15Detectionofβ-Streptococcushemolyticusinanimalbedding2021-01-25發(fā)布本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定I動(dòng)物墊料中β-溶血性鏈球菌檢測本文件規(guī)定了動(dòng)物墊料中β-溶血性鏈球菌的分離鑒GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格GB/T33682基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜鑒別微生物方法通則SN/T1538.1培養(yǎng)基制備指南第1部分：實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制SN/T1538.2培養(yǎng)基制備指南第2部分：培養(yǎng)基性能用于吸收動(dòng)物排泄物，使動(dòng)物保持舒適生活環(huán)境4設(shè)備和材料4.1冰箱：2℃~5℃。4.3均質(zhì)器。4.4漩渦振蕩器。4.7飛行時(shí)間質(zhì)譜儀。4.8二級(jí)生物安全柜。4.10光學(xué)顯微鏡。14.15無菌培養(yǎng)皿：15mm×904.16無菌試管：18mm×180mm。4.20無菌勺。4.22無菌接種環(huán)。5.2改良胰蛋白胨大豆肉湯（Modifiedtryptonesoybeanbroth,mTSB見附錄A中A.2。5.3哥倫比亞CNA血瓊脂(Columbia5.6胰蛋白胨大豆肉湯（Tryptoneso5.11飛行時(shí)間質(zhì)譜儀靶板。2挑取可疑菌落，接種哥倫比亞血瓊脂平板和應(yīng)遵循隨機(jī)性、代表性的原則。取樣過程遵循無菌操作程序，防止一切可能的外來污染。對(duì)送檢樣品包裝內(nèi)不同部位樣品進(jìn)行隨機(jī)多點(diǎn)取樣至少250g，充分混勻后稱取25g顆粒狀或粉末狀墊料樣品，加入225mLmTSB，充分振搖或均質(zhì)1min～2min，置36℃±1℃培養(yǎng)18h無菌操作將滅菌規(guī)格板（5cmi5cm）放在平面墊料表面，用浸有無菌稀釋液（無菌0.85%生理鹽水）的棉拭子，在規(guī)格板內(nèi)來回均勻涂抹整個(gè)方格3次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，然后用滅菌剪刀剪去棉3菌0.85%生理鹽水）中，充分振搖制成樣1234溶血性鏈球菌在哥倫比亞CNA血瓊脂平板上的典型菌落形態(tài)為直徑約2mm～3mm，灰白挑取可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。β-溶血性鏈球菌為革蘭氏陽性，球形或卵圓形，常排列成短挑取可疑菌落于潔凈的載玻片上，滴加適量3%過氧化氫溶液，立即產(chǎn)生氣泡者為陽性。β-溶血4綜合觸酶試驗(yàn)結(jié)果、生化鑒定結(jié)果、輔助鑒定結(jié)果等，報(bào)告25g（cm2）動(dòng)9生物安全措施檢測過程中的廢棄物需經(jīng)121℃高壓滅菌處理至少305A.1培養(yǎng)基制備及質(zhì)量保證A.2改良胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（mTSB）A.2.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基（胰蛋白胨大豆肉湯TSB）A.2.1.1成分A.2.1.2制法將A.2.1.1中各成分溶于蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)pHA.2.2抗生素溶液A.2.2.1多黏菌素溶液稱取10mg多黏菌素B于10mL滅菌A.2.2.2萘啶酮酸鈉溶液稱取10mg萘啶酮酸于10mL0.05mol/L氫A.2.3完全培養(yǎng)基A.2.3.1成分A.2.3.2制法A.3.1成分動(dòng)物組織蛋白消化液5.0g6A.3.2制法A.4哥倫比亞血瓊脂A.4.1基礎(chǔ)培養(yǎng)基A.4.1.1成分A.4.1.2制法將基礎(chǔ)培養(yǎng)基成分溶解于蒸餾水中，加熱溶解。121℃高壓滅菌15A.4.2無菌脫纖維綿羊血A.4.3完全培養(yǎng)基A.4.3.1成分A.4.3.2制法A.5革蘭氏染色液A.5.1結(jié)晶紫染色液7A.5.1.1成分A.5.1.2制法A.5.2革蘭氏碘液A.5.2.1成分A.5.2.2制法將碘與碘化鉀先進(jìn)行混合，加入蒸餾水少許充分振搖，待完全溶解后，再加蒸餾水至300mL。A.5.3沙黃復(fù)染液A.5.3.1成分A.5.3.2制法A.5.4染色方法將涂片在酒精燈火焰上固定，滴加結(jié)晶紫染色液，染1min，水洗；滴加革蘭氏碘液，作用1mA.6胰蛋白胨大豆肉湯（TSB）A.6.1成分A.6.2制法8將A.6.1中各成分溶于蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)節(jié)pH至7.3±0.2A.7.1成分A.7.2制法稱取22.2g氯化鈣（無水）溶于蒸餾水中A.8.1成分A.8.2制法吸取100mL30％過氧化氫溶液，溶于蒸餾A.9無菌生理鹽水A.9.1成分