BD流式細胞儀工作原理演講人：日期:目錄02光學(xué)系統(tǒng)組成01基本原理概述03檢測技術(shù)分類04樣本處理流程05數(shù)據(jù)解析方法06應(yīng)用場景擴展01基本原理概述細胞懸浮液制備要求細胞濃度制備細胞懸浮液時需確保細胞濃度適中，過高或過低均會影響檢測準確性。01細胞狀態(tài)細胞應(yīng)為單個、分散、無聚集狀態(tài)，以確保檢測時每個細胞都能被準確識別。02懸浮液成分細胞懸浮液中應(yīng)含有適當?shù)木彌_液和營養(yǎng)成分，以保持細胞在檢測過程中的活性。03流體聚焦技術(shù)實現(xiàn)通過精確控制流體壓力、流速和通道形狀，使細胞懸浮液在檢測通道內(nèi)形成穩(wěn)定的層流，實現(xiàn)細胞的流體聚焦。流體動力學(xué)聚焦聲波聚焦靜電聚焦利用超聲波或機械波的作用，對細胞懸浮液進行聚焦，提高檢測精度和靈敏度。通過給細胞懸浮液施加靜電場，使細胞在電場力作用下發(fā)生偏轉(zhuǎn)，從而實現(xiàn)細胞的聚焦。單細胞層流形成機制層流原理在流式細胞儀的通道內(nèi)，細胞懸浮液以層流形式流動，各層流速不同，但互不干擾，保證了每個細胞都能以相同的狀態(tài)通過檢測區(qū)。細胞直徑與通道尺寸關(guān)系流體動力學(xué)設(shè)計通道尺寸略大于細胞直徑，使得細胞在通過時受到較小的阻力，同時保證細胞以單層形式通過檢測區(qū)。通過精心設(shè)計的通道形狀和流速控制，使細胞在通道內(nèi)形成穩(wěn)定的單層排列，確保每個細胞都能被準確檢測。12302光學(xué)系統(tǒng)組成激光發(fā)射器類型與波長常見的激光發(fā)射器有氣體激光器、固體激光器和半導(dǎo)體激光器。激光發(fā)射器類型不同波長的激光對應(yīng)不同的熒光染料和檢測器，應(yīng)根據(jù)實驗需求選擇合適的波長。波長選擇熒光信號檢測通道信號處理將放大后的信號轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號，并進行濾波和去噪處理。03采用光電倍增管或雪崩二極管等器件對熒光信號進行放大。02信號放大熒光信號收集通過物鏡和透鏡組將熒光信號收集并傳輸?shù)綑z測器。01散射光信號分析原理當激光照射到細胞時，細胞中的顆粒會產(chǎn)生散射光。散射光產(chǎn)生散射光分類散射光檢測散射光分為前向散射和側(cè)向散射，前向散射反映細胞大小，側(cè)向散射反映細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)。通過不同的檢測器接收散射光信號，并將其轉(zhuǎn)化為電信號進行分析和處理。03檢測技術(shù)分類原理前向散射光檢測是檢測細胞經(jīng)過激光束后，在細胞前方散射的光線。細胞的體積和復(fù)雜度越高，前向散射光強度越大。應(yīng)用前向散射光檢測主要用于細胞體積的測量，以及細胞群體中大小不同的細胞的區(qū)分。前向散射光檢測側(cè)向散射光檢測側(cè)向散射光檢測是檢測細胞經(jīng)過激光束后，在細胞側(cè)面散射的光線。細胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)、形態(tài)和顆粒度會影響側(cè)向散射光的強度。原理側(cè)向散射光檢測主要用于分析細胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)、形態(tài)和顆粒度，如區(qū)分細胞類型、細胞狀態(tài)等。應(yīng)用多色熒光標記技術(shù)是利用熒光染料對細胞進行標記，通過檢測細胞在特定波長光激發(fā)下所發(fā)出的熒光強度和顏色，對細胞進行多參數(shù)分析。原理多色熒光標記技術(shù)廣泛應(yīng)用于細胞表面抗原的檢測、細胞內(nèi)細胞因子及活性物質(zhì)的檢測、細胞周期分析、細胞凋亡檢測等多個領(lǐng)域。應(yīng)用0102多色熒光標記技術(shù)04樣本處理流程細胞染色標準操作熒光染料選擇染色方法染色濃度染色時間根據(jù)待測細胞特性和實驗需求選擇適合的熒光染料?？刹捎帽砻嫒旧?、胞內(nèi)染色或表面和胞內(nèi)同時染色。需嚴格控制熒光染料濃度，以保證染色效果和細胞活力。根據(jù)熒光染料特性和實驗要求確定合適的染色時間?？贵w標記選擇原則特異性選擇與目標細胞表面或胞內(nèi)抗原特異性結(jié)合的抗體。01靈敏度選擇高親和力的抗體，以提高檢測靈敏度。02穩(wěn)定性選擇穩(wěn)定性好的抗體，避免在實驗過程中失活或解離。03標記方法可采用直接標記或間接標記法，根據(jù)實驗需求選擇。04去除細胞懸液中的細胞碎片、組織纖維、聚集體等雜質(zhì)。去除雜質(zhì)樣本過濾凈化要求選擇合適的過濾孔徑，以去除雜質(zhì)同時保留目標細胞。過濾孔徑根據(jù)樣本情況確定過濾次數(shù)，以保證樣本的純凈度和細胞活力。過濾次數(shù)需輕輕混勻細胞懸液，避免細胞損失或破裂。過濾操作05數(shù)據(jù)解析方法散點圖與密度圖應(yīng)用散點圖與密度圖結(jié)合同時展示細胞的數(shù)量和分布，便于異常細胞的識別和細胞亞群的劃分。03通過顏色深淺來表示細胞數(shù)量，可直觀反映細胞群體的分布和聚集狀態(tài)。02密度圖散點圖顯示兩個或多個參數(shù)之間的關(guān)系，常用于分析細胞群體的異質(zhì)性。01細胞亞群分選策略前向散射光（FSC）與側(cè)向散射光（SSC）根據(jù)細胞大小、形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)進行初步分類。熒光標記利用特異性抗體或熒光染料標記細胞表面或內(nèi)部的特定抗原，實現(xiàn)目標細胞亞群的識別。細胞分選策略根據(jù)實驗?zāi)康暮图毎匦裕x擇合適的分選參數(shù)和閾值，將目標細胞亞群從其他細胞中分離出來。熒光強度定量分析熒光強度與細胞內(nèi)的抗原含量、熒光染料的濃度等參數(shù)相關(guān)，可反映細胞的生物學(xué)特性。熒光強度與細胞參數(shù)的關(guān)系使用已知熒光強度的標準品進行校準，確保測量結(jié)果的準確性和可重復(fù)性。熒光強度校準通過統(tǒng)計細胞群體的熒光強度分布，了解細胞在特定條件下的表達水平及其異質(zhì)性。熒光強度分布分析06應(yīng)用場景擴展免疫細胞分型研究淋巴細胞亞群分析利用流式細胞儀可以鑒定和計數(shù)淋巴細胞亞群，如T細胞、B細胞、NK細胞等，幫助研究免疫功能和疾病機制。細胞因子檢測免疫細胞活化與凋亡研究流式細胞術(shù)可以檢測細胞培養(yǎng)上清或血漿中的細胞因子，了解免疫細胞在特定條件下的功能狀態(tài)。通過流式細胞術(shù)檢測免疫細胞的活化狀態(tài)和凋亡水平，探討免疫調(diào)節(jié)機制。123流式細胞術(shù)可以測定細胞DNA含量，從而了解細胞周期分布情況，判斷腫瘤增殖活性。腫瘤細胞周期檢測細胞周期分布分析通過流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡率，評估腫瘤對化療和放療的敏感性。細胞凋亡檢測流式細胞術(shù)可檢測細胞增殖相關(guān)標記物，評估腫瘤細胞的增殖能力。腫瘤細胞增殖能力評估病原微生物快速篩查病原體鑒定與分型利用流式細胞術(shù)可以快速鑒定和