pcr上崗證考試題及答案陜西省

一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR技術(shù)的基本原理是（）A.基因重組B.核酸分子雜交C.核酸的變性、復(fù)性和延伸D.基因突變答案：C2.在PCR反應(yīng)中，下列哪種物質(zhì)起催化作用（）A.引物B.dNTPC.Taq酶D.模板DNA答案：C3.PCR反應(yīng)的變性溫度一般為（）A.90-95℃B.70-75℃C.50-55℃D.30-35℃答案：A4.以下哪種不是PCR的產(chǎn)物檢測(cè)方法（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.熒光定量檢測(cè)C.蛋白質(zhì)印跡法D.聚丙烯酰胺凝膠電泳答案：C5.PCR反應(yīng)中，引物的作用是（）A.提供3'-OH末端供dNTP連接B.起始模板的合成C.催化反應(yīng)進(jìn)行D.解開雙鏈DNA答案：A6.在PCR反應(yīng)體系中，dNTP的作用是（）A.構(gòu)建新的DNA鏈B.穩(wěn)定DNA結(jié)構(gòu)C.激活酶活性D.提高反應(yīng)特異性答案：A7.熒光定量PCR中，熒光信號(hào)的檢測(cè)是在（）A.變性階段B.退火階段C.延伸階段D.每個(gè)循環(huán)都檢測(cè)答案：D8.PCR反應(yīng)的退火溫度主要取決于（）A.模板長(zhǎng)度B.引物長(zhǎng)度和序列C.dNTP濃度D.Taq酶活性答案：B9.以下關(guān)于PCR的說法錯(cuò)誤的是（）A.可以擴(kuò)增微量的DNAB.特異性非常高C.操作簡(jiǎn)單，不需要特殊儀器D.廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)研究答案：C10.如果PCR擴(kuò)增后沒有得到預(yù)期產(chǎn)物，下列哪項(xiàng)不是可能的原因（）A.引物設(shè)計(jì)錯(cuò)誤B.模板量過多C.反應(yīng)體系中缺少某種成分D.退火溫度不合適答案：B二、多項(xiàng)選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)體系包括以下哪些成分（）A.模板DNAB.引物C.Taq酶D.dNTPE.緩沖液答案：ABCDE2.影響PCR特異性的因素有（）A.引物設(shè)計(jì)B.退火溫度C.模板純度D.Taq酶質(zhì)量E.反應(yīng)循環(huán)數(shù)答案：ABCDE3.熒光定量PCR的優(yōu)點(diǎn)包括（）A.靈敏度高B.特異性強(qiáng)C.可以定量分析D.操作簡(jiǎn)單快速E.不需要標(biāo)準(zhǔn)品答案：ABCD4.在PCR實(shí)驗(yàn)中，防止污染的措施有（）A.嚴(yán)格分區(qū)操作B.實(shí)驗(yàn)用品專用C.定期清潔儀器設(shè)備D.做好操作人員的培訓(xùn)E.使用一次性用品答案：ABCDE5.以下哪些是PCR技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用（）A.病原體檢測(cè)B.基因分型C.遺傳性疾病診斷D.腫瘤研究E.藥物研發(fā)答案：ABCDE6.引物設(shè)計(jì)的原則包括（）A.長(zhǎng)度合適B.避免二級(jí)結(jié)構(gòu)C.特異性高D.G-C含量適中E.3'端避免錯(cuò)配答案：ABCDE7.PCR產(chǎn)物的常見純化方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳后切膠回收B.柱層析法C.磁珠法D.沉淀法E.超濾法答案：ABCDE8.下列關(guān)于Taq酶的說法正確的是（）A.耐高溫B.具有5'-3'聚合酶活性C.具有3'-5'外切酶活性D.是PCR反應(yīng)中的關(guān)鍵酶E.不同來源的Taq酶活性可能不同答案：ABDE9.在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，需要考慮的樣本因素有（）A.樣本類型B.樣本量C.樣本的采集方法D.樣本的保存條件E.樣本的處理方法答案：ABCDE10.以下關(guān)于PCR反應(yīng)循環(huán)數(shù)的說法正確的是（）A.循環(huán)數(shù)越多，產(chǎn)物量越多B.過多的循環(huán)數(shù)可能導(dǎo)致非特異性產(chǎn)物增加C.循環(huán)數(shù)過少可能導(dǎo)致產(chǎn)物量不足D.根據(jù)模板量和實(shí)驗(yàn)?zāi)康拇_定循環(huán)數(shù)E.一般在20-40個(gè)循環(huán)之間答案：ABCDE三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR反應(yīng)可以無限擴(kuò)增DNA。（）答案：錯(cuò)誤2.引物的長(zhǎng)度越長(zhǎng)越好。（）答案：錯(cuò)誤3.所有的Taq酶都具有3'-5'外切酶活性。（）答案：錯(cuò)誤4.熒光定量PCR只能檢測(cè)DNA。（）答案：錯(cuò)誤5.PCR反應(yīng)中，模板DNA可以是雙鏈也可以是單鏈。（）答案：正確6.在PCR反應(yīng)體系中，緩沖液的作用是維持pH值穩(wěn)定。（）答案：正確7.只要引物設(shè)計(jì)正確，PCR就一定能得到預(yù)期產(chǎn)物。（）答案：錯(cuò)誤8.瓊脂糖凝膠電泳可以根據(jù)DNA片段大小分離PCR產(chǎn)物。（）答案：正確9.PCR技術(shù)只能用于研究，不能用于臨床診斷。（）答案：錯(cuò)誤10.反應(yīng)體系中dNTP的濃度越高越好。（）答案：錯(cuò)誤四、簡(jiǎn)答題（每題5分，共4題）1.簡(jiǎn)述PCR的基本步驟。答案：PCR的基本步驟包括變性、退火和延伸。變性是將模板DNA加熱至90-95℃，使雙鏈DNA解開為單鏈；退火是將溫度降至引物的退火溫度（一般50-55℃），使引物與模板DNA特異性結(jié)合；延伸是在70-75℃下，Taq酶以dNTP為原料，從引物的3'端開始合成新的DNA鏈。2.說明引物設(shè)計(jì)的重要性及主要注意事項(xiàng)。答案：引物設(shè)計(jì)非常重要，直接影響PCR的特異性和效率。主要注意事項(xiàng)包括長(zhǎng)度合適（18-25bp左右）、避免二級(jí)結(jié)構(gòu)、特異性高（與模板互補(bǔ)）、G-C含量適中（40%-60%）、3'端避免錯(cuò)配等。3.熒光定量PCR中常用的熒光標(biāo)記方法有哪些？答案：熒光定量PCR中常用的熒光標(biāo)記方法有SYBRGreenI法和TaqMan探針法。SYBRGreenI可與雙鏈DNA結(jié)合發(fā)出熒光；TaqMan探針法是通過特異性的探針與模板結(jié)合，在擴(kuò)增過程中被水解發(fā)出熒光。4.簡(jiǎn)述PCR實(shí)驗(yàn)中防止交叉污染的主要措施。答案：主要措施有嚴(yán)格分區(qū)操作（如試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴(kuò)增區(qū)等）、實(shí)驗(yàn)用品專用、定期清潔儀器設(shè)備、做好操作人員培訓(xùn)、使用一次性用品等。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論P(yáng)CR技術(shù)在新冠病毒檢測(cè)中的作用。答案：PCR技術(shù)在新冠病毒檢測(cè)中作用重大。它可以特異性地?cái)U(kuò)增新冠病毒的核酸片段，通過檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物來確定是否感染。具有高靈敏度和特異性，能在早期發(fā)現(xiàn)病毒感染，為疫情防控、患者診斷和治療提供關(guān)鍵依據(jù)。2.如何提高PCR反應(yīng)的特異性？答案：提高PCR反應(yīng)特異性可從多方面著手。精確設(shè)計(jì)引物，確保合適長(zhǎng)度、高特異性等；優(yōu)化退火溫度；保證模板純度；使用高質(zhì)量Taq酶；合理控制反應(yīng)循環(huán)數(shù)等。3.比較瓊脂糖凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳在PCR產(chǎn)物檢測(cè)中的優(yōu)缺點(diǎn)。答案：瓊脂糖凝膠電泳操作簡(jiǎn)單、成本低，可分離較大范圍的DNA片段，但分辨率相對(duì)較低。聚