NF-κB與JNK1通路：炎癥誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌發(fā)展的分子密碼一、引言1.1研究背景肝細(xì)胞癌（HepatocellularCarcinoma，HCC）作為最常見(jiàn)的原發(fā)性肝癌類型，約占原發(fā)性肝癌的85%-90%，是全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，其發(fā)病率在全球惡性腫瘤中排名第六位，每年新發(fā)病例近百萬(wàn)，且呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)，死亡率更是高居全球第三，僅次于肺癌和結(jié)直腸癌。在中國(guó)，肝癌長(zhǎng)期位居惡性腫瘤發(fā)病率和死亡率前列，給患者、家庭和社會(huì)帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素、多步驟的復(fù)雜過(guò)程，其病因主要包括慢性乙型肝炎病毒（HBV）、慢性丙型肝炎病毒（HCV）感染、酒精性肝病、代謝綜合征如非酒精性脂肪性肝炎（NASH）、慢性黃曲霉素中毒等。近年來(lái)，大量研究表明，炎癥在肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著關(guān)鍵作用，約90%的原發(fā)性肝細(xì)胞癌由慢性肝炎轉(zhuǎn)化而來(lái)。長(zhǎng)期或過(guò)度的炎癥狀態(tài)可導(dǎo)致細(xì)胞微環(huán)境改變，促使炎性細(xì)胞因子持續(xù)表達(dá)，募集炎癥和免疫細(xì)胞。活化的炎癥細(xì)胞能釋放大量的活性氧（ROS）和一氧化氮反應(yīng)活性物（RNS）等，使肝細(xì)胞長(zhǎng)期暴露于這種氧化應(yīng)激狀態(tài)，易導(dǎo)致DNA損傷等基因組的異常改變、表觀遺傳學(xué)改變、誘導(dǎo)翻譯后修飾信號(hào)的異常激活等，最終促使正常肝細(xì)胞向癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化。同時(shí)，慢性炎癥還可通過(guò)釋放相關(guān)的細(xì)胞因子募集大量的骨髓祖細(xì)胞進(jìn)入腫瘤組織內(nèi)，在腫瘤微環(huán)境的作用下演化為不同類型的免疫抑制細(xì)胞，形成一種免疫抑制的環(huán)境，進(jìn)而有助于腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)控，隨著自身血管的生長(zhǎng)，這些細(xì)胞逐漸發(fā)育并成熟，在趨化因子的作用下突破基底膜向遠(yuǎn)處擴(kuò)散轉(zhuǎn)移。在炎癥誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌發(fā)展的分子機(jī)制研究中，核因子-κB（NF-κB）和c-Jun氨基末端激酶1（JNK1）通路備受關(guān)注。NF-κB是一類轉(zhuǎn)錄因子，在細(xì)胞的免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)以及細(xì)胞存活中扮演著至關(guān)重要的角色。當(dāng)細(xì)胞受到外界刺激（如細(xì)菌感染或炎癥因子）時(shí)，NF-κB信號(hào)通路被激活，隨之引發(fā)一系列細(xì)胞反應(yīng)。在肝癌中，NF-κB常常處于持續(xù)激活狀態(tài)，促進(jìn)癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。JNK1屬于絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族成員，參與細(xì)胞對(duì)多種刺激的應(yīng)激反應(yīng)，在細(xì)胞增殖、分化、凋亡以及炎癥等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，JNK1通路的異常激活與肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。然而，目前對(duì)于NF-κB和JNK1通路在炎癥誘導(dǎo)的人類肝細(xì)胞癌發(fā)展中的具體作用機(jī)制及其相互關(guān)系，仍存在許多未知之處。深入研究這兩條信號(hào)通路在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用，不僅有助于揭示炎癥與肝癌之間的內(nèi)在聯(lián)系，還可能為肝細(xì)胞癌的預(yù)防、診斷和治療提供新的靶點(diǎn)和策略，具有重要的理論意義和臨床應(yīng)用價(jià)值。1.2研究目的和意義本研究旨在深入探究NF-κB和JNK1通路在炎癥誘導(dǎo)的人類肝細(xì)胞癌發(fā)展過(guò)程中的具體作用機(jī)制，明確兩條通路各自對(duì)炎性細(xì)胞死亡、癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲等生物學(xué)特性的調(diào)控作用，以及它們之間的相互作用關(guān)系，同時(shí)嘗試尋找潛在的治療靶點(diǎn)，為肝細(xì)胞癌的防治提供新的理論依據(jù)和治療策略。肝細(xì)胞癌作為全球范圍內(nèi)高發(fā)且致死率極高的惡性腫瘤，給人類健康帶來(lái)了沉重負(fù)擔(dān)。目前臨床上對(duì)于肝細(xì)胞癌的治療手段，如手術(shù)切除、肝移植、化療、放療和靶向治療等，雖然在一定程度上能夠改善患者的生存狀況，但總體治療效果仍不盡人意，患者的5年生存率較低。主要原因在于肝細(xì)胞癌起病隱匿，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，失去了手術(shù)根治的機(jī)會(huì)，且肝癌細(xì)胞對(duì)放化療的敏感性較低，容易產(chǎn)生耐藥性。因此，深入了解肝細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)制，尋找新的治療靶點(diǎn)和策略，對(duì)于提高肝細(xì)胞癌的治療效果和患者生存率具有迫切的現(xiàn)實(shí)需求。在炎癥誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的復(fù)雜分子機(jī)制中，NF-κB和JNK1通路被認(rèn)為是關(guān)鍵的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，但目前對(duì)于它們?cè)谶@一過(guò)程中的具體作用及相互關(guān)系尚未完全明確。深入研究這兩條通路，有助于進(jìn)一步揭示炎癥與肝癌之間的內(nèi)在聯(lián)系，為理解肝細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)制提供更深入的理論基礎(chǔ)。例如，明確NF-κB通路如何在炎癥微環(huán)境中持續(xù)激活，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，以及JNK1通路在其中所扮演的角色，是協(xié)同促進(jìn)還是存在負(fù)向調(diào)控等。這不僅能夠豐富我們對(duì)腫瘤生物學(xué)的認(rèn)識(shí)，還可能為開(kāi)發(fā)針對(duì)這兩條通路的特異性抑制劑或調(diào)節(jié)劑提供理論支持，從而為肝細(xì)胞癌的精準(zhǔn)治療開(kāi)辟新的道路。一旦我們能夠成功阻斷或調(diào)節(jié)這兩條通路在肝癌發(fā)生發(fā)展中的異常激活，就有可能有效抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，提高患者對(duì)現(xiàn)有治療手段的敏感性，為肝細(xì)胞癌患者帶來(lái)新的希望。二、肝細(xì)胞癌及炎癥相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1肝細(xì)胞癌概述肝細(xì)胞癌（HepatocellularCarcinoma，HCC）是一種起源于肝細(xì)胞的原發(fā)性惡性腫瘤，也是最常見(jiàn)的肝癌類型，約占原發(fā)性肝癌的85%-90%。正常情況下，肝細(xì)胞執(zhí)行著肝臟的各種生理功能，如物質(zhì)代謝、解毒、合成蛋白質(zhì)等。然而，當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化時(shí)，就會(huì)形成肝細(xì)胞癌。這種惡性轉(zhuǎn)化往往是由于多種因素長(zhǎng)期作用，導(dǎo)致肝細(xì)胞的基因發(fā)生突變，細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化和凋亡等調(diào)控機(jī)制失衡，使得細(xì)胞異常增殖并逐漸形成腫瘤。在流行病學(xué)方面，肝細(xì)胞癌具有顯著的地域差異。在全球范圍內(nèi)，其發(fā)病率呈現(xiàn)出不均衡分布的特點(diǎn)。亞洲和非洲地區(qū)是肝細(xì)胞癌的高發(fā)區(qū)，其中中國(guó)、日本、韓國(guó)等東亞國(guó)家以及撒哈拉以南非洲地區(qū)的發(fā)病率尤為突出。中國(guó)作為肝癌大國(guó)，每年新發(fā)病例和死亡病例均占全球的一半以上。而在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家，肝細(xì)胞癌的發(fā)病率相對(duì)較低。這種地域差異主要與不同地區(qū)的肝炎病毒感染率、生活方式、飲食習(xí)慣以及環(huán)境因素等密切相關(guān)。例如，亞洲地區(qū)乙肝病毒（HBV）和丙肝病毒（HCV）的高感染率，是導(dǎo)致該地區(qū)肝細(xì)胞癌高發(fā)的重要原因之一。同時(shí)，性別和年齡也是影響肝細(xì)胞癌發(fā)病的重要因素。男性患肝細(xì)胞癌的風(fēng)險(xiǎn)明顯高于女性，男女發(fā)病比例約為2-4:1。從年齡分布來(lái)看，肝細(xì)胞癌的發(fā)病率隨著年齡的增長(zhǎng)而逐漸升高，多見(jiàn)于40歲以上的中老年人，但近年來(lái)也有年輕化的趨勢(shì)。肝細(xì)胞癌的發(fā)病是一個(gè)多因素、多步驟的復(fù)雜過(guò)程，多種因素共同作用導(dǎo)致了肝細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。慢性病毒性肝炎感染是肝細(xì)胞癌最重要的危險(xiǎn)因素之一，全球約70%-90%的肝細(xì)胞癌病例與HBV或HCV感染有關(guān)。HBV和HCV感染后，病毒持續(xù)在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，引發(fā)慢性炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致肝細(xì)胞反復(fù)損傷和修復(fù)。在這個(gè)過(guò)程中，肝細(xì)胞的基因組容易發(fā)生突變，逐漸積累致癌突變，最終促使肝細(xì)胞癌的發(fā)生。酒精性肝病也是肝細(xì)胞癌的重要病因之一。長(zhǎng)期大量飲酒會(huì)導(dǎo)致肝臟脂肪變性、炎癥和纖維化，進(jìn)而發(fā)展為肝硬化，而肝硬化患者發(fā)生肝細(xì)胞癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加。據(jù)統(tǒng)計(jì)，約30%的肝細(xì)胞癌患者有長(zhǎng)期酗酒史。此外，非酒精性脂肪性肝炎（NASH）作為代謝綜合征在肝臟的表現(xiàn)，近年來(lái)其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，也成為肝細(xì)胞癌的新興危險(xiǎn)因素。NASH患者由于肝臟脂肪堆積、炎癥和氧化應(yīng)激等因素，肝細(xì)胞發(fā)生癌變的風(fēng)險(xiǎn)增加。黃曲霉毒素污染的食物也是肝細(xì)胞癌的危險(xiǎn)因素之一，黃曲霉毒素B1是一種強(qiáng)致癌物質(zhì)，主要污染玉米、花生等糧食作物。長(zhǎng)期攝入含有黃曲霉毒素的食物，會(huì)導(dǎo)致肝細(xì)胞DNA損傷和基因突變，從而增加肝細(xì)胞癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。遺傳因素在肝細(xì)胞癌的發(fā)病中也起到一定作用，家族中有肝癌病史的人，其發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)較高，可能與某些遺傳易感基因有關(guān)。肝細(xì)胞癌對(duì)人體健康危害極大，嚴(yán)重威脅患者的生命。在疾病早期，肝細(xì)胞癌通常沒(méi)有明顯癥狀，患者往往難以察覺(jué)。隨著腫瘤的生長(zhǎng)和發(fā)展，患者會(huì)逐漸出現(xiàn)一系列癥狀，如肝區(qū)疼痛，多為持續(xù)性鈍痛或脹痛，是由于腫瘤迅速生長(zhǎng)，使肝包膜張力增加所致；乏力、消瘦，由于腫瘤消耗機(jī)體能量，以及患者食欲減退、消化吸收功能障礙等原因引起；食欲不振、惡心、嘔吐等消化系統(tǒng)癥狀，這是因?yàn)槟[瘤影響了肝臟的正常代謝和消化功能；黃疸，表現(xiàn)為皮膚和鞏膜黃染，是由于腫瘤壓迫膽管或肝細(xì)胞受損，導(dǎo)致膽紅素代謝異常引起。如果病情進(jìn)一步惡化，腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移，會(huì)侵犯其他器官和組織，引發(fā)相應(yīng)的并發(fā)癥，如肺轉(zhuǎn)移可導(dǎo)致咳嗽、咯血、呼吸困難等；骨轉(zhuǎn)移可引起骨痛、病理性骨折等。肝細(xì)胞癌的預(yù)后通常較差，患者的5年生存率較低。這主要是因?yàn)楦渭?xì)胞癌起病隱匿，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，失去了手術(shù)根治的機(jī)會(huì)。而且，肝癌細(xì)胞對(duì)放化療的敏感性較低，容易產(chǎn)生耐藥性，使得治療效果不理想。因此，深入了解肝細(xì)胞癌的發(fā)病機(jī)制，尋找有效的治療方法，對(duì)于提高患者的生存率和生活質(zhì)量具有重要意義。2.2炎癥與肝細(xì)胞癌的關(guān)聯(lián)炎癥與肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，長(zhǎng)期的慢性炎癥被認(rèn)為是肝細(xì)胞癌的重要誘因之一。炎癥在肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演著關(guān)鍵角色，從正常肝細(xì)胞向癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，到腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移，炎癥都參與其中。其具體作用機(jī)制涉及多個(gè)方面，主要是通過(guò)引發(fā)氧化應(yīng)激、誘導(dǎo)細(xì)胞因子釋放、促進(jìn)細(xì)胞增殖和抑制細(xì)胞凋亡等，推動(dòng)肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展。炎癥過(guò)程中，活化的炎癥細(xì)胞，如巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等，會(huì)釋放大量的活性氧（ROS）和一氧化氮反應(yīng)活性物（RNS）。這些物質(zhì)能夠使肝細(xì)胞長(zhǎng)期處于氧化應(yīng)激狀態(tài)，對(duì)肝細(xì)胞的DNA造成損傷。當(dāng)DNA損傷無(wú)法被有效修復(fù)時(shí)，就會(huì)導(dǎo)致基因突變的積累，這些基因突變可能涉及細(xì)胞周期調(diào)控、凋亡信號(hào)傳導(dǎo)等關(guān)鍵通路相關(guān)基因，如p53、Rb等基因，進(jìn)而促使肝細(xì)胞逐漸向癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化。例如，研究表明，在慢性肝炎患者中，由于炎癥持續(xù)存在，肝細(xì)胞內(nèi)的ROS水平顯著升高，導(dǎo)致p53基因頻繁發(fā)生突變，失去對(duì)細(xì)胞增殖的正常調(diào)控功能，使得細(xì)胞異常增殖，增加了肝細(xì)胞癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。炎癥還會(huì)誘導(dǎo)多種細(xì)胞因子的釋放，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等。這些細(xì)胞因子可以通過(guò)自分泌和旁分泌的方式，作用于肝細(xì)胞和腫瘤微環(huán)境中的其他細(xì)胞，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和發(fā)展。TNF-α能夠激活NF-κB信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)，同時(shí)抑制細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的表達(dá)，從而使癌細(xì)胞獲得生存優(yōu)勢(shì)，不斷增殖。IL-6則可以通過(guò)激活JAK-STAT3信號(hào)通路，促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖和存活，還能誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管生成，為腫瘤細(xì)胞提供充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣，支持腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。武漢大學(xué)人民醫(yī)院的研究團(tuán)隊(duì)在《Gastroenterology》上發(fā)表的研究論文表明，他們通過(guò)構(gòu)建小鼠肝癌模型，發(fā)現(xiàn)持續(xù)的炎癥刺激會(huì)導(dǎo)致肝臟組織中TNF-α和IL-6等細(xì)胞因子水平顯著升高，激活了一系列細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，最終引發(fā)了炎癌轉(zhuǎn)化，小鼠肝臟中出現(xiàn)了大量癌細(xì)胞。炎癥微環(huán)境還會(huì)募集骨髓祖細(xì)胞進(jìn)入腫瘤組織，這些細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境的作用下，會(huì)演化為不同類型的免疫抑制細(xì)胞，如髓源性抑制細(xì)胞（MDSCs）、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）等。這些免疫抑制細(xì)胞能夠抑制機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)，幫助癌細(xì)胞逃避免疫監(jiān)控，從而使癌細(xì)胞能夠在體內(nèi)不斷生長(zhǎng)和擴(kuò)散。MDSCs可以通過(guò)分泌精氨酸酶、活性氧等物質(zhì)，抑制T細(xì)胞的活化和增殖，降低機(jī)體的免疫功能；Tregs則可以通過(guò)分泌抑制性細(xì)胞因子，如IL-10、TGF-β等，抑制免疫細(xì)胞對(duì)癌細(xì)胞的殺傷作用。2.3NF-κB和JNK1通路簡(jiǎn)介2.3.1NF-κB通路核因子-κB（NF-κB）是一種廣泛存在于真核細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄因子，在免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞增殖與凋亡等多種生理病理過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。NF-κB家族成員包括NF-κB1（p50）、NF-κB2（p52）、RelA（p65）、RelB和c-Rel。這些成員具有共同的Rel同源結(jié)構(gòu)域（RHD），可通過(guò)RHD形成同源或異源二聚體，其中p65/p50異二聚體最為常見(jiàn)。在靜息狀態(tài)下，NF-κB二聚體與抑制蛋白IκB結(jié)合，以無(wú)活性的形式存在于細(xì)胞質(zhì)中。當(dāng)細(xì)胞受到各種刺激，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、脂多糖（LPS）等時(shí)，會(huì)激活I(lǐng)κB激酶（IKK）復(fù)合體，IKK復(fù)合體由IKKα、IKKβ和IKKγ（也稱為NEMO）組成。激活后的IKKβ會(huì)使IκB蛋白的特定絲氨酸殘基磷酸化，磷酸化的IκB蛋白隨后被泛素化修飾，并被蛋白酶體降解。IκB蛋白降解后，NF-κB二聚體得以釋放，暴露其核定位信號(hào)（NLS）。在NLS的引導(dǎo)下，NF-κB二聚體從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)，與靶基因啟動(dòng)子區(qū)域的κB序列特異性結(jié)合，招募RNA聚合酶Ⅱ等轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子，啟動(dòng)靶基因的轉(zhuǎn)錄過(guò)程。這些靶基因編碼的產(chǎn)物包括細(xì)胞因子（如TNF-α、IL-6等）、粘附分子（如ICAM-1、VCAM-1等）、抗凋亡蛋白（如Bcl-2、Bcl-xL等）等，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的免疫、炎癥、增殖和存活等生物學(xué)功能。2.3.2JNK1通路c-Jun氨基末端激酶1（JNK1）是絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族的重要成員之一。JNK1通路主要由上游激酶、JNK1以及下游底物組成。其上游激酶包括混合譜系激酶（MLKs）、凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1（ASK1）等。當(dāng)細(xì)胞受到應(yīng)激刺激（如紫外線照射、熱休克、氧化應(yīng)激等）、細(xì)胞因子（如TNF-α、IL-1等）或生長(zhǎng)因子刺激時(shí)，會(huì)激活上游激酶。以ASK1為例，在氧化應(yīng)激條件下，ASK1會(huì)被激活并自身磷酸化，進(jìn)而激活下游的MKK4和MKK7。MKK4和MKK7是JNK1的直接上游激酶，它們可以使JNK1的蘇氨酸（Thr）和酪氨酸（Tyr）殘基發(fā)生雙磷酸化，從而激活JNK1。激活后的JNK1會(huì)從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)，磷酸化其下游底物，如c-Jun、ATF2等轉(zhuǎn)錄因子。磷酸化后的c-Jun和ATF2等形成轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，與靶基因啟動(dòng)子區(qū)域的特定序列結(jié)合，啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄。這些靶基因參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡、炎癥等多種生物學(xué)過(guò)程。例如，JNK1通過(guò)磷酸化c-Jun，增強(qiáng)c-Jun與AP-1轉(zhuǎn)錄因子家族其他成員的結(jié)合能力，調(diào)節(jié)與細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)基因的表達(dá)。在炎癥反應(yīng)中，JNK1通路的激活可以促進(jìn)炎性細(xì)胞因子（如IL-6、IL-8等）的表達(dá)，參與炎癥的發(fā)生和發(fā)展。三、NF-κB通路在炎癥誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌發(fā)展中的作用3.1NF-κB通路的激活機(jī)制在正常生理狀態(tài)下，NF-κB通路處于相對(duì)穩(wěn)定的未激活狀態(tài)。此時(shí)，NF-κB家族成員，如常見(jiàn)的p65/p50異二聚體，與抑制蛋白IκB緊密結(jié)合，以無(wú)活性的復(fù)合物形式存在于細(xì)胞質(zhì)中。IκB蛋白通過(guò)掩蓋NF-κB的核定位信號(hào)（NLS），阻止其進(jìn)入細(xì)胞核，從而抑制NF-κB對(duì)下游基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。當(dāng)肝細(xì)胞受到炎癥刺激時(shí)，這一穩(wěn)定狀態(tài)被打破，NF-κB通路開(kāi)始激活。炎癥刺激源多種多樣，包括細(xì)菌感染產(chǎn)生的脂多糖（LPS）、病毒感染相關(guān)的病原體相關(guān)分子模式（PAMPs），以及炎癥細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）等。以TNF-α刺激為例，當(dāng)肝細(xì)胞表面的TNF受體1（TNFR1）與TNF-α結(jié)合后，會(huì)引發(fā)受體三聚化，并招募一系列銜接蛋白和激酶，形成一個(gè)龐大的信號(hào)復(fù)合物。這個(gè)復(fù)合物中包含TNF受體相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白（TRADD）、受體相互作用蛋白1（RIP1）等。TRADD通過(guò)其死亡結(jié)構(gòu)域與RIP1相互作用，進(jìn)而招募TNF受體相關(guān)因子2（TRAF2）。TRAF2會(huì)激活下游的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β激活激酶1（TAK1），TAK1進(jìn)一步激活I(lǐng)κB激酶（IKK）復(fù)合體。IKK復(fù)合體是NF-κB通路激活的關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)，由IKKα、IKKβ和IKKγ（也稱為NEMO）組成。在這個(gè)激活過(guò)程中，TAK1通過(guò)磷酸化作用使IKK復(fù)合體中的IKKβ亞基活化?；罨蟮腎KKβ能夠特異性地識(shí)別并磷酸化IκB蛋白上的特定絲氨酸殘基。具體來(lái)說(shuō)，IκBα蛋白的Ser32和Ser36位點(diǎn)，以及IκBβ蛋白的Ser19和Ser23位點(diǎn)會(huì)被IKKβ磷酸化。磷酸化后的IκB蛋白構(gòu)象發(fā)生改變，暴露出其泛素化修飾位點(diǎn)。隨后，泛素連接酶E3會(huì)識(shí)別并結(jié)合磷酸化的IκB蛋白，將多個(gè)泛素分子連接到IκB蛋白上，形成多聚泛素鏈。帶有多聚泛素鏈的IκB蛋白會(huì)被26S蛋白酶體識(shí)別并降解。隨著IκB蛋白的降解，與它結(jié)合的NF-κB二聚體得以釋放，其核定位信號(hào)（NLS）暴露。在NLS的引導(dǎo)下，NF-κB二聚體從細(xì)胞質(zhì)迅速轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)。進(jìn)入細(xì)胞核后，NF-κB二聚體憑借其Rel同源結(jié)構(gòu)域（RHD）與靶基因啟動(dòng)子區(qū)域的κB序列特異性結(jié)合。同時(shí)，NF-κB還會(huì)招募RNA聚合酶Ⅱ、轉(zhuǎn)錄共激活因子等一系列轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子，形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物，啟動(dòng)靶基因的轉(zhuǎn)錄過(guò)程。這些靶基因編碼多種與炎癥、免疫、細(xì)胞增殖和存活等生物學(xué)過(guò)程密切相關(guān)的蛋白質(zhì)，如促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-6，粘附分子ICAM-1、VCAM-1，抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL等。它們的表達(dá)上調(diào)進(jìn)一步推動(dòng)了炎癥反應(yīng)的加劇、細(xì)胞增殖的促進(jìn)以及細(xì)胞凋亡的抑制，從而在炎癥誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。3.2NF-κB通路對(duì)肝細(xì)胞增殖與凋亡的影響3.2.1促進(jìn)肝細(xì)胞增殖NF-κB通路在促進(jìn)肝細(xì)胞增殖方面發(fā)揮著重要作用，其分子機(jī)制涉及多個(gè)層面。當(dāng)NF-κB通路被激活后，進(jìn)入細(xì)胞核的NF-κB二聚體能夠與細(xì)胞周期相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域的κB序列結(jié)合，從而調(diào)控這些基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，NF-κB可以上調(diào)細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表達(dá)。CyclinD1是細(xì)胞周期G1期向S期轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白，它與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）或CDK6結(jié)合形成復(fù)合物，進(jìn)而磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（pRB）。磷酸化的pRB會(huì)釋放出轉(zhuǎn)錄因子E2F，E2F能夠啟動(dòng)一系列與DNA復(fù)制和細(xì)胞周期進(jìn)展相關(guān)基因的表達(dá)，促使細(xì)胞進(jìn)入S期，完成DNA復(fù)制，最終實(shí)現(xiàn)細(xì)胞增殖。北京大學(xué)人民醫(yī)院的科研團(tuán)隊(duì)在一項(xiàng)針對(duì)肝細(xì)胞癌的研究中，通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，利用TNF-α刺激肝癌細(xì)胞系，能夠激活NF-κB通路，使細(xì)胞內(nèi)CyclinD1的表達(dá)水平顯著升高，同時(shí)細(xì)胞增殖明顯加快。而當(dāng)使用NF-κB抑制劑處理細(xì)胞后，NF-κB通路被阻斷，CyclinD1的表達(dá)受到抑制，細(xì)胞增殖速度也隨之減緩。NF-κB通路還可以通過(guò)調(diào)節(jié)生長(zhǎng)因子及其受體的表達(dá)來(lái)間接促進(jìn)肝細(xì)胞增殖。例如，NF-κB能夠促進(jìn)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）及其受體c-Met的表達(dá)。HGF與c-Met結(jié)合后，會(huì)激活下游的磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt和Ras/絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信號(hào)通路。PI3K/Akt通路可以通過(guò)抑制糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）的活性，穩(wěn)定細(xì)胞周期蛋白E（CyclinE）和c-Myc等蛋白，促進(jìn)細(xì)胞周期的進(jìn)展；Ras/MAPK通路則可以激活一系列轉(zhuǎn)錄因子，如Elk-1、c-Fos和c-Jun等，這些轉(zhuǎn)錄因子能夠調(diào)節(jié)與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)，從而促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖。在一項(xiàng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，構(gòu)建了NF-κB持續(xù)激活的轉(zhuǎn)基因小鼠模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些小鼠肝臟中HGF和c-Met的表達(dá)明顯增加，肝細(xì)胞增殖活躍，肝臟體積增大。而在敲低NF-κB表達(dá)的小鼠中，HGF和c-Met的表達(dá)降低，肝細(xì)胞增殖受到抑制。此外，NF-κB通路還能通過(guò)調(diào)節(jié)其他與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因和信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮作用。它可以上調(diào)抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xL的表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡，使細(xì)胞能夠持續(xù)存活并進(jìn)行增殖。NF-κB還可以激活基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)，MMPs能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，為細(xì)胞的遷移和增殖提供空間，間接促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖。在炎癥誘導(dǎo)的肝細(xì)胞癌發(fā)展過(guò)程中，持續(xù)激活的NF-κB通路通過(guò)上述多種機(jī)制協(xié)同作用，不斷促進(jìn)肝細(xì)胞的異常增殖，為腫瘤的發(fā)生發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。3.2.2抑制肝細(xì)胞凋亡NF-κB通路在抑制肝細(xì)胞凋亡方面起著關(guān)鍵作用，其主要通過(guò)調(diào)控一系列抗凋亡基因和蛋白的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)這一功能。當(dāng)NF-κB通路激活后，核內(nèi)的NF-κB與抗凋亡基因啟動(dòng)子區(qū)域的κB位點(diǎn)結(jié)合，啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄，促使抗凋亡蛋白的表達(dá)上調(diào)。Bcl-2家族蛋白是細(xì)胞凋亡調(diào)控的關(guān)鍵因子，其中Bcl-2和Bcl-xL具有抗凋亡作用。NF-κB能夠顯著促進(jìn)Bcl-2和Bcl-xL的表達(dá)。Bcl-2和Bcl-xL主要定位于線粒體膜等細(xì)胞器膜上，它們可以通過(guò)阻止線粒體釋放細(xì)胞色素c等凋亡相關(guān)因子，從而抑制細(xì)胞凋亡的內(nèi)源性途徑。細(xì)胞色素c釋放到細(xì)胞質(zhì)后，會(huì)與凋亡蛋白酶激活因子1（Apaf-1）結(jié)合，招募并激活半胱天冬酶9（Caspase-9），進(jìn)而激活下游的Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。而B(niǎo)cl-2和Bcl-xL的高表達(dá)能夠穩(wěn)定線粒體膜，阻止細(xì)胞色素c的釋放，使Caspase-9無(wú)法被激活，從而抑制細(xì)胞凋亡。研究人員在體外培養(yǎng)的肝細(xì)胞系中，通過(guò)激活NF-κB通路，發(fā)現(xiàn)Bcl-2和Bcl-xL的表達(dá)明顯升高，同時(shí)在給予細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑刺激后，細(xì)胞凋亡率顯著降低；而當(dāng)抑制NF-κB通路時(shí)，Bcl-2和Bcl-xL表達(dá)下降，細(xì)胞凋亡率明顯增加。NF-κB還可以調(diào)節(jié)凋亡抑制蛋白（IAPs）家族成員的表達(dá)，如X連鎖凋亡抑制蛋白（XIAP）、細(xì)胞凋亡抑制蛋白1（c-IAP1）和c-IAP2等。這些IAPs能夠直接抑制Caspase的活性，從而阻斷細(xì)胞凋亡信號(hào)傳導(dǎo)。XIAP可以通過(guò)其BIR結(jié)構(gòu)域與Caspase-3、Caspase-7和Caspase-9結(jié)合，抑制它們的酶活性，阻止細(xì)胞凋亡的發(fā)生。c-IAP1和c-IAP2也具有類似的作用機(jī)制，它們能夠與Caspase相互作用，抑制Caspase的活化，進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡。在炎癥微環(huán)境中，NF-κB通路的激活使得IAPs家族成員表達(dá)上調(diào)，有效抑制了肝細(xì)胞的凋亡，使得受到炎癥損傷的肝細(xì)胞能夠持續(xù)存活。然而，這種過(guò)度的凋亡抑制在肝細(xì)胞癌的發(fā)展過(guò)程中卻起到了負(fù)面作用，它使得癌細(xì)胞能夠逃避機(jī)體的正常凋亡機(jī)制，不斷增殖并積累，促進(jìn)了腫瘤的發(fā)展和惡化。NF-κB通路還可以通過(guò)調(diào)節(jié)其他信號(hào)通路來(lái)間接抑制肝細(xì)胞凋亡。它可以激活PI3K/Akt信號(hào)通路，Akt是PI3K的下游關(guān)鍵激酶。激活的Akt可以磷酸化多種凋亡相關(guān)蛋白，如Bad、FoxO1等。磷酸化的Bad會(huì)與14-3-3蛋白結(jié)合，從而失去促凋亡活性；磷酸化的FoxO1會(huì)從細(xì)胞核轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)，無(wú)法啟動(dòng)促凋亡基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而抑制細(xì)胞凋亡。在炎癥誘導(dǎo)的肝細(xì)胞癌發(fā)展中，NF-κB通路通過(guò)抑制肝細(xì)胞凋亡，使得癌細(xì)胞能夠在惡劣的微環(huán)境中存活并不斷增殖，增加了腫瘤治療的難度。3.3NF-κB通路對(duì)炎性微環(huán)境的調(diào)控NF-κB通路在調(diào)控炎性微環(huán)境方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其主要通過(guò)調(diào)節(jié)炎性細(xì)胞因子、趨化因子以及粘附分子等的表達(dá)，來(lái)塑造和維持炎性微環(huán)境，進(jìn)而影響肝細(xì)胞癌的發(fā)展。當(dāng)NF-κB通路被激活后，會(huì)啟動(dòng)一系列炎性細(xì)胞因子基因的轉(zhuǎn)錄。其中，腫瘤壞死因子-α（TNF-α）是一種重要的促炎細(xì)胞因子，它能夠激活NF-κB通路，同時(shí)也是NF-κB通路激活后的重要靶基因產(chǎn)物。TNF-α可以通過(guò)自分泌和旁分泌的方式作用于周圍細(xì)胞，引發(fā)一系列炎癥反應(yīng)。它能夠增強(qiáng)炎癥細(xì)胞的活性，促使巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等釋放更多的炎性介質(zhì)，如白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等。IL-6也是NF-κB通路調(diào)控的重要炎性細(xì)胞因子之一，它可以促進(jìn)肝細(xì)胞的增殖和存活，還能誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤血管生成，為腫瘤細(xì)胞提供充足的營(yíng)養(yǎng)和氧氣，支持腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。在炎癥誘導(dǎo)的肝細(xì)胞癌發(fā)展過(guò)程中，NF-κB通路持續(xù)激活，導(dǎo)致TNF-α和IL-6等炎性細(xì)胞因子大量表達(dá)，使得肝臟局部炎癥反應(yīng)不斷加劇，為癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)展創(chuàng)造了有利的炎性微環(huán)境。NF-κB通路還可以調(diào)節(jié)趨化因子的表達(dá)。趨化因子是一類能夠吸引免疫細(xì)胞和炎性細(xì)胞定向遷移的小分子蛋白，在炎性微環(huán)境的形成和維持中起著重要作用。NF-κB可以促進(jìn)趨化因子如CCL2、CCL5等的表達(dá)。CCL2能夠招募單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等炎性細(xì)胞到炎癥部位，這些炎性細(xì)胞在炎癥部位的聚集，進(jìn)一步釋放炎性介質(zhì)，加劇炎癥反應(yīng)。同時(shí)，這些炎性細(xì)胞還可以分泌一些生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子，如血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）等，這些因子可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，參與腫瘤微環(huán)境中細(xì)胞外基質(zhì)的重塑和血管生成，為腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移提供了條件。CCL5則主要吸引T淋巴細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）等免疫細(xì)胞，然而，在腫瘤微環(huán)境中，這些免疫細(xì)胞的功能往往受到抑制，無(wú)法有效發(fā)揮抗腫瘤作用。在肝細(xì)胞癌組織中，CCL2和CCL5等趨化因子的表達(dá)水平明顯升高，與腫瘤的大小、分期以及患者的預(yù)后密切相關(guān)。此外，NF-κB通路對(duì)粘附分子的調(diào)控也在炎性微環(huán)境中發(fā)揮重要作用。粘附分子能夠介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間的粘附作用，在炎癥細(xì)胞的募集、遷移以及腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。NF-κB可以上調(diào)細(xì)胞間粘附分子-1（ICAM-1）、血管細(xì)胞粘附分子-1（VCAM-1）等粘附分子的表達(dá)。ICAM-1和VCAM-1主要表達(dá)在血管內(nèi)皮細(xì)胞表面，它們可以與炎癥細(xì)胞表面的相應(yīng)配體結(jié)合，促進(jìn)炎癥細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附，進(jìn)而穿過(guò)血管壁進(jìn)入炎癥組織。在肝細(xì)胞癌中，ICAM-1和VCAM-1的高表達(dá)使得腫瘤細(xì)胞更容易與血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附，從而為腫瘤細(xì)胞的血行轉(zhuǎn)移提供了便利。研究發(fā)現(xiàn)，抑制NF-κB通路可以降低ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)，減少腫瘤細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞的粘附，抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。3.4相關(guān)臨床案例分析在臨床實(shí)踐中，眾多案例為NF-κB通路異常與肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展的緊密聯(lián)系提供了有力證據(jù)。以一位56歲男性患者為例，該患者有慢性乙型肝炎病史長(zhǎng)達(dá)20年，長(zhǎng)期的炎癥刺激導(dǎo)致肝臟組織反復(fù)受損和修復(fù)。在定期體檢中，通過(guò)血清學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)甲胎蛋白（AFP）水平顯著升高，達(dá)到了500ng/mL（正常參考值<20ng/mL）。進(jìn)一步進(jìn)行肝臟超聲和增強(qiáng)CT檢查，結(jié)果顯示肝臟右葉有一個(gè)直徑約3cm的占位性病變，邊界不清，增強(qiáng)掃描呈現(xiàn)典型的“快進(jìn)快出”表現(xiàn)，高度懷疑為肝細(xì)胞癌。隨后，通過(guò)肝穿刺活檢進(jìn)行病理診斷，確診為肝細(xì)胞癌。對(duì)該患者的癌組織進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，結(jié)果顯示NF-κB通路相關(guān)蛋白p65的表達(dá)明顯上調(diào)，且主要定位于細(xì)胞核內(nèi)，表明NF-κB通路處于激活狀態(tài)。同時(shí)，檢測(cè)到癌組織中NF-κB的下游靶基因，如細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）、抗凋亡蛋白Bcl-2和促炎細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-6（IL-6）等的表達(dá)也顯著升高。在后續(xù)的治療過(guò)程中，患者接受了手術(shù)切除治療，但由于腫瘤已經(jīng)侵犯到肝內(nèi)血管，術(shù)后復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)較高。盡管進(jìn)行了輔助化療，但在術(shù)后1年復(fù)查時(shí)，發(fā)現(xiàn)肝臟內(nèi)出現(xiàn)了多個(gè)新的轉(zhuǎn)移灶，最終患者因病情惡化去世。再如另一位48歲女性患者，患有丙型肝炎肝硬化，長(zhǎng)期處于肝臟炎癥狀態(tài)。在隨訪過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)肝功能指標(biāo)逐漸惡化，且肝臟硬度值明顯增加。通過(guò)MRI檢查發(fā)現(xiàn)肝臟左葉有彌漫性結(jié)節(jié)樣改變，部分結(jié)節(jié)融合成塊。對(duì)其中較大的結(jié)節(jié)進(jìn)行穿刺活檢，病理診斷為肝細(xì)胞癌。對(duì)該患者的癌組織和癌旁組織進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡（Westernblot）分析，結(jié)果顯示癌組織中NF-κB的磷酸化水平顯著高于癌旁組織，表明NF-κB通路在癌組織中被過(guò)度激活。進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，癌組織中與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因如c-Myc、與侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因如基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）以及與免疫逃逸相關(guān)的基因如程序性死亡配體-1（PD-L1）等，這些受NF-κB調(diào)控的基因表達(dá)均明顯上調(diào)。該患者接受了肝移植手術(shù)，但術(shù)后仍出現(xiàn)了腫瘤復(fù)發(fā)，這也進(jìn)一步表明NF-κB通路的異常激活在肝細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展和復(fù)發(fā)過(guò)程中起著重要作用。大量臨床研究統(tǒng)計(jì)結(jié)果也顯示，在肝細(xì)胞癌患者中，NF-κB通路激活的患者其腫瘤分期往往更高，腫瘤體積更大，預(yù)后更差。一項(xiàng)對(duì)200例肝細(xì)胞癌患者的回顧性研究發(fā)現(xiàn)，NF-κB高表達(dá)組患者的5年生存率僅為20%，而NF-κB低表達(dá)組患者的5年生存率可達(dá)45%。且NF-κB高表達(dá)組患者的腫瘤復(fù)發(fā)率明顯高于低表達(dá)組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這些臨床案例和研究數(shù)據(jù)充分表明，NF-κB通路的異常激活與肝細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其激活狀態(tài)可作為評(píng)估肝細(xì)胞癌患者病情和預(yù)后的重要指標(biāo)。四、JNK1通路在炎癥誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌發(fā)展中的作用4.1JNK1通路的激活與調(diào)控在正常肝細(xì)胞中，JNK1通路處于相對(duì)靜息狀態(tài)，其活性受到嚴(yán)格的調(diào)控。JNK1屬于絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）家族成員，其激活過(guò)程涉及一系列復(fù)雜的級(jí)聯(lián)反應(yīng)。當(dāng)肝細(xì)胞遭受炎癥刺激時(shí)，如受到腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）等炎性細(xì)胞因子，以及活性氧（ROS）、紫外線照射、化學(xué)毒物等應(yīng)激因素作用時(shí)，JNK1通路會(huì)被迅速激活。以TNF-α刺激為例，當(dāng)肝細(xì)胞表面的TNF受體1（TNFR1）與TNF-α結(jié)合后，TNFR1會(huì)發(fā)生三聚化，招募TNF受體相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白（TRADD）。TRADD通過(guò)其死亡結(jié)構(gòu)域與受體相互作用蛋白1（RIP1）結(jié)合，進(jìn)而招募TNF受體相關(guān)因子2（TRAF2）。TRAF2會(huì)激活下游的凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1（ASK1），ASK1是JNK1通路激活的關(guān)鍵上游激酶。在靜息狀態(tài)下，ASK1與硫氧還蛋白（Trx）結(jié)合形成復(fù)合物，處于無(wú)活性狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞受到氧化應(yīng)激等刺激時(shí)，Trx與ASK1解離，使ASK1得以活化?；罨蟮腁SK1通過(guò)自身磷酸化激活下游的MKK4和MKK7。MKK4和MKK7是JNK1的直接上游激酶，它們能夠特異性地使JNK1的蘇氨酸（Thr）183和酪氨酸（Tyr）185殘基發(fā)生雙磷酸化，從而激活JNK1。一旦JNK1被激活，它會(huì)從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)，磷酸化其下游底物，如c-Jun、ATF2等轉(zhuǎn)錄因子。除了上述經(jīng)典的激活途徑外，JNK1通路還存在其他的激活方式和調(diào)控機(jī)制。一些生長(zhǎng)因子，如表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF）等，也可以通過(guò)其相應(yīng)的受體激活JNK1通路。當(dāng)EGF與肝細(xì)胞表面的EGF受體（EGFR）結(jié)合后，EGFR會(huì)發(fā)生二聚化并自身磷酸化，招募銜接蛋白Grb2和鳥(niǎo)苷酸交換因子SOS。SOS激活小G蛋白R(shí)as，Ras進(jìn)一步激活Raf-1，Raf-1通過(guò)激活MKK4和MKK7間接激活JNK1。此外，JNK1通路的激活還受到一些負(fù)調(diào)控機(jī)制的制約。雙特異性磷酸酶（DUSPs）家族成員可以通過(guò)去磷酸化作用使JNK1失活，從而抑制JNK1通路的活性。DUSP1能夠特異性地去除JNK1上的磷酸基團(tuán)，使其恢復(fù)到非激活狀態(tài)。一些細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)分子，如蛋白激酶C（PKC），在某些情況下也可以通過(guò)磷酸化作用抑制JNK1通路的激活。在炎癥誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌發(fā)展的過(guò)程中，JNK1通路的激活與調(diào)控失衡，導(dǎo)致其過(guò)度激活，進(jìn)而對(duì)肝細(xì)胞的生物學(xué)行為產(chǎn)生重要影響。4.2JNK1通路對(duì)肝細(xì)胞生物學(xué)行為的影響4.2.1對(duì)細(xì)胞增殖的影響JNK1通路對(duì)肝細(xì)胞增殖的影響較為復(fù)雜，具有雙重作用，其作用效果取決于細(xì)胞所處的微環(huán)境以及刺激的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間等因素。在某些情況下，適度激活JNK1通路可以促進(jìn)肝細(xì)胞增殖。當(dāng)肝細(xì)胞受到生長(zhǎng)因子如表皮生長(zhǎng)因子（EGF）刺激時(shí)，會(huì)通過(guò)受體酪氨酸激酶途徑激活JNK1通路。激活后的JNK1進(jìn)入細(xì)胞核，磷酸化轉(zhuǎn)錄因子c-Jun，c-Jun與其他轉(zhuǎn)錄因子如c-Fos等結(jié)合形成活化蛋白-1（AP-1）復(fù)合物。AP-1復(fù)合物可以結(jié)合到細(xì)胞周期相關(guān)基因的啟動(dòng)子區(qū)域，促進(jìn)CyclinD1等基因的表達(dá)。CyclinD1能夠與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）或CDK6結(jié)合，形成的復(fù)合物可以磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（pRB），使pRB釋放轉(zhuǎn)錄因子E2F，進(jìn)而啟動(dòng)一系列與DNA復(fù)制和細(xì)胞周期進(jìn)展相關(guān)基因的表達(dá)，推動(dòng)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，促進(jìn)細(xì)胞增殖。研究人員在體外培養(yǎng)的肝細(xì)胞系中，加入EGF刺激后，檢測(cè)到JNK1通路激活，細(xì)胞內(nèi)CyclinD1表達(dá)升高，細(xì)胞增殖明顯加快；而當(dāng)使用JNK1抑制劑處理細(xì)胞后，JNK1通路被抑制，CyclinD1表達(dá)降低，細(xì)胞增殖受到抑制。然而，在炎癥等病理?xiàng)l件下，過(guò)度激活的JNK1通路卻可能抑制肝細(xì)胞增殖，甚至誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。長(zhǎng)期的炎癥刺激會(huì)導(dǎo)致肝細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）水平升高，ROS可以激活A(yù)SK1，進(jìn)而強(qiáng)烈激活JNK1通路。過(guò)度激活的JNK1會(huì)磷酸化Bcl-2家族中的促凋亡蛋白Bim，使其從與Bcl-2或Bcl-xL的結(jié)合中釋放出來(lái)，從而激活線粒體凋亡途徑，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖。在炎癥微環(huán)境中，過(guò)度激活的JNK1還可能通過(guò)抑制細(xì)胞周期蛋白和相關(guān)激酶的活性，使細(xì)胞周期阻滯在G1期或G2/M期，抑制細(xì)胞增殖。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，構(gòu)建炎癥誘導(dǎo)的肝細(xì)胞癌小鼠模型，發(fā)現(xiàn)隨著炎癥的加劇，肝臟組織中JNK1通路過(guò)度激活，肝細(xì)胞凋亡增加，細(xì)胞增殖受到抑制。但在腫瘤發(fā)展的后期，癌細(xì)胞可能通過(guò)一些適應(yīng)性機(jī)制，重新利用JNK1通路的激活來(lái)促進(jìn)自身增殖，這可能與癌細(xì)胞中相關(guān)信號(hào)通路的重編程有關(guān)。4.2.2對(duì)細(xì)胞遷移和侵襲的影響JNK1通路在促進(jìn)肝細(xì)胞遷移和侵襲方面發(fā)揮著重要作用，其主要通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞骨架重塑、細(xì)胞外基質(zhì)降解以及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）等過(guò)程來(lái)實(shí)現(xiàn)這一功能。在細(xì)胞骨架重塑方面，JNK1通路激活后，會(huì)通過(guò)一系列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，調(diào)節(jié)肌動(dòng)蛋白（actin）和微管等細(xì)胞骨架成分的組裝和分布。JNK1可以磷酸化肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白，如絲切蛋白（cofilin）等。磷酸化后的絲切蛋白活性受到抑制，無(wú)法有效地切斷肌動(dòng)蛋白絲，從而導(dǎo)致肌動(dòng)蛋白絲的穩(wěn)定性增加，有利于細(xì)胞偽足的形成和伸展，促進(jìn)細(xì)胞的遷移。研究人員在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，激活JNK1通路后，肝癌細(xì)胞內(nèi)的肌動(dòng)蛋白絲重新排列，形成更多的絲狀偽足和片狀偽足，細(xì)胞的遷移能力明顯增強(qiáng)；而抑制JNK1通路后，細(xì)胞偽足減少，遷移能力顯著降低。JNK1通路還可以通過(guò)調(diào)節(jié)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的表達(dá)來(lái)促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的降解，為肝細(xì)胞的遷移和侵襲提供條件。MMPs是一類能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)成分的蛋白酶，包括MMP-2、MMP-9等。當(dāng)JNK1通路被激活時(shí)，會(huì)促進(jìn)MMP-2和MMP-9等基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。JNK1通過(guò)磷酸化轉(zhuǎn)錄因子AP-1，增強(qiáng)AP-1與MMPs基因啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合能力，從而上調(diào)MMPs的表達(dá)。MMP-2和MMP-9等可以降解細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原蛋白、層粘連蛋白等成分，破壞細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)，使細(xì)胞能夠更容易地突破細(xì)胞外基質(zhì)的限制，發(fā)生遷移和侵襲。在肝癌組織中，常常檢測(cè)到JNK1通路激活，同時(shí)MMP-2和MMP-9等的表達(dá)升高，且與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移程度呈正相關(guān)。此外，JNK1通路在誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過(guò)程中也起著關(guān)鍵作用。EMT是上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間連接，獲得間質(zhì)細(xì)胞特性的過(guò)程，這一過(guò)程賦予細(xì)胞更強(qiáng)的遷移和侵襲能力。JNK1通路激活后，可以通過(guò)調(diào)節(jié)EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)來(lái)誘導(dǎo)EMT。JNK1可以磷酸化并激活轉(zhuǎn)錄因子Snail、Slug等，這些轉(zhuǎn)錄因子能夠抑制上皮標(biāo)志物E-鈣黏蛋白（E-cadherin）的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)間質(zhì)標(biāo)志物如波形蛋白（Vimentin）、N-鈣黏蛋白（N-cadherin）等的表達(dá)。E-鈣黏蛋白表達(dá)降低會(huì)削弱細(xì)胞間的黏附連接，而Vimentin和N-cadherin等表達(dá)升高則使細(xì)胞獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，從而促進(jìn)細(xì)胞的遷移和侵襲。研究表明，在肝癌細(xì)胞中，激活JNK1通路能夠誘導(dǎo)EMT的發(fā)生，使細(xì)胞的遷移和侵襲能力顯著增強(qiáng)；抑制JNK1通路則可以逆轉(zhuǎn)EMT過(guò)程，降低細(xì)胞的遷移和侵襲能力。4.3JNK1通路與肝癌細(xì)胞的耐藥性JNK1通路與肝癌細(xì)胞的耐藥性密切相關(guān)，其異常激活往往導(dǎo)致肝癌細(xì)胞對(duì)多種化療藥物產(chǎn)生耐藥性，這也是肝細(xì)胞癌治療面臨的一大難題?；熓歉渭?xì)胞癌綜合治療的重要手段之一，然而，肝癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性嚴(yán)重限制了化療的療效，導(dǎo)致患者預(yù)后不佳。研究表明，JNK1通路在肝癌細(xì)胞耐藥性的形成過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其主要通過(guò)多種分子機(jī)制來(lái)調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。JNK1通路可以通過(guò)調(diào)節(jié)藥物外排泵的表達(dá)來(lái)影響肝癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性。ATP結(jié)合盒（ABC）轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族是一類重要的藥物外排泵，其中P-糖蛋白（P-gp）、多藥耐藥相關(guān)蛋白1（MRP1）等在肝癌細(xì)胞耐藥中起著關(guān)鍵作用。當(dāng)JNK1通路激活時(shí)，會(huì)促進(jìn)這些ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)。具體來(lái)說(shuō)，激活的JNK1進(jìn)入細(xì)胞核后，能夠磷酸化并激活一些轉(zhuǎn)錄因子，如核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）等。Nrf2可以結(jié)合到ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的啟動(dòng)子區(qū)域，增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活性，從而使P-gp、MRP1等藥物外排泵的表達(dá)上調(diào)。P-gp和MRP1等能夠利用ATP水解產(chǎn)生的能量，將進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的化療藥物泵出細(xì)胞外，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，導(dǎo)致肝癌細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。研究人員在對(duì)肝癌細(xì)胞系的研究中發(fā)現(xiàn)，使用JNK1激活劑處理細(xì)胞后，P-gp和MRP1的表達(dá)明顯升高，細(xì)胞對(duì)多柔比星、順鉑等化療藥物的耐藥性顯著增強(qiáng)；而使用JNK1抑制劑阻斷JNK1通路后，P-gp和MRP1的表達(dá)降低，細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性恢復(fù)。JNK1通路還可以通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)來(lái)影響肝癌細(xì)胞的耐藥性。如前文所述，JNK1通路在細(xì)胞凋亡過(guò)程中具有雙重作用，在一定條件下，它可以通過(guò)磷酸化Bcl-2家族中的促凋亡蛋白Bim等，激活線粒體凋亡途徑，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。然而，在肝癌細(xì)胞耐藥的情況下，JNK1通路的激活卻可能抑制細(xì)胞凋亡，使癌細(xì)胞逃避化療藥物誘導(dǎo)的死亡。研究發(fā)現(xiàn)，耐藥的肝癌細(xì)胞中，JNK1通路的持續(xù)激活會(huì)導(dǎo)致抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL的表達(dá)上調(diào)，同時(shí)抑制促凋亡蛋白Bax和Bim的表達(dá)。Bcl-2和Bcl-xL可以通過(guò)與Bax等促凋亡蛋白相互作用，阻止線粒體釋放細(xì)胞色素c等凋亡相關(guān)因子，從而抑制細(xì)胞凋亡。在對(duì)臨床肝癌組織樣本的分析中發(fā)現(xiàn)，耐藥患者的癌組織中JNK1通路激活，Bcl-2和Bcl-xL表達(dá)明顯升高，而B(niǎo)ax和Bim表達(dá)降低，這與細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的結(jié)果一致。此外，JNK1通路還可能通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤干細(xì)胞（CSCs）的特性來(lái)影響肝癌細(xì)胞的耐藥性。腫瘤干細(xì)胞具有自我更新、多向分化和高耐藥性等特點(diǎn)，被認(rèn)為是腫瘤復(fù)發(fā)和耐藥的根源。研究表明，JNK1通路的激活可以維持肝癌干細(xì)胞的干性，增強(qiáng)其耐藥性。JNK1通路激活后，會(huì)調(diào)節(jié)一些與腫瘤干細(xì)胞相關(guān)的信號(hào)通路，如Wnt/β-catenin通路、Notch通路等。在Wnt/β-catenin通路中，JNK1可以通過(guò)磷酸化作用穩(wěn)定β-catenin蛋白，使其進(jìn)入細(xì)胞核與TCF/LEF轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，啟動(dòng)一系列與腫瘤干細(xì)胞干性維持相關(guān)基因的表達(dá)，如Oct4、Sox2等。這些基因的表達(dá)能夠維持肝癌干細(xì)胞的特性，使其對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。在肝癌細(xì)胞系中，抑制JNK1通路可以降低腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)，減弱肝癌干細(xì)胞的自我更新和耐藥能力。4.4臨床病例中的JNK1通路表現(xiàn)在臨床實(shí)踐中，大量病例研究為JNK1通路異常與肝細(xì)胞癌病情的緊密聯(lián)系提供了有力證據(jù)。以一位62歲男性患者為例，該患者患有慢性丙型肝炎，長(zhǎng)期處于肝臟炎癥狀態(tài)。在定期體檢時(shí)，通過(guò)血清甲胎蛋白（AFP）檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其水平顯著升高，達(dá)到了800ng/mL（正常參考值<20ng/mL）。進(jìn)一步進(jìn)行肝臟超聲檢查，發(fā)現(xiàn)肝臟右葉有一個(gè)直徑約4cm的低回聲占位性病變，邊界不清晰。隨后進(jìn)行的增強(qiáng)CT檢查顯示，該病變?cè)趧?dòng)脈期明顯強(qiáng)化，門靜脈期和延遲期強(qiáng)化減退，呈現(xiàn)典型的肝細(xì)胞癌影像學(xué)特征。經(jīng)肝穿刺活檢病理確診為肝細(xì)胞癌。對(duì)該患者的癌組織進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，結(jié)果顯示JNK1蛋白及其磷酸化形式p-JNK1的表達(dá)均明顯上調(diào)，且主要定位于細(xì)胞核內(nèi)，表明JNK1通路處于激活狀態(tài)。同時(shí)，檢測(cè)到癌組織中與細(xì)胞遷移和侵襲相關(guān)的蛋白，如基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）和N-鈣黏蛋白（N-cadherin）等的表達(dá)也顯著升高，這些蛋白的表達(dá)上調(diào)與JNK1通路的激活密切相關(guān)。在后續(xù)治療過(guò)程中，患者接受了手術(shù)切除治療，但術(shù)后僅8個(gè)月復(fù)查時(shí)，發(fā)現(xiàn)肝臟內(nèi)出現(xiàn)了多個(gè)新的轉(zhuǎn)移灶，病情迅速惡化。再如一位50歲女性患者，有乙肝肝硬化病史10余年，因右上腹疼痛、乏力等癥狀就診。實(shí)驗(yàn)室檢查顯示肝功能指標(biāo)異常，AFP水平升高至350ng/mL。肝臟MRI檢查發(fā)現(xiàn)肝臟左葉有彌漫性結(jié)節(jié)樣改變，部分結(jié)節(jié)融合成較大腫塊。對(duì)其中較大的結(jié)節(jié)進(jìn)行穿刺活檢，病理診斷為肝細(xì)胞癌。對(duì)該患者的癌組織和癌旁組織進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡（Westernblot）分析，結(jié)果顯示癌組織中JNK1的磷酸化水平顯著高于癌旁組織，表明JNK1通路在癌組織中被過(guò)度激活。進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，癌組織中與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因如c-Myc、與耐藥相關(guān)的蛋白如P-糖蛋白（P-gp）等，這些受JNK1通路調(diào)控的基因和蛋白表達(dá)均明顯上調(diào)。該患者接受了介入治療聯(lián)合靶向治療，但治療效果不佳，腫瘤對(duì)靶向藥物產(chǎn)生耐藥性，病情逐漸進(jìn)展。多項(xiàng)臨床研究統(tǒng)計(jì)分析也表明，JNK1通路激活與肝細(xì)胞癌患者的不良預(yù)后密切相關(guān)。一項(xiàng)對(duì)150例肝細(xì)胞癌患者的回顧性研究發(fā)現(xiàn)，JNK1高表達(dá)組患者的腫瘤復(fù)發(fā)率明顯高于JNK1低表達(dá)組，5年生存率則顯著低于低表達(dá)組。JNK1高表達(dá)組患者的中位生存時(shí)間為18個(gè)月，而JNK1低表達(dá)組患者的中位生存時(shí)間為30個(gè)月，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這些臨床病例和研究數(shù)據(jù)充分說(shuō)明，JNK1通路的異常激活在肝細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移以及耐藥等過(guò)程中起著重要作用，其激活狀態(tài)可作為評(píng)估肝細(xì)胞癌患者病情和預(yù)后的重要指標(biāo)。五、NF-κB和JNK1通路的交互作用及其在肝細(xì)胞癌發(fā)展中的協(xié)同效應(yīng)5.1兩條通路的交互作用機(jī)制NF-κB和JNK1通路在肝細(xì)胞內(nèi)并非獨(dú)立發(fā)揮作用，它們之間存在著復(fù)雜的交互作用機(jī)制，通過(guò)多種信號(hào)分子和反饋調(diào)節(jié)機(jī)制相互影響，共同調(diào)控肝細(xì)胞的生物學(xué)行為，在炎癥誘導(dǎo)的肝細(xì)胞癌發(fā)展過(guò)程中扮演著重要角色。在信號(hào)傳導(dǎo)的起始階段，許多炎癥刺激因素，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1（IL-1）等，能夠同時(shí)激活NF-κB和JNK1通路。以TNF-α刺激為例，當(dāng)肝細(xì)胞表面的TNF受體1（TNFR1）與TNF-α結(jié)合后，會(huì)招募TNF受體相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白（TRADD），TRADD進(jìn)一步招募受體相互作用蛋白1（RIP1）和TNF受體相關(guān)因子2（TRAF2）。這一復(fù)合物的形成不僅可以激活I(lǐng)κB激酶（IKK）復(fù)合體，從而啟動(dòng)NF-κB通路；還能激活凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1（ASK1），進(jìn)而激活JNK1通路。這種共享上游信號(hào)分子的方式，使得NF-κB和JNK1通路在炎癥刺激下能夠同時(shí)被激活，為它們之間的交互作用奠定了基礎(chǔ)。在信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中，NF-κB和JNK1通路之間存在著相互調(diào)節(jié)的關(guān)系。一方面，JNK1通路可以調(diào)節(jié)NF-κB的活性。研究發(fā)現(xiàn)，JNK1可以磷酸化IκB激酶（IKK）復(fù)合體中的IKKα亞基，增強(qiáng)IKK復(fù)合體的活性，從而促進(jìn)IκB蛋白的磷酸化和降解，使NF-κB得以激活。JNK1還可以通過(guò)磷酸化NF-κB家族成員p65的特定氨基酸殘基，增強(qiáng)p65的轉(zhuǎn)錄活性，進(jìn)一步促進(jìn)NF-κB下游靶基因的表達(dá)。另一方面，NF-κB通路也可以對(duì)JNK1通路產(chǎn)生影響。NF-κB可以調(diào)節(jié)一些與JNK1通路相關(guān)的上游激酶和調(diào)節(jié)因子的表達(dá)。NF-κB能夠促進(jìn)混合譜系激酶3（MLK3）的表達(dá)，MLK3是JNK1的上游激活激酶之一，其表達(dá)上調(diào)可以增強(qiáng)JNK1通路的激活。NF-κB還可以通過(guò)調(diào)節(jié)雙特異性磷酸酶（DUSPs）的表達(dá)來(lái)間接調(diào)控JNK1通路。DUSPs可以使JNK1去磷酸化，從而抑制JNK1通路的活性。NF-κB可能通過(guò)抑制某些DUSPs的表達(dá)，間接增強(qiáng)JNK1通路的活性。此外，NF-κB和JNK1通路的下游靶基因之間也存在著相互作用。NF-κB和JNK1通路激活后，會(huì)分別調(diào)控一系列靶基因的表達(dá)，這些靶基因產(chǎn)物之間可以相互影響，進(jìn)一步調(diào)節(jié)細(xì)胞的生物學(xué)行為。NF-κB通路激活后上調(diào)的抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL，它們可以與JNK1通路激活后磷酸化的促凋亡蛋白Bim相互作用，抑制Bim誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。而JNK1通路激活后上調(diào)的基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs），如MMP-2和MMP-9等，它們可以降解細(xì)胞外基質(zhì)，為NF-κB通路促進(jìn)的細(xì)胞增殖和遷移提供有利條件。這種下游靶基因產(chǎn)物之間的相互作用，使得NF-κB和JNK1通路在調(diào)控肝細(xì)胞生物學(xué)行為方面產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)。5.2協(xié)同促進(jìn)肝細(xì)胞癌發(fā)展的證據(jù)眾多細(xì)胞實(shí)驗(yàn)為NF-κB和JNK1通路協(xié)同促進(jìn)肝細(xì)胞癌發(fā)展提供了有力證據(jù)。在一項(xiàng)研究中，研究人員選用人肝癌細(xì)胞系HepG2和Huh7，通過(guò)轉(zhuǎn)染特定的質(zhì)粒分別激活NF-κB和JNK1通路。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)激活NF-κB通路時(shí)，癌細(xì)胞的增殖能力有所增強(qiáng)，細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CyclinD1的表達(dá)上調(diào)；單獨(dú)激活JNK1通路時(shí)，癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力增強(qiáng)，基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2和MMP-9的表達(dá)升高。當(dāng)同時(shí)激活NF-κB和JNK1通路時(shí)，癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力顯著增強(qiáng)，且這種增強(qiáng)效果明顯大于兩條通路單獨(dú)激活時(shí)的疊加效應(yīng)。進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，同時(shí)激活兩條通路后，細(xì)胞內(nèi)與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的基因和蛋白表達(dá)發(fā)生了顯著變化。如與細(xì)胞增殖相關(guān)的c-Myc基因表達(dá)進(jìn)一步上調(diào)，與細(xì)胞遷移和侵襲相關(guān)的N-鈣黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）等蛋白的表達(dá)也顯著增加。在另一項(xiàng)針對(duì)肝癌細(xì)胞耐藥性的研究中，利用化療藥物多柔比星處理肝癌細(xì)胞，同時(shí)激活NF-κB和JNK1通路。結(jié)果顯示，單獨(dú)激活NF-κB通路或JNK1通路時(shí)，肝癌細(xì)胞對(duì)多柔比星的耐藥性有一定程度的增加；而同時(shí)激活兩條通路時(shí)，肝癌細(xì)胞對(duì)多柔比星的耐藥性顯著增強(qiáng)，細(xì)胞內(nèi)藥物外排泵P-糖蛋白（P-gp）和多藥耐藥相關(guān)蛋白1（MRP1）的表達(dá)明顯升高，抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL的表達(dá)也顯著上調(diào)，而促凋亡蛋白Bax和Bim的表達(dá)受到抑制。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)同樣證實(shí)了NF-κB和JNK1通路在炎癥誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌發(fā)展中的協(xié)同作用。科研人員構(gòu)建了炎癥誘導(dǎo)的小鼠肝細(xì)胞癌模型，通過(guò)腹腔注射脂多糖（LPS）聯(lián)合二乙基亞硝胺（DEN）的方法，誘導(dǎo)小鼠肝臟發(fā)生炎癥和癌變。在模型小鼠中，利用基因敲除技術(shù)或特異性抑制劑分別阻斷NF-κB和JNK1通路。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)阻斷NF-κB通路時(shí)，小鼠肝臟腫瘤的體積和數(shù)量有所減少，腫瘤組織中細(xì)胞增殖相關(guān)指標(biāo)Ki-67的表達(dá)降低；單獨(dú)阻斷JNK1通路時(shí)，小鼠肝臟腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移能力受到一定抑制，腫瘤組織中MMP-2和MMP-9的表達(dá)下降。當(dāng)同時(shí)阻斷NF-κB和JNK1通路時(shí)，小鼠肝臟腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移受到更為顯著的抑制，小鼠的生存期明顯延長(zhǎng)。對(duì)腫瘤組織進(jìn)行免疫組化和蛋白質(zhì)印跡分析發(fā)現(xiàn)，同時(shí)阻斷兩條通路后，腫瘤組織中與細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和耐藥相關(guān)的基因和蛋白表達(dá)均顯著降低。如與細(xì)胞增殖相關(guān)的PCNA蛋白表達(dá)明顯下降，與細(xì)胞遷移和侵襲相關(guān)的E-鈣黏蛋白（E-cadherin）表達(dá)上調(diào)，而N-cadherin和Vimentin的表達(dá)下調(diào)。這些結(jié)果表明，NF-κB和JNK1通路在炎癥誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌發(fā)展過(guò)程中具有協(xié)同促進(jìn)作用，同時(shí)阻斷這兩條通路可以更有效地抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展。5.3交互作用在臨床樣本中的體現(xiàn)對(duì)臨床樣本的深入分析為NF-κB和JNK1通路交互作用與肝細(xì)胞癌的關(guān)系提供了有力的證據(jù)支持。研究人員收集了100例肝細(xì)胞癌患者的癌組織樣本以及對(duì)應(yīng)的癌旁組織樣本，通過(guò)免疫組化、蛋白質(zhì)印跡（Westernblot）等技術(shù)對(duì)樣本中NF-κB和JNK1通路相關(guān)蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，并分析其與肝細(xì)胞癌臨床病理特征之間的聯(lián)系。免疫組化結(jié)果顯示，在肝細(xì)胞癌組織中，NF-κB的活性亞基p65呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，且主要定位于細(xì)胞核內(nèi)，表明NF-κB通路處于激活狀態(tài)；同時(shí)，JNK1及其磷酸化形式p-JNK1的表達(dá)也顯著上調(diào)。進(jìn)一步的相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，NF-κB通路的激活程度與JNK1通路的激活程度之間存在顯著的正相關(guān)關(guān)系。具體而言，在NF-κB高表達(dá)的癌組織樣本中，JNK1的表達(dá)水平也相對(duì)較高，且p-JNK1的陽(yáng)性細(xì)胞比例也更高；而在NF-κB低表達(dá)的樣本中，JNK1和p-JNK1的表達(dá)水平則相對(duì)較低。蛋白質(zhì)印跡分析結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了這一結(jié)論。通過(guò)對(duì)樣本中NF-κB通路相關(guān)蛋白（如p65、IκBα等）和JNK1通路相關(guān)蛋白（如JNK1、p-JNK1、MKK4、MKK7等）的定量檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在肝細(xì)胞癌組織中，NF-κB通路的激活伴隨著IκBα蛋白的降解和p65蛋白磷酸化水平的升高；同時(shí)，JNK1通路的激活表現(xiàn)為JNK1蛋白磷酸化水平的升高以及其上游激酶MKK4和MKK7的活化。而且，NF-κB通路和JNK1通路相關(guān)蛋白的表達(dá)變化呈現(xiàn)出明顯的協(xié)同性。當(dāng)NF-κB通路被抑制時(shí)，JNK1通路相關(guān)蛋白的表達(dá)也會(huì)受到抑制；反之，當(dāng)JNK1通路被阻斷時(shí)，NF-κB通路相關(guān)蛋白的表達(dá)也會(huì)受到一定程度的影響。研究人員還將NF-κB和JNK1通路的激活狀態(tài)與肝細(xì)胞癌患者的臨床病理特征進(jìn)行了關(guān)聯(lián)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩條通路同時(shí)激活的患者，其腫瘤的分化程度更低，腫瘤直徑更大，TNM分期更晚，且更容易發(fā)生血管侵犯和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。這些患者的術(shù)后復(fù)發(fā)率明顯高于兩條通路未同時(shí)激活的患者，5年生存率也顯著降低。在一項(xiàng)多因素分析中，NF-κB和JNK1通路的同時(shí)激活被確定為肝細(xì)胞癌患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。通過(guò)對(duì)臨床樣本的分析，充分表明NF-κB和JNK1通路在肝細(xì)胞癌組織中存在交互作用，且兩條通路的同時(shí)激活與肝細(xì)胞癌的惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)，可作為評(píng)估肝細(xì)胞癌患者病情和預(yù)后的重要指標(biāo)。六、基于NF-κB和JNK1通路的治療策略探討6.1現(xiàn)有治療方法的局限性肝細(xì)胞癌的治療方法主要包括手術(shù)治療、局部治療、全身治療等，然而，這些方法在實(shí)際應(yīng)用中都存在一定的局限性。手術(shù)治療是肝細(xì)胞癌最主要的根治性治療手段，包括肝切除術(shù)和肝移植術(shù)。肝切除術(shù)適用于早期肝癌患者，要求患者的肝功能良好，腫瘤單發(fā)且局限在肝臟的一葉或一段。然而，由于肝細(xì)胞癌起病隱匿，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，腫瘤往往侵犯血管或發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，不適合進(jìn)行肝切除術(shù)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，僅有10%-30%的肝細(xì)胞癌患者在確診時(shí)符合手術(shù)切除的條件。肝移植術(shù)則適用于肝功能嚴(yán)重受損且腫瘤未發(fā)生肝外轉(zhuǎn)移的患者，它可以同時(shí)去除腫瘤和病變的肝臟，從根本上解決肝臟功能問(wèn)題。但肝移植面臨著供體短缺、手術(shù)費(fèi)用高昂以及術(shù)后免疫排斥反應(yīng)等問(wèn)題。由于供體器官的稀缺，許多患者在等待肝移植的過(guò)程中病情惡化，失去了手術(shù)機(jī)會(huì)。術(shù)后患者需要長(zhǎng)期服用免疫抑制劑來(lái)預(yù)防排斥反應(yīng)，這不僅增加了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，還可能導(dǎo)致感染等并發(fā)癥的發(fā)生，影響患者的生存質(zhì)量和預(yù)后。局部治療包括射頻消融、經(jīng)動(dòng)脈化療栓塞（TACE）等。射頻消融是利用射頻電流產(chǎn)生的熱量使腫瘤組織凝固性壞死，適用于直徑小于3-5cm的小肝癌。然而，對(duì)于較大的腫瘤或位置特殊的腫瘤，射頻消融難以完全覆蓋腫瘤組織，容易導(dǎo)致腫瘤殘留和復(fù)發(fā)。TACE是將化療藥物和栓塞劑混合后注入肝動(dòng)脈，使腫瘤組織缺血壞死并受到化療藥物的作用。TACE主要適用于不能手術(shù)切除的中晚期肝癌患者，但它也存在一些局限性。TACE治療后，腫瘤組織可能會(huì)出現(xiàn)不完全壞死，殘留的癌細(xì)胞容易復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。TACE還可能對(duì)肝功能造成一定的損害，導(dǎo)致肝功能惡化，影響患者的后續(xù)治療和生存質(zhì)量。多次TACE治療后，腫瘤細(xì)胞可能會(huì)產(chǎn)生耐藥性，降低治療效果。全身治療主要包括化療、靶向治療和免疫治療?；熕幬锶缍嗳岜刃?、順鉑等雖然可以通過(guò)血液循環(huán)到達(dá)全身，對(duì)腫瘤細(xì)胞起到殺傷作用，但由于肝癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性較低，且化療藥物缺乏特異性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)也會(huì)對(duì)正常細(xì)胞造成損害，導(dǎo)致嚴(yán)重的不良反應(yīng)，如骨髓抑制、胃腸道反應(yīng)、肝腎功能損害等，使得許多患者難以耐受化療，限制了化療的應(yīng)用。靶向治療是針對(duì)腫瘤細(xì)胞的特定分子靶點(diǎn)進(jìn)行治療，如索拉非尼、侖伐替尼等多激酶抑制劑，它們可以抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、血管生成和轉(zhuǎn)移。然而，靶向治療也面臨著耐藥性的問(wèn)題，大多數(shù)患者在接受靶向治療一段時(shí)間后會(huì)出現(xiàn)耐藥，導(dǎo)致治療失敗。免疫治療是通過(guò)激活機(jī)體自身的免疫系統(tǒng)來(lái)攻擊腫瘤細(xì)胞，如程序性死亡受體1（PD-1）抑制劑、程序性死亡配體1（PD-L1）抑制劑等。雖然免疫治療在部分肝細(xì)胞癌患者中取得了一定的療效，但總體有效率仍然較低，且存在免疫相關(guān)不良反應(yīng)，如免疫性肝炎、肺炎、甲狀腺功能異常等，這些不良反應(yīng)可能會(huì)影響患者的治療依從性和生存質(zhì)量?，F(xiàn)有肝細(xì)胞癌治療方法存在諸多局限性，迫切需要尋找新的治療靶點(diǎn)和策略。NF-κB和JNK1通路在炎癥誘導(dǎo)的肝細(xì)胞癌發(fā)展中起著關(guān)鍵作用，針對(duì)這兩條通路的治療策略有望為肝細(xì)胞癌的治療帶來(lái)新的突破。6.2針對(duì)NF-κB和JNK1通路的潛在治療靶點(diǎn)針對(duì)NF-κB和JNK1通路，在炎癥誘導(dǎo)的肝細(xì)胞癌治療中，存在多個(gè)極具潛力的治療靶點(diǎn)，這些靶點(diǎn)的干預(yù)有望為肝細(xì)胞癌的治療帶來(lái)新的突破。在NF-κB通路中，IκB激酶（IKK）復(fù)合體是關(guān)鍵的治療靶點(diǎn)。IKK復(fù)合體由IKKα、IKKβ和IKKγ（NEMO）組成，在NF-κB通路激活過(guò)程中發(fā)揮著核心作用。當(dāng)細(xì)胞受到炎癥刺激時(shí)，IKK復(fù)合體被激活，進(jìn)而磷酸化IκB蛋白，促使IκB蛋白降解，釋放出NF-κB二聚體，使其進(jìn)入細(xì)胞核啟動(dòng)靶基因轉(zhuǎn)錄。因此，抑制IKK復(fù)合體的活性可以有效阻斷NF-κB通路的激活。目前，已經(jīng)有多種針對(duì)IKK復(fù)合體的抑制劑被研發(fā)出來(lái)并進(jìn)行研究。例如，SC-514是一種選擇性的IKKβ抑制劑，它可以特異性地結(jié)合IKKβ的ATP結(jié)合位點(diǎn)，抑制IKKβ的激酶活性，從而阻斷NF-κB通路的激活。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，SC-514能夠顯著抑制肝癌細(xì)胞中NF-κB的活性，減少其下游促炎細(xì)胞因子和抗凋亡蛋白的表達(dá)，進(jìn)而抑制肝癌細(xì)胞的增殖和存活。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，給予攜帶肝癌細(xì)胞的小鼠SC-514治療，發(fā)現(xiàn)小鼠肝臟腫瘤的生長(zhǎng)明顯受到抑制，腫瘤體積減小，生存期延長(zhǎng)。另一種IKK抑制劑Bay11-7082，它不僅可以抑制IKKβ的活性，還能通過(guò)抑制IκB蛋白的磷酸化，阻止NF-κB的激活。研究表明，Bay11-7082在肝癌細(xì)胞系和動(dòng)物模型中都表現(xiàn)出良好的抗腫瘤活性，能夠降低肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。NF-κB家族成員本身也可作為潛在的治療靶點(diǎn)。以p65為例，它是NF-κB通路中的重要轉(zhuǎn)錄因子，其活性的抑制可以有效調(diào)控NF-κB通路的功能。一些小分子化合物可以通過(guò)與p65蛋白的特定結(jié)構(gòu)域結(jié)合，抑制其與DNA的結(jié)合能力，從而阻斷NF-κB對(duì)下游基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。研究人員發(fā)現(xiàn)，姜黃素是一種從姜黃中提取的天然化合物，它可以通過(guò)與p65的Rel同源結(jié)構(gòu)域（RHD）結(jié)合，抑制p65與DNA的結(jié)合，進(jìn)而抑制NF-κB通路的活性。在肝細(xì)胞癌的研究中，姜黃素能夠降低肝癌細(xì)胞中NF-κB下游靶基因的表達(dá)，抑制癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，并誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡。在臨床前研究中，給予肝癌小鼠模型姜黃素治療，發(fā)現(xiàn)小鼠肝臟腫瘤的生長(zhǎng)受到明顯抑制，且未觀察到明顯的毒副作用。在JNK1通路中，凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1（ASK1）是一個(gè)重要的潛在治療靶點(diǎn)。ASK1是JNK1通路的上游關(guān)鍵激酶，當(dāng)細(xì)胞受到氧化應(yīng)激、炎癥等刺激時(shí)，ASK1被激活，進(jìn)而激活下游的MKK4和MKK7，最終激活JNK1。因此，抑制ASK1的活性可以有效阻斷JNK1通路的激活。有研究開(kāi)發(fā)出了ASK1的小分子抑制劑，如GS-444217。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，GS-444217能夠顯著抑制ASK1的活性，阻斷JNK1通路的激活，降低肝癌細(xì)胞中JNK1下游靶基因的表達(dá)。這使得肝癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力受到抑制，同時(shí)增加了癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，給予攜帶肝癌細(xì)胞的小鼠GS-444217治療，發(fā)現(xiàn)小鼠肝臟腫瘤的生長(zhǎng)得到有效控制，腫瘤體積減小，且聯(lián)合化療藥物使用時(shí)，效果更為顯著。JNK1本身也是一個(gè)直接的治療靶點(diǎn)。通過(guò)抑制JNK1的活性，可以調(diào)節(jié)其下游與細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和凋亡相關(guān)的基因表達(dá)，從而影響肝癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。目前，已經(jīng)有多種JNK1抑制劑被研究。SP600125是一種常用的JNK1抑制劑，它可以通過(guò)與JNK1的ATP結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，抑制JNK1的激酶活性。在肝癌細(xì)胞系中，使用SP600125處理后，JNK1的活性被抑制，癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力明顯降低，細(xì)胞增殖也受到抑制。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，給予肝癌小鼠模型SP600125治療，發(fā)現(xiàn)小鼠肝臟腫瘤的轉(zhuǎn)移能力顯著下降，生存期延長(zhǎng)。6.3相關(guān)治療策略的研究進(jìn)展在肝細(xì)胞癌的治療領(lǐng)域，針對(duì)NF-κB和JNK1通路的研究正不斷取得新進(jìn)展，為開(kāi)發(fā)更有效的治療策略帶來(lái)了希望。在藥物研發(fā)方面，眾多研究聚焦于開(kāi)發(fā)能夠特異性抑制NF-κB和JNK1通路關(guān)鍵節(jié)點(diǎn)的藥物。除了前文提及的針對(duì)NF-κB通路中IKK復(fù)合體的抑制劑SC-514、Bay11-7082，以及針對(duì)JNK1通路中ASK1的抑制劑GS-444217和JNK1抑制劑SP600125外，還有一些新型藥物正在研發(fā)中。一些研究致力于尋找天然產(chǎn)物及其衍生物作為潛在的抑制劑。例如，槲皮素是一種廣泛存在于水果、蔬菜和植物中的黃酮類化合物，研究發(fā)現(xiàn)它可以通過(guò)抑制IKKβ的活性，阻斷NF-κB通路的激活，從而抑制肝癌細(xì)胞的增殖和遷移。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，給予攜帶肝癌細(xì)胞的小鼠槲皮素治療，發(fā)現(xiàn)小鼠肝臟腫瘤的生長(zhǎng)得到抑制，且槲皮素具有良好的安全性。另一種天然化合物姜黃素，不僅可以抑制NF-κB通路，還能對(duì)JNK1通路產(chǎn)生影響。姜黃素可以通過(guò)抑制ASK1的活性，阻斷JNK1通路的激活，進(jìn)而抑制肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲。臨床前研究顯示，姜黃素在抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移方面具有一定的潛力，且毒副作用較小。除了小分子抑制劑，抗體藥物和生物制劑也成為研究熱點(diǎn)。有研究嘗試開(kāi)發(fā)針對(duì)NF-κB和JNK1通路相關(guān)蛋白的單克隆抗體，通過(guò)特異性結(jié)合這些蛋白，阻斷信號(hào)傳導(dǎo)。針對(duì)p65蛋白的單克隆抗體，可以抑制NF-κB的活性，減少其下游靶基因的表達(dá)。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，該單克隆抗體能夠有效抑制肝癌細(xì)胞的增殖和存活。在JNK1通路方面，開(kāi)發(fā)針對(duì)JNK1蛋白的單克隆抗體，有望特異性地抑制JNK1的活性，從而調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞的生物學(xué)行為。還有一些研究關(guān)注基于RNA干擾（RNAi）技術(shù)的治療策略。通過(guò)設(shè)計(jì)針對(duì)NF-κB和JNK1通路關(guān)鍵基因的小干擾RNA（siRNA），可以特異性地降低這些基因的表達(dá)，從而阻斷信號(hào)通路。針對(duì)IKKβ基因的siRNA，可以有效抑制NF-κB通路的激活，抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，將針對(duì)JNK1基因的siRNA遞送至肝癌小鼠模型體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)可以顯著抑制JNK1通路的活性，降低肝癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。在治療策略方面，聯(lián)合治療成為研究重點(diǎn)。鑒于NF-κB和JNK1通路在肝細(xì)胞癌發(fā)展中的協(xié)同作用，將針對(duì)這兩條通路的抑制劑與傳統(tǒng)治療方法聯(lián)合使用，有望提高治療效果。將NF-κB抑制劑與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用