八五三農(nóng)場職工醫(yī)院檢查科文獻(xiàn)編號：BWS-07-01-001

作業(yè)指導(dǎo)書第1頁共3頁

第3版第0次修訂

文獻(xiàn)名林：雙抗原夾心ELISA措施檢和艾滋病病毒抗體原則操作規(guī)程實(shí)行日期:2023-7-11

雙抗原夾心ELISA措施檢測艾滋病病毒抗體原則操作規(guī)程

1、目的

規(guī)范抗-HIV抗體檢測操作程序。

2、合用范圍

本實(shí)行細(xì)則使用于對人類血清或血漿中艾滋病毒抗體的初篩檢測。

3、原理

采用央心EL1SA措施檢測血清或血漿樣品中人類免發(fā)缺陷病毒H1V（1+2型）抗體，預(yù)

包被高純度重組HIV（1+2型）抗原，待檢血清中的抗HIV抗體與包被抗原反應(yīng)，再與酶

標(biāo)HIV-1+2型抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，加底物（TMB）顯色，在酌標(biāo)儀

上測定0D值，根據(jù)0D值鑒定有無HIV抗體的存在。

4、環(huán)境條件

室溫18-25C。室內(nèi)相對濕度30-60%

5、試劑與材料

5.1、吸水紙;

5.2、闡明書1份；

5.3、HIV抗原包被板1塊，每板12條，每條8孔；

5.4、HIV酶標(biāo)抗原工作液1瓶；

5.5、50倍濃縮洗液1瓶；

5.6、HIV陽性對照（已滅活）1支;

5.7、HIV陰性對照1支；

5.8、底物液A1瓶；

5.9、底物液B1瓶；

5.10、終止液1瓶；

5.11、封口膠2張；

5.12、塑料袋1個；

5.13、（新鮮）蒸儲水或去離子水；

5.14、一次性V型水槽；

3.15、一次性瓶（塑料）,用于準(zhǔn)備1MB底物液;

5.16>一次性乳膠手套;

5.17、記時器；

5.18、5%次氯酸鈉或其他承認(rèn)消毒液；

5.19、合用盛裝有也許受污染的物品日勺容器；

5.20、尿過氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。

6、儀器

6.1、&標(biāo)儀;

6.2、水浴箱（35-39（0；

6.3、離心機(jī)；

6.4>洗板機(jī)；

八五三農(nóng)場職工醫(yī)院檢查科文獻(xiàn)編號：BWS

第2頁共3頁

作業(yè)指導(dǎo)書

第3版第0次修訂

文獻(xiàn)名林：雙抗原夾心ELISA措施檢測艾滋病病毒抗體原則操作規(guī)程實(shí)行日期:2023-7-11

6.5、打印機(jī)。

7、操作環(huán)節(jié)

7.1、使用前將試劑盒從冰箱中取出平衡至室溫，取出所須板條，剩余的及時封寄存回冰箱。

7.2、每次試驗(yàn)均須設(shè)置空白對照孔2孔，不加樣品和酶結(jié)合物，只加底物和終止液；抗-HIV

陽性對照孔3孔,每孔5?；?00u1。

7.3、其他各孔加待檢測標(biāo)本50或100u1。

7.4、覆蓋粘膠紙,置37c孵育30或60分鐘。

7.5、將50倍濃縮洗液用純化水50倍稀移后備用。

7.6、取出已孵育完畢H勺反應(yīng)板，棄去粘膠紙，放入洗板機(jī)中，吸干板內(nèi)液體，將洗滌液注

滿酶孔（約300u"孔），吸干，反復(fù)5次，在潔凈紗布上將板拍干。

7.7、除空白孔外,每空加入酶標(biāo)抗原工作液50或l（）0ul,貼上封口膠。37c溫育20或30

分鐘。

7.8、洗滌同環(huán)節(jié)7.6。

7.9、每孔加入底物緩沖液A50U1、TMBB50U1,混勻，置37c顯色10分鐘。

7.10、加終止液50ul振蕩反應(yīng)板5秒種，使之充足混勻。

7.1k在酶標(biāo)讀數(shù)儀中，取波長450nm（提議使用雙波長酶標(biāo)儀比色，參照波長630nm）,以

空白對照孔校零，讀取每孔吸取值（加終止液后，務(wù)必在15分鐘內(nèi)讀數(shù)完畢）。

8、質(zhì)量控制與評價(jià)

8.1、抗HIV陽性對照0D值＞0.8,抗HIV陰性對照0D值V0.08或0.12。

8.2、陽性對照0D值有效范圍:20.50。

8.3、陰性對照0D值有效范圍：《0.10。

秒浸泡時間。

9.9、HIV檢測成果的鑒定必須以酶標(biāo)儀的讀數(shù)為準(zhǔn)。提議用雙波長450/630nm檢測。

9.10、不同樣批號的試劑組不可混用。

10、措施編寫根據(jù)

10.1、GB16000-1995o

10.2、《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》。

10.3,科華、吉比愛、梅里埃、萬泰、麗珠HIV1+2抗體診斷試劑使用闡明書。

編寫:

同意日期：年月日實(shí)行日期：年月日

八五三農(nóng)場職工醫(yī)院檢查科文獻(xiàn)編號：BWS-07-01-001

作業(yè)指導(dǎo)書12

第3版第0次修訂

文獻(xiàn)名稱：曲聯(lián)免技法ELISA指族檢測乙4!肝炎表面抗原原則操作規(guī)程實(shí)行日期:2023-7-11

酶聯(lián)免疫法ELISA措施檢測乙型肝炎表面抗原原則操作規(guī)程

1＞目的

規(guī)范乙型肝炎表面抗原檢測操作程序。

2、合用范圍

本實(shí)行細(xì)則使用于對人類血清或血漿日勺乙型肝炎表面抗原初篩檢測。

3、原理

采用單克隆抗-HBs包被反應(yīng)板，加入待測標(biāo)本，同步加入多克隆抗-HBs-HRP,當(dāng)標(biāo)本

中存在HBsAg時，該HBsAg與包被抗-HBs結(jié)合并與抗-HBs-HRP結(jié)合形成抗-HBs-HBAg-

抗-HBs-HRP及合物，加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)，反之則無顯色反應(yīng)。

4、環(huán)境條件

溫18-25℃o室內(nèi)相對濕度30-60%

5、試劑與材料

5.1、吸水紙;

5.2、闡明書1份；

5.3^HBsAg包被板1塊，每板12條，每條8孔;

5.4、HBsAg酶標(biāo)抗體工作液1瓶：

5.5、25倍濃縮洗液1瓶；

5.6、HBsAg陽性對照（已滅活）1支；

5.7、HBsAg陰性對照1支；

3.X、顯色劑A1瓶；

5.9、顯色劑B1瓶；

5.10、終止液1瓶；

5.11、封口膠2張；

5.12、（新鮮）蒸儲水或去離子水；

5.13、一次性V型水槽；

5.14、一次性瓶（塑料），用于準(zhǔn)備IMB底物液;

5.15、一次性乳膠手套;;

5.16、記時器；

5.17、5%次氯酸鈉或其他承認(rèn)消毒液；

5.18、合用盛裝有也許受污染口勺物品日勺容器；

5.19、尿過氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。

6、儀器

6.1、酶標(biāo)儀;

6.2、水浴箱（35-39℃）；

6.3、離心機(jī);

6.4、洗板機(jī);

6.5、打印機(jī)。

八五三農(nóng)場職工醫(yī)院檢查科文獻(xiàn)編號：BWS

第2頁

作業(yè)指導(dǎo)書共2頁

第3版第0次修訂

文獻(xiàn)名稱：的聯(lián)免疫法ELISA措施檢測乙型肝炎灰面抗原原則操作規(guī)程實(shí)行日期：2023-7-11

7、操作環(huán)節(jié)

7.1、使用前將試劑盒從冰箱中取出平衡至室溫，取出所須板條，剩余的及時封寄存回冰箱。

7.2、每次試驗(yàn)均須設(shè)置空白對照孔1孔，不加樣品和酶結(jié)合物，只加底物和終止液：每孔

加入陰性對照（或陽性對照）各50ul（或1滴）。

7.3、其他各孔加待檢測標(biāo)本50ul。

7.4、每孔加入酶結(jié)合物EOul（或1滴）充足混勻，覆蓋粘膠紙，置37c孵育30分鐘。

7.5、將蒸儲水作25倍稀釋后備用。

7.6、取出已孵育完畢打勺反應(yīng)板，棄去粘膠紙，放入洗板機(jī)中，吸干板內(nèi)液體，將洗滌液注

滿每孔（約300ul/孔），吸干，反更5次，在潔凈紗布上將板拍干。

7.7、每孔加顯色劑A液、B液各50ul（或1滴），充足混勻，貼上封口膠。37C溫育15分

鐘。

7.8、每孔加入終止液50。1（或1滴），振蕩反應(yīng)板5秒鐘，使之充足混勻。

7.9、在酶標(biāo)讀數(shù)儀中，取波長450nm（提議使用雙波長酶標(biāo)儀比色，參照波長630nm］，先

以空白對照孔校零，讀取每孔01）值（加終止液后，務(wù)必在15分鐘內(nèi)讀數(shù)完畢）。

8、質(zhì)量控制與評價(jià)

8.UHBsAg陽性對照0D值＞2.1,HBsAg陰性對照0D值V2.1。

8.2、陽性對照0D值有效范圍:22.1。

8.3、陰性對照0D值有效范圍：W0.05。

8.4、陰、陽性對照和被檢樣本的0D值減去空白對照0D值即為計(jì)算值。

8.5、陰性對照值若不不不大于0.05,以0.05計(jì)算。。

9、注意事項(xiàng)

9.1、從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒內(nèi)所有瓶裝試劑及待測標(biāo)本所需微孔反應(yīng)條應(yīng)置37℃平衡

30后方可使用，余者應(yīng)及時封存「冰箱中以備后用.在平衡試劑的同步，待測標(biāo)本需室溫

平衡30分鐘后再行測試。

9.2使用前試劑應(yīng)搖勻，并棄去1?2滴后垂直滴加。

3、封片不能反復(fù)使用，

4、成果判斷須在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完畢。

5、不同樣批號試劑不可混用。

6、待測標(biāo)本不可用NaN3%腐。

7、本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病試驗(yàn)室檢查規(guī)程處理。

10＞貯存條件和有效期

試劑盒應(yīng)置2c?8℃中避光保留，有效期十二個月。國藥準(zhǔn)字S10910105（48人份）

國藥準(zhǔn)字S10910105（96人份）

10、措施編寫根據(jù)

10.1、GB16000-1995o

10.2、《全國臨床檢查操作規(guī)程》。

10.3、科華、吉比愛、梅里埃、萬泰、麗珠HBV抗體診斷試劑使用闡明書。

編寫：

同意日期：年月日實(shí)行日期：年月日

八五三農(nóng)場職工醫(yī)院檢查科文獻(xiàn)編號：BWS-07-01-001

作業(yè)指導(dǎo)書第1頁共2頁

第3版第0次修訂

文獻(xiàn)名稱：附聯(lián)免技法ELISA措施檢測乙型肝炎衣而抗體猊則悌作規(guī)程實(shí)行日期：2007-7-11

酶聯(lián)免疫法ELISA措施檢測乙型肝炎表面抗體原則操作規(guī)程

1、目的

規(guī)范乙型肝炎表面抗體檢測操作程序。

2、合用范圍

本實(shí)行細(xì)則使用于對人類血清或血漿的乙型肝炎表面抗體初篩檢測。

3、原理

采用純化單克隆HBsAg包被反應(yīng)板，加入待測標(biāo)本，同步加入HBsAg-HRP,當(dāng)標(biāo)本中

存在抗-HBs時，該抗-HBs與包被HBsAg結(jié)合并與酶結(jié)合物結(jié)合形成HBsAg復(fù)合物，加入

TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)，反之則無顯色反應(yīng)。

4、環(huán)境條件

溫18-25C。室內(nèi)相對濕度30-60%

5、試劑與材料

5.1、吸水紙；

5.2、闡明書1份；

5.3、抗-HBs包被板1塊，每板12條，每條8孔；

S.4、抗-HR*酶標(biāo)抗體工作液1瓶:

5.5、25倍濃縮洗液1瓶；

5.6、抗-MBs陽性對照（已滅活）1支；

5.7、抗-MBs陰性對照1支；

5.8、顯色劑A1瓶；

5.9、顯色劑B1瓶；

5.10、終止液1瓶；

5.11、封口膠2張；

5.12、（新鮮）蒸儲水或去離子水;

3.13、一次性V型水槽；

5.14、一次性瓶（塑料），用于準(zhǔn)備TMB底物液;

5.15、一次性乳膠手套;

5.16、記時器；

5.17、5%次氯酸鈉或其他承認(rèn)消毒液；

5.18、合用盛裝有也許受污染的物品口勺容器；

5.19、尿過氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。

6、儀器

6.1、隨標(biāo)儀；

6.2、水浴箱（35-39℃）；

6.3、離心機(jī)；

6.4、洗板機(jī)；

6.5、打印機(jī)。

八五三農(nóng)場職工醫(yī)院檢查科文獻(xiàn)編號：BWS-07-01-001

第2頁

作業(yè)指導(dǎo)書共2頁

第3版第0次修訂

文獻(xiàn)名稱：前聯(lián)免疫法ELISA措施檢測乙型肝炎衣面抗體原則操作規(guī)程實(shí)行日期：2OO7-7-1I

6.5、打印機(jī)。

7、操作環(huán)節(jié)

7.1、使用前將試劑盒從冰箱中取出平衡至室溫，取出所須板條，剩余的及時封寄存回冰箱。

7.2、每次試驗(yàn)均須設(shè)置空白對照孔1孔，不加樣品和醛結(jié)合物，只加底物和終止液；每孔

加入陰性對照（或陽性對照）各50ul（或1滴）。

7.3、其他各孔加待檢測標(biāo)本50ul。

7.4、母孔加入酸結(jié)合物￡Oul（或1滴）充足混勻，覆蓋粘膠紙，置37C孵育30分鐘。

7.5、將蒸儲水作25倍稀釋后備用。

7.6、取出已孵育完畢日勺反應(yīng)板，棄去粘膠紙，放入洗板機(jī)中，吸干板內(nèi)液體，將洗滌液注

滿每孔（約300U1/孔），吸干，反復(fù)5次，在潔凈紗布上將板拍干。

7.7、每孔加顯色劑A液、B液各50ul（或1滴），充足混勻，貼上封口膠。37c溫育15分

鐘。

7.8、每孔加入終止液5041（或1滴），振蕩反應(yīng)板5秒鐘，使之充足混勻。

7.9、在酶標(biāo)讀數(shù)儀中，取波長450nm（提議使用雙波長酶標(biāo)儀比色，參照波長630nm］，先

以空白對照孔校零，讀取每孔OD值（加終止液后，務(wù)必在15分鐘內(nèi)讀數(shù)完畢）。

8、質(zhì)量控制與評價(jià)

8.1、抗-HBs陽性對照0D值＞2.1,抗-HBs陰性對照OD值V2.1。

8.2、陽性對照OD值有效范圍:22.1。

8.3、陰性對照0D值有效范圍:W0.05。

8.4、陰、陽性對照和被檢樣本的0D值減去空白對照0D值即為計(jì)算值。

8.5、陰性對照值若不不不大于0.05,以0.05計(jì)算。。

9、注意事項(xiàng)

9.1、從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒內(nèi)所有瓶裝試劑及待測標(biāo)本所需微孔反應(yīng)條應(yīng)置37℃平衡

30后方可使用，余者應(yīng)及時封存于冰箱中以備后用。在平衡試劑的同步，待測標(biāo)本需室溫

平衡30分鐘后再行測試。

9.2使用前試劑應(yīng)搖勻，并棄去1?2滴后垂直滴加。

3、封片不能反復(fù)使用。

4、成果判斷須在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完畢。

5、不同樣批號試劑不可混用。

6、待測標(biāo)本不可用NaN3坊腐。

7、本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病試驗(yàn)室檢查規(guī)程處理。

10、貯存條件和有效期

試劑盒應(yīng)置2c?8℃中避光保留，有效期十二個月。國藥準(zhǔn)字S10910105（48人份）

國藥準(zhǔn)字S10910105（96人份）

10、措施編寫根據(jù)

10.1、GB16000-1995o

10.2、《全國臨床檢查操作規(guī)程》。

10.3、科華、吉比愛、梅里埃、萬泰、麗珠HBV抗體診斷試劑使用闡明書。

編寫：

同意日期：年月日實(shí)行日期：年月日

八五三農(nóng)場職工醫(yī)院檢查科文獻(xiàn)編號：BWS-07-01-001

止七匕日書1第1頁共2頁

第3版第0次修訂

文Itt名稱：幅聯(lián)免援法ELISA措施檢網(wǎng)乙型肝炎c抗原原則操作規(guī)程實(shí)行日期：2007-7-11

酶聯(lián)免疫法ELISA措施檢測乙型肝炎e抗原原則操作規(guī)程

1、目的

規(guī)范乙型肝炎e抗原檢測操作程序。

2、合用范圍

本實(shí)行細(xì)則使用于對人類血清或血漿R勺HBsAg初篩檢測。

3、原理

采用多克隆抗-HBe包被反應(yīng)板，加入待測標(biāo)本，同步加入單克隆抗-HBe-HRP,如待測

標(biāo)本中具有HBeAg時就與包被抗-HBc、抗-HBc-HRP結(jié)合形成復(fù)合物，加入TMB底物產(chǎn)

生顯色反應(yīng)，反之則無顯色反應(yīng)。

4、環(huán)境條件

溫18-25℃o室內(nèi)相對濕度30-60%

5、試劑與材料

5.1、吸水紙；

5.2、闡明書1份；

5.3、抗-HBe包被板1塊，每板12條，每條8孔；

5.4、HBeAg酶標(biāo)抗體工作液1瓶；

5.5、25倍濃縮洗液1瓶；

5.6、HBeAg陽性對照（已滅活）1支；

5.7、HBeAg陰性對照1支；

5.8、顯色劑A1瓶;

5.9、顯色劑B1瓶；

5.10、終止液1瓶；

5.11＞封口膠2張；

5.12、（新鮮）蒸儲水或去離子水；

5.13、一次性V型水槽;

5.14＞一次性瓶（塑料）,用于準(zhǔn)備TMB底物液;

5.15、一次性乳膠手套；

5.16^記時器；

3.17、3%次氯酸鈉或其他承認(rèn)消毒液；

5.18＞合用盛裝有也許受污染口勺物品日勺容器；

5.19＞尿過氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。

6、儀器

6.1、酶標(biāo)儀;

6.2、水浴箱（35-39℃）；

6.3、離心機(jī);

6.4、洗板機(jī)；

6.5、打印機(jī)。

八五三農(nóng)場職工醫(yī)院檢查科文獻(xiàn)編號：BWS-07-01-001

第2頁共2頁

作業(yè)指導(dǎo)書

第3版第0次修訂

文獻(xiàn)名游：的聯(lián)免疫法ELISA措箱檢測乙型引炎c杭原原則操作晚程實(shí)行日期：2007-7-11

7、操作環(huán)節(jié)

7.1、使用前將試劑盒從冰箱中取出平衡至室溫，取出所須板條，剩余的及時封寄存回冰箱。

7.2、每次試驗(yàn)均須設(shè)置空白對照孔1孔，不加樣品和酶結(jié)合物，只加底物和終止液；每孔

加入陰性對照（或陽性對照）各50ul（或1滴）。

7.3、其他各孔加待檢測標(biāo)本50ulo

7.4、每孔加入酶結(jié)合物EOul（或1滴）充足混勻，覆蓋粘膠紙，置37℃孵育30分鐘。

7.5、將蒸儲水作25倍稀釋后備用。

7.6、取出已孵育完畢H勺反應(yīng)板，棄去粘膠紙，放入洗板機(jī)中，吸干板內(nèi)液體，將洗滌液注

滿每孔（約300U1/孔），吸干，反復(fù)5次，在潔凈紗布上將板拍干。

7.7、每孔加顯色劑A液、B液各50ul（或1滴），充足混勻，貼上封口膠。37℃溫育15分

鐘。

7.8、每孔加入終止液5011（或1滴），振蕩反應(yīng)板5秒鐘，使之充足混勻。

7.9、在酶標(biāo)讀數(shù)儀中，取波長450nm（提議使用雙波長酶標(biāo)儀比色，參照波長63（）nm）,先

以空白對照孔校零，讀取每孔0D值（加終止液后，務(wù)必在15分鐘內(nèi)讀數(shù)完畢）。

8、質(zhì)量控制與評價(jià)

8.1、HBsAg陽性對照0D值＞2.1,HBsAg陰性對照0D值V2.1。

8.2、陽性對照0D值有效范圍：22.1。

8.3、陰性對照0D值有效范圍：W0.05。

8.4、陰、陽性對照和被檢樣本的0D值減去空白對照0D值即為計(jì)算值。

8.5、陰性對照值若不不不大于0.05,以0.05計(jì)算。。

9、注意事項(xiàng)

9.1、從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒內(nèi)所有瓶裝試劑及待測標(biāo)本所需微孔反應(yīng)條應(yīng)置37℃平衡

30后方可使用，余者應(yīng)及時封存于冰箱中以備后用。在平衡試劑的同步，待測標(biāo)本需室溫

平衡30分鐘后再行測試。

9.2使用前試劑應(yīng)搖勻，并棄去1?2滴后垂直滴加。

3、封片不能反復(fù)使用。

4、成果判斷須在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完畢。

5、不同樣批號試劑不可混用。

6、待測標(biāo)本不可用NaN3防腐。

7、本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病試驗(yàn)室檢查規(guī)程處理。

10、貯存條件和有效期

試劑盒應(yīng)置2C?8c中避光保留，有效期十二個月。國藥準(zhǔn)字S10910103（48人份）

國藥準(zhǔn)字S10910105（96人份）

10、措施編寫根據(jù)

10.1、GB16000-1995o

10.2、《全國臨床檢查操作規(guī)程》。

10.3、科華、吉比愛、梅里埃、萬泰、麗珠HBV抗體診斷試劑使用闡明書。

編寫：

同意日期：年月日實(shí)行日期：年月日

八五三農(nóng)場職工醫(yī)院檢查科文文獻(xiàn)獻(xiàn)編編號號：：BBWWSS--0077--0011-0-00011

作業(yè)指導(dǎo)書第1頁共2頁

第3版第0次修訂

文獻(xiàn)名稱：酪聯(lián)免疫法EL1SA指施檢犯乙型肝炎c抗體原則操作熄程實(shí)行日期：2007-7-11

酶聯(lián)免疫法ELISA措施檢測乙型肝炎e抗體原則操作規(guī)程

1、目的

規(guī)范乙型肝炎e抗體檢測操作程序。

2、合用范闈

本實(shí)行細(xì)則使用于對人類血清或血漿H勺乙型肝炎c抗體檢測。

3、原理

采用多克隆抗-HBe基因工程重組HBcAg包被反應(yīng)板，加入待測標(biāo)本，同步加入單克隆

抗-HBeAg-HRP,與抗原形成競爭結(jié)合，如待測標(biāo)本中抗-HBc含量高，則抗-HBe-HRP與

HBeAg結(jié)合少，加入TMB底物時顯色淡，反之則無顯色深。

4、環(huán)境條件

溫18-25C。室內(nèi)相對濕度30-60%

5、試劑與材料

3.1、吸水紙；

5.2、闡明書1份；

5.3、抗-HBc包被板1塊，每板12條，每條8孔；

5.4、抗-HBs醉標(biāo)抗體工作液1瓶；

5.5>25倍濃縮洗液1瓶；

5.6、抗-HBs陽性對照（已滅活）1支；

5.7、抗-HBs陰性對照1支;

5.8、顯色劑A1瓶；

5.9、顯色劑B1瓶；

5.10>終止液1瓶；

5.11、封口膠2張；

5.12、（新鮮）蒸儲水或去離子水；

5.13、一次性V型水槽;

5.14、一次性瓶（塑料），用于準(zhǔn)備TMB底物液;

5.15>一次性乳膠手套:

5.16、記時器；

5.17、5%次氨酸鈉或其他承認(rèn)消毒液；

5.18、合用盛裝有也許受污染的物品的容器;

5.19、尿過氧化物溶液2瓶，每瓶Umi。

6、儀器

6.1、酶標(biāo)儀；

6.2、水浴箱（33-39C）；

6.3、離心機(jī)；

6.4、洗板機(jī)；

6.5、打印機(jī)。

八五三農(nóng)場職工醫(yī)院檢查科文獻(xiàn)編號：BWS-07-01-001

作業(yè)指導(dǎo)書第2頁共2頁

第3版第0次修訂

文獻(xiàn)名楊:：酸聯(lián)免皎法EI.ISA措施檢測乙型肝炎c杭體麻則操作規(guī)程實(shí)行日期：2007-7-11

7、操作環(huán)節(jié)

7.1、使用前將試劑盒從冰箱中取出平衡至室溫，取出所須板條，剩余的J及時封寄存回冰箱。

7.2,每次試驗(yàn)均須設(shè)置空白對照孔1孔，不加樣品和酶結(jié)合物，只加底物和終止液：每孔

加入陰性對照（或陽性對照）各50ul（或1滴）。

7.3、其他各孔加待檢測標(biāo)本50ul。

7.4、每孔加入酶結(jié)合物EOul（或1滴）充足混勻，覆蓋粘膠紙，置37℃孵育30分鐘。

7.5、將蒸儲水作25倍稀釋后備用。

7.6、取出已孵育完畢的反應(yīng)板，棄去粘膠紙，放入洗板機(jī)中，吸干板內(nèi)液體，將洗滌液注

滿每孔（約300ul/孔），吸干，反復(fù)5次，在潔凈紗布上將板拍干。

7.7、每孔加顯色劑A液、B液各50ul（或1滴），充足混勻，貼上封口膠。37℃溫育15分

鐘。

7.8、每孔加入終止液50（或1滴），振蕩反應(yīng)板5秒鐘，使之充足混勻。

7.9、在酶標(biāo)讀數(shù)儀中，取波長450nm（提議使用雙波長前標(biāo)儀比色，參照波長63（）nm〕，先

以空白對照孔校零，讀取每孔OD值（加終止液后，務(wù)必在15分鐘內(nèi)讀數(shù)完畢）。

8、質(zhì)量控制與評價(jià)

8.1、抗陽性對照01）值VCOV,抗-HBe陰性對照01）值出CUV。

8.2、陽性對照0D值有效范圍：＜C0Vo

8.3、陰性對照0D值有效范圍：2C0L

8.4、陰、陽性對照和被檢樣本的0D值減去空白對照0D值即為計(jì)算值。

8.5、陰性對照值若不不不大于0.05,以0.05計(jì)算。。

9、注意事項(xiàng)

9.1、從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒內(nèi)所有瓶裝試劑及待測標(biāo)本所需微孔反應(yīng)條應(yīng)置37℃平衡

30后方可使用，余者應(yīng)及時封存了冰箱中以備后用。在平衡試劑的同步，待測標(biāo)本需室溫

平衡30分鐘后再行測試。

9.2使用前試劑應(yīng)搖勻，并棄去1?2滴后垂直滴加。

3、封片不能反復(fù)使用。

4、成果判斷須在反應(yīng)終止后1（）分鐘內(nèi)完畢。

5、不同樣批號試劑不可混用。

6、待測標(biāo)本不可用NaN3防腐。

7、本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病試驗(yàn)室檜查規(guī)程處理。

10＞貯存條件和有效期

試劑盒應(yīng)置2c?8c中避光保留，有效期十二個月。國藥準(zhǔn)字S10910105（48人份）

國藥準(zhǔn)字S1091005（96人份）

10、措施編寫根據(jù)

10.1、GB16000-1995o

10.2、《全國臨床檢查操作規(guī)程》。

10.3、科華、吉比愛、梅里埃、萬泰、麗珠HBV抗體診斷試劑使用闡明書。

編寫:

同意日期：年月日實(shí)行日期：年月日

八五三農(nóng)場職工醫(yī)院檢查科文獻(xiàn)編號：BWS-07-01-001

作業(yè)指導(dǎo)書第1頁共2頁

第3版第0次修訂

文獻(xiàn)片稱：的聯(lián)免技法ELISA措施檢測乙型肝炎關(guān)鍵抗體原則搽作規(guī)程實(shí)行日期：2007-7-11

酶聯(lián)免疫法ELISA措施檢測乙型肝炎關(guān)鍵抗體原則操作規(guī)程

1、目的

規(guī)范乙型肝炎關(guān)鍵抗體檢測操作程序。

2、合用范圍

本實(shí)行細(xì)則使用于對人類血清或血漿的乙型肝炎關(guān)鍵抗體初篩檢測。

3、原理

采用基因工程重組HBcAg包被反應(yīng)板，加入待測標(biāo)本，同步加入抗-HBc-HRP,與抗原

形成競爭結(jié)合，如待測標(biāo)本中抗-HBc含量高，則抗-HBc-HRP與HBcAg結(jié)合少，加入TMB

底物時顯色淡?.反之則顯色深。

4、環(huán)境條件

溫18-25C。室內(nèi)相對濕度30-60%

5、試劑與材料

5.1、吸水紙；

5.2、闡明書1份；

5.3、HBcAg包被板1塊，每板12條，每條8孔;

5.4、抗-HBc酶標(biāo)抗體工作液1瓶；

5.5、25倍濃縮洗液1瓶；

3.6、抗-HBc陽性對照（已滅活）1支；

5.7、抗-HBc陰性對照1支；

5.8、顯色劑A1瓶；

5.9、顯色劑B1瓶；

5.10、終止液1瓶；

5.11、封口膠2張；

5.12、（新鮮）蒸儲水或去離子水；

5.13、一次性V型水槽；

5.14、一次性瓶（塑料），用于準(zhǔn)備TMB底物液；

5.15、一次性乳膠手套;

5.16、記時器；

5.17、5%次氯酸鈉或其他承認(rèn)消毒液：

5.18、合用盛裝有也許受污染的物品日勺容器;

5.19、尿過氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。

6、儀器

6.1、酶標(biāo)儀；

6.2、水浴箱（35-39C）；

6.3、離心機(jī);

6.4、洗板機(jī);

6.5、打印機(jī)。

八五三農(nóng)場職工醫(yī)院檢查科文獻(xiàn)編號：BWS-O7-O1-(X)1

第2頁共2頁

作業(yè)指導(dǎo)書

第3版第0次修訂

文獻(xiàn)名稱：梆聯(lián)免枝法ELISA措皎檢測乙型肝炎關(guān)鍵抗體原則操作規(guī)程實(shí)行日期:2007-7-11

7、操作環(huán)節(jié)

7.1、使用前將試劑盒從冰箱中取出平衡至室溫，取出所須板條，剩余的及時封寄存回冰箱。

7.2、每次試驗(yàn)均須設(shè)置空白對照孔1孔，不加樣品和酸結(jié)合物，只加底物和終止液；每孔

加入陰性對照（或陽性對照）各50ul（或1滴）。

7.3、其他各孔加待檢測標(biāo)本5（）ul（待測標(biāo)本用生理鹽水作1：30稀釋，檢測成果為臨床意

義；或原血清不作稀釋，檢測成果為流行病學(xué)意義，）。

7.4、每孔加入酶結(jié)合物￡0ul（或1滴）充足混勻，覆蓋粘膠紙，置37c孵育30分鐘。

7.5、將洗滌液用蒸儲水作25倍稀釋后備用。

7.6、取出已孵育完畢的I反應(yīng)板，棄去粘膠紙，放入洗板機(jī)中，吸干板內(nèi)液體，將洗滌液注

滿每孔（約300口以孔），吸干，反復(fù)5次，在潔凈紗布上將板拍干。

7.7、每孔加顯色劑A液、B液各50ul（或1滴），充足混勻，貼上封口膠。37C溫育15分

鐘。

7.8、每孔加入終止液50J1（或1滴），振蕩反應(yīng)板5秒鐘，使之充足混勻。

7.9、在酶標(biāo)讀數(shù)儀中，取波長450nm（提議使用雙波長酶標(biāo)儀比色，參照波長630nm）,先

以空白對照孔校零，讀取每孔OD值（加終止液后，務(wù)必在15分鐘內(nèi)讀數(shù)完畢）。

8、質(zhì)量控制與評價(jià)

8.1、CutoffValue計(jì)算：

8.2、原倍血清C0V=陰性對照平均0D值X0.3

8.3、1：30稀釋血清C0V=陰性對照平均0D值X0.5

8.4、標(biāo)本0D值2C0V為陰性，標(biāo)本0D值VC0V為陽性。

9、注意事項(xiàng)

9.）、從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒內(nèi)所有瓶裝試劑及待測標(biāo)本所需微孔反應(yīng)條應(yīng)置37℃平衡

30后方可使用，余者應(yīng)及時封存于冰箱中以備后用.在平衡試劑的同步，待測標(biāo)本需室溫

平衡30分鐘后再行測試。

9.2使用前試劑應(yīng)搖勻，并棄去1?2滴后垂直滴加。

9.3、封片不能反復(fù)使用。

9.4、成果判斷須在反應(yīng)終止后10分鐘內(nèi)完畢。

9.5、不同樣批號試劑不可混用。

9.6、待測標(biāo)本不可用NaN3防腐。

9.7、本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病試驗(yàn)室檢查規(guī)程處理。

10＞貯存條件和有效期

試劑盒應(yīng)置2℃?8c中避光保留，有效期十二個月。國藥準(zhǔn)字S10910105（48人份）

國藥準(zhǔn)字S10910105（96人份）

10、措施編寫根據(jù)

10.1、GB16000-1995o《全國臨床檢查操作規(guī)程》

10.2、科華、吉比愛、梅里埃、萬泰、麗珠抗體診斷試劑使用闡明書。

編寫：

同意日期：年月日實(shí)行日期：年

月H

八五三農(nóng)場職工醫(yī)院檢查科文獻(xiàn)編號：BWS-07-01-001

作業(yè)指導(dǎo)書第1頁共2頁

第3版第0次修訂

文獻(xiàn)名稱：的聯(lián)免疫法ELISA措奐校測丙型肝炎槍毒抗體除則操作規(guī)程實(shí)行日期：2007-7-11

酶聯(lián)免疫法ELISA措施檢測丙型肝炎病毒抗體原則操作規(guī)程

1、目的

規(guī)范丙型肝炎病毒抗體檢測操作程序。

2、合用范圍

本實(shí)行細(xì)則使用于對人類血清或血漿的丙型肝炎病毒抗體篩選檢測。

3、原理

采用EIA間接測定法，在預(yù)包被有丙肝抗原的反應(yīng)孔內(nèi)加入待測標(biāo)本，若標(biāo)本中有抗

HCV,則可在微孔板表面形成抗原一抗體復(fù)合體，再于酶標(biāo)抗人IgG結(jié)合，形成抗原一抗

體一酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)顯色系統(tǒng)顯色后，根據(jù)OD值究定有無HCV抗體的存在。

4、環(huán)境條件

溫18-253室內(nèi)相對濕度30?60%

5、試劑與材料

5.1、吸水紙;

5.2、闡明書1份;

5.3、HCV抗原包被板1塊，每板12條，每條8孔;

5.4、HCV酶標(biāo)抗體工作液1瓶；

5.5、20倍濃縮洗液1瓶；

5.6、HCV陽性對照（已滅活）1支；

5.7、HCV陰性對照1支；

5.8、顯色劑A1瓶；

5.9、顯色劑B1瓶；

5.10、終止液1瓶；

3.11、封口膠2張；

5.12、（新鮮）蒸儲水或去離子水;

5.13、一次性V型水槽；

5.14>一次性瓶（塑料）,用于準(zhǔn)備TMB底物液；

5.15、一次性乳膠手套；

5.16、記時器；

5.17、5%次氯酸鈉或其他承認(rèn)消毒液；

5.18、合用盛裝有也許受污染口勺物品口勺容器；

5.19、尿過氧化物溶液2瓶，每瓶11ml。

6、儀器

6.1、能標(biāo)儀；

6.2、水浴箱（35-39℃）；

6.3、離心機(jī);

6.4、洗板機(jī);

6.5、打印機(jī)。

八五三農(nóng)場職工醫(yī)院檢查科文獻(xiàn)編號:BWS-()7-()l-(X)l

作業(yè)指導(dǎo)書第2頁共2頁

第3版第0次修訂

文獻(xiàn)名稱：酣聯(lián)免疫法ELISA搭施檢測丙型肝炎病毒抗體原則操作規(guī)程實(shí)行日期:2007-7-11

7、操作環(huán)節(jié)

7.1、使用前將試劑盒從冰箱中取出平衡至室溫，取出所須板條，剩余的及時封寄存回冰箱。

7.2、每次試驗(yàn)均須設(shè)置空白對照孔】孔，不加樣品和酸結(jié)合物，只加底物和終止液；每孔

加入陰性對照（或陽性對照）各lOOul（或2滴）。加樣品稀釋液100ulo其他孔加入

100ul樣品稀釋液再加待測血清10ul。充足混勻后，置37C孵育30分鐘。棄去孔

內(nèi)樣品，扣干。

7.3、將洗滌液用蒸儲水作20倍稀釋后備用。用洗滌液注滿每孔（至少300ul洗滌液/孔）

勿溢出，靜置5分鐘后扣干，反復(fù)5次。

7.4、每孔加入酶結(jié)合物lOOul（或2滴）充足混勻（空白對照孔除外）,覆蓋粘膠紙,置37c

孵育20分鐘同上法洗反應(yīng)板5次。

7.5、每孔加顯色劑A液、B液各50ul（或1滴），充足混勻，貼上封口膠。37c溫育1（）分

鐘。

7.8、每孔加入終止液501（或1滴），振蕩反應(yīng)板5秒鐘，使之充足混勻。

7.9、在酷標(biāo)讀數(shù)儀中，取波長450nm（提議使用雙波長酶標(biāo)儀比色，參照波長630nm）,先

以空白對照孔校零，讀取每孔0D值（加終止液后，務(wù)必在15分鐘內(nèi)讀數(shù)完畢）。

8、質(zhì)量控制與評價(jià)

8.1、陽性對照平均值不不大于1.20,試驗(yàn)成果有效。

8.2、試驗(yàn)設(shè)計(jì)規(guī)定陽性、陰性對照0D值之差應(yīng)不不大于1.20,否則本次試驗(yàn)無效。

8.3、若陰性對照讀數(shù)不不不大于0.050時，按0.050計(jì)算。

8.4、臨界值（Cutoffvalue）=陰性對照平均值+0.1。

8.5、測試標(biāo)本的計(jì)算值不不不大于Cutoffvalue則為HCV抗體陰性。

8.6、測試標(biāo)本的計(jì)算值等于或不不大于Cutoffvalue則為HCV抗體陽性。

9、注意事項(xiàng)

9.】、從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應(yīng)置溫平衡20分鐘再進(jìn)行測試。

9.2、%Tween20o用前1。倍稀釋成0.01MBPS—0.05%Tween20。

9.3、本試劑盒中附樣品稀釋液采用變色技術(shù)，在加原始血清或血漿標(biāo)本后由黃綠色變?yōu)樗{(lán)

紫色。非原始血清或血漿（如稀釋標(biāo)本等）顏色變化不明顯或變?yōu)槠渌伾瑸檎?/p>

現(xiàn)象。

9.5、不同樣批號試劑請勿通用。

9.6、本試劑盒應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)，請按傳染病試驗(yàn)室檢查規(guī)程處理。

10、貯存條件和有效期

試劑盒