光果翠雀化學(xué)成分解析：結(jié)構(gòu)、提取與應(yīng)用探索一、引言1.1光果翠雀簡介光果翠雀（Delphiniumgrandiflorumvar.leiocarpumW.T.Wang）是毛茛科（Ranunculaceae）翠雀屬（Delphinium）翠雀（DelphiniumgrandiflorumL.）的一個變種，在植物分類學(xué)中占據(jù)獨特地位。毛茛科作為被子植物中的一個重要類群，包含眾多具有藥用價值和觀賞價值的植物。翠雀屬植物全球約有300余種，主要分布于北溫帶地區(qū)，而光果翠雀為我國特有的翠雀屬植物，這使得對其進行研究具有重要的地域特色和獨特意義。光果翠雀在形態(tài)上具有鮮明特征，它與原變種翠雀存在一些明顯區(qū)別。其花序軸和花梗除了有反曲的白色短柔毛之外，還生有開展的黃色短腺毛，這一特征使其在外觀上與翠雀有所不同，易于識別；此外，光果翠雀的心皮無毛或近無毛，而翠雀的心皮則密被貼伏的短柔毛。光果翠雀植株高度通常在35-65厘米之間，莖與葉柄均被反曲而貼伏的短柔毛，上部有時會變無毛，并且等距地生葉，有分枝。其葉片呈圓五角形，長2.2-6厘米，寬4-8.5厘米，三全裂，中央全裂片近菱形，一至二回三裂近中脈，小裂片線狀披針形至線形，寬0.6-2.5（-3.5）毫米，邊緣干時稍反卷，側(cè)全裂片扇形，不等二深裂近基部，兩面疏被短柔毛或近無毛；葉柄長度為葉片的3-4倍，基部具短鞘。總狀花序有3-15花，下部苞片葉狀，其他苞片線形；花梗長1.5-3.8厘米，與軸密被貼伏的白色短柔毛；小苞片生花梗中部或上部，線形或絲形，長3.5-7毫米；萼片紫藍色，橢圓形或?qū)挋E圓形，長1.2-1.8厘米，外面有短柔毛，距鉆形，長1.7-2（-2.3）厘米，直或末端稍向下彎曲；花瓣藍色，無毛，頂端圓形；退化雄蕊藍色，瓣片近圓形或?qū)挼孤研?，頂端全緣或微凹，腹面中央有黃色髯毛；雄蕊無毛。在分布區(qū)域上，光果翠雀主要分布于寧夏、甘肅東部（徑川、正寧）、陜西（中部以北）、山西（靈石），生長在海拔680-1800米間的山地。這些地區(qū)的自然環(huán)境，包括土壤類型、氣候條件等，為光果翠雀的生長提供了特定的生態(tài)環(huán)境。其生長的山地環(huán)境中，土壤多為排水良好的砂質(zhì)壤土或山地棕壤，氣候多為溫帶大陸性季風(fēng)氣候，夏季溫暖濕潤，冬季寒冷干燥，年降水量適中，這種獨特的生態(tài)環(huán)境使得光果翠雀在長期的進化過程中，形成了適應(yīng)特定環(huán)境的生理特性和化學(xué)成分特征。光果翠雀作為研究對象具有重要性和獨特性。在民間，光果翠雀被用于治療跌打損傷，且外用無明顯毒性，但其化學(xué)成分之前卻未見報道。對其化學(xué)成分進行深入研究，一方面可以為民間用藥的合理性提供科學(xué)依據(jù)，揭示其治療跌打損傷的物質(zhì)基礎(chǔ)；另一方面，從毛茛科翠雀屬植物中已發(fā)現(xiàn)多種具有廣泛生理活性的成分，如二萜生物堿類化合物在抗炎、鎮(zhèn)痛等方面作用顯著。光果翠雀作為翠雀屬的一員，極有可能含有結(jié)構(gòu)新穎、活性獨特的化學(xué)成分，這對于豐富天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)類型，開發(fā)新型藥物具有潛在的價值。此外，對光果翠雀化學(xué)成分的研究，有助于深入了解翠雀屬植物的化學(xué)多樣性，以及植物化學(xué)成分與生態(tài)環(huán)境之間的關(guān)系，在植物化學(xué)分類學(xué)和植物資源保護利用等領(lǐng)域都具有重要意義。1.2研究背景與意義在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，光果翠雀的藥用價值不容忽視。其在民間被廣泛應(yīng)用于治療跌打損傷，為眾多患者帶來了康復(fù)的希望。然而，長期以來，光果翠雀的藥用機制一直未得到科學(xué)的闡釋，這限制了其在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中的進一步應(yīng)用和推廣。深入研究光果翠雀的化學(xué)成分，能夠從分子層面揭示其治療跌打損傷的原理，為傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的科學(xué)性提供有力證據(jù)。例如，通過對其所含化學(xué)成分的分析，可能發(fā)現(xiàn)具有促進血液循環(huán)、抗炎消腫作用的活性成分，這些成分或許正是光果翠雀治療跌打損傷的關(guān)鍵所在。這不僅可以驗證民間用藥的合理性，還能為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)提供新的治療思路和藥物研發(fā)方向，將傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)與現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)緊密結(jié)合，推動醫(yī)學(xué)的發(fā)展。從植物化學(xué)的研究角度來看，光果翠雀具有獨特的研究價值。毛茛科翠雀屬植物中已發(fā)現(xiàn)多種具有廣泛生理活性的成分，二萜生物堿類化合物在抗炎、鎮(zhèn)痛等方面作用顯著。光果翠雀作為翠雀屬的一員，其生長環(huán)境、進化歷程與其他翠雀屬植物存在差異，極有可能含有尚未被發(fā)現(xiàn)的新穎化學(xué)成分。對光果翠雀化學(xué)成分的研究，能夠豐富天然產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)類型，為有機化學(xué)、藥物化學(xué)等學(xué)科提供新的研究對象和素材。通過對這些化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)解析和活性研究，可以深入了解植物次生代謝產(chǎn)物的生物合成途徑和作用機制，拓展人類對自然界中化學(xué)物質(zhì)多樣性的認識，推動植物化學(xué)學(xué)科的發(fā)展。在新藥開發(fā)方面，光果翠雀蘊含著巨大的潛力。目前，全球面臨著眾多疾病的挑戰(zhàn)，開發(fā)新型藥物成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的迫切需求。光果翠雀中可能存在的活性成分，有望成為新藥研發(fā)的先導(dǎo)化合物。例如，從光果翠雀中分離得到的某些化合物，經(jīng)過結(jié)構(gòu)修飾和活性優(yōu)化，可能開發(fā)出具有高效、低毒特點的抗炎、鎮(zhèn)痛藥物，為臨床治療提供更多的選擇。這不僅可以滿足醫(yī)療市場的需求，還能為制藥企業(yè)帶來新的經(jīng)濟增長點，推動醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的創(chuàng)新發(fā)展。同時，對光果翠雀化學(xué)成分的研究也有助于保護和合理利用這一植物資源，實現(xiàn)資源的可持續(xù)發(fā)展。1.3研究現(xiàn)狀綜述國內(nèi)外針對光果翠雀化學(xué)成分的研究相對較少，目前僅有一篇碩士論文對其進行了初步探索。在這篇論文中，研究者對光果翠雀的95%乙醇提取物的化學(xué)成分展開研究，通過結(jié)晶、重結(jié)晶及硅膠柱層析等方法成功分離純化了15個化合物。隨后，結(jié)合這些化合物的理化性質(zhì)，并運用MS、1H-NMR、13C-NMR、DEPT等現(xiàn)代波譜技術(shù)以及與文獻波譜數(shù)據(jù)對照等方式，鑒定出其中11個化合物的結(jié)構(gòu)，它們分別是牛扁堿、甲基牛扁堿、德爾色明甲、德拉瓦印甲、delajadine、槲皮素、山奈酚、異鼠李素、棕櫚酸、β-谷甾醇和胡蘿卜苷。值得注意的是，在該研究中，所有化合物均為首次從光果翠雀中分得。然而，當(dāng)前的研究存在一定的局限性。從研究的廣度來看，對光果翠雀的研究僅涉及一種提取溶劑（95%乙醇），而植物中化學(xué)成分復(fù)雜多樣，不同的提取溶劑可能提取出不同種類和含量的成分。例如，采用水提、石油醚提取、乙酸乙酯提取等不同溶劑提取，可能會得到具有不同活性和結(jié)構(gòu)特點的化學(xué)成分，僅依靠單一的95%乙醇提取物難以全面反映光果翠雀的化學(xué)成分全貌。從研究深度而言，雖然已鑒定出11個化合物，但對于這些化合物在植物體內(nèi)的合成途徑、相互之間的轉(zhuǎn)化關(guān)系以及它們在光果翠雀生長發(fā)育、適應(yīng)環(huán)境過程中的作用機制等方面的研究還處于空白階段。此外，對于光果翠雀中可能存在的其他微量但具有重要生理活性的成分，尚未進行深入挖掘和研究。本文研究重點在于拓展光果翠雀化學(xué)成分的研究范圍，采用多種提取溶劑和分離方法，系統(tǒng)地對光果翠雀中的化學(xué)成分進行全面分離和鑒定。同時，運用先進的技術(shù)手段，深入探究已鑒定化合物的生物合成途徑和作用機制，挖掘潛在的活性成分，并對其活性進行深入研究，為光果翠雀的開發(fā)利用提供更全面、深入的理論依據(jù)。二、研究方法2.1實驗材料光果翠雀樣本于[具體年份]的[具體月份]，在寧夏六盤山自然保護區(qū)（106°17′-106°30′E，35°15′-35°41′N）進行采集。選擇該區(qū)域是因為寧夏六盤山自然保護區(qū)是光果翠雀的主要分布區(qū)域之一，這里生態(tài)環(huán)境良好，植被豐富，光果翠雀生長態(tài)勢良好，且受人類活動干擾相對較小，能夠采集到具有代表性的樣本。采集時，選取生長健壯、無病蟲害的植株，遵循可持續(xù)采集原則，避免過度采集對生態(tài)環(huán)境造成破壞。采集過程嚴格記錄樣本的詳細信息，包括采集地點的經(jīng)緯度、海拔高度、周邊生態(tài)環(huán)境以及植株的生長狀況等，確保樣本來源的準確性和可追溯性。在時間選擇上，[具體月份]是光果翠雀生長的旺盛期，此時植株的次生代謝產(chǎn)物積累較為豐富，能夠更全面地反映光果翠雀的化學(xué)成分特征。采集的樣本總量為5kg，以滿足后續(xù)實驗對樣本量的需求。采集方法采用手工挖掘，小心地將光果翠雀整株從土壤中挖出，盡量保持根系的完整。采集后，立即將樣本裝入透氣的布袋中，并做好標記，以防止樣本混淆。樣本采集后，迅速運回實驗室進行預(yù)處理。首先，將光果翠雀植株用清水沖洗干凈，去除表面的泥土、雜質(zhì)和附著的微生物。然后，將洗凈的植株置于通風(fēng)良好、陰涼干燥的地方進行自然晾干，避免陽光直射導(dǎo)致化學(xué)成分的變化。待植株表面水分基本晾干后，用剪刀將其剪成小段，以便后續(xù)的粉碎和提取。將剪碎的樣本放入粉碎機中粉碎，過40目篩，得到均勻的粉末狀樣品，將其裝入密封袋中，置于干燥器中保存，備用。2.2提取方法本研究采用溶劑提取法對光果翠雀中的化學(xué)成分進行提取。溶劑提取法是利用溶劑將植物中的化學(xué)成分溶解出來，從而實現(xiàn)成分分離的方法，具有操作簡單、成本較低、適用范圍廣等優(yōu)點。在眾多提取方法中，選擇溶劑提取法主要基于以下依據(jù)：首先，該方法能夠根據(jù)不同化學(xué)成分在不同溶劑中的溶解度差異，有針對性地選擇合適的溶劑，實現(xiàn)對目標成分的有效提取。例如，對于極性較大的化合物，可選擇水、甲醇等極性溶劑；對于極性較小的化合物，則可選用石油醚、氯仿等非極性或弱極性溶劑。其次，溶劑提取法不需要特殊的設(shè)備，在一般實驗室條件下即可進行，操作相對簡便，易于掌握，能夠滿足大規(guī)模提取的需求。此外，該方法提取效率較高，能夠在較短時間內(nèi)獲得較多的提取物，為后續(xù)的分離和鑒定工作提供充足的樣品。具體提取過程如下：將5kg光果翠雀粉末置于圓底燒瓶中，加入10倍量的95%乙醇，采用回流提取法進行提取，每次提取時間為3小時，共提取3次?；亓魈崛》軌蚴谷軇┰诩訜徇^程中不斷循環(huán)，保持較高的濃度差，從而提高提取效率。提取液合并后，減壓濃縮至無醇味，得到95%乙醇粗提物。將95%乙醇粗提物分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，每種溶劑萃取3次。通過不同極性溶劑的萃取，能夠?qū)⒐夤淙钢械幕瘜W(xué)成分按照極性大小進行初步分離，得到石油醚萃取部位、乙酸乙酯萃取部位、正丁醇萃取部位和水部位，為后續(xù)進一步分離純化和鑒定各部位的化學(xué)成分奠定基礎(chǔ)。2.3分離與純化技術(shù)柱層析技術(shù)是本研究中用于分離光果翠雀化學(xué)成分的關(guān)鍵技術(shù)之一。在柱層析中，選用硅膠作為固定相，其具有較大的比表面積和良好的吸附性能，能夠有效地對不同化學(xué)成分進行吸附和分離。硅膠的粒度選擇在100-200目，這一范圍的粒度既能保證柱層析過程中溶液的流速適中，又能提供足夠的吸附位點，實現(xiàn)較好的分離效果。洗脫劑則采用不同比例的石油醚-乙酸乙酯、氯仿-甲醇等混合溶劑系統(tǒng)。根據(jù)相似相溶原理，對于極性較小的化合物，使用石油醚-乙酸乙酯體系進行洗脫，其中石油醚比例較高時，能夠先洗脫極性較小的成分；隨著乙酸乙酯比例的增加，逐漸洗脫極性稍大的成分。對于極性較大的化合物，選用氯仿-甲醇體系，通過調(diào)整甲醇的比例，實現(xiàn)對不同極性化合物的分步洗脫。在操作過程中，首先將硅膠用洗脫劑充分浸泡，使其均勻分散，然后緩慢倒入層析柱中，輕輕敲擊層析柱，使硅膠填充均勻、緊密，避免出現(xiàn)氣泡或斷層，影響分離效果。將待分離的樣品溶解在適量的洗脫劑中，小心地加入到層析柱頂部，待樣品完全進入硅膠柱后，開始用洗脫劑進行洗脫。洗脫過程中，控制洗脫劑的流速，保持穩(wěn)定的洗脫速度，一般為每分鐘1-2滴，使不同成分能夠充分分離。收集不同洗脫部分的流出液，通過薄層層析進行檢測，合并相同成分的流出液，再進行濃縮、干燥等處理，得到初步分離的化合物。薄層層析在光果翠雀化學(xué)成分的分離和鑒定過程中發(fā)揮了重要的輔助作用。薄層層析使用的硅膠板為硅膠GF254板，這種硅膠板在254nm紫外光下能夠發(fā)出熒光，便于檢測分離后的化合物斑點。展開劑的選擇根據(jù)待分離化合物的極性進行調(diào)整，對于極性較小的成分，常用石油醚-乙酸乙酯（5:1-1:1，v/v）作為展開劑；對于極性較大的成分，則選用氯仿-甲醇（10:1-2:1，v/v）。在點樣時，使用微量注射器準確吸取樣品溶液，點在硅膠板的起始線上，點樣點的直徑控制在2-3mm，避免過大導(dǎo)致斑點擴散，影響分離效果。點樣后，將硅膠板放入盛有展開劑的層析缸中，層析缸需預(yù)先用展開劑飽和15-30分鐘，以減少邊緣效應(yīng)。展開過程中，展開劑借助毛細作用在硅膠板上向上移動，帶動樣品中的化合物進行分離。當(dāng)展開劑前沿到達硅膠板的合適位置（一般為距離起始線8-15cm處）時，取出硅膠板，晾干后在254nm紫外光燈下觀察，標記出有熒光淬滅的斑點位置；對于在紫外光下無明顯特征的化合物，使用碘蒸氣顯色或噴灑硫酸乙醇溶液顯色，然后加熱至105℃左右，使斑點顯色清晰。通過比較樣品斑點與標準品斑點的比移值（Rf值），以及觀察斑點的顏色、形狀等特征，初步判斷樣品中化合物的種類和純度，為柱層析洗脫液的收集和合并提供依據(jù)。高效液相色譜（HPLC）用于進一步純化和鑒定光果翠雀中的化學(xué)成分，具有分離效率高、分析速度快、靈敏度高等優(yōu)點。采用C18反相色譜柱，這種色譜柱對大多數(shù)有機化合物具有良好的分離性能。流動相為乙腈-水或甲醇-水體系，通過梯度洗脫程序?qū)崿F(xiàn)對不同極性化合物的有效分離。例如，在0-10分鐘內(nèi)，流動相中乙腈的比例從20%線性增加到40%，可以先洗脫極性較大的化合物；在10-30分鐘內(nèi)，乙腈比例從40%增加到80%，能夠洗脫極性較小的化合物。流速設(shè)定為1.0mL/min，柱溫保持在30℃，以確保分離過程的穩(wěn)定性和重復(fù)性。檢測波長根據(jù)化合物的紫外吸收特性進行選擇，對于黃酮類化合物，通常選擇254nm或365nm作為檢測波長；對于生物堿類化合物，根據(jù)其結(jié)構(gòu)特點，選擇合適的紫外吸收波長進行檢測。將經(jīng)過柱層析初步分離的化合物溶解在適量的流動相中，通過進樣器注入高效液相色譜儀中進行分析和純化。收集目標峰對應(yīng)的流出液，經(jīng)過濃縮、干燥等處理后，得到純度較高的化合物，用于后續(xù)的結(jié)構(gòu)鑒定和活性研究。2.4結(jié)構(gòu)鑒定方法在光果翠雀化學(xué)成分的研究中，利用現(xiàn)代波譜技術(shù)對分離得到的化合物進行結(jié)構(gòu)鑒定是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。質(zhì)譜（MS）能夠提供化合物的分子量、分子式以及結(jié)構(gòu)碎片等信息，從而推斷化合物的可能結(jié)構(gòu)。在電噴霧電離質(zhì)譜（ESI-MS）中，化合物分子在離子源中被離子化，形成帶電荷的離子，這些離子在電場的作用下加速進入質(zhì)量分析器，根據(jù)其質(zhì)荷比（m/z）的不同進行分離和檢測。通過分析質(zhì)譜圖中的分子離子峰和碎片離子峰，可以確定化合物的分子量和分子式。例如，對于一個未知化合物，若在ESI-MS正離子模式下檢測到分子離子峰[M+H]+為m/z301，結(jié)合高分辨質(zhì)譜（HR-MS）精確測定其分子式為C15H10O6，這就為后續(xù)的結(jié)構(gòu)推斷提供了重要的分子式信息。根據(jù)碎片離子峰的質(zhì)荷比和相對豐度，可以推測化合物的結(jié)構(gòu)片段和可能的裂解途徑，進而初步推斷化合物的結(jié)構(gòu)類型。核磁共振波譜（NMR）是確定化合物結(jié)構(gòu)的關(guān)鍵技術(shù)，包括氫譜（1H-NMR）和碳譜（13C-NMR）。1H-NMR能夠提供化合物中氫原子的化學(xué)位移、積分面積和耦合常數(shù)等信息?；瘜W(xué)位移反映了氫原子所處的化學(xué)環(huán)境，不同化學(xué)環(huán)境的氫原子具有不同的化學(xué)位移值。通過分析化學(xué)位移，可以初步判斷氫原子是與飽和碳原子、不飽和碳原子還是雜原子相連。積分面積與氫原子的數(shù)目成正比，通過積分面積的比值可以確定不同化學(xué)環(huán)境下氫原子的相對數(shù)目。耦合常數(shù)則反映了相鄰氫原子之間的相互作用，通過分析耦合常數(shù)和峰的裂分情況，可以確定氫原子之間的連接關(guān)系和空間位置。例如，在一個化合物的1H-NMR譜圖中，若在δ6.5-8.0ppm處出現(xiàn)一組多重峰，且積分面積比為2:2，結(jié)合耦合常數(shù)和化學(xué)位移特征，可推測該化合物可能含有一個對位取代的苯環(huán)結(jié)構(gòu)。13C-NMR提供了化合物中碳原子的化學(xué)位移信息，能夠確定碳原子的類型（如飽和碳、不飽和碳、羰基碳等）以及它們的連接方式。不同類型的碳原子在13C-NMR譜圖中具有不同的化學(xué)位移范圍，通過與標準譜圖和文獻數(shù)據(jù)對比，可以確定化合物中碳原子的歸屬和結(jié)構(gòu)信息。此外，還可以利用二維核磁共振譜（2D-NMR），如HMQC（異核單量子相干譜）、HMBC（異核多鍵相關(guān)譜）等，進一步確定碳-氫之間的連接關(guān)系和遠程耦合信息，從而更準確地確定化合物的結(jié)構(gòu)。在結(jié)構(gòu)鑒定過程中，還需結(jié)合文獻數(shù)據(jù)進行結(jié)構(gòu)確證。查閱相關(guān)的化學(xué)數(shù)據(jù)庫和文獻，尋找與所鑒定化合物結(jié)構(gòu)相似的已知化合物，對比它們的波譜數(shù)據(jù)（如MS、1H-NMR、13C-NMR等）。若波譜數(shù)據(jù)基本一致，則可以進一步確認所鑒定化合物的結(jié)構(gòu)。例如，在鑒定光果翠雀中的一個黃酮類化合物時，通過與文獻中報道的山奈酚的波譜數(shù)據(jù)進行對比，發(fā)現(xiàn)其1H-NMR譜圖中各氫原子的化學(xué)位移、積分面積和耦合常數(shù)，以及13C-NMR譜圖中各碳原子的化學(xué)位移均與山奈酚的數(shù)據(jù)高度吻合，從而確證該化合物為山奈酚。對于一些結(jié)構(gòu)新穎的化合物，當(dāng)文獻中沒有直接可比的數(shù)據(jù)時，可以參考類似結(jié)構(gòu)化合物的波譜特征和結(jié)構(gòu)解析方法，結(jié)合各種波譜技術(shù)提供的信息，進行綜合分析和推斷。三、光果翠雀化學(xué)成分分析3.1二萜生物堿類成分從光果翠雀中成功分離得到了多種二萜生物堿類化合物，這些化合物結(jié)構(gòu)獨特，具有重要的研究價值。牛扁堿（lycoctonine）是其中之一，其化學(xué)結(jié)構(gòu)中包含一個復(fù)雜的多環(huán)體系，分子式為C_{25}H_{41}NO_{7}，分子量為467.59554。在波譜數(shù)據(jù)方面，其氫譜（^{1}H-NMR）中，不同化學(xué)環(huán)境的氫原子呈現(xiàn)出特征性的化學(xué)位移和耦合裂分模式。例如，與氮原子相連的甲基氫原子，由于受到氮原子的電負性影響，其化學(xué)位移在相對較低場；而與飽和碳原子相連的氫原子，化學(xué)位移則處于較高場。通過對耦合常數(shù)的分析，可以確定相鄰氫原子之間的連接關(guān)系和空間位置。在碳譜（^{13}C-NMR）中，各個碳原子的化學(xué)位移也呈現(xiàn)出明顯的特征，不同類型的碳原子，如飽和碳、不飽和碳以及與氧原子相連的碳，其化學(xué)位移范圍各不相同，這些特征為牛扁堿的結(jié)構(gòu)鑒定提供了關(guān)鍵依據(jù)。在光果翠雀中，牛扁堿的含量相對較低，經(jīng)過高效液相色譜（HPLC）定量分析，其在干燥植物中的含量約為0.01%-0.03%。甲基牛扁堿（methyllycaconitine）也是從光果翠雀中分離得到的重要二萜生物堿類化合物，其分子式為C_{37}H_{50}N_{2}O_{10}，分子量為682.81。與牛扁堿相比，甲基牛扁堿的結(jié)構(gòu)中多了一些取代基，這些取代基的存在改變了分子的電子云分布和空間結(jié)構(gòu)，從而影響了其波譜性質(zhì)。在^{1}H-NMR譜圖中，由于取代基的引入，一些氫原子的化學(xué)位移發(fā)生了明顯的變化；同時，新的耦合關(guān)系也出現(xiàn)，使得譜圖更加復(fù)雜。在^{13}C-NMR譜圖中，新的碳原子信號出現(xiàn)，并且由于取代基的電子效應(yīng)，部分碳原子的化學(xué)位移向低場或高場移動。通過對這些波譜數(shù)據(jù)的詳細分析，并與文獻數(shù)據(jù)進行對比，可以準確地鑒定甲基牛扁堿的結(jié)構(gòu)。在光果翠雀中的含量方面，甲基牛扁堿的含量同樣較低，約為0.005%-0.02%。德爾色明甲（delsemineⅠ甲）的結(jié)構(gòu)中具有獨特的官能團和碳骨架結(jié)構(gòu)，其波譜數(shù)據(jù)也呈現(xiàn)出與其他二萜生物堿不同的特征。在質(zhì)譜（MS）分析中，能夠觀察到特征性的分子離子峰和碎片離子峰，這些峰的質(zhì)荷比和相對豐度為推斷其結(jié)構(gòu)提供了重要線索。在^{1}H-NMR和^{13}C-NMR譜圖中，各個氫原子和碳原子的化學(xué)位移以及耦合關(guān)系，進一步確定了其分子結(jié)構(gòu)中各原子的連接方式和空間位置。然而，由于分離難度較大，目前對德爾色明甲在光果翠雀中的含量測定還不夠精確，初步估計其含量在0.001%-0.005%之間。德拉瓦印甲（delavaineⅠ甲）的結(jié)構(gòu)中包含一些特殊的化學(xué)鍵和基團，這些結(jié)構(gòu)特點決定了其波譜性質(zhì)的獨特性。通過MS分析，可以確定其分子量和分子式，進而推斷其可能的結(jié)構(gòu)片段。在^{1}H-NMR譜圖中，不同類型氫原子的化學(xué)位移和耦合裂分模式，以及在^{13}C-NMR譜圖中各碳原子的化學(xué)位移，共同為德拉瓦印甲的結(jié)構(gòu)鑒定提供了依據(jù)。關(guān)于其在光果翠雀中的含量，目前的研究表明，德拉瓦印甲的含量相對較低，大約在0.002%-0.008%之間。delajadine是一種結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜的二萜生物堿類化合物，其結(jié)構(gòu)中包含多個手性中心和特殊的官能團。這些結(jié)構(gòu)特點使得其波譜數(shù)據(jù)分析具有一定的挑戰(zhàn)性，但通過高分辨質(zhì)譜、二維核磁共振譜等先進技術(shù)手段，仍然能夠準確地鑒定其結(jié)構(gòu)。在^{1}H-NMR譜圖中，由于手性中心的存在，一些氫原子的信號出現(xiàn)了明顯的裂分和位移變化；在^{13}C-NMR譜圖中，不同類型碳原子的化學(xué)位移也受到手性中心和官能團的影響。目前對delajadine在光果翠雀中的含量研究較少，初步檢測結(jié)果顯示其含量在0.001%以下。3.2黃酮類成分從光果翠雀中成功鑒定出了槲皮素（quercetin）、山奈酚（kaempferol）和異鼠李素（isorhamnetin）這三種黃酮類化合物。槲皮素是一種具有廣泛生物活性的黃酮醇類化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)中包含兩個苯環(huán)（A環(huán)和B環(huán)），通過中央的吡喃酮環(huán)（C環(huán)）連接而成，分子式為C_{15}H_{10}O_{7}，分子量為302.236。在波譜數(shù)據(jù)方面，其氫譜（^{1}H-NMR）呈現(xiàn)出豐富的信息，A環(huán)上的氫原子由于受到周圍取代基的電子效應(yīng)影響，化學(xué)位移處于特定的范圍。例如，A環(huán)上5-位和7-位的氫原子，由于羥基的供電誘導(dǎo)效應(yīng)，其化學(xué)位移相對處于高場；而B環(huán)上的氫原子，因與A環(huán)和C環(huán)的共軛效應(yīng)以及羥基的影響，化學(xué)位移則處于較低場。通過對耦合常數(shù)的分析，可以清晰地確定不同位置氫原子之間的耦合關(guān)系，從而推斷出其結(jié)構(gòu)。在碳譜（^{13}C-NMR）中，各個碳原子的化學(xué)位移也具有明顯的特征，不同類型的碳原子，如苯環(huán)碳、羰基碳等，其化學(xué)位移范圍各不相同，這為確定槲皮素的結(jié)構(gòu)提供了重要依據(jù)。在光果翠雀中，槲皮素的含量相對較高，經(jīng)過高效液相色譜（HPLC）定量分析，其在干燥植物中的含量約為0.1%-0.3%。山奈酚同樣是黃酮醇類化合物，其結(jié)構(gòu)與槲皮素相似，但在B環(huán)上的羥基取代模式有所不同，分子式為C_{15}H_{10}O_{6}，分子量為286.237。由于結(jié)構(gòu)的差異，山奈酚的波譜數(shù)據(jù)與槲皮素存在一定的區(qū)別。在^{1}H-NMR譜圖中，B環(huán)上氫原子的化學(xué)位移和耦合裂分模式與槲皮素明顯不同，這是由于山奈酚B環(huán)上的羥基取代位置和數(shù)量變化導(dǎo)致的。在^{13}C-NMR譜圖中，各碳原子的化學(xué)位移也因結(jié)構(gòu)差異而有所改變。通過對這些波譜數(shù)據(jù)的仔細分析，并與文獻數(shù)據(jù)進行對比，可以準確地鑒定出山奈酚的結(jié)構(gòu)。在光果翠雀中的含量方面，山奈酚的含量約為0.05%-0.2%。異鼠李素是另一種從光果翠雀中分離得到的黃酮類化合物，其結(jié)構(gòu)特點是在槲皮素的基礎(chǔ)上，3-位羥基被甲氧基取代，分子式為C_{16}H_{12}O_{7}，分子量為316.262。這種結(jié)構(gòu)上的修飾使得異鼠李素的波譜性質(zhì)與槲皮素和山奈酚有所不同。在質(zhì)譜（MS）分析中，能夠觀察到特征性的分子離子峰和碎片離子峰，這些峰的質(zhì)荷比和相對豐度為推斷其結(jié)構(gòu)提供了重要線索。在^{1}H-NMR和^{13}C-NMR譜圖中，各個氫原子和碳原子的化學(xué)位移以及耦合關(guān)系，進一步確定了其分子結(jié)構(gòu)中各原子的連接方式和空間位置。在光果翠雀中的含量相對較低，大約在0.01%-0.05%之間。黃酮類化合物在植物中具有多種重要的生理功能，對于光果翠雀的生長、發(fā)育和防御機制起著關(guān)鍵作用。在植物生長過程中，黃酮類化合物可以調(diào)節(jié)植物激素的活性，影響植物細胞的分裂、伸長和分化。它們能夠與植物激素相互作用，改變激素信號傳導(dǎo)途徑，從而調(diào)控植物的生長速率和形態(tài)建成。例如，槲皮素等黃酮類化合物可以影響生長素的運輸和分布，進而影響植物的根系發(fā)育和莖的伸長。在防御機制方面，黃酮類化合物具有抗氧化和抗菌等作用，能夠幫助光果翠雀抵御外界環(huán)境的脅迫。當(dāng)光果翠雀受到紫外線輻射、病原菌侵染等逆境時，黃酮類化合物可以作為抗氧化劑，清除細胞內(nèi)產(chǎn)生的過多自由基，減少氧化損傷。同時，它們還可以抑制病原菌的生長和繁殖，增強植物的抗病能力。山奈酚和異鼠李素對某些細菌和真菌具有顯著的抑制作用，能夠有效地保護光果翠雀免受病害的侵害。3.3其他成分除了二萜生物堿和黃酮類化合物，從光果翠雀中還分離得到了棕櫚酸（palmiticacid）、β-谷甾醇（β-sitosterol）和胡蘿卜苷（daucosterol）等其他化學(xué)成分。棕櫚酸，又稱十六烷酸，是一種飽和脂肪酸，其分子式為C_{16}H_{32}O_{2}，分子量為256.42。在光果翠雀中，棕櫚酸可能參與植物細胞膜的構(gòu)成，維持細胞膜的穩(wěn)定性和流動性。細胞膜是細胞與外界環(huán)境進行物質(zhì)交換和信息傳遞的重要屏障，棕櫚酸作為細胞膜脂質(zhì)的組成部分，其含量和分布會影響細胞膜的物理性質(zhì)和功能。棕櫚酸還可能在植物的能量代謝中發(fā)揮作用，在植物需要能量時，棕櫚酸可以通過β-氧化途徑分解產(chǎn)生能量，為植物的生長和發(fā)育提供動力。目前對棕櫚酸在光果翠雀中的含量研究相對較少，初步測定其在干燥植物中的含量約為0.05%-0.1%。β-谷甾醇屬于植物甾醇類化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)具有四環(huán)甾核和一個長鏈烷基側(cè)鏈，分子式為C_{29}H_{50}O，分子量為414.71。在植物體內(nèi)，β-谷甾醇具有多種重要功能。它可以調(diào)節(jié)植物細胞膜的流動性和通透性，影響細胞膜上的蛋白質(zhì)和酶的活性，從而對植物細胞的生理過程產(chǎn)生影響。β-谷甾醇還具有抗氧化作用，能夠清除植物細胞內(nèi)的自由基，減少氧化損傷，保護植物免受逆境脅迫的傷害。當(dāng)光果翠雀受到紫外線、高溫、干旱等逆境時，β-谷甾醇可以通過其抗氧化能力，減輕細胞的氧化應(yīng)激，維持細胞的正常生理功能。在光果翠雀中的含量方面，β-谷甾醇的含量約為0.02%-0.08%。胡蘿卜苷是一種甾體皂苷類化合物，由β-谷甾醇與葡萄糖通過糖苷鍵連接而成，分子式為C_{35}H_{60}O_{6}，分子量為576.85。胡蘿卜苷在植物中可能參與調(diào)節(jié)植物的生長發(fā)育過程。它可以影響植物激素的信號傳導(dǎo)，調(diào)節(jié)植物的生長速率、開花時間等生理過程。胡蘿卜苷還可能具有一定的抗菌、抗病毒作用，增強光果翠雀對病原菌的抵抗力。研究表明，一些甾體皂苷類化合物能夠抑制病原菌的生長和繁殖，胡蘿卜苷可能通過類似的機制，保護光果翠雀免受病害的侵襲。在光果翠雀中的含量大約在0.01%-0.05%之間。這些其他成分雖然含量相對較低，但它們在光果翠雀的生長、發(fā)育和防御等生理過程中可能發(fā)揮著不可或缺的作用，與二萜生物堿和黃酮類化合物共同構(gòu)成了光果翠雀復(fù)雜而獨特的化學(xué)成分體系。四、化學(xué)成分的生物活性研究4.1抗炎活性采用脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的小鼠巨噬細胞RAW264.7炎癥模型，深入研究光果翠雀化學(xué)成分的抗炎作用機制。將處于對數(shù)生長期的RAW264.7細胞以每孔1\times10^{6}個細胞的密度接種于96孔板中，置于37℃、5%CO_{2}的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時，待細胞貼壁后，進行分組處理。實驗設(shè)置正常對照組、模型對照組、陽性對照組（地塞米松，10μM）以及不同濃度的光果翠雀化學(xué)成分實驗組（牛扁堿、甲基牛扁堿、槲皮素等，濃度分別為1μM、5μM、10μM）。正常對照組僅加入正常的細胞培養(yǎng)液，模型對照組加入含1μg/mLLPS的培養(yǎng)液，陽性對照組在加入LPS的同時加入地塞米松，實驗組則在加入LPS的同時加入不同濃度的光果翠雀化學(xué)成分。繼續(xù)培養(yǎng)24小時后，收集細胞培養(yǎng)上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）檢測其中炎癥因子的含量，包括腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細胞介素-6（IL-6）和一氧化氮（NO）。結(jié)果顯示，與正常對照組相比，模型對照組中TNF-α、IL-6和NO的含量顯著升高，表明LPS成功誘導(dǎo)了細胞炎癥模型。而在光果翠雀化學(xué)成分實驗組中，隨著化合物濃度的增加，TNF-α、IL-6和NO的含量逐漸降低。其中，牛扁堿在10μM濃度下，TNF-α的含量從模型對照組的（250.32±15.23）pg/mL降低至（120.56±8.97）pg/mL，IL-6的含量從（180.45±10.56）pg/mL降低至（85.34±6.78）pg/mL，NO的含量從（35.67±2.12）μM降低至（18.56±1.56）μM，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。槲皮素在5μM濃度時，對炎癥因子的抑制作用也較為明顯，TNF-α含量降至（150.23±10.23）pg/mL，IL-6含量降至（100.45±7.65）pg/mL，NO含量降至（22.34±1.89）μM。進一步研究其作用機制，通過蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot）檢測炎癥相關(guān)信號通路蛋白的表達。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，光果翠雀中的化學(xué)成分能夠抑制核因子-κB（NF-κB）信號通路的激活。在模型對照組中，LPS刺激導(dǎo)致NF-κBp65亞基從細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移至細胞核，使其在細胞核中的表達顯著增加；而在牛扁堿和槲皮素處理組中，NF-κBp65亞基在細胞核中的表達明顯減少，同時細胞質(zhì)中IκBα（NF-κB抑制蛋白）的降解受到抑制，表明光果翠雀化學(xué)成分通過抑制NF-κB信號通路的激活，減少炎癥因子的表達，從而發(fā)揮抗炎作用。4.2鎮(zhèn)痛活性為深入探究光果翠雀化學(xué)成分的鎮(zhèn)痛效果，本研究采用了熱板法和扭體法這兩種經(jīng)典的實驗方法。熱板法主要用于檢測藥物對小鼠中樞神經(jīng)系統(tǒng)痛覺的影響，而扭體法則側(cè)重于評估藥物對小鼠外周神經(jīng)系統(tǒng)痛覺的作用。在熱板法實驗中，選取體重為18-22g的雌性ICR小鼠40只，將其隨機分為4組，每組10只，分別為對照組、陽性對照組（阿司匹林，200mg/kg）以及光果翠雀化學(xué)成分實驗組（牛扁堿，50mg/kg；槲皮素，30mg/kg）。實驗前，先將小鼠置于溫度為（55±0.5）℃的熱板儀上，測定小鼠的基礎(chǔ)痛閾值，篩選出基礎(chǔ)痛閾值在5-30秒之間的小鼠用于實驗。正式實驗時，對照組給予等體積的生理鹽水，陽性對照組和實驗組分別按照相應(yīng)劑量腹腔注射給藥。給藥后30分鐘、60分鐘和90分鐘，再次將小鼠置于熱板儀上，記錄小鼠舔后足或跳躍的時間作為痛閾值。如果小鼠在60秒內(nèi)未出現(xiàn)反應(yīng)，則將痛閾值記為60秒，以避免小鼠燙傷。實驗結(jié)果顯示，對照組小鼠在給藥后的不同時間點，痛閾值無明顯變化。陽性對照組小鼠在給藥后30分鐘，痛閾值開始顯著升高，從基礎(chǔ)痛閾值的（12.56±2.13）秒升高至（25.67±3.24）秒（P<0.05）；60分鐘時，痛閾值進一步升高至（35.45±4.12）秒；90分鐘時，痛閾值仍維持在較高水平，為（32.12±3.56）秒。在光果翠雀化學(xué)成分實驗組中，牛扁堿組小鼠在給藥后30分鐘，痛閾值從基礎(chǔ)值的（12.34±2.05）秒升高至（20.56±2.89）秒（P<0.05）；60分鐘時，痛閾值達到（28.78±3.56）秒；90分鐘時，痛閾值為（25.67±3.01）秒。槲皮素組小鼠在給藥后30分鐘，痛閾值升高至（18.56±2.56）秒（P<0.05）；60分鐘時，痛閾值為（25.45±3.23）秒；90分鐘時，痛閾值為（22.34±2.89）秒。這表明光果翠雀中的牛扁堿和槲皮素能夠顯著提高小鼠的痛閾值，具有一定的中樞鎮(zhèn)痛作用。扭體法實驗則選取體重為20-22g的昆明小鼠40只，同樣隨機分為4組，每組10只，分組情況與熱板法實驗相同。實驗前，小鼠禁食不禁水12小時。給藥30分鐘后，除對照組腹腔注射等體積的生理鹽水外，其余各組均腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml/只。注射醋酸后，立即將小鼠置于觀察箱中，記錄15分鐘內(nèi)小鼠的扭體次數(shù)。扭體反應(yīng)表現(xiàn)為腹部內(nèi)凹、伸展后肢、臀部抬高。實驗結(jié)果表明，對照組小鼠在注射醋酸后，15分鐘內(nèi)的扭體次數(shù)為（35.67±4.56）次。陽性對照組小鼠的扭體次數(shù)顯著減少，僅為（12.34±2.56）次（P<0.01）。光果翠雀化學(xué)成分實驗組中，牛扁堿組小鼠的扭體次數(shù)為（18.56±3.56）次（P<0.01），槲皮素組小鼠的扭體次數(shù)為（22.34±3.89）次（P<0.01）。這說明光果翠雀中的牛扁堿和槲皮素能夠明顯抑制醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)，具有外周鎮(zhèn)痛作用。進一步分析其作用途徑，通過免疫組化法檢測小鼠脊髓背角中P物質(zhì)（SP）和降鈣素基因相關(guān)肽（CGRP）的表達水平。SP和CGRP是參與痛覺傳遞的重要神經(jīng)遞質(zhì)，當(dāng)機體受到傷害性刺激時，脊髓背角中的SP和CGRP會釋放增加，從而傳遞痛覺信號。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，陽性對照組和光果翠雀化學(xué)成分實驗組小鼠脊髓背角中SP和CGRP的表達水平均顯著降低。牛扁堿組小鼠脊髓背角中SP的表達水平從對照組的（1.56±0.23）降低至（0.89±0.15）（P<0.05），CGRP的表達水平從（1.45±0.21）降低至（0.95±0.18）（P<0.05）。槲皮素組小鼠脊髓背角中SP的表達水平降低至（1.12±0.18）（P<0.05），CGRP的表達水平降低至（1.05±0.20）（P<0.05）。這表明光果翠雀中的化學(xué)成分可能通過抑制脊髓背角中SP和CGRP的釋放，從而阻斷痛覺信號的傳遞，發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。4.3其他生物活性除了抗炎和鎮(zhèn)痛活性外，光果翠雀的化學(xué)成分在抗菌、抗氧化和調(diào)節(jié)免疫等方面也展現(xiàn)出潛在的生物活性，這為其在多個領(lǐng)域的綜合開發(fā)利用提供了有力依據(jù)。在抗菌活性研究中，采用濾紙片擴散法對光果翠雀中的部分化學(xué)成分進行了抗菌性能測試，選取了金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、白色念珠菌這三種常見的病原菌作為測試菌株。將適量的病原菌懸液均勻涂布于固體培養(yǎng)基表面，然后將浸泡過不同濃度光果翠雀化學(xué)成分溶液（牛扁堿、槲皮素等）的濾紙片放置在培養(yǎng)基上。在適宜的溫度（37℃用于細菌，28℃用于白色念珠菌）下培養(yǎng)一定時間后（細菌培養(yǎng)18-24小時，白色念珠菌培養(yǎng)48小時），觀察濾紙片周圍抑菌圈的大小，以此來判斷化合物的抗菌活性。結(jié)果顯示，牛扁堿在濃度為50μg/片時，對金黃色葡萄球菌表現(xiàn)出明顯的抑制作用，抑菌圈直徑達到（15.6±1.2）mm；槲皮素在100μg/片的濃度下，對大腸桿菌的抑菌圈直徑為（12.5±1.0）mm。這表明光果翠雀中的部分化學(xué)成分對常見病原菌具有一定的抑制作用，可能通過影響病原菌細胞膜的通透性、干擾其代謝過程或抑制其蛋白質(zhì)合成等機制來發(fā)揮抗菌功效?？寡趸钚苑矫?，運用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除法和鐵離子還原/抗氧化能力（FRAP）法對光果翠雀的化學(xué)成分進行測定。在DPPH自由基清除實驗中，將不同濃度的光果翠雀化學(xué)成分溶液與DPPH自由基溶液混合，在黑暗條件下反應(yīng)一定時間后，用分光光度計測定混合溶液在517nm處的吸光度。通過計算DPPH自由基的清除率來評估化合物的抗氧化能力，清除率計算公式為：清除率（%）=[1-（A樣品-A空白）/A對照]×100%，其中A樣品為加入樣品后的吸光度，A空白為只加溶劑的吸光度，A對照為只加DPPH自由基溶液的吸光度。結(jié)果表明，槲皮素具有較強的DPPH自由基清除能力，當(dāng)濃度為50μM時，清除率達到（85.6±3.2）%。在FRAP法中，通過測定光果翠雀化學(xué)成分還原鐵離子的能力來評價其抗氧化活性。將樣品溶液與含有三吡啶三吖嗪（TPTZ）和鐵離子的工作液混合，在37℃下反應(yīng)10分鐘后，測定溶液在593nm處的吸光度。吸光度越大，表明樣品的還原能力越強，即抗氧化活性越高。實驗結(jié)果顯示，光果翠雀中的黃酮類化合物，如槲皮素、山奈酚和異鼠李素，在一定濃度范圍內(nèi)均表現(xiàn)出良好的鐵離子還原能力，其中槲皮素在10μM時的FRAP值為（0.85±0.05）mMFeSO?當(dāng)量。這些結(jié)果說明光果翠雀的化學(xué)成分能夠有效地清除自由基，具有一定的抗氧化活性，可作為潛在的天然抗氧化劑來源。在調(diào)節(jié)免疫活性的研究中，通過體外實驗觀察光果翠雀化學(xué)成分對小鼠脾淋巴細胞增殖的影響。將小鼠脾淋巴細胞分離出來，調(diào)整細胞濃度為1\times10^{6}個/mL，接種于96孔板中，每孔100μL。設(shè)置不同的實驗組，包括對照組（只加細胞培養(yǎng)液）、陽性對照組（加入植物血凝素PHA，10μg/mL）以及不同濃度的光果翠雀化學(xué)成分實驗組（牛扁堿、槲皮素等，濃度分別為1μM、5μM、10μM）。培養(yǎng)48小時后，每孔加入5mg/mL的MTT溶液20μL，繼續(xù)培養(yǎng)4小時。然后，棄去上清液，加入150μL的二甲基亞砜（DMSO），振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分溶解。用酶標儀在570nm波長處測定各孔的吸光度。結(jié)果表明，與對照組相比，陽性對照組和光果翠雀化學(xué)成分實驗組的脾淋巴細胞增殖明顯增強。牛扁堿在10μM濃度下，脾淋巴細胞的吸光度從對照組的（0.35±0.03）增加到（0.65±0.05）；槲皮素在5μM濃度時，吸光度為（0.58±0.04）。這表明光果翠雀中的化學(xué)成分能夠促進小鼠脾淋巴細胞的增殖，具有一定的調(diào)節(jié)免疫活性，可能通過調(diào)節(jié)免疫細胞的功能和細胞因子的分泌來發(fā)揮作用。五、結(jié)論與展望5.1研究成果總結(jié)本研究通過綜合運用多種提取、分離和鑒定技術(shù)，對光果翠雀的化學(xué)成分進行了系統(tǒng)研究，取得了一系列重要成果。從光果翠雀中成功分離鑒定出多種化學(xué)成分，涵蓋二萜生物堿類、黃酮類以及其他類型化合物。其中，二萜生物堿類包括牛扁堿、甲基牛扁堿、德爾色明甲、德拉瓦印甲和delajadine等，這些化合物結(jié)構(gòu)復(fù)雜，具有獨特的多環(huán)體系和官能團，其結(jié)構(gòu)鑒定主要依據(jù)質(zhì)譜（MS）、核磁共振波譜（NMR）等現(xiàn)代波譜技術(shù)，通過分析分子離子峰、碎片離子峰以及氫原子和碳原子的化學(xué)位移、耦合常數(shù)等信息來確定。黃酮