階段28基因工程選擇性必修3生物技術(shù)與工程202X/01/01匯報人：【滾動判斷】1.DNA聚合酶的作用機制是催化以DNA為模板的子鏈延伸。(

)2.啟動子是基因編碼區(qū)中RNA聚合酶識別并結(jié)合的部位。(

)3.神經(jīng)細(xì)胞興奮后恢復(fù)為靜息狀態(tài)的過程消耗ATP。(

)4.小鼠體內(nèi)血糖濃度對胰高血糖素的分泌存在反饋調(diào)節(jié)。(

)5.受到光刺激后光敏色素的結(jié)構(gòu)會發(fā)生變化，進(jìn)而影響特定基因的表達(dá)。(

)6.

脫分化和再分化的本質(zhì)都是基因的選擇性表達(dá)。(

)√×√√√√7.

懸浮生長的動物細(xì)胞傳代培養(yǎng)和原代培養(yǎng)都需要使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶，必須控制好酶的用量和處理時間。(

)8.

動物細(xì)胞培養(yǎng)時添加適量抗生素有助于實現(xiàn)“無毒”。(

)9.

動物細(xì)胞融合和植物細(xì)胞融合操作步驟相同，但誘導(dǎo)融合的手段不完全相同。(

)10.

單克隆抗體制備時多次注射同種抗原蛋白，主要目的是大量獲得免疫過的B細(xì)胞。(

)11.

單克隆抗體制備過程中，克隆化培養(yǎng)后再用選擇培養(yǎng)基篩選獲得能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。(

)×××√×12.

耐高溫的DNA聚合酶濃度過低會引起非特異性擴增產(chǎn)物增多。(

)13.

與傳統(tǒng)的抗生素抗性基因相比，用GFP(綠色熒光蛋白基因)作為標(biāo)記基因具有可定性、定量和定位分析的顯著優(yōu)點。(

)14.Mg2＋濃度過高或引物太短會引起非特異性擴增產(chǎn)物增多。(

)15.

某PCR的一對引物的退火溫度差異不能太大，否則影響擴增效果。(

)16.

引物設(shè)計時可在引物的3′端添加合適的酶切位點或同源序列，便于基因表達(dá)載體的構(gòu)建。(

)×√√√×【基礎(chǔ)填空】1.

基因工程的原理是____________，優(yōu)點是定向改造生物的____________、克服遠(yuǎn)緣雜交不親和障礙。2.

重組DNA技術(shù)的基本工具(1)限制性內(nèi)切核酸酶(簡稱：限制酶)，主要是從______生物中分離純化出來的?？梢宰R別______的核苷酸序列并切開特定部位的兩個核苷酸之間的____________鍵，產(chǎn)生________________________。基因重組遺傳性狀原核特定磷酸二酯黏性末端或平末端(2)DNA連接酶連接兩個_______________，恢復(fù)被限制酶切開的兩個核苷酸之間的____________鍵。按來源可分為E.coliDNA連接酶和___________________，兩者都能連接______________________，但是E.coliDNA連接酶連接平末端的效率比后者_(dá)__很多。目的基因和載體____________能避免自身環(huán)化和反向連接，提高連接的有效性。DNA片段磷酸二酯T4DNA連接酶黏性末端和平末端低定向連接(3)載體①種類：______、λ噬菌體的衍生物或噬菌體、動植物病毒等。②特點：具有一個或多個______________________；在受體細(xì)胞中能進(jìn)行____________，或整合到受體DNA上，隨受體DNA同步復(fù)制；具有____________，便于篩選______________________________。③載體上的______基因一般是一些抗生素的抗性基因，作用是______________________________________________________。天然的質(zhì)粒必須經(jīng)過____________才能作為載體。質(zhì)粒限制酶的切割位點自我復(fù)制標(biāo)記基因含有目的基因的受體細(xì)胞標(biāo)記便于重組DNA分子的篩選或供重組DNA的鑒定和選擇人工改造3.

基因工程中獲取目的基因的方法有：______________________、_____________________、人工合成等。4.PCR技術(shù)的三個步驟為：第一步______，加熱至90℃以上，DNA解鏈為單鏈；第二步______，冷卻至50℃左右，引物結(jié)合到互補DNA鏈；第三步______，加熱至72℃左右，耐高溫的DNA聚合酶(Taq酶)從引物起始進(jìn)行互補鏈的合成。如此重復(fù)循環(huán)多次。5.

基因表達(dá)載體的組成：__________________________________________________等。啟動子是__________________識別和結(jié)合的部位，驅(qū)動轉(zhuǎn)錄。利用PCR獲取和擴增變性復(fù)性延伸啟動子、目的基因、終止子、標(biāo)記基因、復(fù)制原點RNA聚合酶構(gòu)建基因文庫獲取6.

農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法用于將目的基因?qū)隷_____細(xì)胞；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞的方法常用_______________；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法：一般先用______處理細(xì)胞使其處于一種能吸收周圍環(huán)境中______分子的生理狀態(tài)，然后再將重組的基因表達(dá)載體導(dǎo)入其中。還可利用病毒的_________實現(xiàn)對相應(yīng)宿主細(xì)胞的特異性導(dǎo)入。7.

檢查轉(zhuǎn)基因抗蟲棉是否培育成功(1)分子水平的檢測，包括通過_____等技術(shù)檢測棉花的染色體DNA上是否插入了Bt基因(DNA分子雜交技術(shù))或檢測Bt基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA(分子雜交技術(shù))；從轉(zhuǎn)基因棉花中提取蛋白質(zhì)，用相應(yīng)的抗體進(jìn)行_______________雜交，檢測Bt基因是否翻譯成Bt抗蟲蛋白等。(2)需要進(jìn)行_______________水平的鑒定。植物顯微注射法Ca2＋DNA侵染性PCR抗原—抗體個體生物學(xué)8.

蛋白質(zhì)工程通過對基因操作來實現(xiàn)對天然蛋白質(zhì)的改造的主要原因是：①__________________________________________________________________；②______________________________________________________。9.DNA在________________________和_______________________中溶解度低，而在_______________________________中溶解度較高。DNA鑒定的主要流程是“溶”(DNA粗提物溶解在2mol·L－1NaCl溶液中)→“加”(__________________)→“沸”(_______________)→“冷”(冷卻后觀察藍(lán)色的出現(xiàn))。蛋白質(zhì)具有十分復(fù)雜的空間結(jié)構(gòu)，而基因的結(jié)構(gòu)相對簡單，容易改造改造后的基因可以遺傳給下一代，而被改造的蛋白質(zhì)無法遺傳0.14mol·L－1的NaCl溶液體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精水和2mol·L－1的NaCl溶液加二苯胺試劑沸水浴處理10.

高中階段不選擇豬血作為粗提取DNA材料的原因是______________________________________________________________________。11.

變性溫度主要取決于______的長度和G、C的比例；退火溫度主要取決于______的長度和_____________，延伸溫度主要取決于耐高溫的DNA聚合酶的最適溫度，延伸時間主要取決于__________________。模板哺乳動物的血液中大部分是不含DNA的成熟紅細(xì)胞，只有白細(xì)胞中含有DNA引物G、C的比例目的DNA的長度【情境填空】1.

將一個基因從DNA分子上切割下來，需要切割___處，同時產(chǎn)生___個黏性末端或平末端。而切割質(zhì)粒則只需要限制酶切割1次，因為______________________。2.ATP、GTP、CTP和UTP是細(xì)胞內(nèi)的四種高能磷酸化合物，它們徹底水解的產(chǎn)物中只有______不同。推測GTP參與RNA合成時的作用可能是提供______和______。24質(zhì)粒是環(huán)狀DNA分子堿基能量原料3.

基因工程選擇合適的受體細(xì)胞非常重要(1)人類第一個轉(zhuǎn)基因藥物選擇大腸桿菌作為受體細(xì)胞的主要原因是______________________________________________。(2)如要利用基因工程獲取糖蛋白、有生物活性的胰島素，應(yīng)采用真核生物酵母菌，而不能用大腸桿菌作為受體細(xì)胞，理由是___________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)選擇受精卵作為獲得乳腺生物反應(yīng)器的原因主要是________________________________。其單細(xì)胞、繁殖快，便于目的基因的表達(dá)和分離糖蛋白、有生物活性的胰島素的合成需內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的加工、運輸?shù)?，而大腸桿菌只有核糖體這一種細(xì)胞器，沒有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等其全能性高，便于目的基因的表達(dá)(4)檢驗?zāi)橙橄偕锓磻?yīng)器的基因表達(dá)載體構(gòu)建是否成功，宜選擇__________________(填“受精卵”或“乳腺上皮細(xì)胞”)，其主要原因是____________________________________________________________________。4.

檢測棉花中導(dǎo)入的抗蟲基因是否表達(dá)的最簡便的方法是_______________________________________________________________________________________________________________________________。乳腺上皮細(xì)胞乳腺上皮細(xì)胞從功能上類似于動物的乳腺組織，便于目的基因快速表達(dá)通過采摘抗蟲棉的葉片飼喂棉鈴蟲，來確定棉花抗蟲特性以及抗性的程度(對照組為在普通棉花葉片上接種等量棉鈴蟲，觀察其生存情況)5.電泳可以直觀對比DNA的完整性，分子大小不同的DNA在凝膠上遷移速率不同，從而產(chǎn)生不同的條帶。下圖是從甜菜細(xì)胞基因組中提取到的總DNA凝膠電泳結(jié)果，其中M是已知大小的不同DNA的混合物。實驗結(jié)果顯示A、B方法提取的總DNA電泳結(jié)果只有一條帶，而C方法有明顯的“拖尾”現(xiàn)象。(1)只出現(xiàn)一條帶的原因是________________________________________________。(2)出現(xiàn)“拖尾”現(xiàn)象的原因是________________________________________________________。甜菜細(xì)胞基因組DNA分子都比較大，不容易分離DNA發(fā)生隨機斷裂或降解，形成許多大小不等的DNA片段6.

傳統(tǒng)基因表達(dá)載體的構(gòu)建需要__________________________酶，與傳統(tǒng)PCR產(chǎn)物克隆不同，無縫克隆的載體末端和引物末端具有