2025pcr上崗證考試題及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題1分，共20分）1.PCR技術(shù)中，引物的作用是（）A.提供模板B.催化合成DNAC.與模板結(jié)合并引導(dǎo)DNA合成D.連接DNA片段答案：C2.PCR反應(yīng)體系中，dNTP的作用是（）A.提供能量B.參與酶的激活C.作為合成DNA的原料D.穩(wěn)定反應(yīng)體系答案：C3.以下哪種因素不會影響PCR反應(yīng)的特異性（）A.引物的特異性B.dNTP的濃度C.模板的純度D.退火溫度答案：B4.在PCR反應(yīng)中，延伸溫度一般為（）A.50-55℃B.55-60℃C.60-65℃D.72℃答案：D5.PCR技術(shù)擴(kuò)增的DNA片段長度主要取決于（）A.引物的長度B.Taq酶的活性C.dNTP的用量D.模板的長度答案：A6.進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，防止污染的關(guān)鍵措施不包括（）A.嚴(yán)格的無菌操作B.使用一次性吸頭C.定期更換實(shí)驗(yàn)服D.實(shí)驗(yàn)后及時(shí)清理臺面答案：C7.PCR產(chǎn)物的檢測方法不包括（）A.凝膠電泳B.核酸測序C.蛋白質(zhì)印跡D.熒光定量分析答案：C8.以下關(guān)于PCR技術(shù)的說法，錯(cuò)誤的是（）A.可用于基因克隆B.只能擴(kuò)增已知序列的DNAC.反應(yīng)過程包括變性、退火、延伸D.具有靈敏度高的特點(diǎn)答案：B9.在PCR反應(yīng)中，鎂離子濃度過高可能導(dǎo)致（）A.特異性增強(qiáng)B.非特異性擴(kuò)增增加C.反應(yīng)速度減慢D.酶活性降低答案：B10.用于PCR的模板DNA可以是（）A..mRNAB.蛋白質(zhì)C.基因組DNAD.tRNA答案：C11.PCR反應(yīng)中，引物的設(shè)計(jì)原則不包括（）A.長度一般為15-30bpB.G+C含量在40%-60%C.引物自身不能有互補(bǔ)序列D.引物之間可以有互補(bǔ)序列答案：D12.以下哪種PCR技術(shù)可用于定量分析（）A.常規(guī)PCRB.巢式PCRC.多重PCRD.熒光定量PCR答案：D13.PCR實(shí)驗(yàn)中，變性的目的是（）A.使模板DNA解鏈B.激活Taq酶C.促進(jìn)引物與模板結(jié)合D.合成DNA答案：A14.退火溫度的選擇主要取決于（）A.引物的Tm值B.模板的濃度C.Taq酶的用量D.dNTP的濃度答案：A15.在PCR反應(yīng)體系中，Taq酶的作用是（）A.催化DNA合成B.降解模板DNAC.穩(wěn)定反應(yīng)體系D.提供能量答案：A16.PCR技術(shù)最早由誰發(fā)明（）A.KaryMullisB.WatsonC.CrickD.Mendel答案：A17.以下哪種情況可能導(dǎo)致PCR反應(yīng)失?。ǎ〢.引物濃度過低B.模板DNA量過多C.退火溫度過高D.以上都有可能答案：D18.PCR產(chǎn)物的大小與預(yù)期不符，可能原因是（）A.引物設(shè)計(jì)錯(cuò)誤B.Taq酶活性過高C.dNTP濃度過高D.延伸時(shí)間過長答案：A19.在PCR實(shí)驗(yàn)中，為了保證反應(yīng)的準(zhǔn)確性，應(yīng)盡量避免（）A.反復(fù)凍融模板DNA和試劑B.嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行實(shí)驗(yàn)C.使用高質(zhì)量的試劑D.定期校準(zhǔn)儀器答案：A20.PCR技術(shù)可用于以下哪些方面（）A.疾病診斷B.親子鑒定C.古DNA研究D.以上都是答案：D二、多項(xiàng)選擇題（每題1分，共20分）1.PCR反應(yīng)體系通常包括（）A.模板DNAB.引物C.dNTPD.Taq酶E.緩沖液答案：ABCDE2.影響PCR反應(yīng)結(jié)果的因素有（）A.引物質(zhì)量B.模板純度C.反應(yīng)溫度D.循環(huán)次數(shù)E.以上都是答案：ABCDE3.PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域包括（）A.基因克隆B.疾病診斷C.遺傳分析D.環(huán)境監(jiān)測E.以上都是答案：ABCDE4.以下哪些屬于PCR技術(shù)的衍生技術(shù)（）A.熒光定量PCRB.巢式PCRC.多重PCRD.逆轉(zhuǎn)錄PCRE.以上都是答案：ABCDE5.在PCR實(shí)驗(yàn)中，防止交叉污染的措施有（）A.分區(qū)操作B.使用一次性耗材C.定期消毒實(shí)驗(yàn)室D.嚴(yán)格規(guī)范操作E.以上都是答案：ABCDE6.PCR產(chǎn)物的檢測方法有（）A.凝膠電泳B.核酸測序C.熒光定量分析D.酶切分析E.以上都是答案：ABCDE7.引物設(shè)計(jì)時(shí)需要考慮的因素包括（）A.長度B.G+C含量C.特異性D.引物之間的互補(bǔ)性E.以上都是答案：ABCDE8.PCR反應(yīng)中，退火溫度的選擇依據(jù)有（）A.引物的Tm值B.模板的復(fù)雜性C.反應(yīng)體系的離子強(qiáng)度D.預(yù)期擴(kuò)增產(chǎn)物的長度E.以上都是答案：ABCDE9.Taq酶的特點(diǎn)包括（）A.耐高溫B.具有5'-3'聚合酶活性C.無3'-5'外切酶活性D.可用于PCR反應(yīng)E.以上都是答案：ABCDE10.PCR技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)有（）A.靈敏度高B.特異性強(qiáng)C.操作簡便D.可快速擴(kuò)增特定DNA片段E.以上都是答案：ABCDE11.以下哪些情況可能導(dǎo)致PCR反應(yīng)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增（）A.引物特異性差B.退火溫度過低C.模板濃度過高D.Taq酶用量過多E.以上都是答案：ABCDE12.在進(jìn)行熒光定量PCR時(shí)，常用的熒光染料有（）A.SYBRGreenIB.TaqMan探針C.EvaGreenD.溴化乙錠E.以上都是答案：ABC13.PCR技術(shù)在腫瘤研究中的應(yīng)用包括（）A.腫瘤基因突變檢測B.腫瘤標(biāo)志物定量分析C.腫瘤細(xì)胞克隆性分析D.腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制研究E.以上都是答案：ABCDE14.以下關(guān)于巢式PCR的說法正確的是（）A.增加了擴(kuò)增特異性B.分兩輪進(jìn)行擴(kuò)增C.第二輪引物位于第一輪擴(kuò)增產(chǎn)物內(nèi)部D.可用于低豐度模板的擴(kuò)增E.以上都是答案：ABCDE15.在PCR實(shí)驗(yàn)中，模板DNA的質(zhì)量要求包括（）A.完整性好B.OD260/OD280在1.8-2.0之間C.無蛋白質(zhì)、RNA等雜質(zhì)污染D.濃度適中E.以上都是答案：ABCDE16.PCR技術(shù)在傳染病診斷中的優(yōu)勢有（）A.快速檢測病原體核酸B.靈敏度高，可早期診斷C.可進(jìn)行病原體分型和定量分析D.操作相對簡便E.以上都是答案：ABCDE17.多重PCR可用于（）A.同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)基因片段B.基因分型C.病原體混合感染的診斷D.遺傳疾病的診斷E.以上都是答案：ABCDE18.在PCR反應(yīng)中，dNTP的濃度過高可能會導(dǎo)致（）A.非特異性擴(kuò)增增加B.反應(yīng)體系粘度增加C.Taq酶活性受抑制D.引物二聚體形成增加E.以上都是答案：ABCDE19.逆轉(zhuǎn)錄PCR的應(yīng)用包括（）A.從mRNA合成cDNAB.基因表達(dá)分析C.病毒RNA檢測D.腫瘤相關(guān)基因研究E.以上都是答案：ABCDE20.PCR技術(shù)在法醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用有（）A.親子鑒定B.個(gè)體識別C.犯罪現(xiàn)場物證分析D.遺傳疾病診斷E.以上都是答案：ABC三、判斷題（每題1分，共10分）1.PCR技術(shù)只能擴(kuò)增雙鏈DNA。（）答案：×2.引物的長度越長，PCR反應(yīng)的特異性越高。（）答案：×3.在PCR反應(yīng)中，模板DNA的量越多越好。（）答案：×4.Taq酶具有3'-5'外切酶活性，可用于校正錯(cuò)誤摻入的堿基。（）答案：×5.熒光定量PCR只能用于定量分析，不能用于定性檢測。（）答案：×6.PCR產(chǎn)物的大小與引物的長度無關(guān)。（）答案：×7.進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，可在同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)同時(shí)進(jìn)行不同樣本的PCR反應(yīng)。（）答案：×8.退火溫度過高會導(dǎo)致引物與模板結(jié)合不充分，影響擴(kuò)增效率。（）答案：√9.PCR技術(shù)可用于擴(kuò)增線粒體DNA。（）答案：√10.巢式PCR比常規(guī)PCR的特異性更高，因此擴(kuò)增效率也更高。（）答案：×四、填空題（每題1分，共10分）1.PCR反應(yīng)的基本步驟包括變性、（）、延伸。答案：退火2.PCR技術(shù)擴(kuò)增的DNA片段長度主要由（）決定。答案：引物3.在PCR反應(yīng)體系中，（）提供合成DNA的原料。答案：dNTP4.為保證PCR反應(yīng)的特異性，引物設(shè)計(jì)時(shí)應(yīng)避免（）。答案：引物二聚體形成5.PCR產(chǎn)物的檢測常用（）方法。答案：凝膠電泳6.熒光定量PCR常用的熒光信號檢測方法有（）和探針法。答案：染料法7.在PCR實(shí)驗(yàn)中，防止污染的關(guān)鍵是（）操作規(guī)范。答案：嚴(yán)格的無菌8.Taq酶的最適反應(yīng)溫度一般為（）。答案：72℃9.PCR技術(shù)最早發(fā)明于（）年。答案：198510.進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)根據(jù)（）選擇合適的引物。答案：模板序列五、簡答題（每題10分，共20分）1.簡述PCR反應(yīng)體系的組成及各成分的作用。答案：PCR反應(yīng)體系通常包括模板DNA、引物、dNTP、Taq酶和緩沖液。模板DNA是擴(kuò)增的起始模板。引物與模板結(jié)合，引導(dǎo)DNA合成。dNTP作為合成DNA的原料。Taq酶催化DNA合成。緩沖液提供適宜的反應(yīng)環(huán)境，維持pH、離子強(qiáng)度等。2.簡述影響PCR反應(yīng)結(jié)果的主要因素及如何優(yōu)化。答案：影響因素：引物質(zhì)量、模板純度、反應(yīng)溫度、循環(huán)次數(shù)、dNTP濃度、Taq酶用量等。優(yōu)化：設(shè)計(jì)高質(zhì)量引物，保證模板純度，根據(jù)引物Tm值選擇合適退火溫度，合理設(shè)置循環(huán)次數(shù)，控制dNTP濃度和Taq酶用量，嚴(yán)格規(guī)范操作，避免污染。六、論述題（每題10分，共20分）1.論述PCR技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用及優(yōu)勢。答案：應(yīng)用：病原體核酸檢測，如病毒、細(xì)菌、真菌等；腫瘤相關(guān)基因檢測，如基因突變、甲基化等；遺傳疾病診斷，如基因分型等。優(yōu)勢：快速檢測病原體核酸，靈敏度高可早期診斷；可進(jìn)行病原體分型和定量分析，有助于疾病的診斷、治療和監(jiān)測；操作相對簡便，能在較短時(shí)間內(nèi)獲得結(jié)果，為臨床診斷提供重要依據(jù)。2