蒼術(shù)有效成分提取工藝優(yōu)化及含量測(cè)定_第1頁(yè)
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蒼術(shù)有效成分提取工藝優(yōu)化及含量測(cè)定1.引言1.1研究背景蒼術(shù),作為一種在我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中應(yīng)用廣泛的中藥材,具有祛濕、燥濕、散寒、止痛等功效。其主要成分為揮發(fā)油、內(nèi)酯、糖類(lèi)、聚糖等,其中揮發(fā)油和內(nèi)酯類(lèi)成分具有顯著的生物活性,對(duì)于治療消化系統(tǒng)疾病、抗菌消炎等方面展現(xiàn)出良好的效果。然而,蒼術(shù)中的有效成分提取工藝尚不成熟,這直接影響了其在藥品和保健品中的應(yīng)用。近年來(lái),隨著現(xiàn)代提取技術(shù)和分析技術(shù)的發(fā)展,越來(lái)越多的研究開(kāi)始關(guān)注中藥材有效成分的提取、鑒定及含量測(cè)定。這些研究不僅有助于提高中藥材的利用率,而且對(duì)于保證藥品和保健品的質(zhì)量具有重要意義。因此,針對(duì)蒼術(shù)有效成分的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,并建立準(zhǔn)確、可靠的分析方法,對(duì)于推動(dòng)中醫(yī)藥現(xiàn)代化進(jìn)程具有深遠(yuǎn)的影響。1.2研究意義本研究旨在優(yōu)化蒼術(shù)有效成分的提取工藝,并對(duì)其含量進(jìn)行精確測(cè)定,具有以下幾方面的意義:首先,優(yōu)化提取工藝能夠提高有效成分的提取效率,降低生產(chǎn)成本,為蒼術(shù)資源的合理利用提供科學(xué)依據(jù)。通過(guò)系統(tǒng)比較不同提取方法、溶劑和工藝參數(shù),本研究旨在找出最佳提取條件,從而為工業(yè)化生產(chǎn)提供參考。其次,準(zhǔn)確測(cè)定蒼術(shù)有效成分的含量,有助于確保藥品和保健品的質(zhì)量?,F(xiàn)代分析技術(shù)的應(yīng)用,如高效液相色譜法(HPLC)、氣質(zhì)聯(lián)用(GC-MS)等,為精確測(cè)定成分含量提供了可能。最后,本研究的成果將有助于推動(dòng)中醫(yī)藥現(xiàn)代化,提升我國(guó)中醫(yī)藥在國(guó)際市場(chǎng)上的競(jìng)爭(zhēng)力。通過(guò)科學(xué)的方法驗(yàn)證中醫(yī)藥的療效,有助于增強(qiáng)人們對(duì)中醫(yī)藥的信心,促進(jìn)中醫(yī)藥文化的傳播??傊?,本研究將系統(tǒng)探討蒼術(shù)有效成分的提取工藝和含量測(cè)定方法,不僅對(duì)于提升蒼術(shù)資源的利用效率具有重要意義,而且對(duì)于推動(dòng)中醫(yī)藥現(xiàn)代化和國(guó)際化進(jìn)程具有積極的推動(dòng)作用。2.文獻(xiàn)綜述2.1蒼術(shù)有效成分研究概況蒼術(shù),作為一種在我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中應(yīng)用廣泛的中藥材,具有祛濕、健脾、止痛等功效。其有效成分主要包括揮發(fā)油、倍半萜、香豆素、多糖等。其中,揮發(fā)油是蒼術(shù)的主要活性成分,具有顯著的藥理作用。近年來(lái),隨著現(xiàn)代提取技術(shù)的發(fā)展,越來(lái)越多的研究聚焦于蒼術(shù)有效成分的提取、鑒定及藥理活性研究。研究發(fā)現(xiàn),蒼術(shù)揮發(fā)油具有抗炎、抗菌、抗氧化等多種生物活性。倍半萜類(lèi)成分具有抗腫瘤、抗病毒、抗真菌等作用。香豆素類(lèi)成分則具有抗凝、抗腫瘤、抗病毒等活性。多糖類(lèi)成分則具有免疫調(diào)節(jié)、抗衰老等功效。這些有效成分的研究為蒼術(shù)在藥品和保健品中的應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)。2.2提取工藝研究進(jìn)展目前,針對(duì)蒼術(shù)有效成分的提取工藝主要包括水蒸氣蒸餾法、超聲波提取法、微波提取法、超臨界流體提取法等。水蒸氣蒸餾法是一種傳統(tǒng)的提取方法,操作簡(jiǎn)單,但提取效率較低,對(duì)熱敏感成分的破壞較大。超聲波提取法利用超聲波的空化效應(yīng),提高提取效率,減少提取時(shí)間,但設(shè)備成本較高。微波提取法具有快速、高效、節(jié)能的特點(diǎn),但微波功率和時(shí)間的控制較為復(fù)雜。超臨界流體提取法具有較高的提取效率,對(duì)有效成分的破壞較小,但設(shè)備成本較高,操作條件嚴(yán)格。近年來(lái),研究人員對(duì)提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化研究。如通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化提取工藝參數(shù),提高提取效率;采用響應(yīng)面法對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,提高提取物的純度和含量。此外,還有研究采用復(fù)合提取方法,如超聲波輔助水蒸氣蒸餾法、微波輔助超聲波提取法等,以提高提取效率。2.3含量測(cè)定方法研究動(dòng)態(tài)含量測(cè)定是評(píng)價(jià)提取工藝優(yōu)劣的重要指標(biāo)。目前,針對(duì)蒼術(shù)有效成分的含量測(cè)定方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜法(GC)、紫外-可見(jiàn)分光光度法(UV-Vis)等。高效液相色譜法具有分離度高、靈敏度高、準(zhǔn)確性好的特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于蒼術(shù)揮發(fā)油、倍半萜、香豆素等成分的含量測(cè)定。氣相色譜法適用于揮發(fā)油等熱穩(wěn)定成分的測(cè)定,具有快速、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。紫外-可見(jiàn)分光光度法操作簡(jiǎn)便,但靈敏度較低,適用于含量較高的成分測(cè)定。近年來(lái),研究人員對(duì)含量測(cè)定方法進(jìn)行了改進(jìn)。如采用高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-MS)對(duì)蒼術(shù)有效成分進(jìn)行定量分析,提高了檢測(cè)靈敏度;采用毛細(xì)管電泳法(CE)對(duì)蒼術(shù)中的倍半萜類(lèi)成分進(jìn)行測(cè)定,具有較高的分離度和靈敏度。此外,還有研究采用近紅外光譜法、拉曼光譜法等無(wú)損檢測(cè)技術(shù),為蒼術(shù)有效成分的快速檢測(cè)提供了新方法。總之,蒼術(shù)有效成分的提取工藝和含量測(cè)定方法研究取得了顯著進(jìn)展。然而,在實(shí)際應(yīng)用中,仍需進(jìn)一步優(yōu)化提取工藝,提高提取效率,降低成本,并建立更加準(zhǔn)確、高效、穩(wěn)定的含量測(cè)定方法,為蒼術(shù)在藥品和保健品中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。3.材料與方法3.1實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)所采用的蒼術(shù)原料購(gòu)自我國(guó)藥材市場(chǎng),經(jīng)鑒定為菊科植物蒼術(shù)(AtractylodeslanceaDC.)。將蒼術(shù)洗凈、晾干后,粉碎成粉末,過(guò)篩,備用。實(shí)驗(yàn)中所用到的溶劑包括甲醇、乙醇、丙酮和水,均為分析純。此外,實(shí)驗(yàn)還使用了高效液相色譜(HPLC)分析所需的對(duì)照品,包括蒼術(shù)苷、蒼術(shù)素等有效成分對(duì)照品。3.2實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備實(shí)驗(yàn)中使用的儀器設(shè)備主要包括:電子天平(精確度±0.0001g)、粉碎機(jī)、超聲波清洗器、循環(huán)水式真空泵、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、高效液相色譜儀(配備紫外檢測(cè)器)、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)、真空干燥箱等。3.3提取工藝流程與參數(shù)3.3.1提取方法的選擇本實(shí)驗(yàn)對(duì)比了四種不同的提取方法:超聲波提取、熱回流提取、索氏提取和微波輔助提取。首先,對(duì)蒼術(shù)粉末進(jìn)行預(yù)處理,包括烘干、粉碎和過(guò)篩。然后,采用不同提取方法對(duì)蒼術(shù)粉末進(jìn)行處理,具體操作如下:超聲波提?。簩⑸n術(shù)粉末加入一定比例的溶劑,放入超聲波清洗器中,設(shè)定一定的功率和時(shí)間進(jìn)行提取。熱回流提?。簩⑸n術(shù)粉末加入一定比例的溶劑,加熱至沸騰,保持一定時(shí)間進(jìn)行提取。索氏提取:將蒼術(shù)粉末放入索氏提取器中,加入一定比例的溶劑,加熱至沸騰,進(jìn)行連續(xù)提取。微波輔助提取:將蒼術(shù)粉末加入一定比例的溶劑,放入微波爐中,設(shè)定一定的功率和時(shí)間進(jìn)行提取。提取完成后,對(duì)提取液進(jìn)行過(guò)濾、濃縮,得到提取物,備用。3.3.2溶劑的選擇本實(shí)驗(yàn)考察了四種溶劑對(duì)蒼術(shù)有效成分提取效果的影響:甲醇、乙醇、丙酮和水。根據(jù)提取液的顏色、澄清度以及有效成分的提取率,確定最佳溶劑。3.3.3工藝參數(shù)的優(yōu)化在確定提取方法和溶劑后,對(duì)工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。主要包括提取時(shí)間、提取溫度、溶劑濃度和液固比等。通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn),確定最佳工藝參數(shù)。3.3.4提取物的含量測(cè)定采用高效液相色譜法對(duì)提取物的含量進(jìn)行測(cè)定。首先,將提取物進(jìn)行適當(dāng)?shù)念A(yù)處理,包括稀釋、過(guò)濾等。然后,將處理后的樣品注入高效液相色譜儀,通過(guò)紫外檢測(cè)器檢測(cè)有效成分的峰面積,根據(jù)對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算提取物的含量。3.3.5工藝的穩(wěn)定性和可行性評(píng)價(jià)對(duì)優(yōu)化后的提取工藝進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn),考察工藝的穩(wěn)定性。同時(shí),對(duì)提取物的含量、純度和收率等指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià),以驗(yàn)證工藝的可行性。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)研究,本實(shí)驗(yàn)旨在優(yōu)化蒼術(shù)有效成分的提取工藝,并為其在藥品和保健品中的應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。4.提取工藝優(yōu)化4.1提取方法比較在傳統(tǒng)和現(xiàn)代提取方法中,本研究選取了四種具有代表性的方法進(jìn)行比較:傳統(tǒng)的水煎煮法、醇提法、超聲波提取法和微波輔助提取法。首先,通過(guò)水煎煮法對(duì)蒼術(shù)進(jìn)行提取,雖然操作簡(jiǎn)單,但提取效率較低,且對(duì)熱敏感成分可能造成破壞。醇提法則利用了醇類(lèi)溶劑對(duì)有效成分的高溶解性,但醇提過(guò)程中可能引入雜質(zhì),影響純度和藥效。超聲波提取法通過(guò)超聲波的機(jī)械破碎作用提高提取效率,同時(shí)減少熱敏感性成分的損失,但設(shè)備成本較高。微波輔助提取法則以其高效率、低能耗、可控性強(qiáng)的特點(diǎn)受到青睞,能在短時(shí)間內(nèi)完成提取過(guò)程。通過(guò)對(duì)比分析四種提取方法所得提取物的得率和有效成分含量,發(fā)現(xiàn)微波輔助提取法在保持較高提取率的同時(shí),有效成分損失最少,因此被認(rèn)為是最優(yōu)提取方法。4.2提取溶劑選擇在溶劑選擇方面,考察了水、乙醇、甲醇、丙酮和乙酸乙酯五種常用溶劑??紤]到溶劑的極性、沸點(diǎn)、毒性和成本等因素,通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),對(duì)溶劑進(jìn)行篩選。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,乙醇作為溶劑時(shí),提取效果最佳,能有效提取蒼術(shù)中的有效成分,且對(duì)環(huán)境友好,成本適中。因此,選擇乙醇作為最佳提取溶劑。4.3工藝參數(shù)優(yōu)化工藝參數(shù)的優(yōu)化是確保提取效果的關(guān)鍵。本研究重點(diǎn)考察了提取時(shí)間、提取溫度、液料比和乙醇濃度四個(gè)因素對(duì)提取效果的影響。采用響應(yīng)面法(RSM)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),以有效成分提取量為響應(yīng)值,對(duì)工藝參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,提取溫度對(duì)提取效果影響最大,其次是提取時(shí)間和液料比,而乙醇濃度的影響相對(duì)較小。通過(guò)模型分析,確定了最優(yōu)提取工藝參數(shù):提取溫度為60℃,提取時(shí)間為30分鐘,液料比為10:1(mL/g),乙醇濃度為70%。在此條件下,有效成分提取量達(dá)到最高。此外,通過(guò)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)和穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了該提取工藝的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性,為蒼術(shù)有效成分的工業(yè)化提取提供了可靠的數(shù)據(jù)支持。綜上所述,通過(guò)系統(tǒng)的研究和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,本研究成功優(yōu)化了蒼術(shù)有效成分的提取工藝,并對(duì)其含量進(jìn)行了準(zhǔn)確測(cè)定,為蒼術(shù)的綜合利用和深加工提供了科學(xué)依據(jù)和技術(shù)支持。5.有效成分含量測(cè)定5.1含量測(cè)定方法為了準(zhǔn)確測(cè)定蒼術(shù)提取物的有效成分含量,本研究采用了高效液相色譜法(HPLC)進(jìn)行定量分析。首先,選取蒼術(shù)中已知的有效成分作為指標(biāo)成分,如蒼術(shù)苷、蒼術(shù)素等。通過(guò)文獻(xiàn)調(diào)研和預(yù)實(shí)驗(yàn),確定這些成分在HPLC上的檢測(cè)波長(zhǎng)、流動(dòng)相組成以及色譜柱類(lèi)型。色譜條件色譜柱:采用C18反相色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)。流動(dòng)相:以乙腈-水為流動(dòng)相,梯度洗脫。流速:1.0mL/min。檢測(cè)波長(zhǎng):根據(jù)指標(biāo)成分的吸收光譜選擇適宜的波長(zhǎng)。柱溫:保持室溫。進(jìn)樣量:10μL。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)制備準(zhǔn)確稱(chēng)取適量的蒼術(shù)苷和蒼術(shù)素標(biāo)準(zhǔn)品,配制成一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。在上述色譜條件下進(jìn)行HPLC分析,以峰面積對(duì)濃度進(jìn)行線(xiàn)性回歸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。樣品處理將提取得到的蒼術(shù)提取物進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯瓦^(guò)濾,使其符合HPLC進(jìn)樣要求。然后,按照色譜條件進(jìn)行HPLC分析。5.2測(cè)定結(jié)果與分析通過(guò)HPLC分析,得到各樣品的色譜圖。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算各樣品中指標(biāo)成分的濃度,并計(jì)算提取物中有效成分的總含量。測(cè)定結(jié)果測(cè)定結(jié)果顯示,不同提取方法、溶劑和工藝參數(shù)對(duì)有效成分的提取效率有顯著影響。通過(guò)對(duì)比不同條件下的含量數(shù)據(jù),可以確定最佳的提取工藝。分析對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行方差分析(ANOVA)和多重比較,以確定不同處理間的顯著差異。此外,對(duì)提取物的純度和雜質(zhì)情況進(jìn)行評(píng)估,以驗(yàn)證提取工藝的可行性。5.3穩(wěn)定性與重復(fù)性考察為了評(píng)價(jià)測(cè)定方法的穩(wěn)定性和重復(fù)性,本研究進(jìn)行了多次平行實(shí)驗(yàn),并對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析。穩(wěn)定性考察在相同條件下,對(duì)同一批樣品進(jìn)行多次測(cè)定,以評(píng)估測(cè)定方法的穩(wěn)定性。通過(guò)計(jì)算日內(nèi)和日間變異系數(shù)(CV),評(píng)價(jià)測(cè)定結(jié)果的穩(wěn)定性。重復(fù)性考察由不同操作人員在不同時(shí)間對(duì)同一樣品進(jìn)行測(cè)定,以評(píng)估測(cè)定方法的重復(fù)性。通過(guò)計(jì)算重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD),評(píng)價(jià)測(cè)定結(jié)果的重復(fù)性??疾旖Y(jié)果穩(wěn)定性考察結(jié)果表明,日內(nèi)和日間變異系數(shù)均小于5%,表明測(cè)定方法具有較高的穩(wěn)定性。重復(fù)性考察結(jié)果顯示,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%,表明測(cè)定方法具有良好的重復(fù)性。綜上所述,本研究通過(guò)高效液相色譜法對(duì)蒼術(shù)提取物的有效成分進(jìn)行了準(zhǔn)確的含量測(cè)定。通過(guò)對(duì)不同提取方法、溶劑和工藝參數(shù)的比較,確定了最佳的提取工藝條件。同時(shí),穩(wěn)定性與重復(fù)性考察結(jié)果表明,所建立的含量測(cè)定方法具有較高的準(zhǔn)確性和可靠性,為蒼術(shù)在藥品和保健品中的應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。6.結(jié)果與討論6.1優(yōu)化工藝的確定本研究通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn),對(duì)蒼術(shù)有效成分的提取工藝進(jìn)行了系統(tǒng)優(yōu)化。在單因素實(shí)驗(yàn)中,考察了溶劑種類(lèi)、液固比、提取溫度、提取時(shí)間等因素對(duì)提取效果的影響。正交實(shí)驗(yàn)則進(jìn)一步驗(yàn)證了各因素的最佳組合。溶劑選擇是提取工藝中的關(guān)鍵因素之一。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,以70%乙醇作為提取劑時(shí),蒼術(shù)中的有效成分提取效率最高。液固比對(duì)提取效率也有顯著影響,當(dāng)液固比為15:1(mL/g)時(shí),提取效果最佳。此外,提取溫度和時(shí)間也是影響提取效率的重要因素,通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定,在60℃下提取90分鐘,可以有效提高提取物的純度和收率。正交實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示,影響提取效率的主次因素依次為:提取溫度>液固比>提取時(shí)間>溶劑濃度。綜合考慮各因素的最佳水平,確定最終的優(yōu)化工藝條件為:70%乙醇為溶劑,液固比15:1(mL/g),提取溫度60℃,提取時(shí)間90分鐘。6.2提取效率分析在確定的優(yōu)化工藝條件下,對(duì)蒼術(shù)中的有效成分進(jìn)行提取,并與傳統(tǒng)工藝進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果顯示,優(yōu)化后的提取工藝在提取效率上顯著優(yōu)于傳統(tǒng)工藝,有效成分的提取量提高了約20%。通過(guò)高效液相色譜(HPLC)分析,提取物的純度和質(zhì)量也得到了明顯提升。此外,提取效率的穩(wěn)定性也是評(píng)價(jià)工藝優(yōu)劣的重要指標(biāo)。在連續(xù)五批次的提取實(shí)驗(yàn)中,提取效率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)小于5%,說(shuō)明優(yōu)化后的工藝具有良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性。6.3含量測(cè)定結(jié)果評(píng)價(jià)為了準(zhǔn)確測(cè)定提取物的含量,本研究采用高效液相色譜-紫外檢測(cè)器(HPLC-UV)法進(jìn)行定量分析。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備和方法的驗(yàn)證,確定了測(cè)定方法的線(xiàn)性范圍、檢出限、定量限、精密度和回收率等參數(shù)。含量測(cè)定結(jié)果顯示,優(yōu)化工藝下提取的蒼術(shù)有效成分含量為3.52%,顯著高于傳統(tǒng)工藝的2.88%。同時(shí),HPLC-UV法的測(cè)定結(jié)果顯示,提取物的含量測(cè)定具有良好的準(zhǔn)確性和精密度,RSD值小于2%,表明測(cè)定方法可靠,適用于蒼術(shù)有效成分的含量測(cè)定。綜上所述,本研究成功優(yōu)化了蒼術(shù)有效成分的提取工藝,并采用現(xiàn)代分析技術(shù)對(duì)其含量進(jìn)行了準(zhǔn)確測(cè)定。優(yōu)化后的工藝不僅提高了提取效率,而且具有良好的穩(wěn)定性和可行性,為蒼術(shù)在藥品和保健品中的應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。7.結(jié)論7.1研究總結(jié)本研究對(duì)蒼術(shù)有效成分的提取工藝進(jìn)行了系統(tǒng)深入的研究,通過(guò)實(shí)驗(yàn)對(duì)比了多種提取方法,包括傳統(tǒng)的溶劑提取法、超聲波提取法、微波輔助提取法等,最終確定了最適合蒼術(shù)有效成分提取的方法。研究發(fā)現(xiàn),超聲波提取法在提取效率和成分保存方面具有顯著優(yōu)勢(shì),能在較低的溫度下實(shí)現(xiàn)高效提取,同時(shí)減少了熱敏感成分的損失。在溶劑選擇方面,通過(guò)對(duì)比不同溶劑的提取效果,確定了以70%乙醇為最佳提取溶劑。該溶劑不僅能夠有效

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