pcr上崗證考試題庫及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR的中文名稱是（）A.聚合酶鏈反應B.連接酶鏈反應C.核酸內切酶反應D.核酸外切酶反應答案：A2.PCR反應中，哪種酶起關鍵作用（）A.逆轉錄酶B.TaqDNA聚合酶C.限制酶D.RNA聚合酶答案：B3.在PCR反應中，引物的作用是（）A.提供起始合成的3'-OH末端B.提供起始合成的5'-OH末端C.提供模板D.提供能量答案：A4.PCR反應的三個基本步驟不包括（）A.變性B.退火C.延伸D.連接答案：D5.以下哪種物質不是PCR反應體系的基本成分（）A.模板DNAB.dNTPsC.引物D.蛋白質酶K答案：D6.PCR反應中，變性溫度一般為（）A.90-95℃B.70-75℃C.50-55℃D.30-35℃答案：A7.以下關于PCR的說法錯誤的是（）A.可以用于基因擴增B.具有很高的特異性C.只能擴增DNA不能擴增RNAD.靈敏度高答案：C8.在PCR反應中，退火溫度主要取決于（）A.模板的長度B.引物的長度和GC含量C.dNTPs的濃度D.Taq酶的活性答案：B9.PCR產物的特異性主要取決于（）A.模板B.引物C.Taq酶D.dNTPs答案：B10.以下哪種情況可能導致PCR假陽性結果（）A.反應體系中模板量過少B.引物設計不合理C.嚴格的實驗室分區(qū)管理D.樣本中無目標核酸答案：B二、多項選擇題（每題2分，共10題）1.PCR反應體系的基本成分包括（）A.模板DNAB.引物C.dNTPsD.TaqDNA聚合酶E.緩沖液答案：ABCDE2.影響PCR擴增效率的因素有（）A.引物質量B.模板質量C.Taq酶活性D.反應體系的離子濃度E.退火溫度答案：ABCDE3.PCR技術在以下哪些領域有應用（）A.醫(yī)學診斷B.法醫(yī)學鑒定C.基因克隆D.基因表達研究E.物種鑒定答案：ABCDE4.以下關于引物設計的原則正確的是（）A.長度一般為15-30bpB.GC含量在40%-60%C.避免引物自身形成二級結構D.引物之間不能有互補序列E.3'端最好是G或C答案：ABCDE5.在PCR實驗中，防止污染的措施包括（）A.實驗室合理分區(qū)B.使用一次性耗材C.實驗前后對儀器設備消毒D.嚴格的操作流程E.對樣本進行預處理答案：ABCD6.以下哪些是PCR的特點（）A.特異性強B.靈敏度高C.操作簡便D.可用于微量樣本檢測E.快速高效答案：ABCDE7.對于RNA模板進行PCR擴增，需要（）A.先進行逆轉錄反應B.特殊的引物設計C.更高的反應溫度D.更多的dNTPsE.特殊的Taq酶答案：A8.PCR產物的分析方法有（）A.瓊脂糖凝膠電泳B.聚丙烯酰胺凝膠電泳C.測序D.熒光定量分析E.酶切分析答案：ABCDE9.在PCR反應中，以下哪些情況可能導致無擴增產物（）A.模板降解B.引物失效C.Taq酶失活D.反應體系配制錯誤E.退火溫度過高答案：ABCDE10.以下關于PCR實驗室的要求正確的是（）A.有嚴格的分區(qū)B.良好的通風系統(tǒng)C.合適的溫濕度控制D.配備專用的儀器設備E.有防污染措施答案：ABCDE三、判斷題（每題2分，共10題）1.PCR只能用于檢測DNA，不能檢測RNA。（×）2.引物的長度越長，PCR擴增的特異性越高。（×）3.Taq酶在高溫下容易失活。（×）4.PCR反應體系中dNTPs的濃度越高越好。（×）5.只要有合適的引物，任何DNA都可以進行PCR擴增。（×）6.瓊脂糖凝膠電泳可以用來檢測PCR產物的大小。（√）7.在PCR反應中，退火溫度越高，引物與模板的結合越牢固。（×）8.一個好的引物3'端最好不要是A。（√）9.PCR實驗室不需要進行特殊的分區(qū)管理。（×）10.所有的Taq酶都具有相同的活性和特性。（×）四、簡答題（每題5分，共4題）1.簡述PCR反應的基本原理。答案：PCR反應基于DNA的半保留復制原理。在反應體系中，模板DNA在高溫下變性解鏈為單鏈，然后在低溫下引物與模板單鏈的互補序列退火結合，接著在合適溫度下，TaqDNA聚合酶以dNTPs為原料，從引物的3'-OH端開始延伸合成新的DNA鏈，經過多次循環(huán)實現(xiàn)目的基因的擴增。2.說明PCR實驗中防止污染的重要性及主要措施。答案：防止污染很重要，因為污染會導致假陽性結果。主要措施包括實驗室合理分區(qū)（如試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增區(qū)、產物分析區(qū)等），使用一次性耗材，實驗前后對儀器設備消毒，嚴格按照操作流程進行實驗。3.簡述引物設計的主要原則。答案：引物設計原則包括：長度15-30bp，GC含量40%-60%，避免自身形成二級結構，引物間無互補序列，3'端最好為G或C等，這些原則有助于提高PCR擴增的特異性和效率。4.簡述PCR技術在醫(yī)學診斷中的應用。答案：在醫(yī)學診斷中可用于檢測病原體（如病毒、細菌等）的核酸，診斷遺傳性疾病，進行腫瘤相關基因檢測，監(jiān)測疾病治療過程中的基因變化等。五、討論題（每題5分，共4題）1.討論如何提高PCR擴增的特異性。答案：可從引物設計方面入手，保證引物特異性（如合適長度、GC含量、避免二級結構等）；優(yōu)化反應條件，如選擇合適的退火溫度、Taq酶量、dNTPs濃度等；保證模板的純度，避免雜質干擾。2.分析PCR實驗室分區(qū)管理的意義。答案：分區(qū)管理可防止污染。試劑準備區(qū)避免試劑受污染，樣本處理區(qū)防止樣本間交叉污染，擴增區(qū)保證擴增反應準確，產物分析區(qū)防止產物對其他區(qū)域污染，提高檢測準確性。3.探討在RNA為模板進行PCR時需要注意的問題