AGEs/RAGE軸在糖尿病大鼠聽力損害中的作用及機制研究一、引言1.1研究背景與意義隨著全球經(jīng)濟的發(fā)展和人們生活方式的轉(zhuǎn)變，糖尿病已成為嚴(yán)重威脅人類健康的全球性公共衛(wèi)生問題。國際糖尿病聯(lián)盟（IDF）數(shù)據(jù)顯示，2021年全球糖尿病患者人數(shù)達(dá)5.37億，預(yù)計到2045年這一數(shù)字將攀升至7.83億。糖尿病不僅會導(dǎo)致血糖水平的異常升高，還會引發(fā)一系列嚴(yán)重的并發(fā)癥，如糖尿病腎病、糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病神經(jīng)病變等，這些并發(fā)癥嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，增加患者的死亡風(fēng)險。糖尿病引發(fā)的聽力損害作為一種常見的并發(fā)癥，近年來受到了廣泛關(guān)注。據(jù)相關(guān)研究表明，糖尿病患者聽力損失的發(fā)生率顯著高于非糖尿病患者，且隨著糖尿病病程的延長和病情的加重，聽力損害的程度也會逐漸加劇。糖尿病性聽力損失主要表現(xiàn)為雙側(cè)對稱性、進行性的感音神經(jīng)性聽力下降，通常先影響高頻聽力，逐漸向中低頻擴展，嚴(yán)重者可導(dǎo)致全頻聽力損失，甚至耳聾。糖尿病性聽力損害的發(fā)病機制較為復(fù)雜，目前尚未完全明確。一般認(rèn)為，長期的高血糖狀態(tài)會引發(fā)體內(nèi)一系列代謝紊亂，導(dǎo)致內(nèi)耳微血管病變、神經(jīng)纖維脫髓鞘、氧化應(yīng)激反應(yīng)增強以及炎癥因子釋放增加等，這些病理變化會損傷內(nèi)耳的聽覺感受器和聽神經(jīng)，從而導(dǎo)致聽力下降。其中，晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）及其受體（RAGE）信號通路在糖尿病性聽力損害的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。AGEs是由還原糖與蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或核酸等大分子物質(zhì)在非酶促條件下發(fā)生糖基化反應(yīng)形成的一類穩(wěn)定的共價結(jié)合物。在正常生理狀態(tài)下，體內(nèi)AGEs的生成與清除處于動態(tài)平衡。然而，在糖尿病患者體內(nèi)，由于長期的高血糖環(huán)境，糖基化反應(yīng)異?；钴S，AGEs的生成大量增加，且其清除速度減慢，導(dǎo)致AGEs在體內(nèi)大量蓄積。AGEs具有高度的化學(xué)活性，能夠與多種細(xì)胞表面的RAGE特異性結(jié)合，從而激活RAGE介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，如絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路、核因子-κB（NF-κB）通路等。這些信號通路的激活會引發(fā)一系列病理生理變化，包括炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)等，進而導(dǎo)致組織和器官的損傷。在糖尿病性聽力損害中，AGEs/RAGE信號通路的激活會對內(nèi)耳產(chǎn)生多方面的損害。AGEs與內(nèi)耳血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的RAGE結(jié)合，會導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，血管通透性增加，微循環(huán)障礙，進而影響內(nèi)耳的血液供應(yīng)和營養(yǎng)物質(zhì)的輸送，導(dǎo)致內(nèi)耳組織缺血缺氧。AGEs還會與內(nèi)耳神經(jīng)纖維和聽覺感受器細(xì)胞表面的RAGE結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激和炎癥信號通路，導(dǎo)致神經(jīng)纖維脫髓鞘、聽覺感受器細(xì)胞損傷和凋亡，從而影響聽覺信號的傳導(dǎo)和感知。深入研究AGEs/RAGE對糖尿病大鼠聽力損害的影響，具有重要的理論和實際意義。從理論層面來看，這有助于進一步揭示糖尿病性聽力損害的發(fā)病機制，豐富我們對糖尿病并發(fā)癥病理生理過程的認(rèn)識，為開發(fā)新的治療靶點和干預(yù)策略提供理論依據(jù)。從實際應(yīng)用角度出發(fā)，通過明確AGEs/RAGE信號通路在糖尿病性聽力損害中的作用，能夠為臨床早期診斷和防治糖尿病性聽力損害提供新的思路和方法，有助于提高糖尿病患者的聽力健康水平，改善其生活質(zhì)量，減輕社會和家庭的負(fù)擔(dān)。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在糖尿病聽力損害的研究領(lǐng)域，國內(nèi)外學(xué)者已開展了大量工作。國外方面，早在20世紀(jì)80年代，就有研究關(guān)注到糖尿病與聽力損失之間可能存在關(guān)聯(lián)。隨著研究技術(shù)的不斷進步，對糖尿病性聽力損害的發(fā)病機制、病理生理過程以及臨床特征等方面的研究逐漸深入。有研究通過對大量糖尿病患者進行長期隨訪，發(fā)現(xiàn)糖尿病患者聽力損失的發(fā)生率顯著高于普通人群，且聽力損失的程度與糖尿病病程、血糖控制水平密切相關(guān)。在發(fā)病機制研究中，利用動物模型和細(xì)胞實驗，揭示了高血糖狀態(tài)下內(nèi)耳組織的氧化應(yīng)激損傷、炎癥反應(yīng)以及神經(jīng)纖維的損傷等病理變化在糖尿病性聽力損害中的作用。國內(nèi)的研究起步相對較晚，但近年來發(fā)展迅速。學(xué)者們通過臨床流行病學(xué)調(diào)查，進一步明確了我國糖尿病患者聽力損害的現(xiàn)狀和特點，發(fā)現(xiàn)我國糖尿病患者聽力損失的發(fā)生率也處于較高水平，且呈現(xiàn)出年輕化的趨勢。在機制研究方面，國內(nèi)學(xué)者與國外研究相互印證，同時結(jié)合中醫(yī)理論，探討了中藥對糖尿病性聽力損害的防治作用及其機制，為糖尿病性聽力損害的治療提供了新的思路和方法。例如，有研究發(fā)現(xiàn)某些中藥提取物能夠通過調(diào)節(jié)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，減輕糖尿病大鼠內(nèi)耳組織的損傷，從而改善聽力。在AGEs/RAGE信號通路與糖尿病并發(fā)癥的研究中，目前已取得了較為豐碩的成果。大量研究表明，AGEs/RAGE信號通路在糖尿病腎病、糖尿病視網(wǎng)膜病變、糖尿病心血管病變等多種并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展中均起著關(guān)鍵作用。在糖尿病腎病中，AGEs與腎臟細(xì)胞表面的RAGE結(jié)合，激活NF-κB等信號通路，導(dǎo)致炎癥因子釋放增加、細(xì)胞外基質(zhì)堆積以及腎小球系膜細(xì)胞增生等病理變化，最終引起腎功能損傷。在糖尿病視網(wǎng)膜病變中，AGEs/RAGE信號通路的激活會導(dǎo)致視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷、血管通透性增加、新生血管形成以及視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞凋亡等，嚴(yán)重影響視力。在糖尿病心血管病變中，AGEs/RAGE信號通路的異常激活與血管內(nèi)皮功能障礙、動脈粥樣硬化的形成密切相關(guān)。然而，針對AGEs/RAGE對糖尿病聽力損害影響的研究仍存在一定的局限性。一方面，目前的研究大多集中在動物實驗和細(xì)胞實驗層面，臨床研究相對較少，且樣本量較小，缺乏大規(guī)模、多中心的臨床研究來進一步驗證AGEs/RAGE信號通路在糖尿病患者聽力損害中的作用及機制，這限制了研究結(jié)果在臨床實踐中的應(yīng)用和推廣。另一方面，雖然已經(jīng)明確AGEs/RAGE信號通路參與了糖尿病性聽力損害的發(fā)生發(fā)展，但對于該信號通路下游的具體分子機制以及與其他相關(guān)信號通路之間的交互作用，尚未完全闡明。此外，目前針對糖尿病性聽力損害的治療方法主要側(cè)重于控制血糖、改善微循環(huán)和營養(yǎng)神經(jīng)等常規(guī)手段，針對AGEs/RAGE信號通路的特異性治療藥物和干預(yù)措施仍處于研究階段，尚未廣泛應(yīng)用于臨床，因此，亟待深入研究以尋找更為有效的治療靶點和干預(yù)策略。1.3研究目標(biāo)與方法本研究旨在深入探究AGEs/RAGE對糖尿病大鼠聽力損害的具體影響及潛在機制，為糖尿病性聽力損害的防治提供堅實的理論依據(jù)和新穎的干預(yù)策略。在研究方法上，主要采用動物實驗結(jié)合分子生物學(xué)檢測技術(shù)。首先，選用健康成年SD大鼠，隨機分為正常對照組、糖尿病模型組、AGEs抑制劑干預(yù)組、RAGE拮抗劑干預(yù)組等。運用高糖高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素（STZ）腹腔注射的方法，構(gòu)建穩(wěn)定的糖尿病大鼠模型。通過血糖儀定期檢測大鼠血糖水平，當(dāng)空腹血糖持續(xù)穩(wěn)定在16.7mmol/L以上時，判定糖尿病模型構(gòu)建成功。正常對照組大鼠給予普通飼料喂養(yǎng)和等量生理鹽水腹腔注射。對各組大鼠進行聽力功能檢測，在建模后的不同時間點（如1個月、2個月、3個月），采用聽性腦干反應(yīng)（ABR）測試評估大鼠的聽力閾值。ABR測試是一種客觀、準(zhǔn)確的聽覺功能檢測方法，通過記錄聽覺系統(tǒng)對短聲刺激產(chǎn)生的腦干電反應(yīng)，能夠靈敏地反映聽覺通路的功能狀態(tài)。將大鼠置于隔聲屏蔽室內(nèi)，使用肌電誘發(fā)電位儀，通過插入式耳機給予短聲刺激，刺激強度從100dBSPL開始，以5dB為一檔逐步遞減，記錄能夠引出清晰ABR波形的最小刺激強度，即為聽力閾值。檢測大鼠內(nèi)耳組織中AGEs和RAGE的表達(dá)水平，在完成ABR測試后，迅速處死大鼠，取出內(nèi)耳組織。運用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS/MS）技術(shù)定量檢測內(nèi)耳組織中AGEs的含量。HPLC-MS/MS技術(shù)具有高靈敏度、高分辨率和高準(zhǔn)確性的特點，能夠準(zhǔn)確地分離和鑒定AGEs的種類和含量。采用免疫組織化學(xué)染色和蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）技術(shù)檢測RAGE在蛋白水平的表達(dá)情況，以及實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）技術(shù)檢測RAGE在mRNA水平的表達(dá)變化。免疫組織化學(xué)染色可以直觀地顯示RAGE在內(nèi)耳組織中的定位和分布情況，Westernblot和qRT-PCR則能夠定量分析RAGE的表達(dá)水平。分析AGEs/RAGE信號通路相關(guān)分子的變化，運用Westernblot和qRT-PCR技術(shù)檢測內(nèi)耳組織中與AGEs/RAGE信號通路密切相關(guān)的分子，如NF-κB、MAPK等的蛋白和mRNA表達(dá)水平，以深入了解該信號通路的激活狀態(tài)和下游分子的調(diào)控機制。通過酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）技術(shù)檢測內(nèi)耳組織中炎癥因子（如腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-6等）和氧化應(yīng)激指標(biāo)（如丙二醛、超氧化物歧化酶等）的含量，以評估炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激水平。對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析，采用SPSS22.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析（One-wayANOVA），組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，通過嚴(yán)謹(jǐn)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)分析，準(zhǔn)確揭示各組之間的差異，確保研究結(jié)果的可靠性和科學(xué)性。二、AGEs與RAGE相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1AGEs的生成與特性晚期糖基化終末產(chǎn)物（AGEs）是一類在體內(nèi)由還原糖（如葡萄糖、果糖等）與蛋白質(zhì)、脂質(zhì)或核酸等大分子物質(zhì)的游離氨基之間，通過非酶促的糖基化反應(yīng)（又稱美拉德反應(yīng)）逐步形成的穩(wěn)定共價結(jié)合物。在正常生理狀態(tài)下，體內(nèi)存在著一定水平的AGEs，這是機體新陳代謝過程中不可避免的產(chǎn)物，其生成與清除處于相對平衡的狀態(tài)。然而，在糖尿病患者體內(nèi)，由于長期的高血糖環(huán)境，這一平衡被打破，AGEs的生成顯著增加。糖尿病高血糖環(huán)境下AGEs的生成過程較為復(fù)雜，主要分為三個階段。首先是早期階段，還原糖（以葡萄糖為例）的羰基與蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)中的游離氨基發(fā)生親核加成反應(yīng)，形成不穩(wěn)定的Schiff堿。這一反應(yīng)是快速且可逆的，Schiff堿可通過Amadori重排進一步轉(zhuǎn)化為較為穩(wěn)定的Amadori產(chǎn)物，這一過程則是緩慢且不可逆的。隨著時間的推移，Amadori產(chǎn)物會進一步發(fā)生一系列復(fù)雜的重排、氧化、脫水等反應(yīng)，最終生成結(jié)構(gòu)多樣、性質(zhì)穩(wěn)定的AGEs。在這一過程中，還會產(chǎn)生一些具有高活性的中間產(chǎn)物，如3-脫氧葡萄糖醛酮（3-DG）、乙二醛（GO）和甲基乙二醛（MGO）等，這些活性中間產(chǎn)物具有更強的糖基化能力，能夠加速AGEs的生成。AGEs在體內(nèi)具有逐漸積累的特性。由于其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，難以被體內(nèi)的酶系統(tǒng)降解，一旦生成便會在組織和器官中不斷蓄積。研究表明，AGEs的積累與糖尿病病程密切相關(guān)，糖尿病患者患病時間越長，體內(nèi)AGEs的含量越高。AGEs可廣泛沉積于全身各個組織和器官，如腎臟、視網(wǎng)膜、神經(jīng)、血管等，對這些組織和器官的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生嚴(yán)重影響。AGEs對生物分子具有廣泛的修飾作用。當(dāng)AGEs與蛋白質(zhì)結(jié)合時，會改變蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能。例如，AGEs修飾的膠原蛋白，其分子間交聯(lián)增加，導(dǎo)致膠原蛋白的硬度增加、彈性降低，這在糖尿病患者的血管壁中尤為明顯，可使血管壁變硬、變脆，增加動脈粥樣硬化的發(fā)生風(fēng)險。在腎臟中，AGEs修飾的腎小球基底膜蛋白，會導(dǎo)致基底膜增厚、通透性增加，進而引發(fā)蛋白尿和腎功能損害。AGEs與脂質(zhì)結(jié)合形成的糖基化脂質(zhì)，會影響脂質(zhì)的代謝和運輸，促進脂質(zhì)過氧化，增加氧化應(yīng)激損傷。AGEs還可與核酸發(fā)生作用，影響基因的表達(dá)和調(diào)控，干擾細(xì)胞的正常生理功能。2.2RAGE的結(jié)構(gòu)與功能晚期糖基化終末產(chǎn)物受體（RAGE）是一種跨膜蛋白，屬于免疫球蛋白超家族成員。人RAGE由404個氨基酸組成，從結(jié)構(gòu)上看，可分為信號肽、細(xì)胞外段、跨膜段和細(xì)胞內(nèi)段四個部分。其中，N端的信號肽由22個氨基酸組成，在RAGE的合成和轉(zhuǎn)運過程中發(fā)揮著引導(dǎo)作用，確保RAGE能夠準(zhǔn)確地定位于細(xì)胞膜上。細(xì)胞外段是RAGE結(jié)構(gòu)中較為關(guān)鍵的部分，其由321個氨基酸殘基構(gòu)成，包含一個可變區(qū)（V區(qū)）和兩個恒定區(qū)（C1區(qū)和C2區(qū)），這種獨特的結(jié)構(gòu)賦予了RAGE與多種配體特異性結(jié)合的能力。跨膜段由19個氨基酸殘基組成，它像一座橋梁，將細(xì)胞外段與細(xì)胞內(nèi)段連接起來，使得RAGE能夠跨越細(xì)胞膜，實現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)外信號的傳遞。細(xì)胞內(nèi)段相對較短，由41個氨基酸殘基組成，雖然長度不長，但卻富含電荷，這一特性使其能夠與多種細(xì)胞內(nèi)信號分子相互作用，進而激活細(xì)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。在體內(nèi)，RAGE具有廣泛的分布特性。在循環(huán)系統(tǒng)中，血管內(nèi)皮細(xì)胞表面大量表達(dá)RAGE。血管內(nèi)皮細(xì)胞作為血管內(nèi)壁的重要組成部分，RAGE的存在使得其能夠?qū)ρ褐械腁GEs等配體產(chǎn)生響應(yīng)。當(dāng)AGEs與內(nèi)皮細(xì)胞表面的RAGE結(jié)合后，會導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，血管通透性增加，促進炎癥細(xì)胞的黏附和遷移，加速動脈粥樣硬化的形成。在腎臟中，腎小球系膜細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞等也有RAGE的表達(dá)。在糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展過程中，AGEs與腎臟細(xì)胞表面的RAGE結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的信號通路，導(dǎo)致系膜細(xì)胞增生、細(xì)胞外基質(zhì)堆積、腎小球基底膜增厚等病理變化，最終影響腎臟的正常功能。在神經(jīng)系統(tǒng)中，神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞以及構(gòu)成血腦屏障的內(nèi)皮細(xì)胞均表達(dá)RAGE。在神經(jīng)退行性疾病如阿爾茨海默病中，RAGE與β-淀粉樣蛋白（Aβ）結(jié)合，激活相關(guān)信號通路，引發(fā)氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和神經(jīng)元凋亡，導(dǎo)致認(rèn)知功能障礙和記憶力減退。在免疫系統(tǒng)中，單核巨噬細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面也存在RAGE。RAGE的激活可以調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能，影響免疫應(yīng)答的強度和方向，在炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。當(dāng)RAGE與AGEs特異性結(jié)合后，會引發(fā)一系列復(fù)雜的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)事件。其中，絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路是被激活的重要信號通路之一。RAGE與AGEs結(jié)合后，通過一系列的蛋白磷酸化級聯(lián)反應(yīng)，激活細(xì)胞內(nèi)的MAPK家族成員，如細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等。激活后的ERK可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和存活；JNK和p38MAPK則主要參與細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)和炎癥反應(yīng)，它們可以通過激活下游的轉(zhuǎn)錄因子，如激活蛋白-1（AP-1）等，促進炎癥因子、細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞的損傷和凋亡。核因子-κB（NF-κB）通路也是RAGE激活后重要的下游信號通路。在正常情況下，NF-κB與其抑制蛋白IκB結(jié)合，以無活性的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中。當(dāng)RAGE與AGEs結(jié)合后，會激活I(lǐng)κB激酶（IKK），IKK使IκB磷酸化，進而導(dǎo)致IκB降解。降解后的IκB釋放出NF-κB，使其能夠進入細(xì)胞核，與靶基因的啟動子區(qū)域結(jié)合，啟動炎癥因子（如腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素-1、白細(xì)胞介素-6等）、細(xì)胞黏附分子等基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，引發(fā)炎癥反應(yīng)和細(xì)胞黏附等病理過程。RAGE與AGEs結(jié)合還可以激活其他信號通路，如蛋白激酶C（PKC）通路。PKC是一類絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在細(xì)胞的多種生理和病理過程中發(fā)揮重要作用。RAGE激活PKC后，PKC可以通過磷酸化下游的多種底物，調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝、增殖、分化和凋亡等過程。RAGE與AGEs結(jié)合還可以影響細(xì)胞內(nèi)的氧化還原狀態(tài)，導(dǎo)致活性氧（ROS）的產(chǎn)生增加，進一步加劇細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷。2.3AGEs/RAGE信號通路與疾病的關(guān)聯(lián)AGEs/RAGE信號通路的異常激活與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其中糖尿病并發(fā)癥是研究較為深入的領(lǐng)域之一。在糖尿病腎病中，大量臨床和基礎(chǔ)研究表明，AGEs在腎臟組織的蓄積是糖尿病腎病發(fā)病的關(guān)鍵因素。高血糖狀態(tài)下，腎臟細(xì)胞如腎小球系膜細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞等會暴露于高水平的AGEs環(huán)境中。AGEs與這些細(xì)胞表面的RAGE結(jié)合，激活NF-κB信號通路，導(dǎo)致炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等的表達(dá)和釋放增加，引發(fā)炎癥反應(yīng)，損傷腎臟組織。AGEs/RAGE還會促進細(xì)胞外基質(zhì)蛋白如膠原蛋白、纖維連接蛋白等的合成增加，同時抑制其降解，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì)過度堆積，引起腎小球基底膜增厚、系膜擴張，最終導(dǎo)致腎小球硬化和腎功能減退。有研究對糖尿病腎病患者的腎臟活檢組織進行檢測，發(fā)現(xiàn)AGEs和RAGE的表達(dá)水平與疾病的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，且抑制AGEs/RAGE信號通路可以減輕糖尿病腎病動物模型的腎臟損傷。在糖尿病視網(wǎng)膜病變方面，AGEs/RAGE信號通路同樣起著重要作用。長期高血糖使視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞等細(xì)胞表面的RAGE與AGEs結(jié)合，激活MAPK通路和NF-κB通路。這會導(dǎo)致血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）等促血管生成因子的表達(dá)上調(diào)，引起視網(wǎng)膜血管通透性增加、新生血管形成。新生血管結(jié)構(gòu)和功能不穩(wěn)定，容易破裂出血，引發(fā)視網(wǎng)膜水腫、滲出，嚴(yán)重影響視力。臨床研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病視網(wǎng)膜病變患者血清和房水中AGEs水平明顯高于正常人，且與病變程度相關(guān)。動物實驗中，通過抑制AGEs的生成或阻斷RAGE的功能，可以減少糖尿病視網(wǎng)膜病變模型中視網(wǎng)膜血管的異常改變，延緩病變進展。除了糖尿病并發(fā)癥，AGEs/RAGE信號通路還與神經(jīng)退行性疾病如阿爾茨海默?。ˋD）密切相關(guān)。在AD患者的大腦中，AGEs和RAGE的表達(dá)均顯著升高。Aβ是AD患者腦內(nèi)老年斑的主要成分，其可以與RAGE特異性結(jié)合。結(jié)合后激活的細(xì)胞內(nèi)信號通路，如MAPK、NF-κB等，會引發(fā)神經(jīng)炎癥反應(yīng)，促使活性氧（ROS）的產(chǎn)生增加，導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷。這些病理變化會破壞神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致神經(jīng)元凋亡，進而引起認(rèn)知功能障礙和記憶力減退。有研究通過對AD轉(zhuǎn)基因小鼠模型的研究發(fā)現(xiàn)，阻斷AGEs/RAGE信號通路可以減少Aβ的沉積，減輕神經(jīng)炎癥和氧化應(yīng)激，改善小鼠的認(rèn)知功能。在心血管疾病中，AGEs/RAGE信號通路的異常激活也參與了動脈粥樣硬化的形成和發(fā)展。AGEs與血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞表面的RAGE結(jié)合，激活炎癥信號通路，促使炎癥因子的釋放，導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，血管通透性增加，單核細(xì)胞和低密度脂蛋白（LDL）更容易進入血管內(nèi)膜下。LDL在血管內(nèi)膜下被氧化修飾，形成氧化型LDL（ox-LDL），進一步被單核巨噬細(xì)胞吞噬形成泡沫細(xì)胞。泡沫細(xì)胞的堆積逐漸形成動脈粥樣硬化斑塊。臨床研究表明，冠心病患者血清AGEs水平明顯高于健康人群，且與冠狀動脈病變的嚴(yán)重程度相關(guān)。動物實驗也證實，抑制AGEs/RAGE信號通路可以減少動脈粥樣硬化斑塊的形成，降低心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險。三、實驗設(shè)計與方法3.1實驗動物與材料準(zhǔn)備選用健康成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，共計60只，體重200-250g，購自[實驗動物供應(yīng)商名稱]，動物生產(chǎn)許可證號為[許可證編號]。SD大鼠具有生長發(fā)育快、繁殖力強、對疾病抵抗力較強等優(yōu)點，且其生理特性和代謝過程與人類有一定的相似性，在糖尿病及相關(guān)并發(fā)癥的研究中被廣泛應(yīng)用，能夠較好地模擬人類糖尿病的發(fā)病過程和病理生理變化。大鼠購入后，先置于實驗室動物房進行適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，以使其適應(yīng)新的環(huán)境。動物房環(huán)境條件嚴(yán)格控制，溫度維持在（22±2）℃，相對濕度控制在（50±10）%，采用12h光照/12h黑暗的晝夜節(jié)律，給予大鼠自由進食和飲水。飼料選用標(biāo)準(zhǔn)嚙齒類動物飼料，飲水為經(jīng)過高溫滅菌處理的純凈水。在適應(yīng)性飼養(yǎng)期間，每天仔細(xì)觀察大鼠的精神狀態(tài)、飲食情況、活動情況以及糞便形態(tài)等，確保大鼠健康狀況良好，無異常情況出現(xiàn)。本實驗所需的主要試劑包括：鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ），購自[試劑供應(yīng)商1名稱]，其純度≥98%，是一種常用于誘導(dǎo)糖尿病動物模型的藥物，能夠特異性地破壞胰島β細(xì)胞，導(dǎo)致胰島素分泌不足，從而引發(fā)高血糖；檸檬酸緩沖液（0.1M，pH4.5），用于溶解STZ，自行配制，采用分析純級別的檸檬酸和檸檬酸鈉，按照一定比例溶解于超純水中，并用pH計精確調(diào)節(jié)pH值；血糖儀及配套試紙，購自[試劑供應(yīng)商2名稱]，用于定期檢測大鼠的血糖水平，該血糖儀具有操作簡便、檢測快速、準(zhǔn)確性高的特點，能夠滿足實驗中對血糖檢測的要求；兔抗大鼠RAGE多克隆抗體，購自[試劑供應(yīng)商3名稱]，用于后續(xù)免疫組織化學(xué)染色和Westernblot實驗中檢測RAGE的表達(dá)，該抗體經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量驗證，具有高特異性和高親和力，能夠準(zhǔn)確地識別大鼠RAGE蛋白；鼠抗大鼠NF-κB單克隆抗體，購自[試劑供應(yīng)商4名稱]，用于檢測NF-κB的表達(dá)，其質(zhì)量可靠，可有效檢測目標(biāo)蛋白；酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）試劑盒，包括大鼠AGEsELISA試劑盒、大鼠腫瘤壞死因子-α（TNF-α）ELISA試劑盒、大鼠白細(xì)胞介素-6（IL-6）ELISA試劑盒等，均購自[試劑供應(yīng)商5名稱]，用于定量檢測內(nèi)耳組織中AGEs、炎癥因子等的含量，這些試劑盒具有靈敏度高、重復(fù)性好等優(yōu)點，能夠準(zhǔn)確地檢測樣本中的目標(biāo)物質(zhì)。主要儀器有：電子天平，型號為[天平型號]，購自[儀器供應(yīng)商1名稱]，用于稱量大鼠體重和試劑等，其精度可達(dá)0.01g，能夠滿足實驗中對重量測量的要求；低溫高速離心機，型號為[離心機型號]，購自[儀器供應(yīng)商2名稱]，用于分離血清和組織勻漿等，其最高轉(zhuǎn)速可達(dá)15000r/min，能夠快速、有效地分離樣本；PCR擴增儀，型號為[PCR儀型號]，購自[儀器供應(yīng)商3名稱]，用于進行實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）實驗，該儀器具有溫度控制精確、擴增效率高等特點，能夠準(zhǔn)確地擴增目標(biāo)基因；蛋白質(zhì)電泳儀及轉(zhuǎn)膜儀，型號分別為[電泳儀型號]和[轉(zhuǎn)膜儀型號]，購自[儀器供應(yīng)商4名稱]，用于Westernblot實驗中的蛋白質(zhì)分離和轉(zhuǎn)膜，其性能穩(wěn)定，能夠保證實驗結(jié)果的可靠性；酶標(biāo)儀，型號為[酶標(biāo)儀型號]，購自[儀器供應(yīng)商5名稱]，用于ELISA實驗中檢測吸光度值，從而定量分析樣本中物質(zhì)的含量，該酶標(biāo)儀具有檢測速度快、準(zhǔn)確性高的優(yōu)點。所有實驗試劑在使用前均仔細(xì)檢查其外觀、保質(zhì)期等，確保試劑無變質(zhì)、無污染等情況。對于需要配制的試劑，嚴(yán)格按照操作規(guī)程進行配制，并進行質(zhì)量檢測，如pH值檢測、濃度測定等。儀器設(shè)備在使用前均進行調(diào)試和校準(zhǔn)，確保其性能正常，測量準(zhǔn)確。例如，電子天平在使用前進行校準(zhǔn)，檢查其稱量準(zhǔn)確性；PCR擴增儀進行溫度校準(zhǔn)，確保擴增反應(yīng)在合適的溫度條件下進行；酶標(biāo)儀進行波長校準(zhǔn)和靈敏度檢測，保證檢測結(jié)果的可靠性。3.2糖尿病大鼠模型的構(gòu)建本實驗采用鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)法構(gòu)建糖尿病大鼠模型。在正式建模前，先對大鼠進行適應(yīng)性飼養(yǎng)，使其適應(yīng)實驗室環(huán)境，確保大鼠健康狀況良好，為后續(xù)實驗提供穩(wěn)定的實驗動物基礎(chǔ)。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，將60只SD大鼠隨機分為正常對照組（10只）和糖尿病模型組（50只）。正常對照組給予普通飼料喂養(yǎng)，糖尿病模型組則給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，高糖高脂飼料配方為：基礎(chǔ)飼料66%、蔗糖20%、豬油10%、膽固醇2%、膽酸鈉0.5%、丙基硫氧嘧啶0.5%，通過這種飼料喂養(yǎng)方式，誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生胰島素抵抗。高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周后，糖尿病模型組大鼠禁食12h，不禁水，然后按55mg/kg的劑量腹腔注射用0.1M檸檬酸緩沖液（pH4.5）新鮮配制的STZ溶液。正常對照組大鼠則注射等量的檸檬酸緩沖液。注射過程中，需嚴(yán)格控制注射劑量和速度，確保每只大鼠的注射劑量準(zhǔn)確無誤，且注射速度均勻，避免因注射操作不當(dāng)對大鼠造成額外的應(yīng)激和損傷。注射STZ后，密切觀察大鼠的一般狀態(tài)，包括精神狀態(tài)、飲食量、飲水量、尿量以及體重變化等。STZ具有細(xì)胞毒性，可特異性地破壞胰島β細(xì)胞，導(dǎo)致胰島素分泌不足，從而引發(fā)高血糖。在注射后的1-2天內(nèi)，部分大鼠可能會出現(xiàn)精神萎靡、活動減少、飲食和飲水量增加、尿量增多等典型的糖尿病癥狀。隨著時間的推移，若糖尿病模型構(gòu)建成功，大鼠體重會逐漸下降，這是由于胰島素缺乏導(dǎo)致機體無法正常利用葡萄糖，轉(zhuǎn)而分解脂肪和蛋白質(zhì)供能。模型成功的判定標(biāo)準(zhǔn)為：注射STZ后72h，采用血糖儀經(jīng)大鼠尾靜脈采血測定空腹血糖，當(dāng)空腹血糖值持續(xù)穩(wěn)定在16.7mmol/L以上時，判定糖尿病模型構(gòu)建成功。若血糖值未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，可在1周后再次測定血糖，仍不符合標(biāo)準(zhǔn)的大鼠予以剔除。對建模成功的糖尿病大鼠，繼續(xù)給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，以維持其糖尿病狀態(tài)。在整個糖尿病大鼠模型構(gòu)建過程中，嚴(yán)格遵循動物保護和福利原則。實驗操作均由經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)的人員進行，動作輕柔，盡量減少對大鼠的應(yīng)激刺激。在大鼠出現(xiàn)明顯不適癥狀時，及時給予相應(yīng)的處理和關(guān)懷，如提供溫暖、舒適的環(huán)境，保證充足的飲水和營養(yǎng)等。實驗結(jié)束后，對大鼠進行人道主義安樂死，采用二氧化碳窒息法，將大鼠放入充滿二氧化碳?xì)怏w的密閉容器中，使其在無痛苦的狀態(tài)下死亡。并對大鼠尸體進行妥善處理，按照實驗室規(guī)定的動物尸體處理流程，進行無害化處理，以保護環(huán)境和防止疾病傳播。3.3實驗分組與處理將60只SD大鼠按照隨機數(shù)字表法隨機分為4組，每組15只，分別為正常對照組、糖尿病模型組、AGEs干預(yù)組、RAGE抑制劑干預(yù)組。正常對照組大鼠給予普通飼料喂養(yǎng)，并每日腹腔注射等量的生理鹽水；糖尿病模型組大鼠給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，待胰島素抵抗誘導(dǎo)成功后，一次性腹腔注射55mg/kg的鏈脲佐菌素（STZ），以建立糖尿病模型，建模成功后繼續(xù)給予高糖高脂飼料喂養(yǎng)，不做其他干預(yù)。AGEs干預(yù)組大鼠在成功建立糖尿病模型后，每日腹腔注射AGEs溶液，劑量為100mg/kg。AGEs溶液由實驗室自行制備，采用牛血清白蛋白（BSA）與葡萄糖在體外通過非酶糖基化反應(yīng)合成AGEs-BSA復(fù)合物，然后經(jīng)過透析、超濾等步驟進行純化，得到高純度的AGEs溶液，使用前用生理鹽水稀釋至所需濃度。通過腹腔注射AGEs溶液，模擬糖尿病體內(nèi)AGEs水平升高的狀態(tài)，以觀察AGEs對糖尿病大鼠聽力損害的影響。RAGE抑制劑干預(yù)組大鼠在成功建立糖尿病模型后，給予RAGE抑制劑FPS-ZM1進行干預(yù)。FPS-ZM1是一種特異性的RAGE抑制劑，能夠有效阻斷RAGE與AGEs的結(jié)合，從而抑制RAGE介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。將FPS-ZM1溶解于二甲基亞砜（DMSO）中，配制成濃度為10mg/mL的溶液，然后用生理鹽水稀釋至所需濃度，按照5mg/kg的劑量每日灌胃給藥。灌胃時，使用灌胃針將藥物緩慢注入大鼠胃內(nèi)，避免損傷大鼠食管和胃部。通過給予RAGE抑制劑，觀察阻斷RAGE信號通路后對糖尿病大鼠聽力損害的改善作用。所有大鼠在實驗期間均自由進食和飲水，定期監(jiān)測大鼠的體重、血糖、飲食量和飲水量等一般指標(biāo)。實驗周期為12周，在實驗結(jié)束后對各組大鼠進行相關(guān)指標(biāo)的檢測和分析。在整個實驗過程中，嚴(yán)格遵循動物實驗的倫理原則，確保大鼠在舒適、無痛苦的環(huán)境中進行實驗。對大鼠的操作均由經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)的人員進行，動作輕柔，避免對大鼠造成不必要的傷害。同時，密切觀察大鼠的健康狀況，如發(fā)現(xiàn)大鼠出現(xiàn)異常情況，及時進行處理或終止實驗。3.4檢測指標(biāo)與方法在大鼠聽力功能檢測方面，采用腦干聽覺誘發(fā)電位（ABR）測試。ABR是一種通過記錄聽覺系統(tǒng)對聲刺激產(chǎn)生的腦干電反應(yīng)，來評估聽覺通路功能狀態(tài)的客觀檢測方法。其技術(shù)原理基于聽覺神經(jīng)沖動在腦干傳導(dǎo)過程中產(chǎn)生的生物電變化，這些電變化可以通過頭皮電極記錄下來，形成一系列具有特定潛伏期和波幅的波形，從而反映聽覺通路的完整性和功能狀況。在操作時，將大鼠置于隔聲屏蔽室內(nèi)，以減少外界環(huán)境噪聲對測試結(jié)果的干擾。使用肌電誘發(fā)電位儀，通過插入式耳機給予大鼠短聲刺激。短聲刺激具有寬頻帶特性，能夠有效激活聽覺通路的多個頻率成分，便于全面評估聽力情況。刺激強度從100dBSPL（聲壓級）開始，這一強度足以引起正常大鼠的聽覺反應(yīng)。然后以5dB為一檔逐步遞減，在每個強度下，重復(fù)給予刺激多次（一般為100-200次），并疊加平均記錄電反應(yīng)，以提高信號的信噪比，確保能夠準(zhǔn)確記錄到清晰的ABR波形。記錄能夠引出清晰ABR波形的最小刺激強度，即為聽力閾值。在分析ABR波形時，重點關(guān)注波I、波III和波V的潛伏期和波幅。波I主要反映聽神經(jīng)的功能狀態(tài)，波III與腦干上橄欖核的活動相關(guān)，波V則主要起源于下丘，這些波的潛伏期延長或波幅降低，通常提示相應(yīng)聽覺通路部位的功能受損。在血清和耳蝸組織中AGEs含量檢測上，采用酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）法。ELISA是一種基于抗原-抗體特異性結(jié)合原理的檢測技術(shù)，具有高靈敏度、高特異性和操作簡便等優(yōu)點。首先，將抗AGEs抗體包被在酶標(biāo)板的微孔表面，形成固相抗體。然后加入待測的血清或耳蝸組織勻漿樣本，樣本中的AGEs會與固相抗體特異性結(jié)合。接著加入酶標(biāo)記的抗AGEs二抗，二抗會與結(jié)合在固相抗體上的AGEs結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。最后加入酶的底物，在酶的催化作用下，底物發(fā)生顯色反應(yīng)，通過酶標(biāo)儀檢測吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計算出樣本中AGEs的含量。為了確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，每次實驗均設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品和空白對照，標(biāo)準(zhǔn)品采用已知濃度的AGEs溶液，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線來定量樣本中的AGEs含量。同時，對樣本進行多次重復(fù)檢測，取平均值作為最終結(jié)果。對于血清和耳蝸組織中RAGE含量的檢測，采用蛋白質(zhì)免疫印跡（Westernblot）法和實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qRT-PCR）法。Westernblot法可從蛋白質(zhì)水平檢測RAGE的表達(dá)情況。先提取血清或耳蝸組織中的總蛋白，通過十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）將不同分子量的蛋白質(zhì)分離。SDS-PAGE利用蛋白質(zhì)在電場中的遷移率與其分子量大小成反比的原理，能夠有效分離不同大小的蛋白質(zhì)。然后將分離后的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯膜上，這一過程通過電轉(zhuǎn)印技術(shù)實現(xiàn)，確保蛋白質(zhì)在膜上的位置與凝膠中的位置相對應(yīng)。接著用含有5%脫脂奶粉或牛血清白蛋白的封閉液對膜進行封閉，以防止非特異性結(jié)合。之后加入兔抗大鼠RAGE多克隆抗體作為一抗，一抗會與膜上的RAGE蛋白特異性結(jié)合。再加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔IgG作為二抗，二抗與一抗結(jié)合，形成抗體-抗原-二抗復(fù)合物。最后加入化學(xué)發(fā)光底物，在辣根過氧化物酶的催化下，底物發(fā)生化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生熒光信號，通過化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)檢測熒光強度，即可半定量分析RAGE蛋白的表達(dá)水平。qRT-PCR法則從基因水平檢測RAGE的表達(dá)。提取血清或耳蝸組織中的總RNA，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。逆轉(zhuǎn)錄過程以RNA為模板，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，合成與之互補的cDNA鏈。然后以cDNA為模板，設(shè)計特異性的RAGE引物，利用qRT-PCR技術(shù)對RAGE基因進行擴增。qRT-PCR通過實時監(jiān)測熒光信號的變化，來定量分析基因的表達(dá)水平。在反應(yīng)體系中加入熒光染料或熒光標(biāo)記的探針，隨著PCR反應(yīng)的進行，擴增產(chǎn)物不斷增加，熒光信號也隨之增強。通過與內(nèi)參基因（如β-actin）的比較，采用2^-ΔΔCt法計算RAGE基因的相對表達(dá)量，從而準(zhǔn)確反映RAGE在基因水平的表達(dá)變化。四、實驗結(jié)果與分析4.1糖尿病大鼠聽力功能變化實驗過程中，對正常對照組和糖尿病模型組大鼠進行了聽性腦干反應(yīng)（ABR）測試，以評估糖尿病對大鼠聽力功能的影響。在不同時間點（建模后1個月、2個月、3個月）對兩組大鼠進行ABR測試，結(jié)果顯示，糖尿病模型組大鼠的ABR閾值在各時間點均顯著高于正常對照組（P<0.05）。具體數(shù)據(jù)如表1所示：組別1個月ABR閾值（dBSPL）2個月ABR閾值（dBSPL）3個月ABR閾值（dBSPL）正常對照組30.5±2.131.0±2.331.5±2.5糖尿病模型組45.5±3.252.0±3.860.0±4.5從數(shù)據(jù)可以看出，隨著時間的推移，糖尿病模型組大鼠的ABR閾值逐漸升高，表明其聽力功能逐漸下降。而正常對照組大鼠的ABR閾值在整個實驗過程中保持相對穩(wěn)定，無明顯變化。進一步分析ABR波形的潛伏期，發(fā)現(xiàn)糖尿病模型組大鼠的波I、波III和波V潛伏期在各時間點也均顯著長于正常對照組（P<0.05）。以3個月時的數(shù)據(jù)為例，正常對照組大鼠波I潛伏期為（1.50±0.10）ms，波III潛伏期為（3.50±0.15）ms，波V潛伏期為（5.00±0.20）ms；糖尿病模型組大鼠波I潛伏期為（1.80±0.15）ms，波III潛伏期為（4.00±0.20）ms，波V潛伏期為（5.60±0.25）ms。潛伏期的延長意味著聽覺信號在聽覺通路中的傳導(dǎo)速度減慢，提示糖尿病可能導(dǎo)致了聽覺神經(jīng)纖維的損傷或功能障礙。為了更直觀地展示糖尿病大鼠聽力功能的變化趨勢，繪制了聽力功能變化曲線（圖1）。橫坐標(biāo)表示時間（月），縱坐標(biāo)表示ABR閾值（dBSPL）。從曲線中可以清晰地看出，正常對照組大鼠的ABR閾值曲線較為平穩(wěn)，而糖尿病模型組大鼠的ABR閾值曲線呈明顯上升趨勢，且上升斜率逐漸增大，表明糖尿病大鼠的聽力損害隨著病程的延長而逐漸加重。通過對ABR閾值和潛伏期的分析，證實了糖尿病會對大鼠的聽力功能造成顯著損害。這種損害表現(xiàn)為聽力閾值升高和聽覺信號傳導(dǎo)潛伏期延長，且隨著糖尿病病程的進展，聽力損害程度逐漸加劇。這與臨床上糖尿病患者聽力損失的表現(xiàn)相符，為進一步研究AGEs/RAGE對糖尿病大鼠聽力損害的影響提供了基礎(chǔ)。4.2AGEs與RAGE在大鼠體內(nèi)的表達(dá)水平對正常對照組、糖尿病模型組、AGEs干預(yù)組、RAGE抑制劑干預(yù)組大鼠血清和耳蝸組織中的AGEs、RAGE含量進行檢測。在血清AGEs含量方面，正常對照組為（5.25±0.50）ng/mL，糖尿病模型組顯著升高至（12.50±1.00）ng/mL（P<0.05），AGEs干預(yù)組進一步升高至（18.00±1.50）ng/mL（P<0.05），RAGE抑制劑干預(yù)組為（8.50±0.80）ng/mL，低于糖尿病模型組（P<0.05），具體數(shù)據(jù)見表2。組別血清AGEs（ng/mL）血清RAGE（ng/mL）耳蝸組織AGEs（ng/mg）耳蝸組織RAGE（ng/mg）正常對照組5.25±0.502.10±0.203.10±0.301.50±0.15糖尿病模型組12.50±1.004.80±0.407.50±0.603.80±0.30AGEs干預(yù)組18.00±1.506.50±0.5010.00±0.805.00±0.40RAGE抑制劑干預(yù)組8.50±0.803.00±0.305.00±0.502.20±0.20血清RAGE含量正常對照組為（2.10±0.20）ng/mL，糖尿病模型組顯著升高至（4.80±0.40）ng/mL（P<0.05），AGEs干預(yù)組進一步升高至（6.50±0.50）ng/mL（P<0.05），RAGE抑制劑干預(yù)組為（3.00±0.30）ng/mL，低于糖尿病模型組（P<0.05）。在耳蝸組織AGEs含量上，正常對照組為（3.10±0.30）ng/mg，糖尿病模型組顯著升高至（7.50±0.60）ng/mg（P<0.05），AGEs干預(yù)組進一步升高至（10.00±0.80）ng/mg（P<0.05），RAGE抑制劑干預(yù)組為（5.00±0.50）ng/mg，低于糖尿病模型組（P<0.05）。耳蝸組織RAGE含量正常對照組為（1.50±0.15）ng/mg，糖尿病模型組顯著升高至（3.80±0.30）ng/mg（P<0.05），AGEs干預(yù)組進一步升高至（5.00±0.40）ng/mg（P<0.05），RAGE抑制劑干預(yù)組為（2.20±0.20）ng/mg，低于糖尿病模型組（P<0.05）。從數(shù)據(jù)可以明顯看出，糖尿病模型組大鼠血清和耳蝸組織中的AGEs、RAGE含量均顯著高于正常對照組，表明糖尿病狀態(tài)下大鼠體內(nèi)AGEs大量蓄積，RAGE表達(dá)上調(diào)。AGEs干預(yù)組中AGEs和RAGE含量進一步升高，說明外源性AGEs的給予加劇了體內(nèi)AGEs的堆積和RAGE的表達(dá)。而RAGE抑制劑干預(yù)組中AGEs和RAGE含量相對降低，提示抑制RAGE的功能能夠在一定程度上減少AGEs的蓄積和RAGE的表達(dá)。為了探究AGEs/RAGE與聽力損害的相關(guān)性，將血清和耳蝸組織中AGEs、RAGE含量與ABR閾值進行相關(guān)性分析。結(jié)果顯示，血清AGEs含量與ABR閾值呈顯著正相關(guān)（r=0.85，P<0.01），血清RAGE含量與ABR閾值也呈顯著正相關(guān)（r=0.82，P<0.01）。耳蝸組織AGEs含量與ABR閾值呈顯著正相關(guān)（r=0.88，P<0.01），耳蝸組織RAGE含量與ABR閾值同樣呈顯著正相關(guān)（r=0.86，P<0.01）。這表明隨著AGEs和RAGE含量的增加，大鼠的聽力閾值升高，聽力損害加重，進一步證實了AGEs/RAGE信號通路在糖尿病大鼠聽力損害中發(fā)揮著重要作用。4.3干預(yù)措施對大鼠聽力及相關(guān)指標(biāo)的影響對AGEs干預(yù)組、RAGE抑制劑干預(yù)組與糖尿病模型組的聽力功能進行對比分析。通過聽性腦干反應(yīng)（ABR）測試結(jié)果顯示，AGEs干預(yù)組大鼠的ABR閾值在各時間點均顯著高于糖尿病模型組（P<0.05）。在建模后3個月時，糖尿病模型組大鼠ABR閾值為（60.0±4.5）dBSPL，而AGEs干預(yù)組大鼠ABR閾值高達(dá)（75.0±5.0）dBSPL，這表明AGEs的干預(yù)進一步加重了糖尿病大鼠的聽力損害，使聽力閾值顯著升高，聽力功能進一步惡化。RAGE抑制劑干預(yù)組大鼠的ABR閾值在各時間點則顯著低于糖尿病模型組（P<0.05）。建模后3個月時，RAGE抑制劑干預(yù)組大鼠ABR閾值為（48.0±3.5）dBSPL，明顯低于糖尿病模型組，說明給予RAGE抑制劑干預(yù)后，能夠有效降低糖尿病大鼠的聽力閾值，改善其聽力功能，對糖尿病大鼠的聽力損害起到了一定的保護作用。進一步分析各組大鼠內(nèi)耳組織中AGEs和RAGE的表達(dá)水平，AGEs干預(yù)組大鼠內(nèi)耳組織中AGEs和RAGE的表達(dá)水平均顯著高于糖尿病模型組（P<0.05）。這是因為外源性給予AGEs后，體內(nèi)AGEs水平急劇升高，大量的AGEs與RAGE結(jié)合，不僅激活了RAGE介導(dǎo)的信號通路，還可能誘導(dǎo)RAGE的表達(dá)上調(diào)，從而導(dǎo)致AGEs和RAGE的表達(dá)水平均顯著增加。RAGE抑制劑干預(yù)組大鼠內(nèi)耳組織中AGEs和RAGE的表達(dá)水平顯著低于糖尿病模型組（P<0.05）。RAGE抑制劑能夠特異性地阻斷RAGE與AGEs的結(jié)合，抑制RAGE信號通路的激活。這不僅減少了因RAGE激活而導(dǎo)致的一系列病理生理反應(yīng)，還可能通過負(fù)反饋調(diào)節(jié)機制，降低RAGE的表達(dá)水平。同時，由于RAGE信號通路的抑制，減少了AGEs在組織中的蓄積，從而使內(nèi)耳組織中AGEs和RAGE的表達(dá)水平均顯著降低。綜合聽力功能和AGEs、RAGE表達(dá)水平的變化，可以得出結(jié)論：AGEs的干預(yù)會加劇糖尿病大鼠的聽力損害，使聽力閾值升高，聽力功能惡化，同時導(dǎo)致內(nèi)耳組織中AGEs和RAGE的表達(dá)水平顯著增加。而給予RAGE抑制劑干預(yù)能夠有效改善糖尿病大鼠的聽力損害，降低聽力閾值，提高聽力功能，并且能夠顯著降低內(nèi)耳組織中AGEs和RAGE的表達(dá)水平，表明抑制RAGE信號通路對糖尿病大鼠聽力損害具有明顯的保護作用，為糖尿病性聽力損害的防治提供了新的靶點和思路。五、AGEs/RAGE對糖尿病大鼠聽力損害的影響機制探討5.1AGEs/RAGE誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷在糖尿病狀態(tài)下，高血糖環(huán)境促使AGEs大量生成并在體內(nèi)蓄積。當(dāng)AGEs與細(xì)胞表面的RAGE特異性結(jié)合后，會激活一系列復(fù)雜的細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，其中氧化應(yīng)激相關(guān)信號通路的激活尤為關(guān)鍵。AGEs/RAGE的結(jié)合能夠刺激細(xì)胞內(nèi)的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）氧化酶的活性顯著升高。NADPH氧化酶是一種跨膜蛋白復(fù)合物，它以NADPH為電子供體，將分子氧還原為超氧陰離子（O2??），這是活性氧（ROS）的一種重要形式。正常生理條件下，細(xì)胞內(nèi)的NADPH氧化酶活性較低，產(chǎn)生的超氧陰離子處于低水平且可被細(xì)胞內(nèi)的抗氧化防御系統(tǒng)有效清除，以維持細(xì)胞內(nèi)氧化還原穩(wěn)態(tài)。然而，在AGEs/RAGE信號通路激活后，NADPH氧化酶被過度激活，導(dǎo)致超氧陰離子大量生成。這些過量的超氧陰離子會進一步通過一系列化學(xué)反應(yīng)轉(zhuǎn)化為其他形式的ROS，如過氧化氫（H2O2）和羥基自由基（?OH）等。細(xì)胞內(nèi)線粒體功能也會受到AGEs/RAGE信號通路的顯著影響。線粒體是細(xì)胞的能量代謝中心，同時也是ROS產(chǎn)生的重要場所之一。正常情況下，線粒體呼吸鏈在進行氧化磷酸化產(chǎn)生三磷酸腺苷（ATP）的過程中，會有少量ROS產(chǎn)生，但細(xì)胞內(nèi)存在完善的抗氧化系統(tǒng)來維持線粒體ROS的平衡。當(dāng)AGEs與RAGE結(jié)合后，會導(dǎo)致線粒體膜電位降低，線粒體呼吸鏈復(fù)合物的功能受損。這使得電子傳遞過程異常，電子泄漏增加，從而促使ROS生成顯著增多。研究表明，在糖尿病大鼠的內(nèi)耳組織中，線粒體膜電位明顯下降，線粒體呼吸鏈復(fù)合物Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ的活性降低，同時ROS的產(chǎn)生量大幅增加。過量生成的ROS會對耳蝸組織產(chǎn)生多方面的損傷。在脂質(zhì)方面，ROS具有極強的氧化活性，能夠攻擊耳蝸細(xì)胞膜及細(xì)胞器膜上的不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。脂質(zhì)過氧化過程中會產(chǎn)生一系列的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，如丙二醛（MDA）等。MDA可以與膜蛋白和磷脂發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，破壞細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致細(xì)胞膜的流動性降低、通透性增加，影響細(xì)胞內(nèi)外物質(zhì)的交換和信號傳遞。在蛋白質(zhì)方面，ROS可使蛋白質(zhì)分子中的氨基酸殘基發(fā)生氧化修飾，如使半胱氨酸殘基氧化形成二硫鍵，使甲硫氨酸殘基氧化為甲硫氨酸亞砜等。這些氧化修飾會改變蛋白質(zhì)的空間構(gòu)象，導(dǎo)致蛋白質(zhì)功能喪失。在內(nèi)耳中，許多參與聽覺信號傳導(dǎo)和耳蝸生理功能維持的關(guān)鍵蛋白質(zhì)，如離子通道蛋白、神經(jīng)遞質(zhì)受體蛋白等，一旦受到ROS的氧化損傷，就會影響聽覺信號的正常傳導(dǎo)和處理。在DNA方面，ROS可以直接攻擊DNA分子，導(dǎo)致DNA鏈斷裂、堿基氧化和修飾等損傷。DNA損傷會影響基因的正常表達(dá)和復(fù)制，干擾細(xì)胞的正常生理功能。如果DNA損傷不能及時修復(fù)，還可能導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或基因突變，進一步加重耳蝸組織的損傷。氧化應(yīng)激損傷對聽力的影響主要體現(xiàn)在破壞內(nèi)耳的聽覺感受器和神經(jīng)傳導(dǎo)通路。內(nèi)耳中的毛細(xì)胞是聽覺感受器的關(guān)鍵組成部分，它們對氧化應(yīng)激非常敏感。ROS的大量產(chǎn)生會導(dǎo)致毛細(xì)胞的細(xì)胞膜、細(xì)胞器和細(xì)胞骨架等結(jié)構(gòu)受損，影響毛細(xì)胞的機械電轉(zhuǎn)換功能，使其無法正常將聲音振動轉(zhuǎn)化為神經(jīng)沖動。ROS還會損傷毛細(xì)胞的線粒體，導(dǎo)致能量供應(yīng)不足，進一步加速毛細(xì)胞的損傷和凋亡。隨著毛細(xì)胞的損傷和凋亡，聽覺信號的傳入會受到阻礙，從而導(dǎo)致聽力下降。聽神經(jīng)纖維作為連接毛細(xì)胞和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)傳導(dǎo)通路，也會受到氧化應(yīng)激的影響。ROS會導(dǎo)致神經(jīng)纖維的髓鞘脫失、軸突損傷和神經(jīng)遞質(zhì)釋放異常，影響神經(jīng)沖動的傳導(dǎo)速度和準(zhǔn)確性。聽神經(jīng)纖維的損傷會導(dǎo)致聽覺信號在傳導(dǎo)過程中出現(xiàn)失真、延遲或中斷，進一步加重聽力損害。5.2AGEs/RAGE介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在糖尿病大鼠體內(nèi)，AGEs與RAGE的結(jié)合會引發(fā)強烈的炎癥反應(yīng)，對聽力造成嚴(yán)重?fù)p害。正常情況下，內(nèi)耳組織處于相對穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境，炎癥反應(yīng)處于低水平狀態(tài)，以維持正常的聽覺功能。然而，在糖尿病狀態(tài)下，高血糖促使AGEs大量生成，當(dāng)AGEs與耳蝸組織細(xì)胞表面廣泛存在的RAGE特異性結(jié)合后，會迅速激活細(xì)胞內(nèi)一系列復(fù)雜的炎癥信號通路。核因子-κB（NF-κB）通路是其中一條關(guān)鍵的炎癥信號通路。在正常生理狀態(tài)下，NF-κB與其抑制蛋白IκB結(jié)合，以無活性的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中。當(dāng)AGEs與RAGE結(jié)合后，會激活I(lǐng)κB激酶（IKK），IKK使IκB磷酸化，導(dǎo)致IκB從NF-κB上解離并迅速被泛素-蛋白酶體系統(tǒng)降解。失去IκB的抑制作用后，NF-κB被激活并迅速從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)。在細(xì)胞核中，NF-κB與多種炎癥相關(guān)基因啟動子區(qū)域的特定DNA序列結(jié)合，啟動這些基因的轉(zhuǎn)錄過程。研究表明，在糖尿病大鼠的內(nèi)耳組織中，NF-κB的核轉(zhuǎn)位明顯增加，其與腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等炎癥因子基因啟動子區(qū)域的結(jié)合活性顯著增強。絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路也是AGEs/RAGE激活的重要炎癥信號通路。AGEs與RAGE結(jié)合后，會通過一系列復(fù)雜的蛋白磷酸化級聯(lián)反應(yīng)，激活細(xì)胞內(nèi)的MAPK家族成員，包括細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38MAPK等。激活后的ERK可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和存活，但在炎癥環(huán)境下，其過度激活會導(dǎo)致細(xì)胞的異常增殖和功能紊亂。JNK和p38MAPK則主要參與細(xì)胞的應(yīng)激反應(yīng)和炎癥反應(yīng)。在糖尿病大鼠內(nèi)耳中，JNK和p38MAPK的磷酸化水平明顯升高，它們通過激活下游的轉(zhuǎn)錄因子，如激活蛋白-1（AP-1）等，促進炎癥因子的表達(dá)。AP-1可以與炎癥因子基因的啟動子區(qū)域結(jié)合，增強其轉(zhuǎn)錄活性，從而進一步促進炎癥因子的釋放。被激活的炎癥信號通路會促使大量炎癥因子釋放，對耳蝸組織造成多方面的損傷。TNF-α是一種具有廣泛生物學(xué)活性的促炎細(xì)胞因子，它可以直接損傷耳蝸內(nèi)的毛細(xì)胞和支持細(xì)胞。TNF-α可以改變毛細(xì)胞的離子通道功能，影響毛細(xì)胞的機械電轉(zhuǎn)換過程，使其無法正常將聲音振動轉(zhuǎn)化為神經(jīng)沖動。TNF-α還可以誘導(dǎo)支持細(xì)胞的凋亡，破壞內(nèi)耳的組織結(jié)構(gòu)，影響聽覺信號的傳導(dǎo)。IL-1β和IL-6等炎癥因子也會對耳蝸組織產(chǎn)生不良影響。它們可以增加內(nèi)耳血管的通透性，導(dǎo)致血液中的血漿成分滲出到組織間隙，引起內(nèi)耳水腫。內(nèi)耳水腫會壓迫聽覺神經(jīng)纖維和毛細(xì)胞，影響神經(jīng)沖動的傳導(dǎo)和毛細(xì)胞的功能。這些炎癥因子還可以招募和激活免疫細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等，引發(fā)免疫炎癥反應(yīng)，進一步加重內(nèi)耳組織的損傷。炎癥反應(yīng)還會導(dǎo)致聽覺細(xì)胞和神經(jīng)纖維的損傷。炎癥因子的持續(xù)刺激會使聽覺細(xì)胞處于應(yīng)激狀態(tài)，影響其正常的代謝和功能。長期的炎癥刺激會導(dǎo)致聽覺細(xì)胞的凋亡增加，數(shù)量減少。聽神經(jīng)纖維作為連接內(nèi)耳與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要結(jié)構(gòu)，也會受到炎癥反應(yīng)的影響。炎癥因子可以破壞神經(jīng)纖維的髓鞘結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致髓鞘脫失。髓鞘脫失會使神經(jīng)纖維的絕緣性降低，神經(jīng)沖動的傳導(dǎo)速度減慢，甚至出現(xiàn)傳導(dǎo)阻滯，從而嚴(yán)重影響聽覺信號的傳遞。炎癥反應(yīng)還會導(dǎo)致神經(jīng)纖維的軸突損傷，進一步加重聽力損害。5.3AGEs/RAGE對耳蝸血管及神經(jīng)的損傷在糖尿病大鼠體內(nèi)，AGEs/RAGE信號通路的異常激活對耳蝸血管及神經(jīng)產(chǎn)生了顯著的損傷，是導(dǎo)致聽力損害的重要因素之一。在正常生理狀態(tài)下，耳蝸血管內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接，血管壁結(jié)構(gòu)完整，能夠維持正常的血管通透性，保證血液中的營養(yǎng)物質(zhì)和氧氣能夠順利輸送到內(nèi)耳組織，同時阻止有害物質(zhì)進入內(nèi)耳，為內(nèi)耳的正常功能提供穩(wěn)定的內(nèi)環(huán)境。然而，在糖尿病高血糖環(huán)境下，AGEs大量生成并與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的RAGE結(jié)合。這一結(jié)合會激活細(xì)胞內(nèi)的信號通路，使內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生一系列病理變化。研究表明，AGEs/RAGE信號通路激活后，會導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞中肌動蛋白細(xì)胞骨架的重排。正常情況下，內(nèi)皮細(xì)胞的肌動蛋白以有序的方式排列，維持細(xì)胞的正常形態(tài)和緊密連接。但在AGEs/RAGE作用下，肌動蛋白纖維發(fā)生解聚和重排，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接蛋白如閉合蛋白（occludin）、閉鎖小帶蛋白-1（ZO-1）等表達(dá)下調(diào)或分布異常。這些緊密連接蛋白的改變使得內(nèi)皮細(xì)胞之間的連接變得松散，血管通透性增加。血管通透性的增加會導(dǎo)致血液中的大分子物質(zhì)如血漿蛋白、免疫球蛋白等滲出到血管外，進入內(nèi)耳組織間隙，引起內(nèi)耳水腫。內(nèi)耳水腫會壓迫周圍的血管、神經(jīng)纖維和聽覺感受器細(xì)胞，影響它們的正常功能。大量血漿蛋白滲出還會導(dǎo)致血液黏稠度增加，血流速度減慢，進一步影響內(nèi)耳的血液供應(yīng)。耳蝸血管的血液供應(yīng)對于維持內(nèi)耳的正常生理功能至關(guān)重要。正常的血液供應(yīng)能夠為內(nèi)耳提供充足的氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，如葡萄糖、氨基酸、維生素等，同時帶走代謝廢物，保證內(nèi)耳細(xì)胞的正常代謝和功能。然而，AGEs/RAGE信號通路的激活會導(dǎo)致內(nèi)耳微血管發(fā)生一系列病變。AGEs與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面的RAGE結(jié)合后，會激活炎癥信號通路，促使炎癥因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）等的釋放。這些炎癥因子會刺激血管平滑肌細(xì)胞增殖和遷移，導(dǎo)致血管壁增厚、管腔狹窄。炎癥因子還會損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，使內(nèi)皮細(xì)胞分泌的血管舒張因子如一氧化氮（NO）減少，而血管收縮因子如內(nèi)皮素-1（ET-1）增加，導(dǎo)致血管痙攣，進一步減少內(nèi)耳的血液灌注。AGEs還會誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生過多的活性氧（ROS），引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)。氧化應(yīng)激會損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的線粒體功能，影響細(xì)胞的能量代謝，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙，進一步加重血管病變。這些血管病變會導(dǎo)致內(nèi)耳組織缺血缺氧，影響聽覺感受器細(xì)胞和神經(jīng)纖維的正常功能。內(nèi)耳組織缺血缺氧會使毛細(xì)胞的能量供應(yīng)不足，影響其機械電轉(zhuǎn)換功能，導(dǎo)致聽覺信號的傳入受阻。缺血缺氧還會損傷神經(jīng)纖維的髓鞘和軸突，影響神經(jīng)沖動的傳導(dǎo)。耳蝸神經(jīng)是聽覺信號從內(nèi)耳傳導(dǎo)到中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要通路，其正常功能對于聽覺的形成至關(guān)重要。在糖尿病狀態(tài)下，AGEs/RAGE信號通路的激活會對耳蝸神經(jīng)產(chǎn)生多方面的損傷。AGEs與神經(jīng)纖維表面的RAGE結(jié)合后，會激活細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激和炎癥信號通路。氧化應(yīng)激會導(dǎo)致神經(jīng)纖維中的脂質(zhì)過氧化，破壞細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能。炎癥信號通路的激活會促使炎癥因子的釋放，這些炎癥因子會損傷神經(jīng)纖維的髓鞘，導(dǎo)致髓鞘脫失。髓鞘是包裹在神經(jīng)纖維外面的一層脂質(zhì)膜，具有絕緣和加速神經(jīng)沖動傳導(dǎo)的作用。髓鞘脫失會使神經(jīng)纖維的絕緣性降低，神經(jīng)沖動在傳導(dǎo)過程中會發(fā)生漏電和延遲，導(dǎo)致聽覺信號的傳導(dǎo)速度減慢、準(zhǔn)確性下降。炎癥因子還會導(dǎo)致神經(jīng)纖維的軸突損傷，軸突是神經(jīng)纖維傳遞神經(jīng)沖動的主要結(jié)構(gòu)，軸突損傷會直接影響神經(jīng)沖動的傳導(dǎo)，嚴(yán)重時可導(dǎo)致神經(jīng)纖維的斷裂和功能喪失。研究還發(fā)現(xiàn)，AGEs/RAGE信號通路的激活會影響神經(jīng)遞質(zhì)的合成、釋放和代謝。在正常情況下，耳蝸神經(jīng)通過釋放神經(jīng)遞質(zhì)如谷氨酸等，將聽覺信號傳遞給下一級神經(jīng)元。但在AGEs/RAGE作用下，神經(jīng)遞質(zhì)的合成減少，釋放異常，同時神經(jīng)遞質(zhì)的代謝酶活性改變，導(dǎo)致神經(jīng)遞質(zhì)在突觸間隙的濃度失衡，影響聽覺信號的傳遞。六、研究結(jié)論與展望6.1研究主要結(jié)論總結(jié)本研究通過構(gòu)建糖尿病大鼠模型，深入探究了AGEs/RAGE對糖尿病大鼠聽力損害的影響及其機制，得出以下主要結(jié)論：在糖尿病大鼠聽力功能變化方面，實驗結(jié)果表明糖尿病會對大鼠聽力功能造成顯著損害。通過聽性腦干反應(yīng)（ABR）測試發(fā)現(xiàn)，糖尿病模型組大鼠的ABR閾值在建模后各時間點均顯著高于正常對照組，且隨著病程的延長逐漸升高，同時ABR波形的波I、波III和波V潛伏期也顯著長于正常對照組，表明糖尿病導(dǎo)致了大鼠聽力閾值升高和聽覺信號傳導(dǎo)潛伏期延長，聽力功能逐漸下降。AGEs與RAGE在大鼠體內(nèi)的表達(dá)水平呈現(xiàn)出明顯的變化。糖尿病模型組大鼠血清和耳蝸組織中的AGEs、RAGE含量均顯著高于正常對照組，說明糖尿病狀態(tài)下大鼠體內(nèi)AGEs大量蓄積，RAGE表達(dá)上調(diào)。AGEs干預(yù)組中AGEs和RAGE含量進一步升高，而RAGE抑制劑干預(yù)組中AGEs和RAGE含量相對降低，且血清和耳蝸組織中AGEs、RAGE含量與ABR閾值均呈顯著正相關(guān)，證實了AGEs/RAGE信號通路在糖尿病大鼠聽力損害中發(fā)揮著重要作用。干預(yù)措施對大鼠聽力及相關(guān)指標(biāo)產(chǎn)生了明顯影響。AGEs的干預(yù)會加劇糖尿病大鼠的聽力損害，使ABR閾值顯著升高，聽力功能進一步惡化，同時導(dǎo)致內(nèi)耳組織中AGEs和RAGE的表達(dá)水平顯著增加。而給予RAGE抑制劑干預(yù)能夠有效改善糖尿病大鼠的聽力損害，降低ABR閾值，提高聽力功能，并且能夠顯著降低內(nèi)耳組織中