ICS11.220B41備案號(hào)：DB42Methodoftheimmunochromatographicassayforthedetectionofavianinfluenzavirus湖北省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布DB42/T794—2012前言 12縮略詞 13實(shí)驗(yàn)原理 14實(shí)驗(yàn)條件 15實(shí)驗(yàn)材料 16樣品處理 27實(shí)驗(yàn)方法 28結(jié)果判定 29注意事項(xiàng) 3DB42/T794—2012本標(biāo)準(zhǔn)按GB/T1.1-2009《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)提出。本標(biāo)準(zhǔn)由湖北省農(nóng)業(yè)廳歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院、武漢科前動(dòng)物生物制品有限責(zé)任公司、湖北省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：金梅林、陳煥春、但漢并、郭學(xué)波、董曉輝、宋念華、張安定、周紅波、孫小美、李淑云、周艷君、田峰。DB42/T794—2012禽流感病毒（AvianInfluenzaVirus,AIV）具有易變異的特點(diǎn)，可通過突變獲得對(duì)人的感染力和致病能力，導(dǎo)致嚴(yán)重的公共衛(wèi)生危害。為加強(qiáng)禽流感監(jiān)測(cè)，制定了《禽流感病毒免疫層析檢測(cè)方法》，本方法具有簡(jiǎn)便、快速的優(yōu)點(diǎn)，尤其適合基層現(xiàn)場(chǎng)使用。DB42/T794—20121禽流感病毒免疫層析檢測(cè)方法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了禽流感病毒免疫層析檢測(cè)的方法的縮略詞、實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)材料、樣品處理、實(shí)驗(yàn)方法、結(jié)果判定和注意事項(xiàng)等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于禽類咽/鼻拭子、肛拭子、內(nèi)臟組織、雞胚尿囊液及細(xì)胞培養(yǎng)物中禽流感病毒的檢測(cè)。2縮略詞下列縮略詞適用于本標(biāo)準(zhǔn)。T線：檢測(cè)線C線：質(zhì)控線3實(shí)驗(yàn)原理本方法用抗禽流感病毒核蛋白的單克隆抗體標(biāo)記膠體金顆粒，以硝酸纖維素（NC）膜為載體，利用微孔膜的毛細(xì)管作用，滴加在膜條一端的液體慢慢向另一端滲透。在移動(dòng)過程中免疫金復(fù)合物會(huì)與NC膜表面檢測(cè)線、質(zhì)控線處包被的抗體發(fā)生反應(yīng)，并通過免疫金的顏色顯示出來。樣品中含有禽流感病毒時(shí)，在檢測(cè)線和質(zhì)控線位置均出現(xiàn)紅色的條帶。4實(shí)驗(yàn)條件4.1實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)操作宜在常溫（18℃~25℃)進(jìn)行。4.2儀器臺(tái)式低溫高速離心機(jī)、微量移液器、冰箱、吸頭。4.3人員注意個(gè)人防護(hù)和環(huán)境保護(hù)。5實(shí)驗(yàn)材料5.1檢測(cè)卡禽流感病毒檢測(cè)試紙條裝在塑料卡中制成檢測(cè)卡，鋁箔密封，內(nèi)裝干燥劑，室溫或冷藏保存。檢測(cè)卡結(jié)構(gòu)如圖1所示。2DB42/T794—20125.2樣品處理液取24.2gTrisBase和10mLTriton-x100，加注射用水至1L,調(diào)pH值至9.0，過濾除菌，無菌分裝，1mL/管。6樣品處理6.1咽/鼻拭子、肛拭子將收集的咽/鼻拭子、肛拭子插入到含有處理液的樣品管中，充分混合，使其溶解，以12,000r/min離心10min，取上清。6.2內(nèi)臟組織稱取組織塊0.5g，置于勻漿器中，加生理鹽水1mL，研磨后取出組織浸出液，然后置2℃~8℃,12,000r/min離心10min，取上清。6.3雞胚尿囊液雞胚尿囊液以12,000r/min離心2min，取上清。6.4細(xì)胞培養(yǎng)物細(xì)胞培養(yǎng)物可直接用于檢測(cè)或者凍融一次后檢測(cè)。7實(shí)驗(yàn)方法將檢測(cè)卡置于平整臺(tái)面上，取適量樣品80μL～120μL（約3滴～4滴），緩慢滴加到樣品孔中，當(dāng)看到紅色液體在試紙條上移動(dòng)時(shí)，放慢加樣速度。整個(gè)加樣過程在1min內(nèi)完成。加樣完成后5min~30min內(nèi)觀察的結(jié)果有效。8結(jié)果判定DB42/T794—20128.1陽性結(jié)果在試紙條上出現(xiàn)兩條紅色的條帶（T線和C線）。8.2陰性結(jié)果在試紙條