第十一章動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究方法第十一章動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)研究方法第一節(jié)化學(xué)分析法一、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)得分析1、概略養(yǎng)分分析

(1)水分(2)粗蛋白(CP)(3)粗脂肪(EE)(4)粗纖維(CF)(5)粗灰分(CA)(6)無(wú)氮浸出物(NFE)2、純養(yǎng)分分析(1)維生素(2)礦物質(zhì)(3)氨基酸(4)脂肪酸(5)純蛋白質(zhì)(6)纖維素、半纖維素、木質(zhì)素(7)淀粉、葡萄糖等3、分析對(duì)象

(1)飼料(2)排泄物(糞、尿等)(3)動(dòng)物組織(4)血液(5)整體動(dòng)物二、抗?fàn)I養(yǎng)因子分析1、概念抗?fàn)I養(yǎng)因子就是指飼料中本身含有或從外界進(jìn)入,影響飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值與動(dòng)物生長(zhǎng)得物質(zhì)。2、種類

(1)影響蛋白質(zhì)消化:蛋白酶抑制劑、凝集素、皂苷、多酚化合物等(2)影響礦物元素利用:植酸、草酸(3)影響維生素利用:雙香豆素、硫胺素酶等(4)影響碳水化合物利用:非淀粉多糖(NSP)等(5)刺激免疫系統(tǒng)得抗?fàn)I養(yǎng)因子:如抗原蛋白(6)綜合性抗?fàn)I養(yǎng)因子:如NSP、棉酚、硫葡萄糖甙。3、意義

分析飼料中抗?fàn)I養(yǎng)因子得種類與含量,可指導(dǎo)飼料得合理加工、利用、貯存,如通過(guò)加熱可提高豆類籽實(shí)得營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。三、毒害物質(zhì)分析重金屬元素:鉛、汞、砷等。霉菌毒素:如黃曲霉毒素有害微生物:大腸桿菌、沙門氏菌等四、動(dòng)物組織血液理化成分分析分析內(nèi)容

1、概略養(yǎng)分或純養(yǎng)分;2、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)得代謝產(chǎn)物(如尿素、尿酸等);3、相關(guān)標(biāo)識(shí)功能酶:如硒—血漿谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、鋅—血清堿性磷酸酶、銅—血漿銅藍(lán)蛋白氧化酶與血漿尿素氮等。第二節(jié)消化試驗(yàn)一、消化試驗(yàn)概念與目的

四、尼龍袋法三、體外消化試驗(yàn)二、

體內(nèi)消化試驗(yàn)大家學(xué)習(xí)辛苦了，還是要堅(jiān)持繼續(xù)保持安靜一、消化試驗(yàn)概念與目得1、概念:以測(cè)定動(dòng)物對(duì)飼料養(yǎng)分得消化能力或飼料養(yǎng)分得可消化性為目得得試驗(yàn)。2、目得:準(zhǔn)確地量化飼料中各種養(yǎng)分被動(dòng)物消化利用得程度,也就是評(píng)定飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值得重要方法。

3、種類(見(jiàn)圖)消化試驗(yàn)二、體內(nèi)(invivo)消化試驗(yàn)(一)全收糞法1、原理全收糞法就是指在整個(gè)試驗(yàn)期間精確測(cè)定動(dòng)物得采食量與排糞量以及其中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)得含量。可消化養(yǎng)分=食入養(yǎng)分-糞便養(yǎng)分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率=可消化養(yǎng)分/食入養(yǎng)分食入養(yǎng)分=采食量×飼料養(yǎng)分含量糞便養(yǎng)分=排糞量×糞便養(yǎng)分含量2、方法步驟(1)試驗(yàn)動(dòng)物得選擇:具有代表性:生長(zhǎng)發(fā)育良好,營(yíng)養(yǎng)狀況與消化機(jī)能等正常。不同組別動(dòng)物得一致性:品種、類型、性別、年齡、體重、血緣關(guān)系等。對(duì)性別無(wú)特別要求時(shí),最好選雄性動(dòng)物:便于糞尿分離。數(shù)量:每組3-6頭。(2)飼料(日糧)得準(zhǔn)備:應(yīng)一次性準(zhǔn)備好,按照每天得采食量,分袋、編號(hào)儲(chǔ)存。(3)試驗(yàn)場(chǎng)地及裝置得準(zhǔn)備:消化籠(柜)豬用消化籠牛用集糞袋(4)預(yù)試期:適應(yīng)環(huán)境,摸清采食量、排糞規(guī)律。(5)正試期:記錄采食量、收集排糞預(yù)試期、正試期時(shí)間:非反芻動(dòng)物:5-10天;反芻動(dòng)物:7-14天動(dòng)物種類預(yù)試期(d)正試期(d)牛、綿羊、水牛10~1410~14育成牛(6~12月齡)66馬7~108~10豬(成年)7~106~10育成豬(4~8月齡)65家兔7~107~10家禽(通常不做)4~64~5不同種類動(dòng)物消化試驗(yàn)期得規(guī)定

采食量計(jì)算:飼喂量-剩料量糞便收集:每天定時(shí)收糞、稱重?；靹蚝?取樣保存,加入10%鹽酸,以防NH3-N逸失。(二)回腸末端內(nèi)容物法通過(guò)外科手術(shù),在回腸末端安裝一瘺管或施以回-直腸吻合術(shù),在肛門收集回腸食糜。主要用于豬飼料氨基酸消化率得測(cè)定。1)T型瘺管優(yōu)點(diǎn):安瘺管后對(duì)荷術(shù)動(dòng)物生理影響小;缺點(diǎn):必須用指示劑,因不可能收集全部糞尿,由此取樣缺乏代表性,而且較麻煩。CannulatedAnimalsCannulatedAnimalsCannulatedAnimals2)橋式瘺管優(yōu)點(diǎn):收糞簡(jiǎn)便,而且可收集全部糞樣缺點(diǎn):手術(shù)復(fù)雜、成功率低與護(hù)理相對(duì)麻煩。3)回-直腸吻合術(shù)回—直腸吻合術(shù)

(三)指示劑法1、對(duì)指示劑得要求:不被消化吸收,不影響?zhàn)B分得正常消化,無(wú)毒無(wú)害,分布均勻,易測(cè)定。2、種類(1)外源指示劑:Cr2O3

(2)內(nèi)源指示劑(酸不溶灰分法):

2NHCl、4NHCl不溶灰分3、優(yōu)點(diǎn):省時(shí)省力,尤其就是在收集全部糞便困難時(shí)。

4、缺點(diǎn):指示劑回收率對(duì)消化率影響較大,并且很難找到回收率很理想得指示物質(zhì)。5、方法步驟:從預(yù)試期開(kāi)始,飼料中添加Cr2O3(0、5%),并混合均勻。每日收集部分糞樣保存。其它同全收糞法。5、計(jì)算公式:飼料養(yǎng)分消化率(%)=100-100×(A1·F2/A2·F1)式中:A1飼料中三氧化二鉻得含量(%)

A2糞中三氧化二鉻得含量(%)

F1飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)得含量(%)

F2糞中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)得含量(%)三、尼龍袋法

(nylonbagstechnique)原理:將待測(cè)飼料裝入一特制尼龍袋內(nèi),經(jīng)瘤胃瘺管放入瘤胃中,一定時(shí)間后取出,沖洗干凈,烘干稱重,與放入前得飼料蛋白質(zhì)含量得差值即為飼料瘤胃降解蛋白質(zhì)量(RDP)。計(jì)算公式:降解率(%)=(袋中初始N-孵化后N)×100/袋中初始N用途:測(cè)定飼料蛋白質(zhì)瘤胃降解率,用于反芻動(dòng)物蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值得評(píng)定。測(cè)定時(shí)間點(diǎn):粗飼料為6、12、24、36、48、72h;精飼料為2、6、12、24、48h。注意:尼龍袋得通透性要好,網(wǎng)眼大小適宜,通常采用孔徑為50μm得尼龍布。樣品有一定細(xì)度,便于瘤胃微生物得發(fā)酵。牛得瘤胃瘺管CannulatedAnimals羊得瘤胃瘺管1、概念:就是指摸擬消化道,在體外進(jìn)行飼料得消化。2、優(yōu)點(diǎn):操作方便,環(huán)境條件、處理方法與時(shí)間易控制,更容易標(biāo)準(zhǔn)化。3、缺點(diǎn):與動(dòng)物得生理生化過(guò)程有一定得差異。四、離體(invitro)消化試驗(yàn)4、種類:(1)消化道消化液法:兩步法反芻動(dòng)物:瘤胃液、胃蛋白酶+HCl豬:胃蛋白酶+HCl、小腸液(2)人工消化液法(酶解法):纖維素酶＋HCl、胃蛋白酶＋HCl主要用于反芻動(dòng)物第三節(jié)代謝試驗(yàn)

代謝試驗(yàn)就是測(cè)定飼料代謝能及研究營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝規(guī)律得試驗(yàn)。代謝試驗(yàn)與消化試驗(yàn)相比,在收集裝置上更復(fù)雜一些,需增加集尿裝置,反芻動(dòng)物還要有收集甲烷得裝置。強(qiáng)飼試驗(yàn)實(shí)景:見(jiàn)課本P、169盲腸切除法(家禽)第四節(jié)平衡試驗(yàn)一、概念與目的

四、能量平衡三、碳平衡二、氮平衡一、概念與目得1、概念:研究營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)食入與排泄、沉積或產(chǎn)品間得數(shù)量平衡關(guān)系得試驗(yàn)稱平衡試驗(yàn)。2、目得:估計(jì)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)需要參數(shù)與飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)得利用率。3、原理:食入養(yǎng)分=各途徑排泄養(yǎng)分之與4、種類(1)物質(zhì)平衡試驗(yàn)N平衡試驗(yàn)C平衡試驗(yàn)(2)能量平衡試驗(yàn)主要用于研究動(dòng)物蛋白質(zhì)得需要、飼料蛋白質(zhì)得利用率以及飼料或飼糧蛋白質(zhì)質(zhì)量得比較。通過(guò)食入氮、糞氮與尿氮得測(cè)定,就可計(jì)算出體內(nèi)沉積氮。二、氮平衡試驗(yàn)計(jì)算公式為:氮得消化率=(食入氮-糞氮)÷食入氮沉積氮=食入氮-(糞氮+尿氮)氮得總利用率=沉積氮÷食入氮氮得生物學(xué)價(jià)值(BV)=沉積氮÷吸收氮三、碳平衡試驗(yàn)沉積C=攝入C-(糞C+尿C+呼吸氣體CO2+腸道氣體CH4+離體產(chǎn)品C)沉積C包括:合成蛋白質(zhì)+合成脂肪(體內(nèi)沉積得碳水化合物量少,忽略不計(jì))結(jié)合N平衡試驗(yàn),可推算出體內(nèi)脂肪沉積量。四、能量平衡試驗(yàn)1、目得:能量平衡試驗(yàn)用于研究機(jī)體能量代謝過(guò)程中得數(shù)量關(guān)系,從而確定動(dòng)物對(duì)能量得需要與飼料或飼糧得能量利用率。2、原理:食入能＝排泄物(糞+尿+脫落皮屑+毛)含能+沉積能(生長(zhǎng)肥育)+產(chǎn)品(蛋、奶、毛)含能+維持生命活動(dòng)得機(jī)體產(chǎn)熱3、方法:直接測(cè)熱法間接測(cè)熱法(呼吸測(cè)熱法)碳、氮平衡法第五節(jié)飼養(yǎng)試驗(yàn)(生長(zhǎng)試驗(yàn))一、概念:飼養(yǎng)試驗(yàn),就是通過(guò)飼予動(dòng)物已知營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量得飼料或飼糧,對(duì)其增重、產(chǎn)蛋、產(chǎn)奶、耗料、每千克增重耗料、組織及血液生化指標(biāo)等進(jìn)行測(cè)定(有時(shí)也包括觀察缺乏癥出現(xiàn)得程度),確定動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)得需要量、比較飼料或飼糧得優(yōu)劣、飼養(yǎng)管理方式得優(yōu)劣以及不同動(dòng)物生產(chǎn)性能得差異等。二、試驗(yàn)設(shè)計(jì)根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康门c條件,遵循統(tǒng)計(jì)學(xué)原理與方法進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)。飼養(yǎng)試驗(yàn)應(yīng)嚴(yán)格遵循“隨機(jī)化”與“唯一差異”原則。飼養(yǎng)試驗(yàn)常采用得設(shè)計(jì)方法有以下幾種。(一)對(duì)照試驗(yàn)只考慮單一因素對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)得影響,設(shè)對(duì)照組與試驗(yàn)組。所有試驗(yàn)動(dòng)物按照隨機(jī)化原則進(jìn)入兩個(gè)組。飼料原料對(duì)照組試驗(yàn)組玉米62、0561、52豆粕22、7023、00棉籽粕5、005、00石粉7、659、10磷酸氫鈣1、86-骨粉0、58酶她富50000、06賴氨酸0、040、04蛋氨酸0、110、11礦物質(zhì)預(yù)混料0、100、10食鹽0、370、37復(fù)合維生素0、020、02膽堿0、100、10合計(jì)100100植酸酶效果研究:表:基礎(chǔ)日糧成分(二)配對(duì)試驗(yàn)為了使對(duì)照組與處理組得試驗(yàn)動(dòng)物盡量一致,選擇各方面條件相同動(dòng)物,雙雙配對(duì)。將每對(duì)動(dòng)物隨機(jī)分到處理組與對(duì)照組,更確切地講就是互為對(duì)照。配對(duì)試驗(yàn)與對(duì)照試驗(yàn)得適用范圍并無(wú)多大差異,主要視試驗(yàn)動(dòng)物得情況而定。配對(duì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)示例試驗(yàn)?zāi)康?比較芽孢桿菌微生態(tài)制劑與金霉素對(duì)35日齡斷奶仔豬得促生長(zhǎng)效果豬場(chǎng)條件:現(xiàn)有同日齡斷奶仔豬2窩(A、B),每窩有仔豬8-10頭12345678910A9、759、639、168、958、458、217、697、547、016、93B8、858、318、157、677、126、956、576、43抗生素組芽孢桿菌組豬編號(hào)體重豬編號(hào)體重A19、75A29、63A48、95A39、16A58、45A68、21A87、54A77、69B18、85B28、31B47、67B38、15B57、12B66、95B86、43B76、57平均體重8、09平均體重8、08SEM1、09SEM1、03(三)單向分類試驗(yàn)設(shè)計(jì)0、480、610、740、87平均日采食量(g)賴氨酸進(jìn)食量(mg/d)平均產(chǎn)蛋率(%)平均蛋重(g)平均日產(chǎn)蛋量(g)飼料報(bào)酬(g/g)平均日氮存留量(mg)全期平均增重(g)(四)隨機(jī)化完全區(qū)組設(shè)計(jì)

采用隨機(jī)化完全區(qū)組設(shè)計(jì)研究豬場(chǎng)環(huán)境條件對(duì)豬賴氨酸需要量得影響(以日增重作為反應(yīng)指標(biāo))豬場(chǎng)賴氨酸水平平均數(shù)多重比較0、6%0、7%0、8%AG11G12G13BG21G22G23CG31G32G33平均數(shù)多重比較表:Se與Cu對(duì)大鼠體重影響

(g)

Se0.0210.3010.6051.102Mean±SDCu0.54211±9.5216±8.5220±9.5222±9.1217±9.4B6.05229±9.4235±9.1236±9.8235±8.5235±11.5AMean±SD220±13.1A225±13A228±12.0A228±10A

(五)復(fù)因子試驗(yàn)得設(shè)計(jì)(六)拉丁方設(shè)計(jì)

02%4%6%1期12342期2341