙屑、試劑殘留）。（二）開機(jī)與預(yù)熱1.開機(jī)順序先開啟主機(jī)電源（位于儀器背面或側(cè)面），待主機(jī)自檢完成（約30秒，指示燈由紅變綠）后，開啟計(jì)算機(jī)，啟動(dòng)儀器專用軟件（如ShimadzuUVProbe、PerkinElmerSpectrumSoftware）。2.燈源開啟與預(yù)熱根據(jù)測(cè)定波長(zhǎng)范圍選擇燈源：紫外區(qū)（<400nm）開啟氘燈，可見光區(qū)（>400nm）開啟鎢燈，全波長(zhǎng)掃描（____nm）同時(shí)開啟兩者。燈開啟后需預(yù)熱20-30分鐘，待軟件顯示“Ready”（能量穩(wěn)定）后方可進(jìn)行測(cè)定。注意：氘燈壽命約____小時(shí)，鎢燈約____小時(shí)，需通過軟件查詢使用時(shí)間，超過壽命及時(shí)更換。（三）基線校正基線校正是消除儀器自身誤差（如燈能量波動(dòng)、比色皿差異、溶劑吸收）的關(guān)鍵步驟，每次測(cè)定前必須執(zhí)行。1.放置空白對(duì)照將裝有空白溶劑的比色皿（與樣品同批次、同規(guī)格）放入樣品室的比色皿架，確保透光面（光滑面）朝向光源（通常為比色皿架的前后方向），關(guān)閉樣品室門。2.設(shè)置校正參數(shù)在軟件中選擇“BaselineCorrection”（基線校正）功能，設(shè)置：校正波長(zhǎng)范圍：覆蓋測(cè)定所需波長(zhǎng)（如____nm）；掃描速度：中等速度（如200nm/min，與后續(xù)樣品測(cè)定一致）；狹縫寬度：1-2nm（根據(jù)樣品吸收強(qiáng)度調(diào)整，狹縫寬可增加光通量，但降低分辨率；狹縫窄則相反）。3.執(zhí)行校正點(diǎn)擊“Start”（開始），儀器自動(dòng)掃描空白對(duì)照的吸收值，生成基線（理想基線應(yīng)為平直直線，吸光度值≤0.005）。若基線漂移較大（如吸光度波動(dòng)>0.01），需重新檢查空白溶劑、比色皿或儀器狀態(tài)，再次校正。（四）樣品測(cè)定1.樣品制備將樣品溶解于選定的溶劑中，配制吸光度在0.2-0.8之間的溶液（此范圍線性關(guān)系最佳，誤差最小）。若濃度過高，需用溶劑稀釋；若過低，需濃縮或更換更靈敏的檢測(cè)方法。樣品需經(jīng)過過濾（0.45μm濾膜）或離心（____rpm，10分鐘），去除顆粒物（避免堵塞比色皿或影響透光）。2.裝樣與放置用樣品溶液潤(rùn)洗比色皿2-3次（每次約1/3體積），避免殘留溶劑影響測(cè)定。將樣品溶液倒入比色皿，液面高度約為2/3-3/4容積（避免溢出，同時(shí)保證光程一致）。用擦鏡紙輕輕擦拭比色皿的透光面（去除指紋、水漬），禁止用毛刷、砂紙等擦拭（避免劃傷）。將比色皿放入樣品室的比色皿架（通常為第2或第3位，根據(jù)軟件設(shè)置），關(guān)閉樣品室門。3.設(shè)置測(cè)定參數(shù)在軟件中選擇“SampleMeasurement”（樣品測(cè)定）功能，設(shè)置：測(cè)定模式：波長(zhǎng)掃描（WavelengthScan，用于獲取吸收光譜）或固定波長(zhǎng)測(cè)定（FixedWavelength，用于定量分析）；波長(zhǎng)范圍：根據(jù)樣品吸收特性設(shè)置（如測(cè)定苯酚的λmax，可設(shè)____nm）；掃描速度：與基線校正一致（如200nm/min）；數(shù)據(jù)間隔：1nm（間隔越小，數(shù)據(jù)越詳細(xì)，但耗時(shí)越長(zhǎng)）；狹縫寬度：與基線校正一致（1-2nm）。4.執(zhí)行測(cè)定點(diǎn)擊“Start”（開始），儀器自動(dòng)掃描樣品的吸收光譜。掃描過程中禁止：打開樣品室門（避免光線干擾）；觸碰儀器（避免震動(dòng)影響數(shù)據(jù)）；切換燈源（避免能量波動(dòng)）。5.重復(fù)測(cè)定同一樣品需測(cè)定2-3次，取平均值（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD≤2%）。若結(jié)果差異較大，需檢查樣品均勻性、比色皿清潔度或儀器穩(wěn)定性。（五）數(shù)據(jù)處理1.光譜分析掃描完成后，軟件顯示樣品的吸收光譜圖。通過“PeakFind”（峰值查找）功能確定最大吸收波長(zhǎng)（λmax），用于定性分析（如與標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)比，判斷化合物結(jié)構(gòu)）。2.定量計(jì)算采用朗伯-比爾定律（\(A=\varepsilonbc\)）進(jìn)行濃度計(jì)算，常用方法：標(biāo)準(zhǔn)曲線法：配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液（如0.1、0.2、0.5、1.0mg/mL），測(cè)定其吸光度，繪制\(A-c\)標(biāo)準(zhǔn)曲線（線性相關(guān)系數(shù)\(r≥0.995\)），代入樣品吸光度計(jì)算濃度。直接比較法：若標(biāo)準(zhǔn)溶液與樣品濃度相近（如樣品濃度約為0.5mg/mL，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0.5mg/mL），可通過\(c_{樣品}=c_{標(biāo)準(zhǔn)}×(A_{樣品}/A_{標(biāo)準(zhǔn)})\)計(jì)算濃度。3.數(shù)據(jù)保存與導(dǎo)出將光譜圖、吸光度值、濃度結(jié)果等數(shù)據(jù)保存至計(jì)算機(jī)指定文件夾（如“UV-VisData/____/樣品名稱”），保存格式可為儀器專用格式（如.spc）或通用格式（如.xls、.pdf），便于后續(xù)查閱。如需打印報(bào)告，可通過軟件生成標(biāo)準(zhǔn)化報(bào)告（包含樣品信息、測(cè)定參數(shù)、光譜圖、結(jié)果等），并打印存檔。（六）關(guān)機(jī)流程1.關(guān)閉燈源：在軟件中關(guān)閉氘燈和鎢燈（避免燈長(zhǎng)時(shí)間開啟縮短壽命）。2.退出軟件：關(guān)閉儀器專用軟件，退出計(jì)算機(jī)系統(tǒng)。3.關(guān)閉主機(jī)：關(guān)閉主機(jī)電源（若儀器有冷卻風(fēng)扇，需待風(fēng)扇停止轉(zhuǎn)動(dòng)后再關(guān)閉）。4.清理樣品室：取出比色皿，用蒸餾水沖洗干凈（若樣品為有機(jī)物，可用乙醇浸泡后沖洗），晾干后放入比色皿盒。用乙醇棉球擦拭樣品室內(nèi)部（去除樣品殘留），關(guān)閉樣品室門。5.整理臺(tái)面：將試劑、耗材放回原位，清理實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，保持整潔。三、注意事項(xiàng)（一）儀器維護(hù)1.燈源維護(hù)定期檢查燈能量（軟件可顯示燈能量值，如氘燈在250nm處能量≥1000counts為正常）。若能量下降至正常值得80%以下，需更換燈。更換燈時(shí)，需關(guān)閉電源，待燈冷卻10分鐘后，戴手套操作（避免手接觸燈的石英部分，防止指紋影響透光），按照儀器說明書更換。2.比色皿維護(hù)材質(zhì)選擇：紫外區(qū)（<400nm）必須使用石英比色皿（玻璃對(duì)紫外光有吸收）；可見光區(qū)（>400nm）可用玻璃或石英比色皿。清潔方法：用完后立即用蒸餾水沖洗，若有頑固污漬，可用10%稀硝酸浸泡30分鐘，再用蒸餾水沖洗干凈。禁止用強(qiáng)堿（如氫氧化鈉）浸泡（會(huì)腐蝕石英）。儲(chǔ)存方法：晾干后放入比色皿盒，避免與硬物接觸，防止破碎。3.樣品室維護(hù)定期（每月1次）用乙醇棉球擦拭樣品室內(nèi)部，去除樣品殘留和灰塵。若有液體溢出，需立即用干紗布吸干，再用乙醇擦拭（避免腐蝕儀器）。4.軟件維護(hù)定期備份儀器軟件和數(shù)據(jù)（每月1次），避免數(shù)據(jù)丟失。若軟件出現(xiàn)異常（如無法啟動(dòng)、數(shù)據(jù)無法保存），需聯(lián)系儀器廠商技術(shù)支持，不要自行修改軟件設(shè)置。（二）操作安全1.高壓警告：儀器內(nèi)部有高壓電路（如氘燈電源），非專業(yè)人員禁止拆開儀器（避免觸電）。若儀器出現(xiàn)冒煙、異味等故障，需立即關(guān)閉電源，聯(lián)系技術(shù)支持。2.溶劑安全：使用揮發(fā)性有機(jī)溶劑（如乙醇、甲醇）時(shí)，需在通風(fēng)櫥中操作（避免吸入揮發(fā)物），遠(yuǎn)離火源（避免火災(zāi)）。若溶劑濺到皮膚或眼睛，需立即用大量清水沖洗，必要時(shí)就醫(yī)。3.燈源安全：氘燈含有汞（有毒），若燈破碎，需立即關(guān)閉電源，戴手套收集碎片（放入密封容器），用硫磺粉覆蓋污染區(qū)域（吸收汞蒸氣），并聯(lián)系專業(yè)人員處理（避免汞中毒）。4.樣品安全：處理有毒、有害樣品（如重金屬離子、有機(jī)毒物）時(shí)，需戴手套、口罩等防護(hù)用品，避免直接接觸。實(shí)驗(yàn)后，樣品需按照實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)定處理（如倒入廢液桶），不要隨意排放。（三）樣品處理1.樣品純度：樣品需經(jīng)過過濾或離心，去除顆粒物（避免堵塞比色皿或影響透光）。2.溶劑選擇：溶劑需與樣品互溶，且在測(cè)定波長(zhǎng)范圍內(nèi)無吸收（如蒸餾水在紫外區(qū)無吸收，乙醇在250nm以上無吸收）。若溶劑有吸收，需用該溶劑作為空白對(duì)照，消除溶劑影響。3.濃度范圍：樣品濃度需控制在吸光度0.2-0.8之間（若吸光度>1.0，需稀釋；若吸光度<0.1，需濃縮），此范圍線性關(guān)系最佳，誤差最小。（四）故障排查問題可能原因解決方法基線漂移燈未預(yù)熱好；環(huán)境溫度變化大；樣品室有異物；空白溶劑不純延長(zhǎng)燈預(yù)熱時(shí)間（至30分鐘）；保持環(huán)境溫度穩(wěn)定；清理樣品室；更換空白溶劑無吸收峰樣品濃度太低；波長(zhǎng)設(shè)置錯(cuò)誤；比色皿放反；燈未開啟濃縮樣品；檢查波長(zhǎng)設(shè)置（如是否在樣品吸收范圍內(nèi)）；調(diào)整比色皿方向（透光面朝向光源）；開啟燈源并預(yù)熱吸光度值不穩(wěn)定電源波動(dòng)；比色皿沒放穩(wěn)；樣品有氣泡；儀器震動(dòng)使用穩(wěn)壓器；重新放置比色皿（確保固定到位）；去除樣品氣泡（如超聲脫氣）；將儀器放置在平穩(wěn)臺(tái)面燈不亮燈壽命到期；電源故障；燈座接觸不良更換燈；檢查電源（如插座是否通電）；清潔燈座（用乙醇棉球擦拭）四、結(jié)語紫外可見光光譜儀是實(shí)驗(yàn)室精準(zhǔn)分析的核心工具，其操作的規(guī)范性直接影響測(cè)定結(jié)果的可靠性。通過嚴(yán)格遵循上述操作規(guī)程，加強(qiáng)儀