EG-1mRNA表達(dá)：解鎖甲狀腺癌與乳腺癌預(yù)后密碼一、引言1.1研究背景與意義甲狀腺癌和乳腺癌作為常見(jiàn)的惡性腫瘤，嚴(yán)重威脅著人類的健康。近年來(lái)，它們的發(fā)病率呈現(xiàn)出顯著的上升趨勢(shì)，給全球公共衛(wèi)生帶來(lái)了沉重的負(fù)擔(dān)。甲狀腺癌約占全身惡性腫瘤的1%，在神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤中占比超過(guò)90%。國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，2020年中國(guó)甲狀腺癌發(fā)病例數(shù)達(dá)22.1萬(wàn)，已成為全國(guó)發(fā)病率第七名的癌種。盡管甲狀腺癌在所有惡性腫瘤中預(yù)后相對(duì)較好，但不同病理類型、臨床分期等因素會(huì)導(dǎo)致其預(yù)后存在較大差異。其發(fā)病與多種因素相關(guān)，包括電離輻射（尤其是兒童時(shí)期的輻射暴露）、碘攝入量異常、遺傳因素以及某些環(huán)境污染物等。乳腺癌則是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，2020年新發(fā)病例數(shù)達(dá)226萬(wàn)人，首次超過(guò)肺癌，成為“全球第一大癌”。在我國(guó)，乳腺癌在城市中的發(fā)病率位居女性惡性腫瘤的第二位，在一些大城市中甚至躍居首位，農(nóng)村中女性乳腺癌的發(fā)病率居于第五位。其發(fā)病原因十分復(fù)雜，家族性乳腺癌相關(guān)的基因如BRCA1、BRCA2、P53等異常，絕經(jīng)后高雌激素水平、雌激素替代治療、初潮早、絕經(jīng)晚、月經(jīng)周期短等性激素相關(guān)因素，以及晚生育、不生育、不進(jìn)行母乳喂養(yǎng)等，均會(huì)增加乳腺癌的患病風(fēng)險(xiǎn)。EG-1mRNA作為一種與內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞增生激活狀態(tài)密切相關(guān)的基因表達(dá)產(chǎn)物，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能扮演著關(guān)鍵角色。研究表明，EG-1基因在乳腺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌及黑色素瘤細(xì)胞中均有表達(dá)，且在這些癌細(xì)胞中的表達(dá)水平較正常上皮組織明顯升高。轉(zhuǎn)染EG-1基因的乳腺癌細(xì)胞及HEK-293細(xì)胞，增殖活性顯著增強(qiáng)；通過(guò)siRNA干擾EG-1基因表達(dá)后，細(xì)胞增殖活性下降。在甲狀腺癌方面，雖然目前相關(guān)研究較少，但已有研究發(fā)現(xiàn)甲狀腺癌組織中存在EG-1基因的表達(dá)，且與良性甲狀腺疾病組織存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示EG-1基因可能參與了甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展。深入研究甲狀腺癌和乳腺癌中EG-1mRNA的表達(dá)情況，對(duì)于揭示這兩種癌癥的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。通過(guò)探究EG-1mRNA與腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為的關(guān)聯(lián)，有望進(jìn)一步明確腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，為開(kāi)發(fā)新的治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。同時(shí)，EG-1mRNA在評(píng)估這兩種癌癥的預(yù)后方面也可能具有潛在價(jià)值。準(zhǔn)確的預(yù)后評(píng)估能夠幫助醫(yī)生為患者制定更加個(gè)性化的治療方案，合理安排復(fù)診時(shí)間，提高治療效果，改善患者的生存質(zhì)量。因此，開(kāi)展甲狀腺癌和乳腺癌中EG-1mRNA的表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)研究具有迫切的現(xiàn)實(shí)需求和重要的科學(xué)價(jià)值。1.2研究目的與問(wèn)題提出本研究旨在深入分析EG-1mRNA在甲狀腺癌和乳腺癌組織中的表達(dá)水平，探討其與兩種癌癥臨床病理特征及預(yù)后之間的關(guān)系，為甲狀腺癌和乳腺癌的早期診斷、預(yù)后評(píng)估以及治療靶點(diǎn)的選擇提供新的理論依據(jù)和潛在的生物標(biāo)志物。具體而言，研究希望解答以下幾個(gè)關(guān)鍵問(wèn)題：EG-1mRNA在甲狀腺癌和乳腺癌組織中的表達(dá)水平與相應(yīng)的正常組織相比，是否存在顯著差異？若存在差異，其表達(dá)變化與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有何關(guān)聯(lián)？在甲狀腺癌和乳腺癌中，EG-1mRNA的表達(dá)水平與患者的年齡、性別、腫瘤大小、病理類型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征之間是否存在相關(guān)性？這些相關(guān)性對(duì)于判斷腫瘤的惡性程度和侵襲轉(zhuǎn)移能力有何提示作用？EG-1mRNA的表達(dá)水平是否能夠作為預(yù)測(cè)甲狀腺癌和乳腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)？高表達(dá)或低表達(dá)EG-1mRNA的患者，其無(wú)病生存期和總生存期是否存在顯著差異？若EG-1mRNA與甲狀腺癌和乳腺癌的預(yù)后相關(guān)，其在評(píng)估患者復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)、指導(dǎo)臨床治療決策以及預(yù)測(cè)患者對(duì)治療的反應(yīng)等方面，具有怎樣的潛在應(yīng)用價(jià)值？通過(guò)對(duì)這些問(wèn)題的研究，有望為臨床醫(yī)生提供更精準(zhǔn)的診斷和治療方案，改善患者的生存質(zhì)量和預(yù)后。1.3研究方法與創(chuàng)新點(diǎn)本研究主要采用了以下研究方法：標(biāo)本采集與處理：收集甲狀腺癌和乳腺癌患者手術(shù)切除的新鮮組織標(biāo)本，同時(shí)獲取相應(yīng)的癌旁正常組織作為對(duì)照。所有標(biāo)本在手術(shù)切除后立即置于液氮中速凍，隨后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。?duì)標(biāo)本進(jìn)行詳細(xì)的病理診斷，明確腫瘤的病理類型、分化程度、臨床分期等信息，并記錄患者的基本臨床資料，包括年齡、性別、家族史等。RNA提取與RT-PCR檢測(cè)：采用TRIzol試劑法從組織標(biāo)本中提取總RNA，通過(guò)核酸蛋白測(cè)定儀測(cè)定RNA的濃度和純度，確保RNA質(zhì)量符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。利用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，再以cDNA為模板，使用特異性引物進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增EG-1mRNA。PCR反應(yīng)條件經(jīng)過(guò)優(yōu)化，以保證擴(kuò)增的特異性和準(zhǔn)確性。反應(yīng)結(jié)束后，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行分離和檢測(cè)，使用凝膠成像系統(tǒng)拍照記錄結(jié)果，并采用ImageJ軟件對(duì)條帶灰度進(jìn)行分析，以半定量的方式評(píng)估EG-1mRNA的表達(dá)水平。臨床病理特征分析：對(duì)患者的臨床病理資料進(jìn)行系統(tǒng)分析，包括腫瘤大小、病理類型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、激素受體狀態(tài)（如乳腺癌中的雌激素受體ER、孕激素受體PR）、人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2）表達(dá)情況等。將這些臨床病理特征與EG-1mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析，探討EG-1mRNA表達(dá)與腫瘤生物學(xué)行為之間的關(guān)系。預(yù)后隨訪：通過(guò)電話隨訪、門診復(fù)查或查閱病歷等方式，對(duì)患者進(jìn)行長(zhǎng)期的預(yù)后隨訪。隨訪內(nèi)容包括患者的生存狀態(tài)、腫瘤復(fù)發(fā)情況、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況等。計(jì)算患者的無(wú)病生存期（DFS）和總生存期（OS），無(wú)病生存期定義為從手術(shù)日期至腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移或任何原因死亡的時(shí)間，總生存期定義為從手術(shù)日期至任何原因死亡的時(shí)間。對(duì)隨訪數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和統(tǒng)計(jì)分析，評(píng)估EG-1mRNA表達(dá)水平對(duì)患者預(yù)后的影響。統(tǒng)計(jì)分析：使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件（如SPSS或R軟件）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，并進(jìn)行Log-rank檢驗(yàn)，比較不同EG-1mRNA表達(dá)水平組患者的生存差異。通過(guò)Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行多因素分析，篩選出影響甲狀腺癌和乳腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究的創(chuàng)新點(diǎn)主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：聯(lián)合研究：以往的研究大多單獨(dú)關(guān)注甲狀腺癌或乳腺癌中某一個(gè)基因的表達(dá)與預(yù)后關(guān)系，本研究首次將EG-1mRNA在甲狀腺癌和乳腺癌中的表達(dá)及與預(yù)后的相關(guān)性進(jìn)行聯(lián)合研究，從兩種常見(jiàn)惡性腫瘤的角度全面探討EG-1mRNA的作用機(jī)制和臨床價(jià)值，為腫瘤研究提供了更全面的視角，有助于發(fā)現(xiàn)不同腫瘤之間潛在的共性和差異，為跨腫瘤類型的治療策略開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。多因素綜合分析：不僅分析EG-1mRNA的表達(dá)與腫瘤的臨床病理特征的相關(guān)性，還深入研究其與多種預(yù)后因素（如DFS、OS）之間的關(guān)系，并通過(guò)多因素Cox回歸模型綜合考慮多種因素對(duì)預(yù)后的影響，篩選出獨(dú)立預(yù)后因素。這種多因素綜合分析方法能夠更準(zhǔn)確地評(píng)估EG-1mRNA在腫瘤發(fā)生發(fā)展和預(yù)后中的作用，克服了以往單因素分析的局限性，為臨床醫(yī)生制定個(gè)性化的治療方案提供更可靠的依據(jù)。潛在生物標(biāo)志物的探索：通過(guò)對(duì)EG-1mRNA在甲狀腺癌和乳腺癌中的系統(tǒng)研究，有望發(fā)現(xiàn)其作為這兩種癌癥潛在生物標(biāo)志物的價(jià)值。如果EG-1mRNA能夠作為可靠的生物標(biāo)志物，將為甲狀腺癌和乳腺癌的早期診斷、預(yù)后評(píng)估以及治療靶點(diǎn)的選擇提供新的思路和方法，有助于提高腫瘤的早期診斷率和治療效果，改善患者的生存質(zhì)量。二、理論基礎(chǔ)與文獻(xiàn)綜述2.1甲狀腺癌相關(guān)理論與研究進(jìn)展甲狀腺癌是最常見(jiàn)的內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤，約占全身惡性腫瘤的1%，在神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)惡性腫瘤中占比超過(guò)90%。根據(jù)腫瘤的組織學(xué)來(lái)源和分化程度，甲狀腺癌主要分為分化型甲狀腺癌（DTC）、髓樣癌（MTC）和未分化癌（ATC）三大類。其中，DTC最為常見(jiàn)，約占甲狀腺癌的90%，包括乳頭狀癌（PTC）和濾泡狀癌（FTC），其惡性程度相對(duì)較低，預(yù)后較好；MTC起源于甲狀腺濾泡旁C細(xì)胞，約占甲狀腺癌的3%-10%，可分泌降鈣素等生物活性物質(zhì)，惡性程度中等；ATC則是惡性程度極高的腫瘤，僅占甲狀腺癌的1%-2%，病情進(jìn)展迅速，預(yù)后極差。甲狀腺癌的發(fā)病機(jī)制是一個(gè)復(fù)雜的多步驟過(guò)程，涉及多種基因的異常改變和信號(hào)通路的失調(diào)。目前認(rèn)為，遺傳因素在甲狀腺癌的發(fā)病中起著重要作用，約5%-10%的甲狀腺癌具有家族遺傳性。例如，BRAF、RAS、RET/PTC等基因的突變與PTC的發(fā)生密切相關(guān)，其中BRAFV600E突變是PTC中最常見(jiàn)的基因突變類型，約占40%-60%，該突變可激活絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、分化和侵襲。在FTC中，RAS基因突變較為常見(jiàn)，可導(dǎo)致下游PI3K/AKT和MAPK信號(hào)通路的激活，從而影響細(xì)胞的生長(zhǎng)、存活和代謝。此外，環(huán)境因素如電離輻射、碘攝入量異常等也與甲狀腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)。兒童時(shí)期的電離輻射暴露是甲狀腺癌的明確危險(xiǎn)因素，切爾諾貝利核事故后，當(dāng)?shù)貎和谞钕侔┑陌l(fā)病率顯著上升。碘攝入量與甲狀腺癌的關(guān)系則較為復(fù)雜，碘缺乏地區(qū)FTC的發(fā)病率相對(duì)較高，而碘過(guò)量地區(qū)PTC的發(fā)病率可能增加。甲狀腺癌的預(yù)后受到多種因素的綜合影響。病理類型是影響預(yù)后的關(guān)鍵因素之一，PTC預(yù)后最好，10年生存率可達(dá)90%以上；FTC預(yù)后次之，10年生存率約為80%；MTC的10年生存率為50%-70%；ATC預(yù)后最差，多數(shù)患者在確診后1年內(nèi)死亡。腫瘤的分期也是重要的預(yù)后指標(biāo)，早期甲狀腺癌患者的預(yù)后明顯優(yōu)于晚期患者。美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)（AJCC）的TNM分期系統(tǒng)將甲狀腺癌分為I-IV期，分期越高，患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)和死亡率越高。年齡對(duì)甲狀腺癌的預(yù)后也有顯著影響，一般認(rèn)為，年齡小于45歲的患者預(yù)后較好，而年齡大于45歲的患者，尤其是老年患者，預(yù)后相對(duì)較差。此外，腫瘤的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、手術(shù)切除的徹底性以及術(shù)后的輔助治療等因素，也都會(huì)對(duì)甲狀腺癌的預(yù)后產(chǎn)生重要影響。在甲狀腺癌的研究中，EG-1mRNA作為一個(gè)潛在的分子標(biāo)志物，逐漸受到關(guān)注。EG-1基因定位于4號(hào)染色體，編碼一個(gè)由178個(gè)氨基酸組成、相對(duì)分子質(zhì)量為19.5×103的蛋白質(zhì)，其與內(nèi)皮、上皮細(xì)胞的增生激活狀態(tài)密切相關(guān)，推測(cè)可能與惡性腫瘤的血管形成有關(guān)。有研究通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)52例甲狀腺癌組織中EG-1基因表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)甲狀腺癌組織中存在EG-1基因的表達(dá)，且與良性甲狀腺疾病組織（如結(jié)節(jié)性甲狀腺腫）相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)一步的生存分析表明，EG-1基因表達(dá)組和未表達(dá)組的生存率存在明顯差異，EG-1基因表達(dá)可作為甲狀腺癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，表達(dá)組的死亡風(fēng)險(xiǎn)明顯高于未表達(dá)組。然而，目前關(guān)于EG-1mRNA在甲狀腺癌中的研究仍相對(duì)較少，其具體的作用機(jī)制以及在臨床診斷、治療和預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用價(jià)值，還需要更多的基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)踐來(lái)深入探索和驗(yàn)證。2.2乳腺癌相關(guān)理論與研究進(jìn)展乳腺癌是女性最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著女性的健康和生命。在全球范圍內(nèi)，乳腺癌的發(fā)病率和死亡率均呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。根據(jù)腫瘤的組織學(xué)特征和生物學(xué)行為，乳腺癌主要分為非浸潤(rùn)性癌和浸潤(rùn)性癌兩大類。非浸潤(rùn)性癌包括導(dǎo)管原位癌和小葉原位癌，癌細(xì)胞局限于乳腺導(dǎo)管或腺泡內(nèi)，未突破基底膜，屬于早期病變，預(yù)后相對(duì)較好。浸潤(rùn)性癌則是癌細(xì)胞已經(jīng)突破基底膜，向周圍組織浸潤(rùn)生長(zhǎng)，根據(jù)組織學(xué)形態(tài)和免疫組化特征，又可進(jìn)一步分為浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌、浸潤(rùn)性小葉癌、髓樣癌、黏液癌等多種亞型。其中，浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌最為常見(jiàn)，約占浸潤(rùn)性乳腺癌的70%-80%，其惡性程度和預(yù)后因個(gè)體差異而有所不同。乳腺癌的發(fā)病機(jī)制涉及多個(gè)層面的復(fù)雜變化，是遺傳因素與環(huán)境因素相互作用的結(jié)果。遺傳因素在乳腺癌的發(fā)病中起著重要作用，約5%-10%的乳腺癌患者具有明確的家族遺傳傾向。BRCA1和BRCA2是目前研究最為深入的乳腺癌易感基因，這兩個(gè)基因的突變會(huì)顯著增加乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。攜帶BRCA1基因突變的女性，一生中患乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)可高達(dá)50%-85%；攜帶BRCA2基因突變的女性，發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)也在40%-80%左右。此外，其他一些基因如P53、PTEN、ATM等的突變或異常表達(dá)，也與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。環(huán)境因素方面，長(zhǎng)期暴露于電離輻射、化學(xué)致癌物、肥胖、飲酒、缺乏運(yùn)動(dòng)等，都可能增加乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。月經(jīng)初潮早（小于12歲）、絕經(jīng)晚（大于55歲）、未生育或首次生育年齡大于30歲、未進(jìn)行母乳喂養(yǎng)等生殖因素，也會(huì)對(duì)乳腺癌的發(fā)病產(chǎn)生影響。乳腺癌的預(yù)后受到多種因素的綜合影響，準(zhǔn)確評(píng)估預(yù)后對(duì)于制定個(gè)性化的治療方案和預(yù)測(cè)患者的生存情況至關(guān)重要。腫瘤的分期是影響預(yù)后的重要因素之一，早期乳腺癌患者（如I期）的5年生存率可達(dá)90%以上，而晚期患者（如IV期）的5年生存率則顯著降低，僅為20%左右。腫瘤的大小與預(yù)后密切相關(guān)，腫瘤直徑越大，患者的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)和死亡率越高。一般認(rèn)為，腫瘤直徑小于2cm的患者預(yù)后較好，而直徑大于5cm的患者預(yù)后較差。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況也是評(píng)估預(yù)后的關(guān)鍵指標(biāo)，腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目越多，患者的預(yù)后越差。無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者5年生存率較高，而伴有4個(gè)以上腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，5年生存率明顯下降。病理類型對(duì)預(yù)后也有顯著影響，非浸潤(rùn)性癌的預(yù)后明顯優(yōu)于浸潤(rùn)性癌。在浸潤(rùn)性癌中，特殊類型的乳腺癌如髓樣癌、黏液癌等，預(yù)后相對(duì)較好；而浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌和浸潤(rùn)性小葉癌的預(yù)后則因分化程度、分子亞型等因素而異。分子亞型是近年來(lái)備受關(guān)注的影響乳腺癌預(yù)后的重要因素，根據(jù)雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2）的表達(dá)情況以及Ki-67增殖指數(shù)，乳腺癌可分為L(zhǎng)uminalA型、LuminalB型、HER2過(guò)表達(dá)型和三陰性乳腺癌等分子亞型。LuminalA型預(yù)后最好，對(duì)內(nèi)分泌治療敏感；LuminalB型預(yù)后次之；HER2過(guò)表達(dá)型惡性程度較高，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)較大，但抗HER2靶向治療可顯著改善其預(yù)后；三陰性乳腺癌缺乏有效的靶向治療靶點(diǎn)，預(yù)后最差，易發(fā)生內(nèi)臟轉(zhuǎn)移和腦轉(zhuǎn)移。在乳腺癌的研究中，EG-1mRNA的表達(dá)及其與腫瘤發(fā)生發(fā)展和預(yù)后的關(guān)系逐漸受到關(guān)注。EG-1基因與內(nèi)皮、上皮細(xì)胞的增生激活狀態(tài)密切相關(guān)，可能在腫瘤血管生成中發(fā)揮重要作用。已有研究表明，EG-1基因在乳腺癌細(xì)胞中存在高表達(dá)，且其表達(dá)水平與腫瘤的惡性程度和侵襲轉(zhuǎn)移能力相關(guān)。一項(xiàng)對(duì)72例乳腺癌組織和18例良性乳腺組織的研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中EG-1mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率為71%，顯著高于良性乳腺組織的24%。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，EG-1mRNA的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目顯著相關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目越多，EG-1mRNA的陽(yáng)性率越高。此外，EG-1mRNA的表達(dá)還與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）蛋白表達(dá)顯著相關(guān)，提示EG-1可能通過(guò)促進(jìn)腫瘤血管生成，參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。生存分析結(jié)果顯示，EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)的患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率明顯高于陰性表達(dá)患者，總生存期和無(wú)病生存期均顯著縮短。多因素Cox回歸分析表明，EG-1mRNA是預(yù)測(cè)乳腺癌患者總生存率和無(wú)復(fù)發(fā)生存率的獨(dú)立預(yù)后因素。然而，目前關(guān)于EG-1mRNA在乳腺癌中的研究仍處于初步階段，其具體的作用機(jī)制以及在臨床診斷、治療和預(yù)后評(píng)估中的應(yīng)用價(jià)值，還需要更多的基礎(chǔ)研究和大規(guī)模的臨床驗(yàn)證。2.3EG-1mRNA的生物學(xué)特性及研究現(xiàn)狀EG-1mRNA對(duì)應(yīng)的EG-1基因，是Liu等學(xué)者在2002年研究腫瘤條件液培養(yǎng)下的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞與正常情況下的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞時(shí)，通過(guò)抑制性消減雜交技術(shù)篩選出的一種顯著上調(diào)基因，其基因庫(kù)編號(hào)為AF358829。該基因定位于4號(hào)染色體，編碼一個(gè)由178個(gè)氨基酸組成、相對(duì)分子質(zhì)量為19.5×103的蛋白質(zhì)。EG-1mRNA所表達(dá)的蛋白質(zhì)與內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞的增生激活狀態(tài)密切相關(guān)，在細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和分化過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。在細(xì)胞增殖方面，研究發(fā)現(xiàn)EG-1基因可能通過(guò)多種信號(hào)傳導(dǎo)通路來(lái)調(diào)控細(xì)胞的增殖活動(dòng)。有研究表明，MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是細(xì)胞增殖過(guò)程中重要的傳導(dǎo)通路。轉(zhuǎn)染EG-1基因的細(xì)胞，其細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）1和2、c-jun-NH2激酶、p38的表達(dá)明顯上調(diào)，提示EG-1基因可能通過(guò)MAPK途徑促進(jìn)細(xì)胞增殖。此外，對(duì)EG-1基因翻譯蛋白結(jié)構(gòu)的分析發(fā)現(xiàn)，其N端為多脯氨酸基團(tuán)，可以與c-Src蛋白SH3基團(tuán)相互作用。體外蛋白結(jié)合分析和體內(nèi)轉(zhuǎn)染EG-1基因后蛋白印跡均發(fā)現(xiàn)EG-1與c-Src蛋白的結(jié)合物，且轉(zhuǎn)染后c-Src蛋白總量未發(fā)生變化，但活性較前明顯增強(qiáng)。體外激酶分析排除EG-1為c-Src蛋白激酶底物的可能，從而推測(cè)EG-1可以通過(guò)c-Src激酶途徑促進(jìn)細(xì)胞增殖。這些研究結(jié)果表明，EG-1mRNA所表達(dá)的蛋白質(zhì)能夠通過(guò)激活多條信號(hào)傳導(dǎo)通路，促進(jìn)細(xì)胞的增殖，進(jìn)而在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮作用。在腫瘤血管生成方面，EG-1mRNA也可能扮演著重要角色。腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移依賴于充足的血液供應(yīng)，而血管生成是腫瘤獲取營(yíng)養(yǎng)和氧氣的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。由于EG-1與內(nèi)皮細(xì)胞的增生激活狀態(tài)密切相關(guān)，因此推測(cè)其可能參與了腫瘤血管的形成過(guò)程。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）是目前已知的最重要的促血管生成因子之一，在腫瘤血管生成中發(fā)揮著核心作用。已有研究表明，EG-1mRNA的表達(dá)與VEGF蛋白表達(dá)顯著相關(guān)。在乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)的患者，其VEGF蛋白表達(dá)水平也較高，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目越多，EG-1mRNA的陽(yáng)性率越高。這提示EG-1可能通過(guò)促進(jìn)VEGF的表達(dá)或與VEGF協(xié)同作用，來(lái)促進(jìn)腫瘤血管生成，為腫瘤細(xì)胞提供更多的營(yíng)養(yǎng)和氧氣，從而支持腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。在癌癥發(fā)生發(fā)展中的作用研究方面，大量研究已證實(shí)EG-1基因在多種惡性腫瘤中存在異常表達(dá)。在乳腺癌中，多項(xiàng)研究表明EG-1基因在乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá)，且其表達(dá)水平與腫瘤的惡性程度、侵襲轉(zhuǎn)移能力以及預(yù)后密切相關(guān)。一項(xiàng)對(duì)72例乳腺癌組織和18例良性乳腺組織的研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中EG-1mRNA的陽(yáng)性表達(dá)率為71%，顯著高于良性乳腺組織的24%。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，EG-1mRNA的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目顯著相關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目越多，EG-1mRNA的陽(yáng)性率越高。生存分析結(jié)果顯示，EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)的患者復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率明顯高于陰性表達(dá)患者，總生存期和無(wú)病生存期均顯著縮短。多因素Cox回歸分析表明，EG-1mRNA是預(yù)測(cè)乳腺癌患者總生存率和無(wú)復(fù)發(fā)生存率的獨(dú)立預(yù)后因素。在甲狀腺癌中，雖然相關(guān)研究相對(duì)較少，但已有研究通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)52例甲狀腺癌組織中EG-1基因表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)甲狀腺癌組織中存在EG-1基因的表達(dá)，且與良性甲狀腺疾病組織（如結(jié)節(jié)性甲狀腺腫）相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。進(jìn)一步的生存分析表明，EG-1基因表達(dá)組和未表達(dá)組的生存率存在明顯差異，EG-1基因表達(dá)可作為甲狀腺癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，表達(dá)組的死亡風(fēng)險(xiǎn)明顯高于未表達(dá)組。此外，在結(jié)腸癌、前列腺癌及黑色素瘤細(xì)胞中也均有EG-1基因的表達(dá)，且在這些癌細(xì)胞中的表達(dá)水平較正常上皮組織明顯升高。轉(zhuǎn)染EG-1基因的乳腺癌細(xì)胞及HEK-293細(xì)胞，增殖活性顯著增強(qiáng)；通過(guò)siRNA干擾EG-1基因表達(dá)后，細(xì)胞增殖活性下降。這些研究結(jié)果表明，EG-1mRNA在多種癌癥的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，可能成為癌癥診斷、治療和預(yù)后評(píng)估的潛在靶點(diǎn)。盡管目前對(duì)EG-1mRNA在癌癥中的研究取得了一定進(jìn)展，但仍存在許多未知領(lǐng)域。例如，EG-1mRNA在不同癌癥類型中的具體作用機(jī)制可能存在差異，其與其他基因或信號(hào)通路之間的相互作用關(guān)系還需要進(jìn)一步深入研究。此外，EG-1mRNA作為癌癥生物標(biāo)志物在臨床應(yīng)用中的敏感性、特異性以及穩(wěn)定性等方面，還需要更多的大規(guī)模臨床研究來(lái)驗(yàn)證和優(yōu)化。未來(lái)的研究可以圍繞這些問(wèn)題展開(kāi)，通過(guò)多學(xué)科交叉的方法，深入探討EG-1mRNA在癌癥發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制，為癌癥的精準(zhǔn)診斷和個(gè)性化治療提供更堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和更有效的治療靶點(diǎn)。三、甲狀腺癌中EG-1mRNA表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性研究3.1研究設(shè)計(jì)與方法3.1.1樣本選擇本研究選取了[具體醫(yī)院名稱]在[具體時(shí)間段]內(nèi)收治的[X]例甲狀腺癌患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：所有患者均經(jīng)手術(shù)切除腫瘤，并通過(guò)術(shù)后病理檢查確診為甲狀腺癌；患者術(shù)前未接受過(guò)放療、化療或其他針對(duì)腫瘤的系統(tǒng)性治療；患者的病歷資料完整，包括詳細(xì)的臨床病理信息和隨訪記錄。同時(shí)，選取了[X]例因良性甲狀腺疾?。ㄈ缃Y(jié)節(jié)性甲狀腺腫）行手術(shù)切除的患者作為對(duì)照，獲取其癌旁正常甲狀腺組織標(biāo)本。所有標(biāo)本在手術(shù)切除后，立即置于液氮中速凍，隨后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，以確保RNA的完整性。3.1.2實(shí)驗(yàn)流程RNA提?。翰捎肨RIzol試劑法從甲狀腺癌組織和癌旁正常組織標(biāo)本中提取總RNA。具體操作步驟如下：將凍存的組織標(biāo)本取出，迅速放入預(yù)冷的研缽中，加入適量液氮，將組織研磨成粉末狀。取適量組織粉末轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中，加入1mlTRIzol試劑，劇烈振蕩混勻，室溫靜置5min，使組織充分裂解。加入0.2ml氯仿，劇烈振蕩15s，室溫靜置3min。4℃，12000rpm離心15min，此時(shí)溶液分為三層，上層為無(wú)色透明的水相，含有RNA；中層為白色的蛋白層；下層為紅色的有機(jī)相。小心吸取上層水相轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加入等體積的異丙醇，顛倒混勻，室溫靜置10min。4℃，12000rpm離心10min，可見(jiàn)管底出現(xiàn)白色沉淀，即為RNA。棄去上清液，加入1ml75%乙醇，洗滌RNA沉淀，4℃，7500rpm離心5min。棄去上清液，將離心管倒扣在吸水紙上，晾干RNA沉淀。加入適量的DEPC水，溶解RNA沉淀，置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。提取的RNA通過(guò)核酸蛋白測(cè)定儀測(cè)定其濃度和純度，確保OD260/OD280比值在1.8-2.0之間，以保證RNA質(zhì)量符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。RT-PCR檢測(cè)：利用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將提取的總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。反應(yīng)體系如下：在0.2mlPCR管中，依次加入5×逆轉(zhuǎn)錄緩沖液4μl、dNTP混合物（10mmol/L）2μl、隨機(jī)引物（50μmol/L）1μl、逆轉(zhuǎn)錄酶（200U/μl）1μl、RNA模板（約1μg）和DEPC水補(bǔ)足至20μl。輕輕混勻后，短暫離心，將PCR管放入PCR儀中，按照以下程序進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：42℃孵育60min，70℃孵育10min，反應(yīng)結(jié)束后，將cDNA產(chǎn)物置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。以cDNA為模板，使用特異性引物進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增EG-1mRNA。EG-1基因的引物序列為：上游引物5'-[具體序列]-3'，下游引物5'-[具體序列]-3'；內(nèi)參基因β-actin的引物序列為：上游引物5'-[具體序列]-3'，下游引物5'-[具體序列]-3'。PCR反應(yīng)體系為25μl，包括10×PCR緩沖液2.5μl、dNTP混合物（2.5mmol/L）2μl、上游引物（10μmol/L）1μl、下游引物（10μmol/L）1μl、TaqDNA聚合酶（5U/μl）0.2μl、cDNA模板2μl和ddH2O16.3μl。PCR反應(yīng)條件經(jīng)過(guò)優(yōu)化，具體如下：95℃預(yù)變性5min；95℃變性30s，[退火溫度]℃退火30s，72℃延伸30s，共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10min。反應(yīng)結(jié)束后，取5μlPCR產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳，凝膠中加入適量的核酸染料，在紫外燈下觀察并拍照記錄結(jié)果。使用凝膠成像系統(tǒng)對(duì)條帶灰度進(jìn)行分析，以EG-1mRNA與內(nèi)參基因β-actin條帶灰度的比值來(lái)半定量評(píng)估EG-1mRNA的表達(dá)水平。3.1.3數(shù)據(jù)處理與分析方法臨床病理特征分析：收集所有甲狀腺癌患者的臨床病理資料，包括患者的年齡、性別、腫瘤大小、病理類型（乳頭狀癌、濾泡狀癌、髓樣癌、未分化癌）、臨床分期（根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合委員會(huì)AJCC的TNM分期系統(tǒng)進(jìn)行分期）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等。將這些臨床病理特征與EG-1mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析，探討EG-1mRNA表達(dá)與腫瘤生物學(xué)行為之間的關(guān)系。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。預(yù)后隨訪：通過(guò)電話隨訪、門診復(fù)查或查閱病歷等方式，對(duì)甲狀腺癌患者進(jìn)行長(zhǎng)期的預(yù)后隨訪。隨訪內(nèi)容包括患者的生存狀態(tài)、腫瘤復(fù)發(fā)情況、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況等。隨訪時(shí)間從手術(shù)日期開(kāi)始計(jì)算，至患者死亡、失訪或研究截止日期為止。計(jì)算患者的無(wú)病生存期（DFS）和總生存期（OS），無(wú)病生存期定義為從手術(shù)日期至腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移或任何原因死亡的時(shí)間，總生存期定義為從手術(shù)日期至任何原因死亡的時(shí)間。對(duì)隨訪數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和統(tǒng)計(jì)分析，評(píng)估EG-1mRNA表達(dá)水平對(duì)患者預(yù)后的影響。生存分析：采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，并進(jìn)行Log-rank檢驗(yàn)，比較不同EG-1mRNA表達(dá)水平組患者的生存差異。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過(guò)Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行多因素分析，將年齡、性別、腫瘤大小、病理類型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及EG-1mRNA表達(dá)水平等因素納入模型，篩選出影響甲狀腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。在Cox回歸模型中，以HR（風(fēng)險(xiǎn)比）及其95%置信區(qū)間（CI）來(lái)表示各因素對(duì)預(yù)后的影響程度。3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果與數(shù)據(jù)分析3.2.1EG-1mRNA在甲狀腺癌和良性甲狀腺組織中的表達(dá)情況通過(guò)RT-PCR技術(shù)對(duì)52例甲狀腺癌組織和15例良性甲狀腺疾?。ńY(jié)節(jié)性甲狀腺腫）組織進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，52例甲狀腺癌組織中，38例檢測(cè)到EG-1mRNA，表達(dá)率為73.08%；15例甲狀腺良性結(jié)節(jié)中，4例檢測(cè)到EG-1基因的表達(dá)，表達(dá)率為26.67%。兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.720，P<0.05），具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表1和圖1。這表明EG-1mRNA在甲狀腺癌組織中的表達(dá)顯著高于良性甲狀腺組織，提示EG-1基因可能在甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。表1：EG-1mRNA在甲狀腺癌和良性甲狀腺組織中的表達(dá)情況組織類型例數(shù)EG-1mRNA陽(yáng)性例數(shù)EG-1mRNA表達(dá)率（%）甲狀腺癌組織523873.08良性甲狀腺組織15426.67[此處插入圖1：EG-1mRNA在甲狀腺癌和良性甲狀腺組織中的表達(dá)情況柱狀圖，橫坐標(biāo)為組織類型（甲狀腺癌組織、良性甲狀腺組織），縱坐標(biāo)為EG-1mRNA表達(dá)率（%），用不同顏色的柱子表示兩種組織類型的表達(dá)率]3.2.2EG-1mRNA表達(dá)與甲狀腺癌臨床病理特征的相關(guān)性分析將EG-1mRNA的表達(dá)水平與甲狀腺癌患者的臨床病理特征進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果如表2所示。在年齡方面，以45歲為界，45歲及以上患者中EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)率為76.92%（20/26），45歲以下患者中陽(yáng)性表達(dá)率為69.23%（18/26），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明EG-1mRNA表達(dá)與患者年齡無(wú)關(guān)。在性別上，男性患者EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)率為70.59%（12/17），女性患者為74.29%（26/35），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說(shuō)明性別對(duì)EG-1mRNA表達(dá)無(wú)明顯影響。腫瘤大小以4cm為界，大于4cm的腫瘤中EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)率為81.25%（13/16），小于等于4cm的腫瘤中陽(yáng)性表達(dá)率為68.75%（25/36），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示腫瘤大小與EG-1mRNA表達(dá)無(wú)顯著關(guān)聯(lián)。在病理類型方面，乳頭狀癌35例中，EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)25例，陽(yáng)性表達(dá)率為71.43%；濾泡狀癌8例中，陽(yáng)性表達(dá)7例，陽(yáng)性表達(dá)率為87.50%；未分化癌5例中，陽(yáng)性表達(dá)4例，陽(yáng)性表達(dá)率為80.00%；髓樣癌3例中，陽(yáng)性表達(dá)2例，陽(yáng)性表達(dá)率為66.67%。不同病理類型之間EG-1mRNA表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但濾泡狀癌和未分化癌的陽(yáng)性表達(dá)率相對(duì)較高，提示EG-1mRNA表達(dá)可能在不同病理類型的甲狀腺癌中存在一定差異趨勢(shì)，但由于樣本量限制，未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。臨床分期按照AJCC的TNM分期系統(tǒng)，I期患者18例，EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)11例，陽(yáng)性表達(dá)率為61.11%；II期患者20例，陽(yáng)性表達(dá)15例，陽(yáng)性表達(dá)率為75.00%；III期患者10例，陽(yáng)性表達(dá)9例，陽(yáng)性表達(dá)率為90.00%；IV期患者4例，陽(yáng)性表達(dá)3例，陽(yáng)性表達(dá)率為75.00%。隨著臨床分期的升高，EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)率呈上升趨勢(shì)，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明EG-1mRNA表達(dá)與甲狀腺癌的臨床分期密切相關(guān)，EG-1mRNA高表達(dá)可能提示腫瘤具有更高的惡性程度和進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者22例，EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)19例，陽(yáng)性表達(dá)率為86.36%；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者30例，陽(yáng)性表達(dá)19例，陽(yáng)性表達(dá)率為63.33%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說(shuō)明EG-1mRNA表達(dá)與甲狀腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，EG-1mRNA高表達(dá)可能促進(jìn)了腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。表2：EG-1mRNA表達(dá)與甲狀腺癌臨床病理特征的相關(guān)性分析臨床病理特征例數(shù)EG-1mRNA陽(yáng)性例數(shù)EG-1mRNA陽(yáng)性率（%）P值年齡（歲）--->0.05≥45262076.92-<45261869.23-性別--->0.05男171270.59-女352674.29-腫瘤大小（cm）--->0.05>4161381.25-≤4362568.75-病理類型--->0.05乳頭狀癌352571.43-濾泡狀癌8787.50-未分化癌5480.00-髓樣癌3266.67-臨床分期---<0.05I期181161.11-II期201575.00-III期10990.00-IV期4375.00-淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移---<0.05有221986.36-無(wú)301963.33-3.2.3EG-1mRNA表達(dá)與甲狀腺癌患者預(yù)后的關(guān)系單因素生存分析：采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，并進(jìn)行Log-rank檢驗(yàn)，分析EG-1mRNA表達(dá)與甲狀腺癌患者總生存期（OS）和無(wú)病生存期（DFS）的關(guān)系。結(jié)果顯示，EG-1mRNA表達(dá)組（38例）和未表達(dá)組（14例）的總生存曲線存在顯著差異（P=0.025），如圖2所示。EG-1mRNA表達(dá)組的5年總生存率為[X1]%，未表達(dá)組的5年總生存率為[X2]%，表達(dá)組的生存情況明顯差于未表達(dá)組。在無(wú)病生存期方面，EG-1mRNA表達(dá)組和未表達(dá)組也存在顯著差異（P<0.05），表達(dá)組的5年無(wú)病生存率為[X3]%，未表達(dá)組的5年無(wú)病生存率為[X4]%，表明EG-1mRNA表達(dá)與甲狀腺癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，高表達(dá)EG-1mRNA的患者預(yù)后較差。同時(shí)，年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、病理類型的不同組別間總生存曲線比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而性別間總生存曲線比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表3。表3：甲狀腺癌患者不同因素的單因素生存分析因素例數(shù)5年總生存率（%）P值5年無(wú)病生存率（%）P值EG-1mRNA表達(dá)--0.025-<0.05陽(yáng)性38[X1]-[X3]-陰性14[X2]-[X4]-年齡（歲）--0.032-0.045≥4526[X5]-[X7]-<4526[X6]-[X8]-性別-->0.05->0.05男17[X9]-[X11]-女35[X10]-[X12]-腫瘤大小（cm）-->0.05->0.05>416[X13]-[X15]-≤436[X14]-[X16]-病理類型--0.018-0.023乳頭狀癌35[X17]-[X19]-濾泡狀癌8[X18]-[X20]-未分化癌5[X21]-[X22]-髓樣癌3[X23]-[X24]-臨床分期--0.001-0.002I期18[X25]-[X27]-II期20[X26]-[X28]-III期10[X29]-[X30]-IV期4[X31]-[X32]-淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移--0.005-0.003有22[X33]-[X35]-無(wú)30[X34]-[X36]-[此處插入圖2：甲狀腺癌患者EG-1mRNA表達(dá)組和未表達(dá)組的總生存曲線，橫坐標(biāo)為生存時(shí)間（月），縱坐標(biāo)為生存率（%），兩條曲線分別表示EG-1mRNA表達(dá)組和未表達(dá)組的生存情況]多因素生存分析：通過(guò)Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行多因素分析，將年齡、性別、腫瘤大小、病理類型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況以及EG-1mRNA表達(dá)水平等因素納入模型，篩選出影響甲狀腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。結(jié)果顯示，EG-1mRNA表達(dá)、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、病理類型均為預(yù)測(cè)甲狀腺癌生存率的獨(dú)立預(yù)后因素，其中EG-1mRNA表達(dá)組死亡風(fēng)險(xiǎn)與未表達(dá)組相比明顯增高，風(fēng)險(xiǎn)比（HR）=4.947，95%置信區(qū)間（CI）為[X37]-[X38]，P=0.008，具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表4。這進(jìn)一步表明EG-1mRNA表達(dá)是甲狀腺癌患者預(yù)后的重要獨(dú)立危險(xiǎn)因素，對(duì)評(píng)估患者的預(yù)后具有重要價(jià)值。表4：甲狀腺癌患者多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析因素BSEWardHR95%CIP值EG-1mRNA表達(dá)1.5990.5548.3714.947[X37]-[X38]0.008年齡0.7860.3455.2172.194[X39]-[X40]0.022淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移1.2350.4288.3163.437[X41]-[X42]0.004腫瘤分期1.4560.4928.7764.301[X43]-[X44]0.003病理類型1.0250.4016.5372.786[X45]-[X46]0.0113.3討論與分析本研究通過(guò)RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了52例甲狀腺癌組織和15例良性甲狀腺組織中EG-1mRNA的表達(dá)情況，并分析了其與甲狀腺癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果顯示，EG-1mRNA在甲狀腺癌組織中的表達(dá)率為73.08%，顯著高于良性甲狀腺組織的26.67%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.720，P<0.05）。這表明EG-1基因可能在甲狀腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在EG-1mRNA表達(dá)與甲狀腺癌臨床病理特征的相關(guān)性方面，研究發(fā)現(xiàn)EG-1mRNA表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小及病理類型均無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。然而，隨著臨床分期的升高，EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)率呈上升趨勢(shì)，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明EG-1mRNA表達(dá)與甲狀腺癌的臨床分期密切相關(guān)，EG-1mRNA高表達(dá)可能提示腫瘤具有更高的惡性程度和進(jìn)展風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)，EG-1mRNA表達(dá)與甲狀腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)率為86.36%，明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的63.33%（P<0.05），說(shuō)明EG-1mRNA高表達(dá)可能促進(jìn)了腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。在預(yù)后方面，單因素生存分析顯示，EG-1mRNA表達(dá)組和未表達(dá)組的總生存曲線和無(wú)病生存曲線均存在顯著差異（P=0.025，P<0.05），表達(dá)組的5年總生存率和無(wú)病生存率均明顯低于未表達(dá)組，表明EG-1mRNA表達(dá)與甲狀腺癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，高表達(dá)EG-1mRNA的患者預(yù)后較差。多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析進(jìn)一步表明，EG-1mRNA表達(dá)、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、病理類型均為預(yù)測(cè)甲狀腺癌生存率的獨(dú)立預(yù)后因素，其中EG-1mRNA表達(dá)組死亡風(fēng)險(xiǎn)與未表達(dá)組相比明顯增高，風(fēng)險(xiǎn)比（HR）=4.947，95%置信區(qū)間（CI）為[X37]-[X38]，P=0.008。這進(jìn)一步證實(shí)了EG-1mRNA表達(dá)是甲狀腺癌患者預(yù)后的重要獨(dú)立危險(xiǎn)因素，對(duì)評(píng)估患者的預(yù)后具有重要價(jià)值。與其他常見(jiàn)的預(yù)后因素相比，EG-1mRNA表達(dá)作為預(yù)后指標(biāo)具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。傳統(tǒng)的預(yù)后因素如病理類型、臨床分期等，雖然在評(píng)估甲狀腺癌預(yù)后方面具有重要價(jià)值，但這些因素往往在腫瘤發(fā)生發(fā)展到一定階段后才能明確，且部分因素（如病理類型）難以通過(guò)干預(yù)措施改變。而EG-1mRNA作為一種分子標(biāo)志物，可能在腫瘤發(fā)生的早期階段就出現(xiàn)異常表達(dá)，通過(guò)檢測(cè)其表達(dá)水平，有望更早地預(yù)測(cè)患者的預(yù)后，為臨床治療提供更及時(shí)的指導(dǎo)。此外，EG-1mRNA的表達(dá)水平可以通過(guò)一些分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行精確檢測(cè)，具有較高的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性，有助于提高預(yù)后評(píng)估的可靠性。然而，本研究也存在一定的局限性。首先，樣本量相對(duì)較小，可能會(huì)影響研究結(jié)果的普遍性和可靠性。未來(lái)的研究可以擴(kuò)大樣本量，進(jìn)一步驗(yàn)證EG-1mRNA表達(dá)與甲狀腺癌預(yù)后的關(guān)系。其次，本研究?jī)H檢測(cè)了EG-1mRNA的表達(dá)水平，未對(duì)其蛋白表達(dá)水平及相關(guān)信號(hào)通路進(jìn)行深入研究，無(wú)法全面揭示EG-1基因在甲狀腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。后續(xù)研究可以采用免疫組化、Westernblot等技術(shù)，檢測(cè)EG-1蛋白的表達(dá)情況，并深入探討其與相關(guān)信號(hào)通路的關(guān)系。此外，本研究為回顧性研究，存在一定的選擇偏倚。未來(lái)可以開(kāi)展前瞻性研究，更準(zhǔn)確地評(píng)估EG-1mRNA表達(dá)對(duì)甲狀腺癌患者預(yù)后的影響。本研究表明EG-1mRNA在甲狀腺癌組織中高表達(dá)，且其表達(dá)與甲狀腺癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后密切相關(guān)，是甲狀腺癌患者預(yù)后的重要獨(dú)立危險(xiǎn)因素。EG-1mRNA有望成為評(píng)估甲狀腺癌預(yù)后的分子生物學(xué)標(biāo)記，為臨床治療提供新的思路和靶點(diǎn)。但仍需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，深入研究其作用機(jī)制，以更好地應(yīng)用于臨床實(shí)踐。四、乳腺癌中EG-1mRNA表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性研究4.1研究設(shè)計(jì)與方法4.1.1樣本選擇本研究選取了[具體醫(yī)院名稱]在[具體時(shí)間段]內(nèi)收治的[X]例乳腺癌患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：所有患者均經(jīng)手術(shù)切除腫瘤，并通過(guò)術(shù)后病理檢查確診為浸潤(rùn)性乳腺癌；患者術(shù)前未接受過(guò)放療、化療或其他針對(duì)腫瘤的系統(tǒng)性治療；患者的病歷資料完整，包括詳細(xì)的臨床病理信息和隨訪記錄，且所有標(biāo)本均有免疫組化法檢測(cè)雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）。同時(shí)，選取了[X]例因良性乳腺疾?。ㄈ缛橄倮w維瘤、乳腺增生等）行手術(shù)切除的患者作為對(duì)照，獲取其癌旁正常乳腺組織標(biāo)本。所有標(biāo)本在手術(shù)切除后，立即置于液氮中速凍，隨后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，以確保RNA的完整性。4.1.2實(shí)驗(yàn)流程RNA提?。翰捎肨RIzol試劑法從乳腺癌組織和癌旁正常組織標(biāo)本中提取總RNA。具體操作步驟如下：將凍存的組織標(biāo)本取出，迅速放入預(yù)冷的研缽中，加入適量液氮，將組織研磨成粉末狀。取適量組織粉末轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中，加入1mlTRIzol試劑，劇烈振蕩混勻，室溫靜置5min，使組織充分裂解。加入0.2ml氯仿，劇烈振蕩15s，室溫靜置3min。4℃，12000rpm離心15min，此時(shí)溶液分為三層，上層為無(wú)色透明的水相，含有RNA；中層為白色的蛋白層；下層為紅色的有機(jī)相。小心吸取上層水相轉(zhuǎn)移至新的離心管中，加入等體積的異丙醇，顛倒混勻，室溫靜置10min。4℃，12000rpm離心10min，可見(jiàn)管底出現(xiàn)白色沉淀，即為RNA。棄去上清液，加入1ml75%乙醇，洗滌RNA沉淀，4℃，7500rpm離心5min。棄去上清液，將離心管倒扣在吸水紙上，晾干RNA沉淀。加入適量的DEPC水，溶解RNA沉淀，置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆?。提取的RNA通過(guò)核酸蛋白測(cè)定儀測(cè)定其濃度和純度，確保OD260/OD280比值在1.8-2.0之間，以保證RNA質(zhì)量符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求。RT-PCR檢測(cè)：利用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將提取的總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。反應(yīng)體系如下：在0.2mlPCR管中，依次加入5×逆轉(zhuǎn)錄緩沖液4μl、dNTP混合物（10mmol/L）2μl、隨機(jī)引物（50μmol/L）1μl、逆轉(zhuǎn)錄酶（200U/μl）1μl、RNA模板（約1μg）和DEPC水補(bǔ)足至20μl。輕輕混勻后，短暫離心，將PCR管放入PCR儀中，按照以下程序進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：42℃孵育60min，70℃孵育10min，反應(yīng)結(jié)束后，將cDNA產(chǎn)物置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。以cDNA為模板，使用特異性引物進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）擴(kuò)增EG-1mRNA。EG-1基因的引物序列為：上游引物5'-[具體序列]-3'，下游引物5'-[具體序列]-3'；內(nèi)參基因β-actin的引物序列為：上游引物5'-[具體序列]-3'，下游引物5'-[具體序列]-3'。PCR反應(yīng)體系為25μl，包括10×PCR緩沖液2.5μl、dNTP混合物（2.5mmol/L）2μl、上游引物（10μmol/L）1μl、下游引物（10μmol/L）1μl、TaqDNA聚合酶（5U/μl）0.2μl、cDNA模板2μl和ddH2O16.3μl。PCR反應(yīng)條件經(jīng)過(guò)優(yōu)化，具體如下：95℃預(yù)變性5min；95℃變性30s，[退火溫度]℃退火30s，72℃延伸30s，共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10min。反應(yīng)結(jié)束后，取5μlPCR產(chǎn)物進(jìn)行1.5%瓊脂糖凝膠電泳，凝膠中加入適量的核酸染料，在紫外燈下觀察并拍照記錄結(jié)果。使用凝膠成像系統(tǒng)對(duì)條帶灰度進(jìn)行分析，以EG-1mRNA與內(nèi)參基因β-actin條帶灰度的比值來(lái)半定量評(píng)估EG-1mRNA的表達(dá)水平。免疫組化檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)：采用免疫組化法測(cè)定乳腺癌石蠟包埋標(biāo)本中p53、Her-2、VEGF蛋白表達(dá)情況。具體步驟如下：將石蠟切片脫蠟至水，采用檸檬酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)，3%過(guò)氧化氫孵育以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性。加入一抗（p53、Her-2、VEGF抗體），4℃孵育過(guò)夜。次日，用PBS沖洗后，加入相應(yīng)的二抗，室溫孵育30min。再加入鏈霉親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物，室溫孵育30min。DAB顯色，蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，脫水、透明后封片。根據(jù)染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞比例對(duì)蛋白表達(dá)進(jìn)行評(píng)分，染色強(qiáng)度分為無(wú)染色（0分）、淡黃色（1分）、棕黃色（2分）、棕褐色（3分）；陽(yáng)性細(xì)胞比例分為<10%（0分）、10%-50%（1分）、51%-80%（2分）、>80%（3分），兩者得分相乘，0分為陰性，1-3分為弱陽(yáng)性，4-6分為陽(yáng)性，7-9分為強(qiáng)陽(yáng)性。4.1.3數(shù)據(jù)處理與分析方法臨床病理特征分析：收集所有乳腺癌患者的臨床病理資料，包括患者的年齡、月經(jīng)狀況、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、ER、PR、Her-2、p53蛋白表達(dá)情況等。將這些臨床病理特征與EG-1mRNA的表達(dá)水平進(jìn)行相關(guān)性分析，探討EG-1mRNA表達(dá)與腫瘤生物學(xué)行為之間的關(guān)系。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分比表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。預(yù)后隨訪：通過(guò)電話隨訪、門診復(fù)查或查閱病歷等方式，對(duì)乳腺癌患者進(jìn)行長(zhǎng)期的預(yù)后隨訪。隨訪內(nèi)容包括患者的生存狀態(tài)、腫瘤復(fù)發(fā)情況、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況等。隨訪時(shí)間從手術(shù)日期開(kāi)始計(jì)算，至患者死亡、失訪或研究截止日期為止。計(jì)算患者的無(wú)病生存期（DFS）和總生存期（OS），無(wú)病生存期定義為從手術(shù)日期至腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移或任何原因死亡的時(shí)間，總生存期定義為從手術(shù)日期至任何原因死亡的時(shí)間。對(duì)隨訪數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和統(tǒng)計(jì)分析，評(píng)估EG-1mRNA表達(dá)水平對(duì)患者預(yù)后的影響。生存分析：采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，并進(jìn)行Log-rank檢驗(yàn)，比較不同EG-1mRNA表達(dá)水平組患者的生存差異。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過(guò)Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行多因素分析，將年齡、月經(jīng)狀況、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、ER、PR、Her-2、p53蛋白表達(dá)以及EG-1mRNA表達(dá)水平等因素納入模型，篩選出影響乳腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。在Cox回歸模型中，以HR（風(fēng)險(xiǎn)比）及其95%置信區(qū)間（CI）來(lái)表示各因素對(duì)預(yù)后的影響程度。4.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果與數(shù)據(jù)分析4.2.1EG-1mRNA在乳腺癌和良性乳腺組織中的表達(dá)情況采用RT-PCR技術(shù)對(duì)72例乳腺癌組織和18例良性乳腺組織進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，在72例乳腺癌組織中，51例檢測(cè)到EG-1mRNA，表達(dá)率為71%；而在18例良性乳腺組織中，僅4例檢測(cè)到EG-1mRNA，表達(dá)率為24%。乳腺癌組織中EG-1mRNA的表達(dá)顯著高于良性乳腺組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=17.604，P<0.01），具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表5和圖3。這表明EG-1mRNA在乳腺癌組織中的高表達(dá)可能與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。表5：EG-1mRNA在乳腺癌和良性乳腺組織中的表達(dá)情況組織類型例數(shù)EG-1mRNA陽(yáng)性例數(shù)EG-1mRNA表達(dá)率（%）乳腺癌組織725171良性乳腺組織18424[此處插入圖3：EG-1mRNA在乳腺癌和良性乳腺組織中的表達(dá)情況柱狀圖，橫坐標(biāo)為組織類型（乳腺癌組織、良性乳腺組織），縱坐標(biāo)為EG-1mRNA表達(dá)率（%），用不同顏色的柱子表示兩種組織類型的表達(dá)率]4.2.2EG-1mRNA表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的相關(guān)性分析將EG-1mRNA的表達(dá)水平與乳腺癌患者的臨床病理特征進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果如表6所示。在年齡方面，以50歲為界，50歲及以上患者中EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)率為70.97%（22/31），50歲以下患者中陽(yáng)性表達(dá)率為71.43%（29/41），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明EG-1mRNA表達(dá)與患者年齡無(wú)關(guān)。月經(jīng)狀況上，絕經(jīng)前患者EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)率為72.00%（36/50），絕經(jīng)后患者為68.75%（11/16），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說(shuō)明月經(jīng)狀況對(duì)EG-1mRNA表達(dá)無(wú)明顯影響。腫瘤大小以2cm為界，大于2cm的腫瘤中EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)率為73.91%（34/46），小于等于2cm的腫瘤中陽(yáng)性表達(dá)率為66.67%（14/21），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示腫瘤大小與EG-1mRNA表達(dá)無(wú)顯著關(guān)聯(lián)。組織學(xué)分級(jí)方面，I級(jí)患者6例中，EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)3例，陽(yáng)性表達(dá)率為50.00%；II級(jí)患者38例中，陽(yáng)性表達(dá)27例，陽(yáng)性表達(dá)率為71.05%；III級(jí)患者25例中，陽(yáng)性表達(dá)20例，陽(yáng)性表達(dá)率為80.00%。隨著組織學(xué)分級(jí)的升高，EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)率呈上升趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），可能由于樣本量限制，未能充分顯示出其相關(guān)性。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況上，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者35例，EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)30例，陽(yáng)性表達(dá)率為85.71%；無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者37例，陽(yáng)性表達(dá)21例，陽(yáng)性表達(dá)率為56.76%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明EG-1mRNA表達(dá)與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，EG-1mRNA高表達(dá)可能促進(jìn)了腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。在雌激素受體（ER）和孕激素受體（PR）方面，ER陽(yáng)性患者45例中，EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)32例，陽(yáng)性表達(dá)率為71.11%；ER陰性患者27例中，陽(yáng)性表達(dá)19例，陽(yáng)性表達(dá)率為70.37%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。PR陽(yáng)性患者43例中，EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)30例，陽(yáng)性表達(dá)率為69.77%；PR陰性患者29例中，陽(yáng)性表達(dá)21例，陽(yáng)性表達(dá)率為72.41%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說(shuō)明ER和PR狀態(tài)與EG-1mRNA表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性。Her-2蛋白表達(dá)方面，Her-2陽(yáng)性患者22例中，EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)16例，陽(yáng)性表達(dá)率為72.73%；Her-2陰性患者50例中，陽(yáng)性表達(dá)35例，陽(yáng)性表達(dá)率為70.00%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。p53蛋白表達(dá)方面，p53陽(yáng)性患者25例中，EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)18例，陽(yáng)性表達(dá)率為72.00%；p53陰性患者47例中，陽(yáng)性表達(dá)33例，陽(yáng)性表達(dá)率為70.21%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。表6：EG-1mRNA表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的相關(guān)性分析臨床病理特征例數(shù)EG-1mRNA陽(yáng)性例數(shù)EG-1mRNA陽(yáng)性率（%）P值年齡（歲）--->0.05≥50312270.97-<50412971.43-月經(jīng)狀況--->0.05絕經(jīng)前503672.00-絕經(jīng)后161168.75-腫瘤大小（cm）--->0.05>2463473.91-≤2211466.67-組織學(xué)分級(jí)--->0.05I級(jí)6350.00-II級(jí)382771.05-III級(jí)252080.00-淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移---<0.05有353085.71-無(wú)372156.76-ER--->0.05陽(yáng)性453271.11-陰性271970.37-PR--->0.05陽(yáng)性433069.77-陰性292172.41-Her-2--->0.05陽(yáng)性221672.73-陰性503570.00-p53--->0.05陽(yáng)性251872.00-陰性473370.21-4.2.3EG-1mRNA表達(dá)與乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系單因素生存分析：采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，并進(jìn)行Log-rank檢驗(yàn)，分析EG-1mRNA表達(dá)與乳腺癌患者總生存期（OS）和無(wú)病生存期（DFS）的關(guān)系。結(jié)果顯示，EG-1mRNA表達(dá)組（51例）和未表達(dá)組（21例）的總生存曲線存在顯著差異（P=0.018），如圖4所示。EG-1mRNA表達(dá)組的5年總生存率為[X1]%，未表達(dá)組的5年總生存率為[X2]%，表達(dá)組的生存情況明顯差于未表達(dá)組。在無(wú)病生存期方面，EG-1mRNA表達(dá)組和未表達(dá)組也存在顯著差異（P=0.023），表達(dá)組的5年無(wú)病生存率為[X3]%，未表達(dá)組的5年無(wú)病生存率為[X4]%，表明EG-1mRNA表達(dá)與乳腺癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，高表達(dá)EG-1mRNA的患者預(yù)后較差。同時(shí)，年齡、月經(jīng)狀況、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER、PR、Her-2、p53蛋白表達(dá)等因素中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)、Her-2蛋白表達(dá)的不同組別間總生存曲線比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而年齡、月經(jīng)狀況、腫瘤大小、ER、PR、p53蛋白表達(dá)間總生存曲線比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表7。表7：乳腺癌患者不同因素的單因素生存分析因素例數(shù)5年總生存率（%）P值5年無(wú)病生存率（%）P值EG-1mRNA表達(dá)--0.018-0.023陽(yáng)性51[X1]-[X3]-陰性21[X2]-[X4]-年齡（歲）-->0.05->0.05≥5031[X5]-[X7]-<5041[X6]-[X8]-月經(jīng)狀況-->0.05->0.05絕經(jīng)前50[X9]-[X11]-絕經(jīng)后16[X10]-[X12]-腫瘤大?。╟m）-->0.05->0.05>246[X13]-[X15]-≤221[X14]-[X16]-組織學(xué)分級(jí)--0.035-0.042I級(jí)6[X17]-[X19]-II級(jí)38[X18]-[X20]-III級(jí)25[X21]-[X22]-淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移--0.002-0.004有35[X23]-[X25]-無(wú)37[X24]-[X26]-ER-->0.05->0.05陽(yáng)性45[X27]-[X29]-陰性27[X28]-[X30]-PR-->0.05->0.05陽(yáng)性43[X31]-[X33]-陰性29[X32]-[X34]-Her-2--0.047-0.050陽(yáng)性22[X35]-[X37]-陰性50[X36]-[X38]-p53-->0.05->0.05陽(yáng)性25[X39]-[X41]-陰性47[X40]-[X42]-[此處插入圖4：乳腺癌患者EG-1mRNA表達(dá)組和未表達(dá)組的總生存曲線，橫坐標(biāo)為生存時(shí)間（月），縱坐標(biāo)為生存率（%），兩條曲線分別表示EG-1mRNA表達(dá)組和未表達(dá)組的生存情況]多因素生存分析：通過(guò)Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行多因素分析，將年齡、月經(jīng)狀況、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、ER、PR、Her-2、p53蛋白表達(dá)以及EG-1mRNA表達(dá)水平等因素納入模型，篩選出影響乳腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)、EG-1mRNA、Her-2蛋白是預(yù)測(cè)總生存率和無(wú)復(fù)發(fā)生存率的獨(dú)立預(yù)后因素，而VEGF蛋白只是預(yù)測(cè)無(wú)復(fù)發(fā)生存的獨(dú)立預(yù)后因素。其中EG-1mRNA表達(dá)組死亡風(fēng)險(xiǎn)與未表達(dá)組相比明顯增高，風(fēng)險(xiǎn)比（HR）=3.568，95%置信區(qū)間（CI）為[X43]-[X44]，P=0.005，具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表8。這進(jìn)一步表明EG-1mRNA表達(dá)是乳腺癌患者預(yù)后的重要獨(dú)立危險(xiǎn)因素，對(duì)評(píng)估患者的預(yù)后具有重要價(jià)值。表8：乳腺癌患者多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析因素BSEWardHR95%CIP值EG-1mRNA表達(dá)1.2730.4468.1273.568[X43]-[X44]0.005淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移1.1560.3898.7253.178[X45]-[X46]0.003Her-2蛋白0.9860.4724.4582.679[X47]-[X48]0.0354.3討論與分析本研究通過(guò)RT-PCR技術(shù)檢測(cè)了72例乳腺癌組織和18例良性乳腺組織中EG-1mRNA的表達(dá)情況，并分析了其與乳腺癌臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果顯示，EG-1mRNA在乳腺癌組織中的表達(dá)率為71%，顯著高于良性乳腺組織的24%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=17.604，P<0.01），表明EG-1基因可能在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。在EG-1mRNA表達(dá)與乳腺癌臨床病理特征的相關(guān)性方面，研究發(fā)現(xiàn)EG-1mRNA表達(dá)與患者年齡、月經(jīng)狀況、腫瘤大小、組織學(xué)分級(jí)、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、Her-2蛋白、p53蛋白表達(dá)均無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。然而，EG-1mRNA表達(dá)與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)率為85.71%，明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的56.76%（P<0.05），說(shuō)明EG-1mRNA高表達(dá)可能促進(jìn)了腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。此外，雖然隨著組織學(xué)分級(jí)的升高，EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)率呈上升趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），可能由于樣本量限制，未能充分顯示出其相關(guān)性，未來(lái)可擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步研究。在預(yù)后方面，單因素生存分析顯示，EG-1mRNA表達(dá)組和未表達(dá)組的總生存曲線和無(wú)病生存曲線均存在顯著差異（P=0.018，P=0.023），表達(dá)組的5年總生存率和無(wú)病生存率均明顯低于未表達(dá)組，表明EG-1mRNA表達(dá)與乳腺癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，高表達(dá)EG-1mRNA的患者預(yù)后較差。多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析進(jìn)一步表明，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)、EG-1mRNA、Her-2蛋白是預(yù)測(cè)總生存率和無(wú)復(fù)發(fā)生存率的獨(dú)立預(yù)后因素，其中EG-1mRNA表達(dá)組死亡風(fēng)險(xiǎn)與未表達(dá)組相比明顯增高，風(fēng)險(xiǎn)比（HR）=3.568，95%置信區(qū)間（CI）為[X43]-[X44]，P=0.005。這進(jìn)一步證實(shí)了EG-1mRNA表達(dá)是乳腺癌患者預(yù)后的重要獨(dú)立危險(xiǎn)因素，對(duì)評(píng)估患者的預(yù)后具有重要價(jià)值。與其他常見(jiàn)的預(yù)后因素相比，EG-1mRNA表達(dá)作為預(yù)后指標(biāo)具有一定的優(yōu)勢(shì)和特點(diǎn)。例如，傳統(tǒng)的預(yù)后因素如淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)等，雖然能夠在一定程度上反映腫瘤的惡性程度和預(yù)后情況，但這些因素往往受到多種因素的影響，且在腫瘤發(fā)展到一定階段后才能夠明確。而EG-1mRNA作為一種分子標(biāo)志物，能夠從基因水平反映腫瘤的生物學(xué)行為，可能在腫瘤發(fā)生的早期階段就出現(xiàn)異常表達(dá)，有助于更早地預(yù)測(cè)患者的預(yù)后。此外，EG-1mRNA的檢測(cè)方法相對(duì)簡(jiǎn)單、快速，具有較高的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性，能夠?yàn)榕R床醫(yī)生提供更及時(shí)、可靠的預(yù)后信息。然而，EG-1mRNA表達(dá)作為預(yù)后指標(biāo)也存在一定的局限性。一方面，其表達(dá)水平可能受到多種因素的干擾，如檢測(cè)方法的差異、樣本的質(zhì)量等，從而影響其準(zhǔn)確性和可靠性。另一方面，EG-1mRNA表達(dá)與其他預(yù)后因素之間的相互作用關(guān)系還需要進(jìn)一步深入研究，以更好地理解其在腫瘤發(fā)生發(fā)展和預(yù)后中的作用機(jī)制。本研究也存在一些不足之處。首先，樣本量相對(duì)較小，可能會(huì)影響研究結(jié)果的普遍性和可靠性。未來(lái)的研究可以擴(kuò)大樣本量，進(jìn)行多中心、大樣本的研究，以進(jìn)一步驗(yàn)證EG-1mRNA表達(dá)與乳腺癌預(yù)后的關(guān)系。其次，本研究?jī)H檢測(cè)了EG-1mRNA的表達(dá)水平，未對(duì)其蛋白表達(dá)水平及相關(guān)信號(hào)通路進(jìn)行深入研究，無(wú)法全面揭示EG-1基因在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。后續(xù)研究可以采用免疫組化、Westernblot等技術(shù)，檢測(cè)EG-1蛋白的表達(dá)情況，并深入探討其與相關(guān)信號(hào)通路的關(guān)系。此外，本研究為回顧性研究，存在一定的選擇偏倚。未來(lái)可以開(kāi)展前瞻性研究，更準(zhǔn)確地評(píng)估EG-1mRNA表達(dá)對(duì)乳腺癌患者預(yù)后的影響。本研究表明EG-1mRNA在乳腺癌組織中高表達(dá)，且其表達(dá)與乳腺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及患者預(yù)后密切相關(guān)，是乳腺癌患者預(yù)后的重要獨(dú)立危險(xiǎn)因素。EG-1mRNA有望成為評(píng)估乳腺癌預(yù)后的分子生物學(xué)標(biāo)記，為臨床治療提供新的思路和靶點(diǎn)。但仍需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量，深入研究其作用機(jī)制，以更好地應(yīng)用于臨床實(shí)踐。五、甲狀腺癌與乳腺癌中EG-1mRNA表達(dá)及預(yù)后相關(guān)性的比較分析5.1兩種癌癥中EG-1mRNA表達(dá)特征的比較通過(guò)對(duì)甲狀腺癌和乳腺癌的研究數(shù)據(jù)進(jìn)行深入分析，發(fā)現(xiàn)EG-1mRNA在這兩種癌癥中的表達(dá)特征存在一定的異同。在表達(dá)水平方面，甲狀腺癌組織中EG-1mRNA的表達(dá)率為73.08%（38/52），乳腺癌組織中EG-1mRNA的表達(dá)率為71%（51/72）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，雖然兩者表達(dá)率較為接近，但甲狀腺癌組織中EG-1mRNA的表達(dá)率略高于乳腺癌組織，不過(guò)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這表明EG-1mRNA在甲狀腺癌和乳腺癌組織中均呈現(xiàn)較高的表達(dá)水平，可能在這兩種癌癥的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中都發(fā)揮著重要作用，但具體作用機(jī)制可能存在差異。在陽(yáng)性率與臨床病理特征的關(guān)系上，兩種癌癥既有相似之處，也有明顯差異。相似點(diǎn)在于，在甲狀腺癌和乳腺癌中，EG-1mRNA表達(dá)與患者年齡、性別（甲狀腺癌）、月經(jīng)狀況（乳腺癌）、腫瘤大小均無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05）。這說(shuō)明這些因素可能不是影響EG-1mRNA表達(dá)的關(guān)鍵因素，或者EG-1mRNA的表達(dá)不受這些常規(guī)臨床因素的直接調(diào)控。差異方面，在甲狀腺癌中，EG-1mRNA表達(dá)與臨床分期密切相關(guān)，隨著臨床分期的升高，EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)率呈上升趨勢(shì)（P<0.05），且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P<0.05）。在乳腺癌中，EG-1mRNA表達(dá)同樣與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者EG-1mRNA陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者（P<0.05），但與組織學(xué)分級(jí)雖有陽(yáng)性表達(dá)率上升趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這表明EG-1mRNA在甲狀腺癌中對(duì)臨床分期的反映更為敏感，而在乳腺癌中，雖然與組織學(xué)分級(jí)的關(guān)系在本次研究中未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，但仍可能存在一定的潛在聯(lián)系，需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行研究。此外，在乳腺癌研究中，還分析了EG-1mRNA表達(dá)與雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、Her-2蛋白、p53蛋白表達(dá)的關(guān)系，結(jié)果顯示均無(wú)明顯相關(guān)性（P>0.05），而在甲狀腺癌研究中未涉及這些指標(biāo)的分析。在與其他相關(guān)因子的關(guān)系上，在乳腺癌研究中發(fā)現(xiàn)EG-1mRNA與VEGF蛋白顯著相關(guān)（P<0.05），提示EG-1可能通過(guò)促進(jìn)VEGF的表達(dá)或與VEGF協(xié)同作用，來(lái)促進(jìn)腫瘤血管生成，從而參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。而在甲狀腺癌研究中，未對(duì)EG-1mRNA與VEGF蛋白或其他相關(guān)血管生成因子的關(guān)系進(jìn)行探討，這可能是未來(lái)研究的一個(gè)重要方向，以進(jìn)一步明確EG-1mRNA在甲狀腺癌血管生成中的作用機(jī)制。5.2兩種癌癥中EG-1mRNA與預(yù)后相關(guān)性的異同在預(yù)后相關(guān)性方面，EG-1mRNA在甲狀腺癌和乳腺癌中表現(xiàn)出諸多相似之處。單因素生存分析結(jié)果顯示，在甲狀腺癌和乳腺癌中，EG-1mRNA表達(dá)組和未表達(dá)組的總生存曲線和無(wú)病生存曲線均存在顯著差異（甲狀腺癌：P總生存=0.025，P無(wú)病生存<0.05；乳腺癌：P總生存=0.018，P無(wú)病生存=0.023）。這表明EG-1mRNA高表達(dá)均與兩種癌癥患者較差的預(yù)后相關(guān)，高表達(dá)EG-1mRNA的患者，其總生存期和無(wú)病生存期均明顯縮短。多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析進(jìn)一步證實(shí)了EG-1mRNA在兩種癌癥預(yù)后評(píng)估中的重要作用。在甲狀腺癌中，EG-1mRNA表達(dá)、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、病理類型均為預(yù)測(cè)甲狀腺癌生存率的獨(dú)立預(yù)后因素，其中EG-1mRNA表達(dá)組死亡風(fēng)險(xiǎn)與未表達(dá)組相比明顯增高，風(fēng)險(xiǎn)比（HR）=4.947，95%置信區(qū)間（CI）為[X37]-[X38]，P=0.008。在乳腺癌中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)、EG-1mRNA、Her-2蛋白是預(yù)測(cè)總生存率和無(wú)復(fù)發(fā)生存率的獨(dú)立預(yù)后因素，EG-1mRNA表達(dá)組死亡風(fēng)險(xiǎn)與未表達(dá)組相比明顯增高，風(fēng)險(xiǎn)比（HR）=3.568，95%置信區(qū)間（CI）為[X43]-[X44]，P=0.005。這說(shuō)明EG-1mRNA表達(dá)在甲狀腺癌和乳腺癌中均是獨(dú)立的預(yù)后危險(xiǎn)因素，對(duì)評(píng)估患者的預(yù)后具有重要價(jià)值。盡管存在相似性，但EG-1mRNA與兩種癌癥預(yù)后相關(guān)性也存在差異。在影響預(yù)后的其他因素方面，在甲狀腺癌中，年齡、腫瘤分期、病理類型等因素對(duì)預(yù)后的影響較為顯著，且與EG-1mRNA表達(dá)共同作為獨(dú)立預(yù)后因素。而在乳腺癌中，除了EG-1mRNA表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移外，Her-2蛋白表達(dá)也是預(yù)測(cè)總生存率和無(wú)復(fù)發(fā)生存率的重要獨(dú)立預(yù)后因素。這表明不同癌癥中，除了EG-1mRNA外，其他影響預(yù)后的關(guān)鍵因素存在差異，提示EG-1mRNA在不同癌癥的預(yù)后機(jī)制中可能與不同的因素相互作用。在風(fēng)險(xiǎn)比（HR）方面，甲狀腺癌中EG-1mRNA表達(dá)組相對(duì)未表達(dá)組的死亡風(fēng)險(xiǎn)比（HR=4.947）略高于乳腺癌中EG-1