DB15Detectionforcoliforms2020-02-25發(fā)布內(nèi)蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局發(fā)布本標準按照GB/T1.1-2009給I動物墊料中大腸菌群檢測本標準規(guī)定了動物墊料中大腸菌群MPN計數(shù)法和GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和GB/T8170數(shù)值修約規(guī)則與極限數(shù)值的表菌落形成單位colonyforming在瓊脂平板上經(jīng)過一定溫度和時間培養(yǎng)后形成的每一個菌落，是計算細菌或霉菌數(shù)目的單位。14檢驗原理MPN計數(shù)法是統(tǒng)計學和微生物學相結合的一種定量檢測法。待測樣品經(jīng)系列稀釋并培養(yǎng)后，根據(jù)其4.2平板計數(shù)法5儀器和設備5.1恒溫培養(yǎng)箱：36℃±1℃。5.2冰箱：2℃~5℃。5.5均質(zhì)器。5.6漩渦混合器。5.7高壓滅菌器。5.8菌落計數(shù)器。5.9無菌試管：18mm×180m5.11無菌濾膜均質(zhì)袋。5.12無菌錐形瓶：500mL。5.15無菌培養(yǎng)皿：15mm×905.19無菌勺。6.2月桂基硫酸鹽胰蛋白胨(laurylsulfatetryptose，LST)肉湯6.3煌綠乳糖膽鹽(brilliantgreenlactosebile，BGLB)肉湯：6.4結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(violetredbileagar，VRBA)：）：2）：樣品采集應遵循隨機性、代表性的原則。采樣過程遵循無菌操作對送檢樣品包裝內(nèi)不同部位樣品進行隨機多點取樣至少250g，充分混勻后稱取25g顆粒狀或粉末狀墊料樣品，加入225mL無菌稀釋液（磷酸鹽緩沖鹽水）的棉拭子，在規(guī)格板內(nèi)來回均勻涂抹整個方格3次，并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子，然后用滅菌剪刀剪去棉拭子與手接觸的部分，將棉拭子頭置入裝有25mL無菌稀釋液的無菌錐形瓶中，根據(jù)樣品面積大小重復采樣1～4個規(guī)格板面積，采樣量見表1，相應地將棉拭子頭置入25mL～100mL的無菌搖制成樣品原液（1mL原液對應的樣品面積為1cm2）。取1mL樣品原液注入含有9mL無菌稀釋液的試1234），3），±1℃培養(yǎng)24h±2h，觀察導管內(nèi)是否有氣泡產(chǎn)生，24h±2h產(chǎn)氣者進行復發(fā)酵試如未產(chǎn)氣則繼續(xù)培養(yǎng)至48h±2h，產(chǎn)氣者進行復發(fā)酵試驗。未產(chǎn)氣者為大腸菌群陰性。），8.3.2及時將約15mL～20mL融化并恒溫至45℃~50℃的結晶紫中性紅膽鹽瓊脂（VRBA)傾注于每個平皿中。小心旋轉(zhuǎn)平皿，使培養(yǎng)基與樣液充選取菌落數(shù)在15CFU～150CFU之間的平板，分別計數(shù)平板上出現(xiàn)的典型和可疑大腸菌群菌落。典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑為0菌落。分別移種于BGLB肉湯管內(nèi)，36℃±1℃培養(yǎng)24h～48h，觀8.6大腸菌群平板計數(shù)結果計算與報告48.6.1.1若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，分別計算經(jīng)最后證實為大腸菌群陽性-2樣品稀釋液的2個VRBA平板上分別有82個和648.6.1.2若有2個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，ΣC——平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）證實為大腸菌群陽性的菌落數(shù)之和；1——第一稀釋度（低稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；2——第二稀釋度（高稀釋倍數(shù)）平板個數(shù)；8.6.2.2大腸菌群平板計數(shù)結果大于或等于100CFU時，第3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)來表示結果；也可用10的指數(shù)形式來表示，此時按照“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字。具體修約規(guī)則按照GB8.6.2.3若空白對照平板上有大腸菌群菌落出現(xiàn)，則此次檢驗結果無效。5培養(yǎng)基和試劑A.1培養(yǎng)基制備及質(zhì)量保證A.2月桂基硫酸鹽胰蛋白胨(LST)肉湯A.2.1成分A.2.2制法A.3煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯A.3.2制法準確稱取以上成分，加1000mL蒸餾水，加熱煮沸至完全溶解，調(diào)節(jié)pHA.4結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRB6A.4.2制法將培養(yǎng)基融化并恒溫至45℃~50℃傾注平板。使用前3h內(nèi)制備。A.5磷酸鹽緩沖液A.5.1成分A.5.2制法貯存液：稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中，用大約175mL的1mol/L氫氧化鈉稀釋液：取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌1A.6無菌生理鹽水A.6.1成分A.6.2制法A.7.1成分mL蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min備用。7A.7.2制法A.8.1成分A.8.2制法量取濃鹽酸90mL，用無菌蒸餾水稀釋至8每g(cm2)檢樣中大腸菌群最可能數(shù)(MPN)的檢MPNMPN000—2200012210102220112300202310303001003011013021023109110311111312120