臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)教學(xué)實(shí)習(xí)指導(dǎo)

實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)

（供臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)八、五年制試用）

大學(xué)醫(yī)學(xué)部

二零零七年一月

目錄

學(xué)習(xí)目的與要求.......................-----........2

第一單元血液一般檢查...................................3

第二單元尿液及糞便常規(guī)檢查......16

第三單元漿膜腔穿刺液與腦脊髓液檢查--------------------30

第四單元肝臟疾病、腎臟疾病及血糖檢查---------------37

第五單元骨髓細(xì)胞學(xué)檢查--------------------------------48

第六單元止血及凝血障礙檢查----------------------------59

常用檢驗(yàn)項(xiàng)目的參考范圍....................-..........65

實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)實(shí)習(xí)指導(dǎo)

實(shí)習(xí)目的與要求

一、實(shí)習(xí)目的

實(shí)習(xí)課是實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)教學(xué)中的重要組成部分。通過實(shí)習(xí)和學(xué)習(xí)有關(guān)檢驗(yàn)的操作方法，熟悉

和了解一些基礎(chǔ)檢驗(yàn)技術(shù)與程序，進(jìn)一步理解課堂講授的內(nèi)容，達(dá)到理論聯(lián)系實(shí)際的目的。

有些內(nèi)容在課堂上未講授則主要在實(shí)習(xí)課進(jìn)行介紹及示教。

二、實(shí)驗(yàn)室守則

1.進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室前，必須認(rèn)真預(yù)習(xí)實(shí)習(xí)內(nèi)容。

2.進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室時(shí)，必須穿好白大衣，遵守實(shí)驗(yàn)室紀(jì)律，注意保持實(shí)驗(yàn)室的整潔與安靜。

3.實(shí)習(xí)課開始后，應(yīng)仔細(xì)聽取教師的講解，認(rèn)真觀察示范操作及示教標(biāo)本，做到先明了

實(shí)驗(yàn)原理、操作步驟和注意事項(xiàng)后再進(jìn)行操作。

4.某些標(biāo)本如血液、腦脊液、胸腹水、骨髓等的采集有一定困難，在操作或進(jìn)行標(biāo)本檢

驗(yàn)時(shí)，應(yīng)愛護(hù)標(biāo)本，一絲不茍地操作和處理每一件標(biāo)本。有些標(biāo)本可能有潛在的生物傳染性,

在操作時(shí)應(yīng)注意防護(hù)，避免污染自己及他人，在檢驗(yàn)完畢后放置在規(guī)定的垃圾收集容器中。

5.注意理論聯(lián)系實(shí)際，實(shí)事求是。在實(shí)驗(yàn)過程中要認(rèn)真操作，注意檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性和

重復(fù)性；仔細(xì)觀察實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象和分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，并聯(lián)系有關(guān)理論進(jìn)行思考

6.認(rèn)真作好實(shí)習(xí)記錄，正確地書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告，并于每次實(shí)習(xí)后交給輔導(dǎo)教師。

7.愛護(hù)儀器，節(jié)約試劑，用前檢查，用后清點(diǎn)。損壞時(shí)要登記賠償。

8.注意安全，節(jié)水節(jié)電。每次實(shí)習(xí)課后認(rèn)真洗刷實(shí)驗(yàn)用具，并輪流搞好實(shí)驗(yàn)室的清潔衛(wèi)

生。

三、實(shí)習(xí)課安排

實(shí)習(xí)課共安排：8次（可參照各教學(xué)醫(yī)院課表），每次3.5學(xué)時(shí)，具體安排見下表

序號(hào)實(shí)習(xí)內(nèi)容

血液標(biāo)本采集，全血細(xì)胞計(jì)數(shù)（手工、儀器法）：RBC、Hb、Het、WBC、

DC,網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和ESR測(cè)定

二尿液分析（手工、儀器法）：糞便常規(guī)檢查及潛血試驗(yàn)

三漿膜腔穿刺液、腦脊液常規(guī)檢杳

四肝功能（ALT、HBsAg、尿三膽）和腎功能（urea）試驗(yàn)及血糖檢查

五正常骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查

六病理骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查

七止血與凝血障礙檢查（PT、APTT、FDP、DD測(cè)定、血小板計(jì)數(shù)）

第一單元血液一般檢查

實(shí)驗(yàn)一血液標(biāo)本采集

【要求】

1.熟悉毛細(xì)血管與靜脈采血方法。

2.掌握真空采血管的種類與使用。

3.正確分析檢驗(yàn)結(jié)果與血液標(biāo)本采集的關(guān)系。

【原理】

1.毛細(xì)血管采血法：采血針刺破毛細(xì)血管后，用微量吸管吸取所需的血量。

2.靜脈采血法：注射器刺入淺靜脈后，用負(fù)壓吸取所需的血量。

【器材】

一次性消毒采血針、一次性微量吸管、一次性消毒注射器、壓脈帶、枕墊、消毒棉簽（球）。

【試劑】

1.30g/L碘酊

2.75%（V/V）乙醇

【操作步驟】

（一）毛細(xì)血管采血法

1.輕輕按摩受檢者左手無名指指尖腹內(nèi)側(cè)，使局部組織自然充血。

2.用75%乙醇棉球擦拭采血部位，待干。

3.用左手拇指和食指固定采血部位，右手將一次性消毒采血針刺入采血部位，深度約

2?3nlm,立即拔出采血針。

4.用無菌干棉球擦去第一滴血液，待血液自然流出時(shí)，用一次性微量吸血管吸取需要

的血量并放入稀釋液中混勻待用。

5.用無菌干棉球壓住采血部位止血。

（二）靜脈采血法

1.打開一次性注射器包裝，取下針頭無菌帽，將針頭與針筒緊密連接；拉針?biāo)z查有無

阻塞與漏氣，排盡注射器內(nèi)的空氣，套上針頭無菌帽，備用。

2.選擇靜脈。

3.用30g/L碘酊消毒穿刺部位，待碘酹揮發(fā)后，用75%乙醉脫碘，待干。

4.扎壓脈帶，使靜脈充盈暴露。

5.穿刺

（1）抽取所需血量。

（2）用消毒干棉球壓住穿剌部位，拔出針頭，囑咐受檢者按壓數(shù)分鐘.

【注意事項(xiàng)】

1.取血部位的皮膚必須正常，凡局部有水腫、發(fā)炎、紫鉗或凍瘡等均不可穿刺采血。

2.一人一針，防止交叉感染。毛細(xì)血管采血穿刺必須夠深度，使血液自行流出或僅輕施

壓力即可流出。

3.微量吸管的容量必須準(zhǔn)確，內(nèi)腔一定要干燥，否則會(huì)影響吸血量和導(dǎo)致溶血。

4.毛細(xì)血管采血部位以往曾選擇耳垂，雖然疼痛感較輕，但因耳垂末梢血循環(huán)較差，且

易受外界氣溫影響，全血細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果不穩(wěn)定，常造成紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血紅蛋白和血細(xì)胞

比容等結(jié)果比靜脈血高，故現(xiàn)已少用。手指采血雖疼痛感較強(qiáng)，但能獲得較充沛的血量，操

作亦較方便，檢驗(yàn)結(jié)果較恒定，但某些試驗(yàn)結(jié)果仍與靜脈血之間存在一定差異。由于靜脈血

標(biāo)本各項(xiàng)成分相對(duì)恒定，可反映病人整體狀態(tài)，是臨床最常用的檢驗(yàn)標(biāo)本，廣泛用于臨床生

化、血液、免疫、微生物等檢驗(yàn)。

5.目前國(guó)內(nèi)已推廣使用真空定量采血器，它包括穿刺針和真空試管兩部分，試管內(nèi)根據(jù)

不同檢驗(yàn)?zāi)康囊鸭尤肓艘欢康奶囟ㄔ噭?，如抗凝劑、促凝劑或防腐劑等。真空采血具有?/p>

防止血液污染，采血量準(zhǔn)確，便于血液與抗凝劑混勻，有利于自動(dòng)化分析等優(yōu)點(diǎn)。但是，

定注意要正確使用真空采血管，不同檢驗(yàn)項(xiàng)目選擇適當(dāng)?shù)牟裳堋?/p>

6.靜脈采血過程中壓脈帶壓迫時(shí)間不應(yīng)超過半分鐘，否則可引起血液成分活性和含量

的改變。壓脈帶壓迫時(shí)間過長(zhǎng)，靜脈血流被阻塞，引起靜脈濾過壓升高，液體和低分子量物

質(zhì)通過毛細(xì)血管使血液相對(duì)濃縮。同時(shí)，靜脈壓持續(xù)升高時(shí)，流到組織的新鮮血液減少，細(xì)

胞的代謝還繼續(xù)進(jìn)行，使靜脈內(nèi)的代謝產(chǎn)物如乳酸等增加，乳酸堆積又會(huì)使鉀從細(xì)胞中漏出，

使血鉀升高。

7.采血過程中人為的因素可導(dǎo)致溶血。溶血可使紅細(xì)胞破壞，使血紅蛋白和細(xì)胞f勺內(nèi)容

物漏出，對(duì)很多檢驗(yàn)結(jié)果都可能有影響，如使紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血細(xì)胞比容降低；細(xì)胞內(nèi)鉀、乳

酸脫氫酶、轉(zhuǎn)氨酶等漏出引起假性升高。

8.血液標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)送檢，測(cè)定血?dú)鈺r(shí)應(yīng)避免血液與空氣接觸。

9.血液標(biāo)本采集時(shí)還應(yīng)注意受檢者采血的體位、生理節(jié)奏、運(yùn)動(dòng)狀態(tài)、飲食、用藥、吸

煙、飲酒等因素，醫(yī)護(hù)人員應(yīng)了解這些因素對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的影響，在解釋其臨床意義時(shí)應(yīng)給予

注意。

實(shí)驗(yàn)二全血細(xì)胞計(jì)數(shù)

【要求】

了解血細(xì)胞分析儀基石原理，掌握血細(xì)胞分析儀的各項(xiàng)參數(shù)、操作方法與結(jié)果分析，熟

記主要參數(shù)的參考范圍。

一、血細(xì)胞分析各項(xiàng)參數(shù)

【原理】

I.血紅蛋白測(cè)定

（1）策化高鐵血紅蛋白測(cè)定法：血紅蛋白被高鐵氨化鉀氧化為高鐵血紅蛋白，后者再與

制離子結(jié)合形成穩(wěn)定的棕紅色冢化高鐵血紅蛋白（HiCN）,HiCN在540nm波長(zhǎng)處有一吸收

峰，選擇此波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定吸光度，即可求得血紅蛋白濃度（g/L）o

（2）十二烷基磺酸鈉血紅蛋白測(cè)定法：十二烷基磺酸訥（SDS）為一種陰離子表面活性劑,

血液中除硫化血紅蛋白（SHb）外的所有血紅蛋白均可與SDS作用，形成穩(wěn)定的SDS-Hb棕

紅色化合物，SDS-Hb在538nm波長(zhǎng)有一吸收峰，選擇此波氏進(jìn)行測(cè)定吸光度，即可求得血紅

蛋白濃度（g/L）?

2.血細(xì)胞計(jì)數(shù)（紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板）

（1）血細(xì)胞分析儀計(jì)教（電阻抗法）

懸浮在電解質(zhì)溶液中的血細(xì)胞通過儀器的計(jì)數(shù)微孔時(shí)，由于血細(xì)胞相對(duì)于稀樣液是不良

導(dǎo)體，每個(gè)細(xì)胞均擠代等體積的電解質(zhì)溶液在電路上出現(xiàn)?短暫的電阻變化而產(chǎn)生相應(yīng)的脈

沖信號(hào)。脈沖數(shù)被轉(zhuǎn)換為細(xì)胞數(shù)量，脈沖高低與細(xì)胞體積大小成比例。脈沖信號(hào)經(jīng)計(jì)算機(jī)處

理后得出各種血細(xì)胞的數(shù)量、體積等參數(shù)。

（2）顯微鏡計(jì)數(shù)

分別用白細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液（2%冰醋酸）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液（Hayem液）、血小板計(jì)數(shù)稀

釋液（1%草酸錢）將全血進(jìn)行一定倍數(shù)的稀釋，充入血細(xì)胞計(jì)數(shù)池，在顯微鏡下計(jì)數(shù)一定體

積內(nèi)的白細(xì)胞、紅細(xì)胞及血小板，經(jīng)換算得到每升血液中的白細(xì)胞、紅細(xì)胞及血小板的數(shù)量。

3.白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)

（1）血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)

一般的電阻抗型血細(xì)胞分析儀根據(jù)細(xì)胞電阻的大小將白細(xì)胞分成兩群（大細(xì)胞及小細(xì)胞）

或三群（大細(xì)胞、小細(xì)胞及中間細(xì)胞）。采用多種高新技術(shù)，如VCS技術(shù)（電阻抗、電導(dǎo)性及

激光散射）、阻抗與射頻技術(shù)、流動(dòng)細(xì)胞化學(xué)染色、多角度偏振光散射等技術(shù)的血細(xì)胞分析儀

可將白細(xì)胞分成五群或五類。

（2）顯微鏡計(jì)數(shù)

將血液制備成血涂片，晾干，經(jīng)瑞一姬染色后，在顯微鏡下計(jì)數(shù)，分類報(bào)告各類白細(xì)胞

的百分比，根據(jù)白細(xì)胞總數(shù)，可換算成血液中各類白細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量。

【器材】

1.全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（三分群、五分類）

2.光學(xué)顯微鏡

3.改良牛鮑（Neubauer）血細(xì)胞計(jì)數(shù)板

【試劑】

1.血細(xì)胞分析儀配套試劑（稀釋液、溶血?jiǎng)?、清洗液等?/p>

2.白細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液：2%冰醋酸

3.紅細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋液：Hayem液

4.血小板計(jì)數(shù)稀釋液：1%草酸鐵

【操作方法】

（一）全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（三分群）：以SysmexKX-21為例介紹

1.儀器準(zhǔn)備

（I）打開電源之前先檢杳：是否有足量的試劑、稀釋液、溶血?jiǎng)?、打卬紙、并倒空廢液

瓶。

（2）打開電源。

（3）儀器自檢、空白計(jì)數(shù)。

（4）進(jìn)入準(zhǔn)備測(cè)量狀態(tài)。

（5）選擇測(cè)量模式（全血模式或預(yù)稀稀模式）。

2.質(zhì)控物分析

用全血或單項(xiàng)質(zhì)控物在儀器上測(cè)定，其數(shù)值應(yīng)在質(zhì)控物均值±2SD范圍之內(nèi)。

3.標(biāo)本的準(zhǔn)備

（1）全血模式：EDTA-K2抗凝靜脈血2mL

（2）預(yù)稀釋模式:采取20m末梢血，加入5004稀釋液中混勻。

4.標(biāo)本分析

（1）輸入標(biāo)本號(hào)碼。

（2）將測(cè)定標(biāo)本混勻。

（3）將吸樣針插入試管中血液的中部，按下START鍵，當(dāng)聽到蜂鳴器“嘀嘀”響兩聲

后，將標(biāo)本取下。此后等存儀器自動(dòng)測(cè)試、清洗。計(jì)數(shù)完成后得到各項(xiàng)參數(shù)和直方圖。

（二）全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（五分類）：以STKS全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀為例介紹

1.儀器準(zhǔn)備

（1）打開電源之前先檢查：是否有足量試劑，并倒空廢液瓶。

（2）打開電源，儀器自檢，空白計(jì)數(shù)。

（3）質(zhì)控物分析

用全血質(zhì)控物在儀器上測(cè)定，其數(shù)值應(yīng)在質(zhì)控物均值±2SD之內(nèi)。

2.標(biāo)本的準(zhǔn)備

￡口丁人《2抗凝靜脈血2011。

3.標(biāo)本分析

（1）輸入標(biāo)本號(hào)碼。

（2）儀器自動(dòng)將血液混勻，自動(dòng)吸樣。分析完成后得到各項(xiàng)參數(shù)和直方圖。

（三）顯微鏡計(jì)數(shù)法

1.血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的結(jié)構(gòu)

為一特制的長(zhǎng)方形硬質(zhì)玻璃板，中間1/3部分具有“H”形槽溝，橫槽溝上下的平臺(tái)部分

各深0.1mm,成為二個(gè)計(jì)數(shù)池。每臺(tái)有一個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)域，分為9個(gè)大方格，每一個(gè)大方格的面

枳為1mn?。四角的每個(gè)大方格劃分為16個(gè)中方格，供白細(xì)胞計(jì)數(shù)用。中央的一個(gè)大方格用

雙線劃分為25個(gè)中方格，每中方格又劃分為16個(gè)小方格，共為400個(gè)小方格，供紅細(xì)胞計(jì)

數(shù)用。計(jì)數(shù)池之上覆以特制的蓋片（厚度0.4mm、表面平直、質(zhì)地較硬）后構(gòu)成計(jì)數(shù)室。每

個(gè)大方格的體積是0.1mm3（ImmXImmX0.1mm）,參閱圖1、2、3。

蓋片

計(jì)數(shù)板蓋片支持架

圖1血細(xì)胞計(jì)數(shù)板正面圖

計(jì)數(shù)板與蠱片蓋片

間距為0.1mm/

)

放片支架

圖2血細(xì)胞計(jì)數(shù)板側(cè)面圖

■■■■nutiumimi

圖3計(jì)數(shù)池結(jié)構(gòu)

2.紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（redbloodcellcount）

（1）加稀釋液取紅細(xì)胞稀釋液2ml于小試管內(nèi)。

（2）加血用微量吸管取血10可加入紅細(xì)胞稀釋液中，混勻。

（3）充池混勻后充入計(jì)數(shù)池，室溫平放3?5min,待細(xì)胞下沉后顯微鏡下計(jì)數(shù)。

（4）計(jì)數(shù)高倍鏡下計(jì)數(shù)中間大方格內(nèi)四角及中央的5個(gè)雙線中方格內(nèi)紅細(xì)胞總數(shù)。

（5）計(jì)算

將5個(gè)雙線中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)X5X10X200X106=5個(gè)雙線中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)X10口

=紅細(xì)胞數(shù)/L,報(bào)告方式：△.△△X10I2/L

上式中

義5表示把5個(gè)雙線中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)折算為1個(gè)大方格的紅細(xì)胞。

X10表示把1個(gè)大方格容積（0.1mn?或0.13）折算為1川。

X200表示血液稀釋倍數(shù)。

XIO,表示將卜換算為L(zhǎng)o

△.△△X1012表示將紅細(xì)胞數(shù)以小數(shù)點(diǎn)前保留1位數(shù)字乘以10'2形式報(bào)告，如數(shù)

得紅細(xì)胞為450個(gè)則報(bào)告為4.5X10,2/LO

3.白細(xì)胞計(jì)數(shù)（whilebloodcellcount）

（1）加稀釋液取白細(xì)胞稀釋液0.38ml于小試管內(nèi)。

（2）加血用微量吸管取血20pl加入白細(xì)胞稀釋液中，混勻。

（3）溶血混勻后室溫靜置，待液體變?yōu)樽睾稚?/p>

（4）充池混勻后充入計(jì)數(shù)池，室溫平放2?3min,待細(xì)胞下沉后顯微鏡下計(jì)數(shù).

（5）計(jì)數(shù)低倍鏡下計(jì)數(shù)四角4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞數(shù)。

（6）計(jì)算

4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞數(shù)

X10X20X106/L=白細(xì)胞數(shù)/L

4

即四個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)X0.05XI（）9/L

上式中

?4得每個(gè)大方格［即0.1E）內(nèi)白細(xì)胞平均數(shù)。

X10為將一個(gè)大方格的容積0.1M換算為I川。

X20是血液稀釋倍數(shù)，即得1H1血液的白細(xì)胞數(shù)。

義1。6將血液中的白細(xì)胞數(shù)換算為1L血液中的白細(xì)胞數(shù)。如計(jì)數(shù)4個(gè)大方格為

160個(gè)白細(xì)胞,則白細(xì)胞數(shù)為160X0.05X109=8X109/L

注意事項(xiàng)：有核紅細(xì)胞在2%乙酸溶液中并不被破壞，故如病人血液中有較多的有核紅

細(xì)胞時(shí)，對(duì)其“白細(xì)胞數(shù)值”須進(jìn)行校正，方法如下：

①如常法求得白細(xì)胞數(shù)/L（實(shí)為包括幼紅細(xì)胞在內(nèi)的有核細(xì)胞數(shù)/L）o

②同時(shí)推一血涂片，用瑞-姬染色后進(jìn)行白細(xì)胞分類，記錄在分類100個(gè)白細(xì)胞的過程中

所見到的有核紅細(xì)胞數(shù)。

③按下式求出每升血液中真正的白細(xì)胞數(shù)。

100

白細(xì)胞數(shù)/L=校正前”有核細(xì)胞數(shù)”/LX---------------------------------------------------------------------

1。0+分類100個(gè)白細(xì)胞過程中見到有核紅細(xì)胞

舉例：

校正前“有核細(xì)胞數(shù)”為13X109/L,分類計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞過程中見到有核紅細(xì)胞

30個(gè)。

100

則：白細(xì)胞數(shù)/L=13X109/LX---------------------=10X109/L

100+3（）

4.血小板計(jì)數(shù)

（1）加稀釋液取血小板稀釋液0.38ml于小試管內(nèi)。

（2）加血用微量吸管取血203加入血小板稀釋液中，混勻。

（3）充池混勻后充入計(jì)數(shù)池，室溫平放10?15min,待血小板下沉后顯微鏡下計(jì)數(shù)。

（4）計(jì)數(shù)高倍鏡下計(jì)數(shù)中間大方格內(nèi)四角及中央的5個(gè)中方格內(nèi)血小板總數(shù)（PLT）.

（5）計(jì)算PLT=5個(gè)中方格內(nèi)血小板總數(shù)X10'"Lo

【參考范圍】（見表一）

北京市健康成人靜脈血血細(xì)胞分析參考范圍

分析參數(shù)男性女性

RBC(X10l2/L)4.30?5.9()3.90?5.2()

HGB(g/L)137?179116?155

HCT(L/L)0.40?0.520.37-0.47

MCV(fl)80?9880?98

MCH(pg)27.2-34.327.2-34.3

MCHC(g/L)329?360329?360

RDW(%)<14.9<14.9

WBC(X109/L)3.48?9.53.48?9.5

PLT(X109/L)98.7?302.998.7?302.9

MPV(fl)7.7?13.17.7?13.1

PDW(%)<17.2<17.2

PCT(%)0.18?0.200.18-0.20

成年人末梢血全血細(xì)胞分析參考范圍

分析參數(shù)男性女性

RBC(X10,2/L)4.5?5.53.5?5.0

HGB(g/L)120?160110?150

HCT(L/L)40?5037?48

MCV(fl)82?9282?92

MCH(pg)27?3127?31

MCHC(g/L)320?360320?360

WBC(X109/L)4.0-10.04.0?10.0

PLT(X109/L)100?300100~300

【注意事項(xiàng)】

多種因素可引起測(cè)定結(jié)果出現(xiàn)偏差，測(cè)定時(shí)應(yīng)注意預(yù)防并加以糾正。

1.血細(xì)胞分析儀的儀器因素及糾正方法

血細(xì)胞分析儀分析細(xì)胞具有操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確度和精密度高,少量血液就可得到多

項(xiàng)參數(shù)的優(yōu)點(diǎn)，但必須正確使用血細(xì)胞分析儀，否則可出現(xiàn)較大誤差，甚至得出錯(cuò)誤的結(jié)果。

（I）為防止粉塵污染，血細(xì)胞分析儀應(yīng)安放于相對(duì)密閉的環(huán)境中，采血時(shí)切勿混入棉纖

維或粉塵。

（2）必須對(duì)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行性能評(píng)價(jià)，合格后才能用于臨床標(biāo)本分析（不合格時(shí)須進(jìn)

行校準(zhǔn)），而且必須做好室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評(píng)價(jià)，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

（3）不同稀釋液在細(xì)胞計(jì)數(shù)過程中的作用不同，而且試劑性能的好壞如電導(dǎo)率、滲透壓、

離子強(qiáng)度；溶血?jiǎng)┑姆N類、濃度等都可直接影響細(xì)胞直方圖及細(xì)胞數(shù)量的變化，故應(yīng)使用質(zhì)

量合格的試劑，才能得到準(zhǔn)確的結(jié)果，一般使用儀器配套的試劑。

2.病理因素及糾正方法

（1）白血病患者可能因細(xì)胞大小懸殊及粘連成堆等導(dǎo)致誤差，此時(shí)應(yīng)以顯微鏡計(jì)數(shù)法測(cè)

定結(jié)果為準(zhǔn)。

（2）EDTA-K2抗凝的靜脈血可引起個(gè)別患者血小板凝集，導(dǎo)致假性血小板計(jì)數(shù)減少，此

時(shí)，可采用其他抗凝劑進(jìn)行計(jì)數(shù)，如使用枸椽酸鈉抗凝。也可用毛細(xì)血管采血進(jìn)行顯微鏡計(jì)

數(shù)。

3.操作人員技能因素

操作人員素質(zhì)的高低對(duì)血細(xì)胞分析儀結(jié)果的準(zhǔn)確性乜至關(guān)重要。操作人員要有高度的責(zé)

任心、全心全意為病人服務(wù)的意識(shí)：要熟悉血細(xì)胞分析儀的工作原理，維護(hù)保養(yǎng)好儀器，使

儀器始終保持工作最佳狀態(tài)，同時(shí)要做好質(zhì)鼠管理方面的工作，嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程進(jìn)行

操作，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。

二、白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)'、whitebloodcelldifferentialcount,DC）

（-）顯微鏡分類計(jì)數(shù)法

【原理】

Wright-Giemsa（瑞一姬）復(fù)合染液的染料是由酸性伊紅和堿性美藍(lán)所組成。伊紅的鈉鹽

有色部分為陰離子，可與背正電荷的物質(zhì)結(jié)合；氯化美藍(lán)有色部分為陽離子，可與帶負(fù)電荷

的物質(zhì)結(jié)合。二者溶解在日醇中形成可溶性的伊紅化美藍(lán)溶液，既可以固定細(xì)胞乂利于細(xì)胞

蛋白質(zhì)選擇性地吸附其中有色離子而著色。氯化美藍(lán)放置久后可氧化為天青，對(duì)細(xì)胞核染色

加強(qiáng)，色彩更豐富，染色效果更好。

細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用。各種細(xì)胞成分因化學(xué)性質(zhì)不同，

對(duì)染料的親和力也不一樣。故可呈不同的著色特點(diǎn)。例如血紅蛋白、嗜酸性顆粒均為堿性物

質(zhì)，故與酸性染料伊紅結(jié)合而染成紅色。細(xì)胞核的核蛋白與原、幼細(xì)胞的胞質(zhì)為酸性物質(zhì)，

故與堿性染料美藍(lán)和天青相結(jié)合，染成深藍(lán)色或深紫紅色。中性顆粒與美藍(lán)和伊紅同時(shí)結(jié)合

而染為淡紫紅色。瑞氏染粉是由伊紅化美藍(lán)組成，對(duì)胞質(zhì)及中性顆粒的著色性極佳，而姬姆

薩染粉由天青、伊紅組成，對(duì)細(xì)胞核著色較好，結(jié)構(gòu)顯示更清晰。采用瑞一姬氏復(fù)合染液可

兼取二者之長(zhǎng)，取得更好的染色效果。由于蛋白質(zhì)所帶電荷隨溶液的pH而定。在偏酸性環(huán)境

中所帶正電荷增多而親和昔負(fù)電荷的染料伊紅，故著色偏紅。在偏堿性環(huán)境中其負(fù)電荷增多

而親和帶正電荷的美藍(lán)，導(dǎo)致細(xì)胞著色偏灰藍(lán)。因此，為使血涂片=片每次染色效果好且趨于

一致，需配制pH6.4?6.8的緩沖液，使細(xì)胞蛋白質(zhì)在此恒定的環(huán)境中著色。

【操作方法】

1.常規(guī)消毒皮膚，穿刺后拭去第一滴血。

2.用微量吸管吸取約5-10ul血液并置于載玻片的一瑞。

3.將推片的平齊端置載玻片上血液的稍前方，將推片略向后移使其與血液相接觸，血液

遂于推片與載玻片的夾角間散開。

4.以大約30度的夾角向前勻速地推動(dòng)推片，即可制成血涂片。血涂片薄厚度要適中，

襯以白紙時(shí)呈淡的紅黃色，且有頭體尾之分（圖4、5）

圖4血涂片制作方法

尾體頭

圖5制作好的血涂片

5.血涂片干后，在血膜兩端用玻璃蠟筆各劃一線，以防染液流失。滴加瑞一姬復(fù)合染

液數(shù)滴于血涂片上（以蓋住血膜為宜），靜置.約Imin,目的在于用染液的甲醇成分固定血細(xì)胞.

6.加相當(dāng)于染液L5?2倍量的緩沖液并充分混勻。

7.染色約5?l（）min,屆時(shí)可將載有染液的涂片置低倍鏡下觀察，若見白細(xì)胞的核著色

清晰、核漿分明即可用水沖去染液，干燥后鎰檢。

8.鏡檢時(shí)先用低倍鏡選好薄厚適宜、染色良好、細(xì)胞分布均勻處，滴加香柏油一滴，

用油浸鏡觀察。通常計(jì)數(shù)IOO個(gè)白細(xì)胞（必要時(shí)可增加到200或更多）。分類時(shí)移動(dòng)血涂片要

按“之”字形或“城垛”形有秩序的連續(xù)進(jìn)行（見圖6）,同時(shí)將所遇到的各類白細(xì)胞分別記

錄，直到計(jì)數(shù)100個(gè)白細(xì)胞為止，計(jì)算每種白細(xì)胞占總數(shù)的百分比。

圖6血涂片鏡下視野移動(dòng)走向

舉例說明：分類計(jì)數(shù)時(shí)以畫“正”字作如下記錄

中性桿狀核T2

中性分葉核正正正正正正正正正正正正正65

嗜酸粒細(xì)胞T2

嗜堿粒細(xì)胞0

淋巴細(xì)胞正正正正正25

單核細(xì)胞正一6

9.各類白細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn)

（1）中性粒細(xì)胞在瑞一姬染色血涂片上胞體呈圓形，直徑10?13pm,胞質(zhì)染粉紅色，

其中有許多細(xì)小紫紅色顆粒。核形一葉（桿狀核）至五葉不等，以三葉者多見，染為深紫紅

色。

（2）嗜酸性粒細(xì)胞比中性粒細(xì)胞稍大，細(xì)胞核多為兩葉，著色較淡。胞質(zhì)內(nèi)充滿粗大

均勻的嗜酸性顆粒，瑞一姬染色時(shí)成桔紅色，有折光性。

（3）嗜堿性粒細(xì)胞紐胞質(zhì)中含有大小不等的嗜堿性顆粒，瑞一姬法染色時(shí)呈黑藍(lán)色。

在光學(xué)顯微鏡下常見胞質(zhì)中有小空泡，乃因嗜堿性顆粒易溶于水或因功能活躍而脫顆粒所致.

細(xì)胞核呈淡紫紅色，?？床磺宸秩~。

（4）淋巴細(xì)胞胞體呈圓形，直徑介于6?1511m之間，分為大、中、小三型。在成人血

涂片中以小淋巴細(xì)胞多見，直徑6?9Hm。細(xì)胞核大呈深紫色致密而濃染。胞質(zhì)量很少，若可

見，呈淡籃色。大淋巴細(xì)胞直徑12?15wn,胞質(zhì)量較多，呈清澈的淡藍(lán)色，可見少量嗜苯胺

藍(lán)顆粒。中淋巴細(xì)胞的大小及特點(diǎn)介于大、小淋巴細(xì)胞之間。

（5）單核細(xì)胞在瑞一姬氏染色血涂片上直徑為12?20叩】，胞體圓形、橢圓形，但常可

見到偽足。胞質(zhì)一般較多，呈淡灰藍(lán)色，內(nèi)含較多細(xì)小的嗜苯胺藍(lán)顆粒?？梢娦】张?。核形

多種多樣，最重要的特點(diǎn)是染色質(zhì)較細(xì)致疏松，呈絲網(wǎng)狀或條縷狀，故著色較淡。

【參考范圍】

中性桿狀核粒細(xì)胞1-5%

中性分葉核粒細(xì)胞50?70%

嗜酸粒細(xì)胞0.5-5%

嗜堿粒細(xì)胞。?1%

淋巴細(xì)胞20?40%

單核細(xì)胞3?8%

（二）血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞分類過篩應(yīng)用的評(píng)價(jià)

（1）全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀得到的各項(xiàng)分析參數(shù)和體積分布直方圖均正常時(shí)，一般可不做

血涂片染色后顯微鏡油鏡下白細(xì)胞分類，宜接出報(bào)告；但對(duì)已確診或疑為血液病的患者必須

進(jìn)行血涂片染色后顯微鏡泊鏡下白細(xì)胞分類。若為半自動(dòng)血細(xì)胞分析儀且白細(xì)胞分類為兩分

群，應(yīng)做血涂片瑞-姬染色后顯微鏡油鏡下白細(xì)胞分類，白細(xì)胞分類按鏡卜分類結(jié)果報(bào)告。

（2）當(dāng)白細(xì)胞數(shù)量或體積分布直方圖異常時(shí)，應(yīng)作在涂片瑞-姬染色后顯微鏡油鏡下白細(xì)

胞分類，白細(xì)胞分類按鏡下分類結(jié)果報(bào)告。

（3）僅有紅細(xì)胞或血小板分析參數(shù)及其體積分布直方圖異常時(shí)，應(yīng)作血涂片瑞特染色后

顯微鏡油鏡下仔細(xì)觀察紅細(xì)胞、血小板形態(tài)及大致數(shù)量變化，當(dāng)觀察結(jié)果與血細(xì)胞分析儀分

析一致時(shí)可報(bào)告結(jié)果；若差別懸殊，則應(yīng)根據(jù)情況重復(fù)測(cè)定并報(bào)告顯微鏡形態(tài)觀察結(jié)果

實(shí)驗(yàn)三網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（reticulocytecount）

【要求】

了解網(wǎng)織紅細(xì)胞（Ret）的活體染色過程、形態(tài)學(xué)特點(diǎn)、計(jì)數(shù)方法，掌握其參考范圍和臨

床意義。

【原理】

網(wǎng)織紅細(xì)胞是晚幼紅細(xì)胞脫核后到完全成熟的紅細(xì)胞之間的過渡型細(xì)胞。由于其胞質(zhì)中

尚殘存核糖體等嗜堿性物質(zhì)，故經(jīng)煌焦油藍(lán)染液活體染色后，可見有藍(lán)綠色的點(diǎn)狀、線狀或

網(wǎng)織樣結(jié)構(gòu)，故名網(wǎng)織紅細(xì)胞。在細(xì)胞中的網(wǎng)狀狀結(jié)構(gòu)成分愈多，表示網(wǎng)織紅細(xì)胞細(xì)胞越年

輕，反之則更近于成熟紅細(xì)胞。

【器材和試劑】

1.光學(xué)顯微鏡

2.1%煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液：煌焦油藍(lán)1.0g,枸椽酸鈉0.4g,氯化鈉0.85g,蒸儲(chǔ)

水加到100ml,

3.消毒，穿刺取血用具

4.香柏油

5.小口徑試管（V6mm內(nèi)徑），載玻片及推片，目境縮小視野用紙片或米勒窺盤c

【操作方法】

1.小試管中放1%煌焦油藍(lán)生理鹽水溶液1滴，加入病人血液1滴后混勻緊塞管口，待

15min后再混勻，吸出1小滴以約15-30度角推片制備薄涂片。

2.涂片干后，低倍鏡下選擇細(xì)胞分布均勻、著色清晰處，油浸鏡下進(jìn)行觀察。為便于計(jì)

數(shù)，可于接目鏡筒中放一縮小視野用的具有直徑為3mm圓孔的紙片。計(jì)數(shù)1000個(gè)紅細(xì)胞，

記錄其中的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)。即可得出網(wǎng)織紅細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)值。如1000個(gè)紅細(xì)胞中見到6個(gè)網(wǎng)

織紅細(xì)胞，則百分率為0.6%。

3.也可用米勒（Miller）窺盤置入目鏡內(nèi)進(jìn)行計(jì)數(shù)（圖7）；具體方祛是以窺盤的A區(qū)計(jì)

數(shù)紅細(xì)胞，B區(qū)計(jì)數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞，由于B區(qū)的面積為A區(qū)的9倍，故計(jì)算如下：

B區(qū)網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)

網(wǎng)織紅細(xì)胞（％）=----------------------------X10（）%

A區(qū)紅細(xì)胞數(shù)X9

【參考范圍】

成人0.5%?1.5%

初生兒2%?6%

成人網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值（24?84）X109/L

【注意事項(xiàng)】

1.只有活體染色后才能看到網(wǎng)織紅細(xì)胞，故必須將新鮮血與染液相混合，染液與血液之

比一般約為1:1,但若貧血嚴(yán)重也可按1：2關(guān)系處理”應(yīng)注意混合，否則可導(dǎo)致血液凝固。

2.染色時(shí)間不得短于10min,否則可能著色不佳。計(jì)數(shù)前注意多部位觀察，可?于涂片的

體尾交界處選染色好、紅細(xì)胞分布既不過于分散又不重疊的區(qū)域進(jìn)行計(jì)數(shù)。經(jīng)此種染色后紅

細(xì)胞呈清晰的藍(lán)綠色，凡胞質(zhì)中含有深藍(lán)色點(diǎn)狀、短線狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)者均為網(wǎng)織紅細(xì)胞。

3.計(jì)數(shù)時(shí)需注意與異物或假象相區(qū)別.如有異物殘?jiān)?，多呈黑色，轉(zhuǎn)動(dòng)微螺旋時(shí)可見其

折光性。目鏡中粉塵重疊于紅細(xì)胞上所致的假象，則隨接目鏡轉(zhuǎn)動(dòng)而移位。勿將皺縮紅細(xì)胞

的較深染的皺縮點(diǎn)誤認(rèn)為網(wǎng)織結(jié)構(gòu)，皺縮紅細(xì)胞其邊緣處呈均勻的鋸齒狀可以鑒別。

4.染色后的涂片應(yīng)盡快觀察計(jì)數(shù)，否則其網(wǎng)織結(jié)構(gòu)可因久置而溶解消失，尤其在夏天濕

度大的季節(jié)。

5.如擬保留涂片，需用瑞一姬氏復(fù)合染液進(jìn)行復(fù)染，染色方法同白細(xì)胞分類，復(fù)染后的

紅細(xì)胞呈淡紅色，網(wǎng)織結(jié)構(gòu)呈深藍(lán)色。

6.遇再生障礙性貧血等病人，網(wǎng)織紅細(xì)胞非常少時(shí)，可計(jì)數(shù)2000甚至5000個(gè)紅細(xì)胞中

的網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)或數(shù)個(gè)米勒氏窺盤面區(qū)域之后求其百分率。

7.網(wǎng)織紅細(xì)胞的絕對(duì)值可如下求得：①網(wǎng)織紅細(xì)胞的百分率，如為3%。②同時(shí)作病人

的紅細(xì)胞計(jì)數(shù),如3.0X10I2/L,則網(wǎng)織紅細(xì)胞絕對(duì)值為3.0X10I2/LX3%=90X109/L。

實(shí)驗(yàn)四紅細(xì)胞沉降率（erythrocytesedimentationrate,ESR）

【要求】

了解血沉的操作技術(shù)及讀取方法，掌握其參考范圍及臨床意義。

【原理】

血液經(jīng)枸椽酸鈉抗凝后，吸于特制的血沉管中，垂直豎立I小時(shí)，觀察其紅細(xì)胞下沉的

速度，以所暴露出的血漿段的高度（mm）表示。

【器材和試劑】

1.靜脈穿刺用器材，包括壓脈帶、墊枕、無菌注射器（2ml）、2.5%碘酒、75%酒精及

消毒棉簽等。

2.特制的westergren血沉管（全長(zhǎng)300mm,內(nèi)徑2.5mm,具有0~200mm刻度）。

3.Westergren血沉架c

4.106mmol/L枸椽酸鈉溶液

【操作方法】

1.向有2ml刻度的中號(hào)試管中準(zhǔn)確地加入106mol/L枸椽酸納0.4ml.

2.靜脈穿刺后，取血約2ml,拔去針頭注入上述試管內(nèi)，使血量恰達(dá)2ml的劃線處，輕

輕搖動(dòng)混勻。

3.用Westergren血沉管準(zhǔn)確地吸此抗凝血至“。”刻度處，擦凈管尖，垂直豎立于血沉

架上，記時(shí)。lh后讀取血架段的高度。結(jié)果以mm/h表示。

【參考范圍】

男性0?15mm/h

女性。?20mm/h

【注意事項(xiàng)】

1.注射器內(nèi)腔、血沉吸管內(nèi)腔均須干燥，以防溶血。

2.血量與抗凝劑比例應(yīng)嚴(yán)格遵守4：1,并充分濕勻，如有小凝塊則對(duì)血沉下降速度產(chǎn)生

影響。

3.血沉管必須垂直豎立，如有傾斜可致血沉增快。

4.血沉試驗(yàn)應(yīng)及時(shí)進(jìn)行，抗凝血于室溫中最長(zhǎng)不得超過2h,否則水份蒸發(fā)，可使結(jié)果

減慢。

5.嚴(yán)重貧血病人紅細(xì)胞大小不均時(shí)，于1h后血漿與沉積的紅細(xì)胞之間未能形成整齊的

界面，此時(shí)要讀取靠近較緊密沉積的紅細(xì)胞層的刻度作為血沉數(shù)值.

6.中等度以上貧血的病人做血沉測(cè)定時(shí)，可做貧血校正試驗(yàn)。即將病人血用枸椽酸鈉溶

液按9：1比例抗凝，以3000r/min速度離心30min之后，將上層血漿完全吸出，然后按正

常人紅細(xì)胞比積情況，人為地將血漿與壓積紅細(xì)胞按各0.50L/L的比例（男性病人）或按壓

積紅細(xì)胞為0.40L/L,血漿為0.60L/L的比例（女性病人）混合后再作血沉測(cè)定，報(bào)告時(shí)

注明系貧血校正后血沉數(shù)值。

7.血沉測(cè)定時(shí)室溫以18?25°C為宜，溫度越高血沉越快，反之減慢。但有高效價(jià)冷凝

集素時(shí)則相反。必要時(shí)需校止溫度。

病例分析

某患者，女15歲，面色蒼白，乏力，食欲不振。全血細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果為：RBC1.8xIO12/L,

Hb68g/L,HCT0.22,MCV122fl,MCH38pg,MCHC380g/L,RDW-CV25%,Ret1.7%,

WBC4.4X|()9/L,白細(xì)胞分類：中性中幼粒細(xì)胞I%,中性晚幼粒細(xì)胞I%,中性桿狀核粒細(xì)

胞1%,中性分葉核粒細(xì)胞58%,淋巴細(xì)胞37%,單核細(xì)胞2%,PLT80X109/LO

1.試分析該患者血液一般檢查哪些結(jié)果異常？

2.紅細(xì)胞直方圖的分布.情況如何？可能的臨床診斷是什么？還需要進(jìn)一步做哪些檢查？

第二單元尿液及糞便常規(guī)檢查

實(shí)驗(yàn)一尿液分析

【要求】

1.掌握尿液標(biāo)本的種類及采集要求。

2.掌握尿液一般性狀檢查的內(nèi)容及方法。

3.掌握尿液化學(xué)檢查的方法、參考范圍及臨床意義。

4.掌握尿液沉渣檢查的方法、參考范圍及臨床意義。

一、尿液標(biāo)本采集

（一）標(biāo)本的種類

1.隨機(jī)尿即留取任何時(shí)間的尿液。由于方便，門診病人常用，但易受各種因素的影

響，致使低濃度或臨界濃度的病理性物質(zhì)和有形成分易被漏檢。

2.晨尿收集早晨起床后的第一次尿標(biāo)本。人處于夜間睡眠狀態(tài)，尿液傾向于濃縮和酸

化，血細(xì)胞、上皮細(xì)胞及管型等有形成分在酸性環(huán)境中較為穩(wěn)定，此種標(biāo)本最適于腎病患者

尿液的一般檢查。

3.餐后尿通常在餐后2h收集尿標(biāo)本，此標(biāo)本對(duì)病理性蛋白尿和糖尿的檢出更為敏感。

這是由于餐后負(fù)荷增加，使已降低閾值的腎臟不能承受，病理性成分易于發(fā)現(xiàn)。

4.定時(shí)尿應(yīng)從排空尿液開始計(jì)算時(shí)間，將全時(shí)間內(nèi)各次尿液和到時(shí)間后排空膀胱中的

尿液全都送檢。定時(shí)尿最常應(yīng)用的是3h、12h、24h尿。主要用于尿中有形成份和一些化學(xué)

成份的定量。

（二）采集方法

采集尿液的容器應(yīng)為惰性材料制品、具有足夠容積、清潔、干燥，一般由患者或護(hù)理人

員按照醫(yī)囑留取。女性應(yīng)避免月經(jīng)血及陰道分泌物混入，應(yīng)沖洗外陰后，留中段尿檢查。留

12h或24h尿時(shí)應(yīng)適當(dāng)放防腐劑（如甲苯2ml/100ml尿液,40%甲醛液0.2?0.5ml/100ml

尿液，10%鹽酸10ml/24h尿液）。若做細(xì)菌培養(yǎng)，則必須用無菌瓶按無菌操作留取中段尿，

必要時(shí)用無菌手術(shù)導(dǎo)尿送檢。

二、尿液理學(xué)檢查

1.尿量正常成人每晝夜尿量常在1（）00~2000ml之間，平均為1500ml。尿量增多見

于糖尿病、尿崩癥、慢性仔炎（尿液濃縮功能隙礙）等。尿量減少見于急性腎炎、高熱、水

腫、休克及各種原因所致的急性腎功能不全。無尿見于嚴(yán)重急性腎功能不全。

2.顏色正常尿液為淡黃或黃色。病理性可見乳糜尿、血尿、血紅蛋白尿及膽紅素尿

等。

3.透明度正常新鮮尿液多透明，放置后可出現(xiàn)微帚:絮狀沉淀。若新鮮尿明顯混濁可見

以下情況：①尿酸鹽沉淀，以粉紅色結(jié)晶析出，多見于酸性尿液冷卻后，加熱或加堿后混濁

消失；②磷酸鹽和碳酸鹽沉淀，淡灰白色結(jié)晶析出，多見于堿性或中性尿液。加酸后混濁消

失。若沉淀為碳酸鹽則可產(chǎn)生氣泡，磷酸鹽則無氣泡產(chǎn)生；③膿尿和菌尿呈云絮狀沉淀，加

熱加酸其混濁均不消失。

4.比密測(cè)定

（1）將尿混勻后沿管壁慢慢倒入量筒內(nèi)，避免發(fā)生氣泡，如有氣泡可用毛細(xì)吸管或吸水

紙吸去。

（2）將比密計(jì)（上有1.000-1.060刻度）輕輕放于尿液內(nèi)，使其懸浮于中央，勿觸及筒

壁或簡(jiǎn)底。

（3）等比密計(jì)停穩(wěn)后，讀取與尿液凹面相切的刻度，即為被測(cè)尿液的比密。

（4）結(jié)果判斷：正常人比密為1.015?1.025之間。急性腎炎尿量少，比密高；而慢性腎

炎尿量多，比密低；糖尿病病人，尿量雖多，但尿內(nèi)含有糖，故比密而。尿崩癥、慢性腎功

能不全，尿比密常在1.010左右形成低比密尿。

（5）注意事項(xiàng)：①尿量太少，不足以浮起比密計(jì)時(shí)，可用蒸儲(chǔ)水將尿液稀釋1倍后再行

測(cè)定.其結(jié)果應(yīng)將讀數(shù)末尾兩位數(shù)字乘2,即得原尿液比密。②尿比密計(jì)應(yīng)保持清潔，特別

是比密計(jì)的球部不能附有蛋白質(zhì)，不用時(shí)放干凈水中泡洗后保存。③測(cè)比密時(shí)若尿液的溫度

（室溫）與比密計(jì)上所注明溫度不一致時(shí)，每高3°C測(cè)得結(jié)果則應(yīng)增加0.001；每低3c時(shí)

則應(yīng)減去0.001。④蛋白尿和糖尿按每增加l（）g/L,從尿比密中分別減去0.003（對(duì)蛋白質(zhì)而

言）或0.004（對(duì)糖而言）。

三、尿液化學(xué)檢查

（一）尿蛋白定性試驗(yàn)

1.加熱乙酸法

【原理】

加熱煮沸使蛋白質(zhì)變性凝固，加酸使pH下降，接近蛋自質(zhì)的等電點(diǎn)（pH5左右），可促

進(jìn)蛋白質(zhì)的沉淀，并可使加熱析出的磷酸鹽、碳酸鹽溶解。

【器材和試劑】

1.試管

2.滴管

3.5%乙酸溶液

【操作方法】

取15X150mm試管1只，加入清晰尿液至管的2/3高度。用試管夾持試管下端，

將試管上部斜置在火焰上加熱，煮沸即止。輕輕直立試管，在黑色背景下觀察煮沸部分有無

混濁。滴入5%乙酸溶液3?4滴，再煮沸后立即觀察，如無混濁出現(xiàn)即為陰性。如有混濁即

為陽性，按下表判斷結(jié)果。

加熱乙酸法結(jié)果判斷

結(jié)果符號(hào)約含蛋白質(zhì)（g/L）

仍清晰——0

黑色背景下輕微渾濁±<0.1

白色渾濁，無顆粒及絮片沉淀+0.1?0.5

明顯白色顆粒狀渾濁，但無絮片沉淀0.5?2.0

大量絮片狀渾濁，無凝固塊+++2.0?5.0

出現(xiàn)凝固塊并有大量絮片狀沉淀++++>5.0

【注意事項(xiàng)】①尿液標(biāo)本要新鮮，陳舊尿液因大量細(xì)菌生長(zhǎng)可引起假陽性。標(biāo)本內(nèi)含有

其它分泌物（如女性生殖及泌尿道分泌物）也能出現(xiàn)假陽性。②尿蛋自含量很少時(shí)，加酸再

加熱后始出現(xiàn)混濁。因此，操作時(shí)必須遵照加熱、加酸、再加熱的程序。加入乙酸量也要適

當(dāng)。過多或過少均可使陽性反應(yīng)程度減弱。③長(zhǎng)期限鹽病人因尿液電解質(zhì)含量減少，可致假

陰性。因此，試驗(yàn)時(shí)先滴加飽和氯化鈉1?2滴于尿液中，再進(jìn)行操作。

（2）磺基水楊酸法

【原理】

磺基水楊酸亦稱磺柳酸，為生物堿試劑，在略低于等電點(diǎn)的酸性環(huán)境下，其陰離子（酸

根）與蛋白質(zhì)的氨基端陽離子結(jié)合，成為不溶的蛋白鹽而沉淀。

【器材和試劑】

1.試管

2.滴管

3.20g/L磺基水楊酸溶液

【操作方法】

取試管2只，各加入弱酸性清晰尿1ml,于一管中加120g/L磺基水楊酸溶液2滴，輕輕

混勻，另一管不加試劑做空白對(duì)照，1分鐘內(nèi)立即觀察結(jié)果，結(jié)果判斷如下表。

___________________磺基水楊酸法結(jié)果判斷_________________________

符號(hào)結(jié)果一

（一）尿液外觀仍清一透明

極微量?jī)H在黑色背景前可見極輕微混濁

微量不需黑色背景即可見到輕度混濁

（+）明顯的白色混濁但無顆粒出現(xiàn)

（++）明顯混濁并出現(xiàn)顆粒

（+++）更明顯混濁并有絮片狀沉淀

（++++）嚴(yán)重混濁并有大凝塊下沉

【注意事項(xiàng)】①混濁尿應(yīng)離心后取上清液做試驗(yàn)；②本法非常敏感，判斷結(jié)果時(shí)間應(yīng)

嚴(yán)格控制在1分鐘內(nèi)；③尿液堿性較強(qiáng)時(shí)，滴加試劑后局部出現(xiàn)白色混濁，但輕搖即消失，

應(yīng)于尿液內(nèi)加入冰乙酸數(shù)滴，酸化尿液至pH5再作試驗(yàn)：④尿中含高濃度尿酸或尿酸鹽時(shí)可

呈假陽性反應(yīng)，特點(diǎn)為滴加試劑15秒后，尿液逐漸呈蛛絲狀混濁，其后慢慢獷散，薄薄覆蓋

于尿液表面，加熱或加堿可迅速消失。

（二）尿液葡萄糖測(cè)定

1.葡萄糖氧化酶試帶法

【原理】

前萄糖氧化酶催化葡萄糖形成菊萄糖酸和過氧化氫，過氧化物酶再催化過氧化氫和鄰聯(lián)

甲苯胺色原反應(yīng)呈現(xiàn)黃綠色至藍(lán)色。

【操作方法】將試帶浸入尿中，1秒鐘后取出與標(biāo)準(zhǔn)色板比較并報(bào)告。

【參考范圍】尿糖陰性

2.尿葡萄糖定量測(cè)定（葡萄糖氧化酶法）

【原理】見血糖測(cè)定

【操作方法】

先做尿糖定性試驗(yàn)，大概可估計(jì)出尿糖量，然后用蒸儲(chǔ)水稀釋尿液在含糖量約“+”范

圍。其余操作同血糖，結(jié)果乘以稀群倍數(shù)。

【參考范圍】定量：0.56?5.0mmol/24h

四、尿液自動(dòng)化分析儀檢查

【原理】

試紙條以濾紙為載體，將各種試劑成分浸漬后干燥，作為試劑層，再在表面覆蓋一層纖

維膜，作為反射層。尿液自動(dòng)化分析儀是用球面積分儀和雙波長(zhǎng)法測(cè)定試劑帶上各種試劑墊

和尿液接觸后出現(xiàn)的不同顏色變化，分別在數(shù)碼管上顯示，并打印出報(bào)告。試帶上另有一個(gè)

試劑墊補(bǔ)償區(qū)，作為尿液不底顏色，以對(duì)有色尿液及儀器變化等因素產(chǎn)生的誤差進(jìn)行補(bǔ)償。

下面簡(jiǎn)介各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)原理。

1.pH采用酸堿指示劑法，試劑墊上含有甲基紅（pH閾值4.6?6.2）和澳廨香草酚蘭（pH

閾值6.0?7.6）,二者適量配合可反映尿液pH5.0?9.0的變化范圍。在酸性尿中為橙紅色到黃

色，堿性尿中為綠色到藍(lán)色。

2.尿比密采用多聚電解質(zhì)離子解離法，試紙條中的多聚（甲基酸）馬來酎的PKa值與

離子濃度相關(guān)，尿標(biāo)本中離子濃度越高，其酸性基團(tuán)（氫離子）解離越多，使膜塊pH改變，

并通過浪麝香草酚蘭的顏色變化顯示出來，低離子濃度為藍(lán)綠色離子濃度升高轉(zhuǎn)為黃綠色，

進(jìn)而換算成尿比密。

3.尿蛋白質(zhì)采用指示劑蛋白質(zhì)誤差法。試帶上的酸堿指示劑漠酚藍(lán)的變色范圍是

pH3.0?4.6,在pH3.2的枸椽酸緩沖系統(tǒng)中澳酚藍(lán)指示劑的陰離子與尿液中的蛋白質(zhì)作用，

產(chǎn)生黃綠色顏色變化，呈色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。

4.尿他萄糖采用前萄糖氧化酶-過氧化物酶法，箱葡糖氧化酶催化輻萄糖形成葡荀糖酸

和過氧化氫，后者與色原在過氧化物酶的作用下，呈現(xiàn)色澤變化，呈色深淺與葡萄糖含量呈

正比。

5.酮體采用亞硝基鐵氯化鈉法。亞硝基鐵氟化鈉與尿中的乙酰乙酸、丙酮產(chǎn)生紫色反

應(yīng)，顏色深淺與酮體含量成正比。

6.膽紅素采用偶氮反應(yīng)法。結(jié)合膽紅素在強(qiáng)酸介質(zhì)中與2,4.二氯苯胺重氮鹽起偶聯(lián)

反應(yīng)，呈紫紅色，顏色深淺與膽紅素含量成正比。

7.尿膽原采用醛反應(yīng)法或重氮反應(yīng)法。尿膽原在酸性條件下與對(duì)-二甲氨基苯甲醛作用，

生成櫻紅色化合物，顏色深淺與尿膽原含量成正比。

8.亞硝酸鹽采用亞硝酸鹽還原法。引起泌尿道感染的某些細(xì)菌可使硝酸鹽還原為亞硝

酸鹽，將膜塊中對(duì)?氨基苯珅酸重氮化生成重氮鹽，再與N-1-蔡乙二胺二鹽酸化合物偶聯(lián)使膜

塊產(chǎn)生粉紅色，顏色深淺與亞硝酸鹽含量成正比。

9.白細(xì)胞采用粒細(xì)胞酯的法。中性粒細(xì)胞中存在熔異性酯隨，可分解用噪酚酯，釋放

出口引珠酚，口引味酚與重氮鹽發(fā)生反應(yīng)而呈紫色，依其顯色之深淺而換算為白細(xì)胞數(shù)。

10.尿血紅蛋白或紅細(xì)胞采用血紅蛋白類過氧化物酶法。尿中紅細(xì)胞內(nèi)或其破壞釋放

的血紅蛋白均含有血紅素成分，它具有類似過氧化物酶樣活性，使過氧化氫茴香素分解出新

生態(tài)氯，氧化色素原而顯色。

11.維生素C采用還原法.維生素C在酸性條件下，將氧化態(tài)粉紅色的2,6-二氮酚靛

染料還原為無色的2,6-二氯二對(duì)酚胺。

【儀器和試劑】

1.尿液自動(dòng)化分析儀

2.標(biāo)準(zhǔn)試帶和測(cè)定試帶

3.陰性與陽性質(zhì)控液

【操作方法】

I.開機(jī)預(yù)熱、自檢。

2.取標(biāo)準(zhǔn)試帶（儀器自帶），同時(shí)取測(cè)定試帶二條分別于陰性、陽性質(zhì)控液中浸泡（浸

泡時(shí)間按儀器廠家要求）后取出并在質(zhì)控液瓶壁刮去多余尿液，立即依次將標(biāo)準(zhǔn)試帶，陰性、

陽性質(zhì)控測(cè)定試帶放入比色槽，按“運(yùn)行”鍵，儀器即自動(dòng)打印出各種結(jié)果。如結(jié)果在允許

范圍內(nèi)，即可行止式檢測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)試帶是各種成分定值的顏色，不能浸質(zhì)控液，用后立即收回

保存，可重復(fù)使用。

3.將測(cè)定試帶浸于待測(cè)新鮮而且混勻的尿液中一定時(shí)間（按儀器說明）取出刮去多余尿

液。放入比色槽，按運(yùn)行鍵，即可獲得打印報(bào)告。

【參考范圍】

pH4.6?8.0

蛋白質(zhì)（PRO）neg(<0.3g/L,30mg/di)

葡萄糖（GLU）norm(<2.8mmol/L,50mg/d1)

酮體（KET）neg(<0.86mmol/L,5mg/d1)

尿膽原（UBG）norm(<17pmol/L,1mg/dl)

膽紅素（BIL）neg(8.55pmol/L,0.5mg/dl)

亞硝酸鹽（NIT）