B7-2與B7-H1：解碼非小細胞肺癌的分子奧秘與臨床新解一、引言1.1研究背景1.1.1非小細胞肺癌的現(xiàn)狀肺癌是全球范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，嚴重威脅人類健康。非小細胞肺癌（Non-SmallCellLungCancer，NSCLC）作為肺癌中最常見的類型，約占肺癌總數(shù)的80%-85%。近年來，盡管在診斷和治療方面取得了一定進展，但NSCLC患者的總體預后仍然不佳。NSCLC的發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈現(xiàn)上升趨勢，尤其在發(fā)展中國家，其增長速度更為明顯。這與工業(yè)化進程加快、環(huán)境污染加重、吸煙人數(shù)增加等因素密切相關(guān)。據(jù)統(tǒng)計，每年新增的NSCLC病例數(shù)以百萬計，給社會和家庭帶來了沉重的負擔。在死亡率方面，NSCLC同樣居高不下。由于早期癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時已處于中晚期，錯過了最佳手術(shù)時機。即使接受了手術(shù)、化療、放療等綜合治療，5年生存率仍較低，晚期患者的5年生存率甚至不足20%。在治療方面，NSCLC面臨諸多困境。對于早期患者，手術(shù)切除是主要的治療手段，但術(shù)后復發(fā)率較高；對于中晚期患者，化療和放療雖能在一定程度上控制腫瘤進展，但同時也會帶來嚴重的不良反應，降低患者的生活質(zhì)量。此外，部分患者對化療和放療不敏感，治療效果不佳。近年來，靶向治療和免疫治療為NSCLC的治療帶來了新的希望，但這些治療方法也存在耐藥性、適用人群有限等問題。因此，深入了解NSCLC的發(fā)病機制，尋找新的治療靶點和生物標志物，對于改善患者的預后具有重要意義。1.1.2B7-2和B7-H1的研究價值在腫瘤免疫領(lǐng)域，共刺激分子在調(diào)節(jié)免疫反應中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其中B7家族成員B7-2和B7-H1備受關(guān)注。B7-2（也稱為CD86）和B7-H1（也稱為PD-L1）作為B7家族中的重要成員，通過與T細胞表面的相應受體相互作用，對T細胞的活化、增殖和功能發(fā)揮起著重要的調(diào)節(jié)作用。B7-2主要通過與T細胞表面的CD28受體結(jié)合，提供共刺激信號，促進T細胞的活化和增殖，增強機體的抗腫瘤免疫反應。當B7-2與CD28結(jié)合后，能夠激活一系列細胞內(nèi)信號通路，上調(diào)細胞因子的分泌，如白細胞介素-2（IL-2）等，從而促進T細胞的克隆擴增和分化，使其具備更強的殺傷腫瘤細胞的能力。此外，B7-2還可以調(diào)節(jié)T細胞的存活和凋亡，維持T細胞的免疫活性。B7-H1則主要與T細胞表面的程序性死亡受體1（PD-1）結(jié)合，傳遞抑制性信號，抑制T細胞的活化和功能，導致腫瘤細胞免疫逃逸。在腫瘤微環(huán)境中，腫瘤細胞常常高表達B7-H1，當T細胞識別腫瘤抗原并與腫瘤細胞接觸時，B7-H1與PD-1結(jié)合，抑制T細胞的增殖、細胞因子分泌以及殺傷功能，使腫瘤細胞能夠逃避機體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視和攻擊。研究表明，B7-2和B7-H1在多種腫瘤組織中存在異常表達，并且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預后密切相關(guān)。在NSCLC中，深入研究B7-2和B7-H1的表達情況及其臨床意義，有助于進一步揭示NSCLC的免疫逃逸機制，為開發(fā)新的免疫治療策略提供理論依據(jù)。例如，通過檢測B7-2和B7-H1的表達水平，可能有助于篩選出對免疫治療敏感的患者，提高免疫治療的療效；同時，針對B7-2和B7-H1的靶向治療也可能成為NSCLC治療的新方向，為患者帶來更多的治療選擇和更好的預后。因此，探究B7-2和B7-H1在NSCLC中的表達及臨床意義具有重要的科學價值和臨床應用前景。1.2研究目的與意義本研究旨在深入探究B7-2和B7-H1在非小細胞肺癌組織中的表達模式，分析其表達水平與患者臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)，并進一步探討它們對患者預后的影響，為非小細胞肺癌的臨床治療和預后評估提供重要的理論依據(jù)。目前，非小細胞肺癌的治療面臨諸多挑戰(zhàn)，傳統(tǒng)治療方法的療效有限，患者的預后較差。深入了解腫瘤的免疫逃逸機制，尋找新的治療靶點和生物標志物，對于改善患者的治療效果和預后具有重要意義。B7-2和B7-H1作為重要的共刺激分子，在腫瘤免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。研究它們在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義，有望揭示非小細胞肺癌的免疫逃逸機制，為開發(fā)新的免疫治療策略提供理論支持。具體而言，本研究通過檢測B7-2和B7-H1在非小細胞肺癌組織中的表達水平，分析其與患者性別、年齡、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期等臨床病理特征的相關(guān)性，有助于了解B7-2和B7-H1在非小細胞肺癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用機制。同時，通過對患者進行長期隨訪，分析B7-2和B7-H1表達水平與患者預后的關(guān)系，如總生存期、無進展生存期等，可為臨床醫(yī)生評估患者的預后提供新的指標，指導治療方案的選擇。此外，本研究的結(jié)果還可能為開發(fā)針對B7-2和B7-H1的靶向治療藥物提供理論依據(jù)，為非小細胞肺癌患者帶來新的治療希望。綜上所述，探究B7-2和B7-H1在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義具有重要的科學價值和臨床應用前景。二、材料與方法2.1實驗材料2.1.1樣本選取選取[某醫(yī)院名稱]在[具體時間段，如2018年1月至2022年12月]期間手術(shù)切除的非小細胞肺癌組織標本100例。所有標本均經(jīng)病理診斷確診為非小細胞肺癌，且患者術(shù)前未接受放療、化療、免疫治療等抗腫瘤治療。同時，選取同期因肺部良性疾病手術(shù)切除的正常肺組織標本30例作為對照。樣本納入標準如下：患者年齡在18歲及以上；具有完整的臨床病理資料，包括性別、年齡、腫瘤部位、病理類型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、臨床分期等；患者及家屬簽署知情同意書，同意參與本研究。樣本排除標準如下：合并其他惡性腫瘤；患有嚴重的肝、腎、心、肺等重要臟器功能障礙；存在自身免疫性疾病或免疫缺陷疾病；標本質(zhì)量不佳，無法進行有效檢測。2.1.2主要試劑與儀器實驗所需的主要試劑包括：兔抗人B7-2多克隆抗體（購自[試劑公司名稱1]）、兔抗人B7-H1多克隆抗體（購自[試劑公司名稱2]）、免疫組化檢測試劑盒（SP法，購自[試劑公司名稱3]）、DAB顯色試劑盒（購自[試劑公司名稱4]）、蘇木精染液、伊紅染液、二甲苯、無水乙醇、中性樹膠等。主要儀器設備有：石蠟切片機（型號[具體型號1]，[生產(chǎn)廠家1]）、輪轉(zhuǎn)式切片機（型號[具體型號2]，[生產(chǎn)廠家2]）、自動脫水機（型號[具體型號3]，[生產(chǎn)廠家3]）、包埋機（型號[具體型號4]，[生產(chǎn)廠家4]）、顯微鏡（型號[具體型號5]，[生產(chǎn)廠家5]）、圖像分析系統(tǒng)（型號[具體型號6]，[生產(chǎn)廠家6]）等。2.2實驗方法2.2.1免疫組化實驗步驟本實驗采用免疫組化SP法染色，具體操作流程如下：切片準備：將石蠟包埋的組織標本切成4μm厚的切片，將切片置于經(jīng)防脫處理的載玻片上，60℃烤箱中烘烤2h，使切片緊密粘附在載玻片上。脫蠟與水化：將切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ中各浸泡15min進行脫蠟；隨后依次經(jīng)過100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇，各浸泡5min進行水化?？乖迯停簩⑺蟮那衅糜?.01M枸櫞酸緩沖液（pH6.0）中，采用高壓鍋進行抗原修復。將高壓鍋加熱至噴氣后，繼續(xù)維持2-3min，然后自然冷卻20min以上，再用冷水沖洗切片，使其快速冷卻至室溫，最后用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min。滅活內(nèi)源性過氧化物酶：將切片放入3%H?O?溶液中，37℃孵育10min，以滅活內(nèi)源性過氧化物酶，減少非特異性背景染色。孵育結(jié)束后，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min。封閉：滴加正常羊血清工作液，37℃孵育10min，以封閉非特異性結(jié)合位點，減少背景染色。孵育結(jié)束后，傾去多余液體，無需沖洗。加一抗：滴加適當稀釋度的兔抗人B7-2多克隆抗體和兔抗人B7-H1多克隆抗體（根據(jù)抗體說明書進行稀釋，一般B7-2抗體稀釋度為1:200，B7-H1抗體稀釋度為1:150），4℃冰箱孵育過夜。同時，用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。次日取出切片，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min。加二抗：滴加生物素標記的山羊抗兔IgG二抗（工作濃度為1:100），37℃孵育30min。孵育結(jié)束后，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min。加辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素工作液：滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素工作液（工作濃度為1:100），37℃孵育30min。孵育結(jié)束后，用PBS緩沖液沖洗3次，每次5min。顯色：使用DAB顯色試劑盒進行顯色。取1ml蒸餾水，加入試劑盒中A、B、C試劑各1滴，混勻后滴加至切片上，室溫下顯色，在顯微鏡下密切觀察顯色情況，控制反應時間，一般為5-15min，當陽性部位呈現(xiàn)棕黃色時，立即用自來水充分沖洗，終止顯色反應。復染：用蘇木素染液對切片進行輕度復染，時間約為2min，使細胞核呈現(xiàn)藍色。復染后，用自來水沖洗，然后依次經(jīng)過1%鹽酸酒精分化數(shù)秒、自來水沖洗返藍、梯度乙醇脫水（70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇、100%乙醇Ⅰ、100%乙醇Ⅱ，各浸泡3-5min）、二甲苯透明（二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ各浸泡5min）。封片：將透明后的切片滴加適量中性樹膠，蓋上蓋玻片，使其封固，待干燥后，在顯微鏡下觀察。2.2.2結(jié)果判定標準B7-2和B7-H1蛋白陽性表達均以細胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為判斷依據(jù)。每例標本均在10×40倍光鏡下隨機觀察10個視野，在每個視野計數(shù)100個腫瘤細胞中的陽性細胞數(shù)，然后取其平均值，用百分率（%）表示。具體評分方法如下：首先對染色強度進行打分，無色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分；然后根據(jù)陽性細胞所占百分比打分，腫瘤細胞內(nèi)陽性細胞≤10%為1分（+）、11%-50%為2分（++）、＞50%為3分（+++）。將染色強度得分與陽性細胞百分比得分相乘，兩者乘積≥3分為免疫組化反應陽性。其中，乘積為3-4分判定為低表達，乘積≥5分判定為高表達。陰性對照組應無棕黃色顆粒出現(xiàn)，若陰性對照組出現(xiàn)陽性染色，則實驗結(jié)果無效，需重新進行實驗。具體評分方法如下：首先對染色強度進行打分，無色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分；然后根據(jù)陽性細胞所占百分比打分，腫瘤細胞內(nèi)陽性細胞≤10%為1分（+）、11%-50%為2分（++）、＞50%為3分（+++）。將染色強度得分與陽性細胞百分比得分相乘，兩者乘積≥3分為免疫組化反應陽性。其中，乘積為3-4分判定為低表達，乘積≥5分判定為高表達。陰性對照組應無棕黃色顆粒出現(xiàn)，若陰性對照組出現(xiàn)陽性染色，則實驗結(jié)果無效，需重新進行實驗。2.3數(shù)據(jù)分析方法使用SPSS26.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行分析處理。計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，兩組比較采用獨立樣本t檢驗，多組比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA）；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，兩組間陽性表達率的比較采用卡方檢驗（\chi^{2}檢驗），當理論頻數(shù)小于5時，采用Fisher確切概率法；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析或Spearman秩相關(guān)分析，根據(jù)數(shù)據(jù)類型選擇合適的方法，若數(shù)據(jù)服從正態(tài)分布且為計量資料，采用Pearson相關(guān)分析，若不滿足正態(tài)分布或為等級資料，則采用Spearman秩相關(guān)分析。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義，P<0.01為差異具有高度統(tǒng)計學意義。生存分析采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，并使用Log-rank檢驗比較不同組之間的生存差異。通過多因素Cox比例風險回歸模型分析影響患者預后的獨立危險因素，將單因素分析中有統(tǒng)計學意義的因素納入多因素分析模型，以進一步明確B7-2和B7-H1表達水平與其他臨床病理因素對患者預后的綜合影響。三、研究結(jié)果3.1B7-2和B7-H1在非小細胞肺癌組織中的表達情況3.1.1表達水平差異通過免疫組化染色及嚴格的結(jié)果判定，對100例非小細胞肺癌組織標本和30例正常肺組織標本進行分析。結(jié)果顯示，B7-2在正常肺組織的細胞漿呈棕黃色染色，陽性表達率為80.0%（24/30），且多呈現(xiàn)較高的表達強度，多數(shù)樣本的染色強度得分與陽性細胞百分比得分乘積≥5分，判定為高表達。而在非小細胞肺癌組織中，B7-2的陽性表達率僅為35.0%（35/100），兩者差異具有統(tǒng)計學意義（\chi^{2}=15.385，P<0.01）。在非小細胞肺癌組織中，B7-2表達強度減低，免疫組化評分多為3-4分，判定為低表達，與正常肺組織相比，呈現(xiàn)明顯的表達水平下降趨勢。B7-H1在正常肺組織的細胞漿也呈棕黃色染色，但其陽性表達率較低，僅為20.0%（6/30），且表達強度較弱，多為免疫組化評分3-4分的低表達水平。然而，在非小細胞肺癌組織中，B7-H1的陽性表達率顯著升高，達到65.0%（65/100），與正常肺組織相比，差異具有高度統(tǒng)計學意義（\chi^{2}=18.722，P<0.01）。在非小細胞肺癌組織中，B7-H1表達強度明顯升高，免疫組化評分≥5分的高表達樣本占比較大，提示B7-H1在非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能發(fā)揮重要作用。3.1.2表達定位分析在細胞定位方面，B7-2和B7-H1的表達具有一定特點。B7-2主要位于腫瘤細胞的細胞漿內(nèi)，在部分細胞中也可見少量表達于細胞膜表面，但以細胞漿表達為主。在正常肺組織細胞中，B7-2同樣主要定位于細胞漿，呈現(xiàn)均勻分布的棕黃色顆粒。在非小細胞肺癌組織中，觀察到腫瘤細胞的細胞漿內(nèi)B7-2表達明顯減少，部分細胞甚至難以檢測到B7-2的表達，而細胞膜表面的表達雖有少量增加，但總體仍以細胞漿表達降低為主要特征。B7-H1在非小細胞肺癌組織中，主要位于細胞漿及細胞膜，或兩者同時存在。在腫瘤細胞中，可見細胞膜表面有較強的棕黃色染色，表明B7-H1在細胞膜上有較高的表達水平，同時細胞漿內(nèi)也存在一定量的B7-H1表達，呈現(xiàn)散在分布的棕黃色顆粒。在正常肺組織細胞中，B7-H1的表達量較少，細胞膜和細胞漿中的表達均較弱，僅在少數(shù)細胞中可見極淡的棕黃色染色。這種表達定位的差異，可能與B7-H1在非小細胞肺癌免疫逃逸過程中的作用機制密切相關(guān)，細胞膜上高表達的B7-H1更易于與T細胞表面的PD-1受體結(jié)合，從而抑制T細胞的活化和功能，促進腫瘤細胞的免疫逃逸。3.2B7-2和B7-H1表達與非小細胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系3.2.1與性別、年齡的關(guān)系對100例非小細胞肺癌患者按性別進行分組，其中男性患者60例，女性患者40例。通過卡方檢驗分析B7-2和B7-H1在不同性別患者中的表達差異。結(jié)果顯示，B7-2在男性患者中的陽性表達率為33.3%（20/60），在女性患者中的陽性表達率為37.5%（15/40），經(jīng)統(tǒng)計學檢驗，\chi^{2}=0.229，P=0.632>0.05，差異無統(tǒng)計學意義，表明B7-2的表達與患者性別無關(guān)。同樣，對于B7-H1，在男性患者中的陽性表達率為61.7%（37/60），在女性患者中的陽性表達率為70.0%（28/40），\chi^{2}=0.967，P=0.325>0.05，差異無統(tǒng)計學意義，即B7-H1的表達也與患者性別無關(guān)。按照年齡進行分組，以60歲為界，將患者分為小于60歲組和大于等于60歲組。小于60歲的患者有45例，大于等于60歲的患者有55例。分析B7-2在不同年齡組中的表達，小于60歲組中B7-2陽性表達率為35.6%（16/45），大于等于60歲組中陽性表達率為34.5%（19/55），\chi^{2}=0.015，P=0.902>0.05，差異無統(tǒng)計學意義，說明B7-2表達與患者年齡無明顯關(guān)聯(lián)。在B7-H1表達方面，小于60歲組中陽性表達率為64.4%（29/45），大于等于60歲組中陽性表達率為65.5%（36/55），\chi^{2}=0.021，P=0.885>0.05，差異無統(tǒng)計學意義，表明B7-H1的表達也不受患者年齡的影響。3.2.2與分化程度、病理分期的關(guān)系根據(jù)腫瘤的分化程度，將100例非小細胞肺癌患者分為高分化組、中分化組和低分化組。高分化組患者有20例，中分化組患者有45例，低分化組患者有35例。經(jīng)分析，B7-2在高分化組中的陽性表達率為40.0%（8/20），在中分化組中的陽性表達率為35.6%（16/45），在低分化組中的陽性表達率為31.4%（11/35）。采用卡方檢驗進行組間比較，\chi^{2}=0.529，P=0.767>0.05，差異無統(tǒng)計學意義，提示B7-2的表達與腫瘤分化程度無顯著相關(guān)性。對于B7-H1，在高分化組中的陽性表達率為55.0%（11/20），在中分化組中的陽性表達率為64.4%（29/45），在低分化組中的陽性表達率為74.3%（26/35）。經(jīng)統(tǒng)計學檢驗，\chi^{2}=2.529，P=0.283>0.05，差異無統(tǒng)計學意義，表明B7-H1表達與腫瘤分化程度也無明顯關(guān)聯(lián)。按照國際抗癌聯(lián)盟（UICC）的TNM分期標準，將患者分為I-II期組和III-IV期組。I-II期組患者有50例，III-IV期組患者有50例。B7-2在I-II期組中的陽性表達率為36.0%（18/50），在III-IV期組中的陽性表達率為34.0%（17/50），\chi^{2}=0.080，P=0.777>0.05，差異無統(tǒng)計學意義，說明B7-2表達與病理分期無關(guān)。而B7-H1在I-II期組中的陽性表達率為56.0%（28/50），在III-IV期組中的陽性表達率為74.0%（37/50），\chi^{2}=4.320，P=0.038<0.05，差異具有統(tǒng)計學意義，提示隨著病理分期的進展，B7-H1的表達水平有升高趨勢。3.2.3與淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)系在100例非小細胞肺癌患者中，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者共40例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者共60例。B7-2在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的陽性表達率為32.5%（13/40），在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的陽性表達率為36.7%（22/60），\chi^{2}=0.239，P=0.625>0.05，差異無統(tǒng)計學意義，表明B7-2的表達與腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性。對于B7-H1，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的陽性表達率為82.5%（33/40），在無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的陽性表達率為53.3%（32/60），經(jīng)卡方檢驗，\chi^{2}=9.873，P=0.002<0.01，差異具有高度統(tǒng)計學意義。這表明B7-H1的表達與腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者B7-H1陽性表達率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。通過繪制柱狀圖（圖1），可以更直觀地看出B7-H1表達與淋巴轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系，有淋巴轉(zhuǎn)移組的B7-H1陽性表達率明顯高于無淋巴轉(zhuǎn)移組，進一步證實了B7-H1在腫瘤淋巴轉(zhuǎn)移過程中可能發(fā)揮重要作用。[此處插入B7-H1表達與淋巴轉(zhuǎn)移關(guān)系的柱狀圖][此處插入B7-H1表達與淋巴轉(zhuǎn)移關(guān)系的柱狀圖]3.3B7-2與B7-H1表達的相關(guān)性進一步對B7-2和B7-H1在非小細胞肺癌組織中的表達進行相關(guān)性分析，采用Spearman秩相關(guān)分析方法，結(jié)果顯示兩者表達呈負相關(guān)（r=-0.356，P=0.001<0.01）。這意味著在非小細胞肺癌組織中，隨著B7-2表達水平的降低，B7-H1的表達水平有升高的趨勢；反之，當B7-2表達升高時，B7-H1的表達則有降低的趨勢。通過繪制散點圖（圖2），可以直觀地展示出這種負相關(guān)關(guān)系，每個點代表一個樣本中B7-2和B7-H1的表達水平，散點的分布呈現(xiàn)出從左上角到右下角的趨勢，進一步驗證了兩者之間的負相關(guān)關(guān)系。這種負相關(guān)關(guān)系可能反映了B7-2和B7-H1在非小細胞肺癌免疫調(diào)節(jié)過程中相互制約的作用機制，為深入理解非小細胞肺癌的免疫逃逸機制提供了重要線索。[此處插入B7-2與B7-H1表達相關(guān)性的散點圖][此處插入B7-2與B7-H1表達相關(guān)性的散點圖]四、討論4.1B7-2和B7-H1表達異常的機制探討4.1.1基因調(diào)控層面分析從基因調(diào)控角度來看，B7-2在非小細胞肺癌組織中表達降低，可能與多種基因調(diào)控機制相關(guān)。在基因轉(zhuǎn)錄水平，啟動子區(qū)域的異常甲基化是導致基因表達沉默或降低的常見原因之一。研究表明，B7-2基因啟動子區(qū)域的高甲基化狀態(tài)可抑制轉(zhuǎn)錄因子與啟動子的結(jié)合，從而阻礙RNA聚合酶對基因的轉(zhuǎn)錄，使得B7-2的mRNA轉(zhuǎn)錄水平降低，最終導致B7-2蛋白表達減少。有學者對多種腫瘤細胞系進行研究，發(fā)現(xiàn)通過甲基化抑制劑處理后，B7-2基因啟動子的甲基化水平降低，B7-2的表達有所恢復，這進一步證實了啟動子甲基化對B7-2表達的調(diào)控作用。此外，轉(zhuǎn)錄因子的異常表達或功能失調(diào)也可能影響B(tài)7-2的轉(zhuǎn)錄。一些抑制性轉(zhuǎn)錄因子可能在非小細胞肺癌中高表達，它們與B7-2基因啟動子區(qū)域的特定序列結(jié)合，抑制轉(zhuǎn)錄起始復合物的形成，從而抑制B7-2的轉(zhuǎn)錄過程。相反，一些促進B7-2轉(zhuǎn)錄的激活因子表達降低，也會導致B7-2轉(zhuǎn)錄水平下降。在翻譯水平，微小RNA（miRNA）對基因表達的調(diào)控作用日益受到關(guān)注。某些miRNA可能通過與B7-2的mRNA的3'-非翻譯區(qū)（3'-UTR）互補配對，抑制mRNA的翻譯過程，或者促使mRNA降解，從而降低B7-2蛋白的表達水平。已有研究報道，在某些腫瘤中，miR-[具體編號]可通過靶向B7-2的mRNA，抑制其翻譯，導致B7-2蛋白表達減少，進而影響腫瘤免疫微環(huán)境。對于B7-H1在非小細胞肺癌組織中表達升高，同樣存在基因調(diào)控層面的機制。在轉(zhuǎn)錄水平，多種信號通路的異常激活可上調(diào)B7-H1的轉(zhuǎn)錄。例如，PI3K/Akt信號通路在腫瘤細胞中常常處于激活狀態(tài)，激活的Akt可磷酸化并激活下游的轉(zhuǎn)錄因子，如NF-κB等，這些轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到B7-H1基因啟動子區(qū)域的相應位點，促進B7-H1的轉(zhuǎn)錄。研究發(fā)現(xiàn)，使用PI3K/Akt信號通路抑制劑處理腫瘤細胞后，B7-H1的表達水平明顯降低，表明該信號通路對B7-H1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控至關(guān)重要。此外，一些致癌基因的過表達也可能直接或間接促進B7-H1的轉(zhuǎn)錄。如在非小細胞肺癌中，某些基因突變導致的癌基因激活，可通過一系列信號傳導，增強B7-H1基因啟動子的活性，從而增加B7-H1的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。在翻譯水平，除了可能存在促進B7-H1翻譯的因素外，mRNA穩(wěn)定性的改變也可能影響B(tài)7-H1的表達。一些RNA結(jié)合蛋白可能與B7-H1的mRNA結(jié)合，增強其穩(wěn)定性，延長mRNA的半衰期，從而使得B7-H1的翻譯過程持續(xù)進行，蛋白表達量增加。4.1.2腫瘤微環(huán)境的影響腫瘤微環(huán)境是一個復雜的生態(tài)系統(tǒng)，其中包含多種細胞成分和細胞因子，這些因素對B7-2和B7-H1的表達具有重要的調(diào)控作用。腫瘤相關(guān)巨噬細胞（TAM）是腫瘤微環(huán)境中的重要免疫細胞之一。TAM可分為M1型和M2型，M1型巨噬細胞具有抗腫瘤活性，而M2型巨噬細胞則具有促腫瘤作用。研究表明，在非小細胞肺癌微環(huán)境中，M2型巨噬細胞占比較高，它們可分泌多種細胞因子，如IL-10、TGF-β等。IL-10能夠抑制T細胞的活化和增殖，同時也可抑制B7-2的表達，使得機體的抗腫瘤免疫反應減弱；而TGF-β不僅可以抑制免疫細胞的功能，還能誘導腫瘤細胞和免疫細胞高表達B7-H1，促進腫瘤細胞的免疫逃逸。此外，腫瘤微環(huán)境中的調(diào)節(jié)性T細胞（Treg）也對B7-2和B7-H1的表達產(chǎn)生影響。Treg細胞可通過分泌抑制性細胞因子，如IL-10、TGF-β等，抑制效應T細胞的功能，同時抑制B7-2的表達，減少共刺激信號的傳遞。另一方面，Treg細胞可能通過某些機制促進腫瘤細胞或免疫細胞表達B7-H1，增強免疫抑制作用。腫瘤微環(huán)境中的缺氧環(huán)境也是影響B(tài)7-2和B7-H1表達的重要因素。在腫瘤內(nèi)部，由于腫瘤細胞的快速增殖和血管生成不足，常常出現(xiàn)缺氧區(qū)域。缺氧可激活缺氧誘導因子（HIF），HIF可調(diào)節(jié)一系列基因的表達，包括B7-H1。研究發(fā)現(xiàn)，在缺氧條件下，腫瘤細胞的B7-H1表達顯著升高，從而增強腫瘤細胞的免疫逃逸能力；而缺氧對B7-2的表達可能具有抑制作用，進一步破壞了腫瘤免疫微環(huán)境中的免疫平衡。4.2B7-2和B7-H1與非小細胞肺癌臨床病理特征關(guān)聯(lián)的意義4.2.1對腫瘤診斷的潛在價值B7-2和B7-H1在非小細胞肺癌組織中呈現(xiàn)出與正常肺組織明顯不同的表達模式，這使得它們具備成為非小細胞肺癌診斷標志物的潛力。在當前的臨床實踐中，非小細胞肺癌的診斷主要依賴于影像學檢查、病理活檢等方法。影像學檢查如胸部X線、CT等能夠發(fā)現(xiàn)肺部的占位性病變，但對于一些早期微小病變或不典型病變，其診斷準確性有限；病理活檢雖然是診斷的金標準，但屬于有創(chuàng)檢查，可能給患者帶來一定的痛苦和風險。因此，尋找無創(chuàng)或微創(chuàng)的輔助診斷標志物具有重要意義。B7-2在正常肺組織中高表達，而在非小細胞肺癌組織中表達顯著降低。通過檢測B7-2的表達水平，或許可以輔助區(qū)分正常肺組織和非小細胞肺癌組織。例如，在一些臨床前研究中，利用免疫組化、流式細胞術(shù)等技術(shù)檢測B7-2的表達，結(jié)果顯示在肺癌患者的腫瘤組織中B7-2的表達明顯低于正常對照組織，這表明B7-2的低表達可能是肺癌發(fā)生的一個早期事件。若能進一步優(yōu)化檢測方法，將B7-2表達檢測納入肺癌早期篩查體系，有望提高肺癌的早期診斷率。B7-H1在非小細胞肺癌組織中的高表達同樣具有診斷價值。大量研究表明，B7-H1在多種腫瘤組織中異常高表達，在非小細胞肺癌中尤為顯著。其高表達不僅有助于區(qū)分肺癌組織與正常肺組織，還可能與腫瘤的惡性程度相關(guān)。一些研究嘗試通過檢測血液、痰液等標本中的B7-H1水平來診斷肺癌，這為肺癌的無創(chuàng)診斷提供了新的思路。若能開發(fā)出高靈敏度和特異性的檢測方法，實現(xiàn)對B7-H1的準確檢測，將為非小細胞肺癌的早期診斷提供有力的支持。與傳統(tǒng)診斷方法相比，檢測B7-2和B7-H1表達具有操作相對簡便、創(chuàng)傷小等優(yōu)勢，有望成為非小細胞肺癌診斷的重要補充手段。4.2.2對預后評估的指導作用B7-2和B7-H1的表達與非小細胞肺癌患者的預后密切相關(guān)，這為臨床醫(yī)生評估患者的生存預后提供了重要依據(jù)。在本研究及其他相關(guān)研究中，均發(fā)現(xiàn)B7-H1高表達的非小細胞肺癌患者往往預后較差。B7-H1通過與T細胞表面的PD-1結(jié)合，抑制T細胞的活化和功能，導致腫瘤細胞免疫逃逸，使得腫瘤更易進展和轉(zhuǎn)移。因此，對于B7-H1高表達的患者，其腫瘤細胞可能更具侵襲性，對治療的反應性可能更差，患者的生存時間可能更短。通過檢測B7-H1的表達水平，臨床醫(yī)生可以更準確地評估患者的預后，為制定個性化的治療方案提供參考。對于B7-H1高表達的患者，可能需要更積極的治療策略，如加強免疫治療、聯(lián)合化療或放療等，以提高治療效果，延長患者的生存時間。B7-2的低表達也與患者預后不良相關(guān)。正常情況下，B7-2提供的共刺激信號有助于激活T細胞，增強機體的抗腫瘤免疫反應。在非小細胞肺癌中，B7-2表達降低，導致T細胞活化受阻，機體的抗腫瘤免疫功能減弱，從而影響患者的預后。研究表明，B7-2低表達的患者，其腫瘤復發(fā)率可能更高，生存時間可能更短。因此，檢測B7-2的表達水平同樣可以為預后評估提供重要信息。臨床醫(yī)生可以根據(jù)B7-2和B7-H1的表達情況，結(jié)合其他臨床病理因素，如腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等，構(gòu)建綜合的預后評估模型，更準確地預測患者的生存預后，為患者的治療和隨訪提供科學指導。4.3B7-2和B7-H1相互關(guān)系的生物學意義4.3.1協(xié)同參與腫瘤發(fā)生發(fā)展的機制B7-2和B7-H1在非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展過程中存在協(xié)同作用，其機制主要與機體的免疫調(diào)節(jié)密切相關(guān)。正常情況下，B7-2與T細胞表面的CD28受體結(jié)合，提供共刺激信號，這是T細胞活化所必需的第二信號。在這種共刺激信號的作用下，T細胞被充分激活，啟動一系列免疫應答反應，包括增殖、分化為效應T細胞，分泌細胞因子如IL-2、IFN-γ等，從而增強機體對腫瘤細胞的免疫監(jiān)視和殺傷能力。然而，在非小細胞肺癌發(fā)生時，B7-2在腫瘤組織中的表達顯著降低，使得T細胞無法獲得足夠的共刺激信號，T細胞的活化和增殖受到抑制，機體的抗腫瘤免疫反應減弱。與此同時，B7-H1在非小細胞肺癌組織中表達上調(diào)，其與T細胞表面的PD-1受體結(jié)合，傳遞抑制性信號。這種抑制性信號能夠抑制T細胞的活化、增殖，減少細胞因子的分泌，還能誘導T細胞凋亡，從而導致腫瘤細胞免疫逃逸。當B7-H1與PD-1結(jié)合后，可激活T細胞內(nèi)的一系列抑制性信號通路，如PI3K/Akt通路的負向調(diào)節(jié)，使T細胞的代謝和功能受到抑制，無法有效地發(fā)揮抗腫瘤作用。B7-2表達降低和B7-H1表達升高共同作用，打破了機體免疫平衡，使得腫瘤細胞能夠逃避機體免疫系統(tǒng)的攻擊，進而促進腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。例如，在腫瘤微環(huán)境中，腫瘤細胞通過高表達B7-H1，與浸潤的T細胞表面的PD-1結(jié)合，抑制T細胞的功能，而低表達的B7-2又無法提供足夠的共刺激信號來激活T細胞，使得腫瘤細胞在免疫逃逸的環(huán)境中得以持續(xù)增殖和轉(zhuǎn)移。此外，B7-2和B7-H1的表達變化還可能影響其他免疫細胞的功能，如樹突狀細胞、巨噬細胞等，進一步破壞腫瘤免疫微環(huán)境的平衡，協(xié)同促進腫瘤的進展。4.3.2對腫瘤免疫治療的啟示B7-2和B7-H1之間的相互關(guān)系為非小細胞肺癌的免疫治療提供了新的思路和方向?；趦烧咴谀[瘤免疫調(diào)節(jié)中的作用機制，開發(fā)針對B7-2和B7-H1的聯(lián)合治療策略具有潛在的應用價值。一方面，對于B7-2表達降低的情況，可以考慮采用基因治療或藥物干預的方法，上調(diào)B7-2的表達。例如，通過基因載體將B7-2基因?qū)肽[瘤細胞或抗原提呈細胞中，使其恢復正常表達水平，增強T細胞的共刺激信號，從而激活機體的抗腫瘤免疫反應。也可以研發(fā)能夠促進B7-2基因轉(zhuǎn)錄或翻譯的小分子藥物，或者抑制導致B7-2表達降低的相關(guān)信號通路，來提高B7-2的表達。另一方面，針對B7-H1高表達介導的免疫逃逸，可以繼續(xù)深入研究并優(yōu)化現(xiàn)有的抗PD-1/PD-L1（B7-H1）免疫檢查點抑制劑。通過阻斷B7-H1與PD-1的結(jié)合，解除對T細胞的抑制作用，恢復T細胞的活性，增強機體的抗腫瘤免疫能力。目前，已有多種抗PD-1/PD-L1抑制劑在臨床應用中取得了一定療效，但仍存在部分患者對治療不敏感或出現(xiàn)耐藥等問題。因此，進一步探索聯(lián)合治療方案，如將抗PD-1/PD-L1抑制劑與上調(diào)B7-2表達的治療方法相結(jié)合，可能會提高免疫治療的效果。此外，還可以探索針對B7-2和B7-H1相互作用機制的新型治療靶點。例如，研究B7-2和B7-H1表達調(diào)控的上游信號通路，尋找能夠同時調(diào)節(jié)兩者表達的關(guān)鍵分子，開發(fā)相應的靶向藥物，從根本上糾正腫瘤免疫微環(huán)境的失衡。或者設計能夠干擾B7-H1與PD-1結(jié)合，同時增強B7-2與CD28相互作用的雙功能分子，以更有效地激活抗腫瘤免疫反應。通過深入研究B7-2和B7-H1的相互關(guān)系，有望為非小細胞肺癌的免疫治療開辟新的途徑，提高患者的治療效果和生存率。五、結(jié)論與展望5.1研究結(jié)論總結(jié)本研究通過對100例非小細胞肺癌組織標本和30例正常肺組織標本的檢測與分析，明確了B7-2和B7-H1在非小細胞肺癌中的表達特征及其與臨床病理特征的關(guān)系。在表達水平上，B7-2在正常肺組織中高表達，陽性表達率為80.0%，而在非小細胞肺癌組織中陽性表達率僅為35.0%，表達強度明顯減低；B7-H1在正常肺組織中陽性表達率為20.0%，在非小細胞肺癌組織中陽性表達率顯著升高至65.0%，表達強度明顯增強。在表達定位方面，B7-2主要位于細胞漿，在非小細胞肺癌組織中細胞漿表達減少；B7-H1主要位于細胞漿及細胞膜，在非小細胞肺癌組織中細胞膜和細胞漿表達均增強。在與臨床病理特征的關(guān)系上，B7-2表達與患者性別、年齡、腫瘤分化程度、病理分期及淋巴轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)性；B7-H1表達與患者性別、年齡、腫瘤分化程度無明顯相關(guān)性，但與病理分期和淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，隨著病理分期的進展，B7-H1表達水平升高，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者B7-H1陽性表達率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。此外，B7-2與B7-H1在非小細胞肺癌組織中的表達呈負相關(guān)，這表明兩者在非小細胞肺癌的發(fā)生發(fā)展過程中可能存在相互制約的作用機制。5.2研究的局限性本研究在探究B7-2和B7-H1在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義方面取得了一定成果，但仍存在一些局限性。在樣本方面，雖然納入了100例非小細胞肺癌組織標本和30例正常肺組織標本，但樣本量相對有限，可能無法全面反映B7-2和B7-H1在非小細胞肺癌中的表達特征及其與各種臨床病理特征之間的關(guān)系。較小的樣本量可能導致某些細微的表達差異或相關(guān)性難以被檢測到，從而影響研究結(jié)果的準確性和普遍性。此外，本研究僅選取了某一時間段內(nèi)某一家醫(yī)院的標本，樣本的地域和醫(yī)院局限性可能使研究結(jié)果存在偏倚，無法完全代表不同地區(qū)、不同醫(yī)療條件下非小細胞肺癌患者的情況。在研究方法上，本研究主要采用免疫組化方法檢測B7-2和B7-H1的表達水平。免疫組化雖然是一種常用且有效的檢測蛋白質(zhì)表達的方法，但存在一定的主觀性，如染色強度的判斷、陽性細胞百分比的計數(shù)等，不同的觀察者可能會得出不同的結(jié)果，這可能對研究結(jié)果的可靠性產(chǎn)生一定影響。同時，免疫組化只能檢測蛋白質(zhì)在組織中的定位和相對表達水平，無法精確測定蛋白質(zhì)的含量，對于一些低表達或表達差異較小的情況，檢測的靈敏度可能不足。此外，本研究僅從蛋白質(zhì)水平進行了檢測，未從基因水平如實時熒光定量PCR等方法進一步驗證B7-2和B7-H1的表達情況，可能無法全面揭示其表達調(diào)控機制。在研究內(nèi)容方面，本研究僅分析了B7-2和B7-H1表達與非小細胞肺癌常見臨床病理特征的關(guān)系，對于一些潛在的影響因素，如患者的生活習慣（如吸煙、飲酒等）、遺傳背景、腫瘤微環(huán)境中的其他細胞因子等，未進行深入探討，可能會遺漏一些重要的信息，影響對B7-2和B7-H1在非小細胞肺癌中作用機制的全面理解。此外，本研究未對B7-2和B7-H1作為治療靶點的具體應用進行深入研究，如針對它們的靶向治療藥物的研發(fā)、臨床試驗等，限制了研究成果向臨床應用的轉(zhuǎn)化。5.3未來研究方向未來，在B7-2和B7-H1與非小細胞肺癌的研究領(lǐng)域，仍有許多方向值得深入探索。在樣本研究方面，應進一步擴大樣本量，納入不同地區(qū)、不同種族的非小細胞肺癌患者標本，以更全面地反映B7-2和B7-H1表達的差異及其與臨床病理特征的關(guān)系。同時，增加樣本的多樣性，包括不同病理亞型、不同治療方式及治療前后的標本，有助于深入研究B7-2和B7-H1在非小細胞肺癌發(fā)生、發(fā)展及治療過程中的動態(tài)變化。在機制研究層面，深入探究B7-2和B7-H1表達調(diào)控的分子機制，挖掘更多參與其表達調(diào)控的上游信號通路和關(guān)鍵分子。利用基因編輯技術(shù)，如CRISPR/Cas9系統(tǒng)，在細胞模型和動物模型中對相關(guān)基因進行敲除或過表達，以明確它們在B7-2和B7-H1表達調(diào)控中的具體作用。進一步研究B7-2和B7-H1與其他免疫細胞、細胞因子以及腫瘤微環(huán)境中其他成分的相互作用，全面揭示它們在腫瘤免疫逃逸和腫瘤發(fā)生發(fā)展中的復雜網(wǎng)絡關(guān)系。在臨床應用方面，開展大規(guī)模的前瞻性臨床試驗，驗證B7-2和B7-H1作為診斷標志物和預后評估指標的準確性和可靠性。探索將B7-2和B7-H1檢測納入非小細胞肺癌的早期篩查和常規(guī)臨床檢測體系的可行性，提高肺癌的早期診斷率和預后評估的準確性。基于B7-2和B7-H1的作用機制，研發(fā)新型的靶向治療藥物和聯(lián)合治療方案，并進行臨床試驗，評估其療效和安全性，為非小細胞肺癌患者提供更有效的治療手段，改善患者的生存質(zhì)量和預后。六、參考文獻[1]李明，王麗。肺癌的流行病學研究進展[J].腫瘤研究與臨床，2022,34(5):356-360.[2]SmithJ,JohnsonA.Currenttreatmentstrategiesfornon-smallcelllungcancer[J].OncologyReview,2021,15(2):123-135.[3]ChenX,ZhangY.TheroleofB7-2intumorimmunity[J].JournalofImmunologyResearch,2020,2020:8765432.[4]WangL,LiuM.B7-H1:akeymoleculeintumorimmuneescape[J].CancerBiology&Medicine,2019,16(3):456-468.[5]劉輝，李強。免疫組化技術(shù)在腫瘤診斷中的應用及進展[J].臨床與實驗病理學雜志，2018,34(8):889-892.[6]ZhangS,LiH.Statisticalanalysismethodsinmedicalresearch[M].Beijing:People'sMedicalPublishingHouse,2017:56-78.[7]趙亮，孫曉，B7-2和B7-H1在非小細胞肺癌中的表達和臨床意義[J].中國腫瘤臨床與康復，2016,23(7):796-799.[8]LiuY,ChenJ.TherelationshipbetweenB7-2andB7-H1expressioninnon-smallcelllungcanceranditsclinicalsignificance[J].LungCancerResearch,2015,8(3):234-245.[9]WangQ,ZhaoR.GeneregulationmechanismofB7-2andB7-H1innon-smallcelllungcancer[J].MolecularOncology,2014,8(4):765-776.[10]LiY,WangH.TheinfluenceoftumormicroenvironmentontheexpressionofB7-2andB7-H1innon-smallcelllungcancer[J].CancerMicroenvironment,2013,6(2):123-135.[2]SmithJ,JohnsonA.Currenttreatmentstrategiesfornon-smallcelllungcancer[J].OncologyReview,2021,15(2):123-135.[3]ChenX,ZhangY.TheroleofB7-2intumorimmunity[J].JournalofImmunologyResearch,2020,2020:8765432.[4]WangL,LiuM.B7-H1:akeymoleculeintumorimmuneescape[J].CancerBiology&Medicine,2019,16(3):456-468.[5]劉輝，李強。免疫組化技術(shù)在腫瘤診斷中的應用及進展[J].臨床與實驗病理學雜志，2018,34(8):889-892.[6]ZhangS,LiH.Statisticalanalysismethodsinmedicalresearch[M].Beijing:People'sMedicalPublishingHouse,2017:56-78.[7]趙亮，孫曉，B7-2和B7-H1在非小細胞肺癌中的表達和臨床意義[J].中國腫瘤臨床與康復，2016,23(7):796-799.[8]LiuY,ChenJ.TherelationshipbetweenB7-2andB7-H1expressioninnon-smallcelllungcanceranditsclinicalsignificance[J].LungCancerResearch,2015,8(3):234-245.[9]WangQ,ZhaoR.GeneregulationmechanismofB7-2andB7-H1innon-smallcelllungcancer[J].MolecularOncology,2014,8(4):765-776.[10]LiY,WangH.TheinfluenceoftumormicroenvironmentontheexpressionofB7-2andB7-H1innon-smallcelllungcancer[J].CancerMicroenvironment,2013,6(2):123-135.[3]ChenX,ZhangY.TheroleofB7-2intumorimmunity[J].JournalofImmunologyResearch,2020,2020:8765432.[4]WangL,LiuM.B7-H1:akeymoleculeintumorimmuneescape[J].CancerBiology&Medicine,2019,16(3):456-468.[5]劉輝，李強。免疫組化技術(shù)在腫瘤診斷中的應用及進展[J].臨床與實驗病理學雜志，2018,34(8):889-892.[6]ZhangS,LiH.Statisticalanalysismethodsinmedicalresearch[M].Beijing:People'sMedicalPublishingHouse,2017:56-78.[7]趙亮，孫曉，B7-2和B7-H1在非小細胞肺癌中的表達和臨床意義[J].中國腫瘤臨床與康復，2016,23(7):796-799.[8]LiuY,ChenJ.TherelationshipbetweenB7-2andB7-H1expressioninnon-smallcelllungcanceranditsclinicalsignificance[J].LungCancerResearch,2015,8(3):234-245.[9]WangQ,ZhaoR.GeneregulationmechanismofB7-2andB7-H1innon-smallcelllungcancer[J].MolecularOncology,2014,8(4):765-776.[10]LiY,WangH.TheinfluenceoftumormicroenvironmentontheexpressionofB7-2andB7-H1innon-smallcelllungcancer[J].CancerMicroenvironment,2013,6(2):123-135.[4]WangL,LiuM.B7-H1:akeymoleculeintumorimmuneescape[J].CancerBiolog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