Bmi-1：大腸癌診療新視角——從表達(dá)特征到臨床價(jià)值的深度剖析一、引言1.1研究背景癌癥，作為全球范圍內(nèi)嚴(yán)重威脅人類健康的重大疾病之一，其發(fā)病率和死亡率長(zhǎng)期居高不下。據(jù)世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的2020年全球癌癥負(fù)擔(dān)數(shù)據(jù)顯示，當(dāng)年全球新增癌癥病例1929萬例，癌癥死亡病例996萬例。在各類癌癥中，大腸癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率在全球癌癥排行榜中均名列前茅。在中國，大腸癌同樣是高發(fā)癌癥之一，嚴(yán)重危害著民眾的生命健康與生活質(zhì)量。大腸癌包括結(jié)腸癌和直腸癌，其發(fā)病是一個(gè)多步驟、多階段及多基因共同參與的復(fù)雜過程，涉及遺傳因素、生活方式、飲食習(xí)慣以及環(huán)境因素等多個(gè)方面。隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和生活方式的改變，尤其是膳食纖維攝入減少、高脂高蛋白飲食增加、運(yùn)動(dòng)量減少以及老齡化進(jìn)程的加速，大腸癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，且發(fā)病年齡逐漸年輕化。據(jù)統(tǒng)計(jì)，中國2020年大腸癌新發(fā)病例數(shù)約55.5萬，死亡病例數(shù)約28.6萬，分別位居惡性腫瘤發(fā)病和死亡的第2位和第5位。這不僅給患者個(gè)人帶來了巨大的身心痛苦，也給家庭和社會(huì)造成了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)和社會(huì)壓力。目前，臨床上對(duì)于大腸癌的治療主要包括手術(shù)、放療、化療、靶向治療和免疫治療等多種手段。盡管這些治療方法在一定程度上提高了患者的生存率和生活質(zhì)量，但仍面臨著諸多挑戰(zhàn)。例如，手術(shù)后的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移問題依然嚴(yán)峻，化療藥物的副作用限制了其臨床應(yīng)用，部分患者對(duì)靶向治療和免疫治療的反應(yīng)不佳等。此外，由于大腸癌早期癥狀不明顯，多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，錯(cuò)過了最佳的治療時(shí)機(jī)，導(dǎo)致總體預(yù)后較差。因此，深入探究大腸癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，尋找有效的早期診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)，對(duì)于提高大腸癌的診療水平、改善患者預(yù)后具有至關(guān)重要的意義。Bmi-1（B-cell-specificMoloneymurineleukemiavirusintegrationsite1）基因，作為多梳基因家族（Polycombgroupgenes，PcG）的重要成員之一，在個(gè)體發(fā)育、干細(xì)胞自我更新以及細(xì)胞衰老等生理過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。近年來，大量的研究表明，Bmi-1在多種腫瘤組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)，且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲、轉(zhuǎn)移以及預(yù)后密切相關(guān)。在大腸癌中，Bmi-1同樣被發(fā)現(xiàn)參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程，其高表達(dá)可能通過抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖、維持腫瘤干細(xì)胞特性以及調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境等多種途徑，推動(dòng)大腸癌的進(jìn)展。然而，目前關(guān)于Bmi-1在大腸癌組織中的表達(dá)情況及其具體作用機(jī)制尚未完全明確，仍存在許多亟待解決的問題。例如，Bmi-1在不同分期、不同病理類型的大腸癌組織中的表達(dá)差異如何？Bmi-1與其他相關(guān)基因或信號(hào)通路之間存在怎樣的相互作用關(guān)系？Bmi-1能否作為大腸癌早期診斷的特異性標(biāo)志物以及潛在的治療靶點(diǎn)？對(duì)這些問題的深入研究，將有助于我們進(jìn)一步揭示大腸癌的發(fā)病機(jī)制，為臨床診斷、治療和預(yù)后評(píng)估提供新的思路和方法。1.2研究目的和意義本研究旨在通過對(duì)大腸癌組織和癌旁正常組織中Bmi-1基因及蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)，系統(tǒng)分析Bmi-1表達(dá)與大腸癌患者臨床病理特征之間的關(guān)聯(lián)，深入探究Bmi-1在大腸癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用機(jī)制，為大腸癌的早期診斷、病情評(píng)估、預(yù)后判斷以及靶向治療提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)和有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。在早期診斷方面，目前臨床上用于大腸癌早期診斷的方法如結(jié)腸鏡檢查、糞便潛血試驗(yàn)等存在一定的局限性，結(jié)腸鏡檢查屬于侵入性檢查，患者依從性較差，糞便潛血試驗(yàn)的特異性和敏感性有待提高。而Bmi-1作為一種在大腸癌發(fā)生發(fā)展過程中起關(guān)鍵作用的分子，若能證實(shí)其在大腸癌早期組織中具有特異性高表達(dá)，有望成為一種新型的早期診斷標(biāo)志物，通過檢測(cè)血液或糞便中的Bmi-1水平，實(shí)現(xiàn)大腸癌的早期篩查，提高早期診斷率，為患者爭(zhēng)取更多的治療時(shí)機(jī)。對(duì)于病情評(píng)估，準(zhǔn)確判斷大腸癌的病情進(jìn)展對(duì)于制定合理的治療方案至關(guān)重要。本研究通過分析Bmi-1表達(dá)與大腸癌浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期等臨床病理參數(shù)的相關(guān)性，能夠?yàn)榕R床醫(yī)生提供一個(gè)新的評(píng)估指標(biāo)。當(dāng)Bmi-1表達(dá)水平較高時(shí)，提示大腸癌可能具有更強(qiáng)的侵襲性和轉(zhuǎn)移潛能，病情更為嚴(yán)重，醫(yī)生可以據(jù)此及時(shí)調(diào)整治療策略，采取更為積極有效的治療措施。在預(yù)后判斷上，大腸癌患者的預(yù)后差異較大，準(zhǔn)確預(yù)測(cè)患者的預(yù)后對(duì)于指導(dǎo)后續(xù)治療和患者的生活規(guī)劃具有重要意義。現(xiàn)有的預(yù)后評(píng)估指標(biāo)如腫瘤分期、病理類型等存在一定的局限性，不能完全準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)患者的預(yù)后。本研究通過對(duì)Bmi-1表達(dá)與患者生存率、復(fù)發(fā)率等預(yù)后指標(biāo)的研究，有望將Bmi-1納入大腸癌的預(yù)后評(píng)估體系，為患者的預(yù)后判斷提供更準(zhǔn)確、全面的信息。在靶向治療領(lǐng)域，當(dāng)前大腸癌的靶向治療藥物雖然取得了一定的療效，但仍存在耐藥性、副作用等問題。Bmi-1在大腸癌發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵作用使其成為一個(gè)極具潛力的治療靶點(diǎn)。深入研究Bmi-1的作用機(jī)制，有助于開發(fā)針對(duì)Bmi-1的靶向治療藥物，通過抑制Bmi-1的表達(dá)或活性，阻斷其參與的信號(hào)通路，從而抑制大腸癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，提高治療效果，減少耐藥性和副作用的發(fā)生，為大腸癌患者帶來新的治療希望。1.3研究方法和創(chuàng)新點(diǎn)本研究綜合運(yùn)用多種研究方法，從不同層面深入探究Bmi-1在大腸癌組織中的表達(dá)及意義，確保研究結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。文獻(xiàn)研究法是本研究的重要基礎(chǔ)。通過全面檢索國內(nèi)外權(quán)威數(shù)據(jù)庫，如WebofScience、PubMed、中國知網(wǎng)等，廣泛收集與Bmi-1基因、大腸癌相關(guān)的文獻(xiàn)資料。對(duì)這些文獻(xiàn)進(jìn)行系統(tǒng)梳理和深入分析，了解Bmi-1在腫瘤領(lǐng)域尤其是大腸癌中的研究現(xiàn)狀、存在問題及發(fā)展趨勢(shì)，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和研究思路提供堅(jiān)實(shí)的理論支持。例如，通過對(duì)前人研究的總結(jié)，發(fā)現(xiàn)目前關(guān)于Bmi-1在大腸癌不同分子亞型中的表達(dá)差異研究較少，這為本研究的深入探索提供了方向。實(shí)驗(yàn)分析法是本研究的核心方法。在組織標(biāo)本獲取方面，收集我院經(jīng)手術(shù)切除且病理確診為大腸癌的患者組織標(biāo)本[X]例，同時(shí)采集相應(yīng)的癌旁正常組織作為對(duì)照。嚴(yán)格記錄患者的臨床病理信息，包括年齡、性別、腫瘤部位、分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等，確保樣本信息的完整性。運(yùn)用免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測(cè)Bmi-1蛋白在大腸癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)定位及相對(duì)表達(dá)量。通過對(duì)染色結(jié)果的判讀，直觀地觀察Bmi-1蛋白在不同組織中的表達(dá)差異。采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（RT-qPCR）技術(shù)，檢測(cè)Bmi-1基因在兩組組織中的mRNA表達(dá)水平，從基因?qū)用孢M(jìn)一步驗(yàn)證其表達(dá)差異。利用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Westernblot），定量分析Bmi-1蛋白在組織中的表達(dá)量，為后續(xù)的相關(guān)性分析提供準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)支持。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)部分，選用人大腸癌細(xì)胞系[具體細(xì)胞系名稱]和正常大腸上皮細(xì)胞系[具體細(xì)胞系名稱]進(jìn)行研究。通過轉(zhuǎn)染技術(shù)，構(gòu)建Bmi-1過表達(dá)和低表達(dá)的細(xì)胞模型。運(yùn)用細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)（如CCK-8法），檢測(cè)不同Bmi-1表達(dá)水平對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響；采用細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)（如AnnexinV-FITC/PI雙染法），觀察細(xì)胞凋亡情況的變化；利用細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)（如Transwell實(shí)驗(yàn)），探究Bmi-1對(duì)大腸癌細(xì)胞遷移和侵襲能力的作用。在數(shù)據(jù)分析階段，運(yùn)用SPSS、GraphPadPrism等專業(yè)統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行深入分析。采用卡方檢驗(yàn)分析Bmi-1表達(dá)與大腸癌患者臨床病理特征之間的相關(guān)性；運(yùn)用Kaplan-Meier生存分析評(píng)估Bmi-1表達(dá)對(duì)患者生存率的影響；通過Cox回歸分析確定Bmi-1是否為大腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。通過這些統(tǒng)計(jì)分析方法，深入挖掘數(shù)據(jù)背后的潛在信息，為研究結(jié)論的得出提供有力的統(tǒng)計(jì)學(xué)支持。本研究在研究視角和研究?jī)?nèi)容方面具有一定的創(chuàng)新之處。在研究視角上，本研究從多個(gè)維度綜合分析Bmi-1在大腸癌中的作用。不僅關(guān)注Bmi-1在大腸癌組織中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)聯(lián)，還深入探究其對(duì)大腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，以及與其他相關(guān)信號(hào)通路的交互作用，為全面揭示Bmi-1在大腸癌發(fā)生發(fā)展中的機(jī)制提供了更完整的視角。在研究?jī)?nèi)容上，本研究將重點(diǎn)探討B(tài)mi-1在大腸癌不同分子亞型中的表達(dá)差異及其臨床意義。目前，關(guān)于大腸癌分子亞型的研究逐漸成為熱點(diǎn)，不同分子亞型的大腸癌在發(fā)病機(jī)制、治療反應(yīng)和預(yù)后等方面存在顯著差異。而Bmi-1在不同分子亞型中的作用尚未得到充分研究，本研究有望填補(bǔ)這一領(lǐng)域的空白，為大腸癌的精準(zhǔn)診斷和個(gè)體化治療提供新的理論依據(jù)和分子靶點(diǎn)。二、Bmi-1基因概述2.1Bmi-1基因結(jié)構(gòu)與功能2.1.1基因結(jié)構(gòu)Bmi-1基因，全稱為B細(xì)胞特異性莫洛尼鼠白血病病毒插入位點(diǎn)1（B-cell-specificMoloneymurineleukemiavirusintegrationsite1），是多梳基因家族（Polycombgroupgenes，PcG）的關(guān)鍵成員。人類Bmi-1基因定位于第10號(hào)染色體短臂1區(qū)3帶（10p13），其結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，包含14個(gè)外顯子和10個(gè)內(nèi)含子。Bmi-1基因的cDNA全長(zhǎng)3251bp，其開放閱讀框編碼的蛋白由326個(gè)氨基酸組成，相對(duì)分子質(zhì)量處于44,000-46,000之間。人和小鼠的Bmi-1在DNA水平和氨基酸水平的同源性分別達(dá)到86%和98%，這一高度的同源性暗示了Bmi-1在進(jìn)化過程中的保守性和重要性。通過氨基酸序列分析，發(fā)現(xiàn)Bmi-1蛋白含有多個(gè)重要的模序。在N末端存在環(huán)指模序，該模序由鋅指和C3HC4保守序列構(gòu)成，Bmi-1能夠借助環(huán)指與其他蛋白相結(jié)合，進(jìn)而形成多聚復(fù)合物，這對(duì)于其參與多種生物學(xué)過程的調(diào)控至關(guān)重要。位于蛋白中心部位的螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋-轉(zhuǎn)角模序，則介導(dǎo)了Bmi-1與DNA的特異性結(jié)合，使其能夠直接作用于基因的調(diào)控區(qū)域，影響基因的轉(zhuǎn)錄過程。此外，Bmi-1蛋白分子內(nèi)還存在兩個(gè)核定位信號(hào)（nuclearlocalizationsignal，NLS），即NLS1和NLS2，其中NLS2是Bmi-1蛋白定位于細(xì)胞核所不可或缺的，只有進(jìn)入細(xì)胞核，Bmi-1才能發(fā)揮其對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控作用。而Bmi-1的C-末端部分富含脯氨酸、谷氨酸、絲氨酸和蘇氨酸殘基，這一區(qū)域與Bmi-1蛋白在細(xì)胞內(nèi)的快速降解密切相關(guān)，精細(xì)地調(diào)控著Bmi-1蛋白在細(xì)胞內(nèi)的含量和功能發(fā)揮的時(shí)長(zhǎng)。2.1.2正常生理功能在正常生理過程中，Bmi-1發(fā)揮著多方面不可或缺的作用，尤其是在干細(xì)胞維持、個(gè)體發(fā)育以及細(xì)胞衰老調(diào)控等關(guān)鍵環(huán)節(jié)。干細(xì)胞具有自我更新和多向分化的能力，對(duì)于組織的生長(zhǎng)、修復(fù)和穩(wěn)態(tài)維持起著核心作用。Bmi-1在干細(xì)胞的自我更新過程中扮演著至關(guān)重要的角色。以造血干細(xì)胞為例，它是生成各種血細(xì)胞的原始細(xì)胞，在機(jī)體的整個(gè)生命過程中持續(xù)發(fā)揮作用。研究表明，Bmi-1能夠通過抑制細(xì)胞周期抑制劑p16INK4a和p19ARF（在人類中為p14ARF）的表達(dá)，從而維持造血干細(xì)胞的自我更新能力。當(dāng)Bmi-1基因缺失時(shí)，造血干細(xì)胞的增殖能力顯著下降，無法有效地補(bǔ)充血細(xì)胞，進(jìn)而導(dǎo)致造血功能障礙。在神經(jīng)干細(xì)胞中，Bmi-1同樣發(fā)揮著關(guān)鍵作用。從胚胎期到成人期，神經(jīng)祖細(xì)胞的增殖和發(fā)育越來越依賴于Bmi-1。shRNA介導(dǎo)的急性Bmi-1缺失會(huì)導(dǎo)致從胚胎期到成人期的神經(jīng)干細(xì)胞增殖和自我更新障礙，這一過程是通過細(xì)胞周期抑制劑p21介導(dǎo)的?；蛐蛄蟹治鲲@示，Bmi-1發(fā)育差異調(diào)控p21-Rb細(xì)胞周期調(diào)節(jié)途徑的基因表達(dá)，表明Bmi-1在神經(jīng)干細(xì)胞的發(fā)育過程中具有重要的調(diào)控作用。個(gè)體發(fā)育是一個(gè)復(fù)雜而有序的過程，涉及多個(gè)器官和系統(tǒng)的形成和發(fā)育。Bmi-1在胚胎期對(duì)哺乳動(dòng)物的骨骼、造血及神經(jīng)等系統(tǒng)的發(fā)育具有重要的調(diào)控作用。在骨骼發(fā)育方面，對(duì)Bmi-1基因敲除小鼠的研究發(fā)現(xiàn)，由于軟骨細(xì)胞增殖減少和凋亡增加，新生Bmi-1（-/-）小鼠出現(xiàn)骨骼生長(zhǎng)遲緩的現(xiàn)象。具體表現(xiàn)為成骨細(xì)胞數(shù)量減少、堿性磷酸酶基因表達(dá)降低、Ⅰ型膠原合成減少、降鈣素水平下降、礦物質(zhì)沉積率降低、骨小梁體積減小以及骨礦物質(zhì)密度顯著減少；與此同時(shí)，骨髓脂肪細(xì)胞數(shù)量增加，過氧化物酶體增生物激活受體表達(dá)上調(diào)。這表明Bmi-1通過抑制p27、p16、p19表達(dá)來維持骨髓基質(zhì)細(xì)胞自我更新，并通過增強(qiáng)成骨細(xì)胞分化、抑制脂肪細(xì)胞分化來改變骨髓基質(zhì)細(xì)胞命運(yùn)，刺激Sirt1表達(dá)在這一過程中也起部分作用，從而對(duì)骨骼發(fā)育產(chǎn)生重要影響。在造血系統(tǒng)發(fā)育中，Bmi-1參與了造血干細(xì)胞的分化和成熟過程，對(duì)于各類血細(xì)胞的正常生成至關(guān)重要。在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育方面，Bmi-1對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的增殖和分化進(jìn)行調(diào)控，確保神經(jīng)系統(tǒng)的正常結(jié)構(gòu)和功能的形成。細(xì)胞衰老作為細(xì)胞生命歷程中的一個(gè)重要階段，是細(xì)胞增殖能力逐漸喪失并走向功能衰退的過程。Bmi-1能夠通過抑制衰老相關(guān)基因的表達(dá)，延緩細(xì)胞衰老的進(jìn)程。研究發(fā)現(xiàn)，Bmi-1可以通過抑制p16INK4a的表達(dá)，維持細(xì)胞的增殖能力，從而延緩細(xì)胞衰老。當(dāng)Bmi-1表達(dá)下調(diào)時(shí)，p16INK4a表達(dá)上調(diào)，細(xì)胞衰老加速，這表明Bmi-1在細(xì)胞衰老調(diào)控中發(fā)揮著重要的負(fù)向調(diào)節(jié)作用。2.2Bmi-1與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)聯(lián)機(jī)制2.2.1抑制細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡，又稱程序性細(xì)胞死亡，是一種由基因嚴(yán)格調(diào)控的細(xì)胞主動(dòng)死亡過程，在維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、細(xì)胞增殖與死亡平衡以及胚胎發(fā)育等生理過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。當(dāng)細(xì)胞受到各種內(nèi)外源性刺激，如DNA損傷、氧化應(yīng)激、生長(zhǎng)因子缺乏等，細(xì)胞凋亡機(jī)制被激活，通過一系列復(fù)雜的信號(hào)傳導(dǎo)通路，最終導(dǎo)致細(xì)胞的有序死亡。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中，細(xì)胞凋亡的異常抑制是一個(gè)關(guān)鍵因素，使得腫瘤細(xì)胞能夠逃避機(jī)體的正常清除機(jī)制，不斷增殖并形成腫瘤。Bmi-1在抑制細(xì)胞凋亡方面發(fā)揮著重要作用，其主要通過對(duì)相關(guān)基因的調(diào)控來實(shí)現(xiàn)這一功能。INK4a/ARF位點(diǎn)是Bmi-1調(diào)控細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵靶點(diǎn)之一。該位點(diǎn)可同時(shí)編碼p16INK4a和p14ARF（在嚙齒類動(dòng)物中為p19ARF）兩種重要的腫瘤抑制蛋白。p16INK4a通過與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4/6（CDK4/6）結(jié)合，抑制其活性，進(jìn)而阻止視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（pRb）的磷酸化，使細(xì)胞停滯于G1期，無法進(jìn)入S期進(jìn)行DNA復(fù)制和細(xì)胞分裂；p14ARF則通過與鼠雙微體2（MDM2）結(jié)合，抑制MDM2對(duì)p53的泛素化降解，從而穩(wěn)定p53蛋白，激活p53下游的凋亡相關(guān)基因，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Bmi-1作為INK4a/ARF的上游調(diào)節(jié)因子，在轉(zhuǎn)錄水平負(fù)向調(diào)控INK4a/ARF的表達(dá)。當(dāng)Bmi-1高表達(dá)時(shí)，INK4a/ARF的表達(dá)受到抑制，p16INK4a對(duì)細(xì)胞周期的阻滯作用和p14ARF對(duì)p53的激活作用減弱，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡受阻，腫瘤細(xì)胞獲得生存優(yōu)勢(shì)。Bmi-1還可以通過調(diào)節(jié)其他凋亡相關(guān)基因的表達(dá)來抑制細(xì)胞凋亡。研究發(fā)現(xiàn)，Bmi-1能夠抑制促凋亡基因Bax的表達(dá)，同時(shí)上調(diào)抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá)。Bax是Bcl-2家族中的促凋亡成員，它可以在線粒體外膜上形成孔道，導(dǎo)致細(xì)胞色素C等凋亡因子釋放到細(xì)胞質(zhì)中，激活下游的半胱天冬酶（caspase）級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終引發(fā)細(xì)胞凋亡；而Bcl-2則是抗凋亡成員，它可以與Bax相互作用，抑制Bax的促凋亡活性，維持線粒體膜的穩(wěn)定性，從而抑制細(xì)胞凋亡。Bmi-1通過調(diào)節(jié)Bax和Bcl-2的表達(dá)失衡，使細(xì)胞凋亡的閾值升高，腫瘤細(xì)胞更難發(fā)生凋亡。在肺癌細(xì)胞中，敲低Bmi-1的表達(dá)后，細(xì)胞凋亡率顯著增加，同時(shí)伴隨著Bax表達(dá)的上調(diào)和Bcl-2表達(dá)的下調(diào)；而在過表達(dá)Bmi-1的細(xì)胞中，細(xì)胞凋亡受到明顯抑制，Bax表達(dá)降低，Bcl-2表達(dá)升高。這表明Bmi-1通過調(diào)節(jié)Bax和Bcl-2的表達(dá)來影響細(xì)胞凋亡，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著抗凋亡的作用。2.2.2促進(jìn)細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖是細(xì)胞生命活動(dòng)的基本特征之一，對(duì)于生物體的生長(zhǎng)、發(fā)育和組織修復(fù)至關(guān)重要。在正常生理狀態(tài)下，細(xì)胞增殖受到嚴(yán)格的調(diào)控，包括細(xì)胞周期調(diào)控、生長(zhǎng)因子信號(hào)傳導(dǎo)以及各種細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的協(xié)同作用，以確保細(xì)胞的有序增殖和組織穩(wěn)態(tài)的維持。當(dāng)這些調(diào)控機(jī)制出現(xiàn)異常時(shí)，細(xì)胞可能會(huì)發(fā)生失控性增殖，這是腫瘤發(fā)生發(fā)展的重要基礎(chǔ)。Bmi-1在促進(jìn)細(xì)胞增殖方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，其分子機(jī)制涉及多個(gè)層面。Bmi-1可以通過調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)來促進(jìn)細(xì)胞增殖。細(xì)胞周期包括G1期、S期、G2期和M期，每個(gè)時(shí)期都受到一系列細(xì)胞周期蛋白（cyclin）和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（CDK）的嚴(yán)格調(diào)控。研究表明，Bmi-1能夠上調(diào)細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表達(dá)，CyclinD1與CDK4/6形成復(fù)合物，促進(jìn)pRb的磷酸化，使E2F轉(zhuǎn)錄因子釋放，進(jìn)而激活一系列與DNA復(fù)制和細(xì)胞周期進(jìn)展相關(guān)的基因，推動(dòng)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，促進(jìn)細(xì)胞增殖。Bmi-1還可以通過抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑（CKI）如p21Cip1和p27Kip1的表達(dá)，解除對(duì)CDK的抑制作用，加速細(xì)胞周期進(jìn)程，促進(jìn)細(xì)胞增殖。Bmi-1與Wnt/β-catenin信號(hào)通路密切相關(guān)，該信號(hào)通路在細(xì)胞增殖、分化和胚胎發(fā)育等過程中發(fā)揮著重要作用。在經(jīng)典的Wnt信號(hào)通路中，當(dāng)Wnt配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合后，會(huì)抑制糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）的活性，使β-catenin蛋白在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，激活下游靶基因的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)細(xì)胞增殖。研究發(fā)現(xiàn)，Bmi-1可以通過上調(diào)Wnt信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子如Wnt1、Wnt3a等的表達(dá)，激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞增殖。Bmi-1還可以與β-catenin相互作用，增強(qiáng)β-catenin在細(xì)胞核內(nèi)的穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)錄活性，進(jìn)一步促進(jìn)下游靶基因的表達(dá)，如c-Myc、CyclinD1等，這些基因產(chǎn)物在細(xì)胞增殖過程中發(fā)揮著重要作用。在乳腺癌細(xì)胞中，敲低Bmi-1的表達(dá)后，細(xì)胞增殖能力顯著下降，細(xì)胞周期進(jìn)程受到阻滯，CyclinD1表達(dá)下調(diào)，p21Cip1和p27Kip1表達(dá)上調(diào)；而過表達(dá)Bmi-1則促進(jìn)細(xì)胞增殖，CyclinD1表達(dá)升高，p21Cip1和p27Kip1表達(dá)降低。在結(jié)直腸癌細(xì)胞中，抑制Bmi-1的表達(dá)可阻斷Wnt/β-catenin信號(hào)通路的激活，導(dǎo)致細(xì)胞增殖受到抑制，c-Myc、CyclinD1等下游靶基因表達(dá)下調(diào)。這些研究結(jié)果表明，Bmi-1通過調(diào)控細(xì)胞周期相關(guān)蛋白和Wnt/β-catenin信號(hào)通路等多種途徑，促進(jìn)細(xì)胞增殖，在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到重要的推動(dòng)作用。2.2.3維持干細(xì)胞特性干細(xì)胞具有自我更新和多向分化的能力，在組織的發(fā)育、修復(fù)和穩(wěn)態(tài)維持中發(fā)揮著核心作用。腫瘤干細(xì)胞（CancerStemCells，CSCs）是腫瘤組織中一小部分具有干細(xì)胞特性的細(xì)胞群體，它們能夠自我更新、分化形成腫瘤中的各種細(xì)胞類型，并具有高度的致瘤性和耐藥性，被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的根源。Bmi-1在維持腫瘤干細(xì)胞的自我更新和增殖能力方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。在造血系統(tǒng)中，Bmi-1是造血干細(xì)胞自我更新所必需的關(guān)鍵因子。研究表明，Bmi-1通過抑制INK4a/ARF基因的表達(dá)，維持造血干細(xì)胞的增殖能力和自我更新潛能。當(dāng)Bmi-1基因缺失時(shí)，造血干細(xì)胞中的p16INK4a和p19ARF表達(dá)上調(diào)，導(dǎo)致造血干細(xì)胞的增殖能力顯著下降，自我更新能力受損，無法有效地補(bǔ)充血細(xì)胞，進(jìn)而影響整個(gè)造血系統(tǒng)的功能。在神經(jīng)干細(xì)胞中，Bmi-1同樣對(duì)其自我更新和增殖起著重要的調(diào)控作用。從胚胎期到成人期，神經(jīng)祖細(xì)胞的增殖和發(fā)育越來越依賴于Bmi-1。shRNA介導(dǎo)的急性Bmi-1缺失會(huì)導(dǎo)致從胚胎期到成人期的神經(jīng)干細(xì)胞增殖和自我更新障礙，這一過程是通過細(xì)胞周期抑制劑p21介導(dǎo)的?；蛐蛄蟹治鲲@示，Bmi-1發(fā)育差異調(diào)控p21-Rb細(xì)胞周期調(diào)節(jié)途徑的基因表達(dá)，表明Bmi-1在神經(jīng)干細(xì)胞的發(fā)育和維持其干細(xì)胞特性中具有不可或缺的作用。在腫瘤領(lǐng)域，越來越多的研究表明Bmi-1與腫瘤干細(xì)胞的維持密切相關(guān)。在乳腺癌中，Bmi-1被發(fā)現(xiàn)高表達(dá)于腫瘤干細(xì)胞群體中，敲低Bmi-1的表達(dá)可顯著抑制腫瘤干細(xì)胞的自我更新和增殖能力，降低其致瘤性。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，Bmi-1通過與SOX2、OCT4等干細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子相互作用，形成轉(zhuǎn)錄調(diào)控復(fù)合物，共同維持腫瘤干細(xì)胞的干性基因表達(dá)譜，促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞的自我更新和增殖。在結(jié)直腸癌中，Bmi-1同樣在腫瘤干細(xì)胞中高表達(dá)，沉默Bmi-1可導(dǎo)致腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物如CD133、EpCAM等的表達(dá)下調(diào)，腫瘤干細(xì)胞的自我更新和克隆形成能力減弱，腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移能力降低。這表明Bmi-1在維持結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞特性方面發(fā)揮著重要作用，可能是通過調(diào)控腫瘤干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物和信號(hào)通路來實(shí)現(xiàn)的。三、Bmi-1在大腸癌組織中的表達(dá)研究3.1研究設(shè)計(jì)與方法3.1.1樣本收集本研究的樣本來源于[醫(yī)院名稱]在[具體時(shí)間段]內(nèi)收治的經(jīng)手術(shù)切除且病理確診為大腸癌的患者。共收集到大腸癌組織標(biāo)本[X]例，同時(shí)為了進(jìn)行對(duì)比分析，采集了相應(yīng)患者距腫瘤邊緣5cm以上的癌旁正常組織作為對(duì)照，同樣為[X]例。在樣本收集過程中，嚴(yán)格遵循一系列標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)為：患者均經(jīng)病理組織學(xué)檢查確診為大腸癌；患者在手術(shù)前未接受過放療、化療、靶向治療或免疫治療等可能影響B(tài)mi-1表達(dá)的抗腫瘤治療；患者的臨床病理資料完整，包括年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤大小、組織學(xué)類型、分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等，以便后續(xù)進(jìn)行相關(guān)性分析。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：合并其他惡性腫瘤的患者，因?yàn)槠渌[瘤可能會(huì)干擾Bmi-1在大腸癌組織中的表達(dá)及相關(guān)研究結(jié)果；患有嚴(yán)重心、肝、腎等重要臟器功能障礙或其他系統(tǒng)性疾病的患者，這些疾病可能影響機(jī)體的生理狀態(tài)和基因表達(dá)，從而對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生干擾；標(biāo)本質(zhì)量不佳，如組織發(fā)生嚴(yán)重自溶、壞死或標(biāo)本量不足等情況，無法滿足實(shí)驗(yàn)檢測(cè)要求的樣本。所有標(biāo)本在手術(shù)切除后，迅速進(jìn)行處理。將一部分組織用10%中性福爾馬林固定，用于后續(xù)的免疫組織化學(xué)檢測(cè)，以觀察Bmi-1蛋白在組織中的表達(dá)定位和相對(duì)表達(dá)量；另一部分組織則立即放入液氮中速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存，用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)，分別從mRNA水平和蛋白質(zhì)水平分析Bmi-1的表達(dá)情況。在整個(gè)樣本收集和處理過程中，嚴(yán)格做好樣本的標(biāo)記和記錄工作，確保樣本信息的準(zhǔn)確性和可追溯性，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)研究提供可靠的材料基礎(chǔ)。3.1.2檢測(cè)技術(shù)實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-timeFluorescenceQuantitativePCR，RT-qPCR）技術(shù)是在傳統(tǒng)PCR技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的一種核酸定量分析技術(shù)。其原理基于PCR反應(yīng)過程中的能量傳遞和熒光信號(hào)的檢測(cè)。在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，DNA模板不斷擴(kuò)增，與之結(jié)合的熒光基團(tuán)數(shù)量也相應(yīng)增加，熒光信號(hào)隨之增強(qiáng)。通過熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，能夠?qū)ζ鹗寄０暹M(jìn)行定量分析。根據(jù)熒光標(biāo)記物的不同，RT-qPCR主要分為兩種方法：SYBRGreen法和TaqMan探針法。SYBRGreen是一種非特異性的熒光染料，它能夠與雙鏈DNA的小溝結(jié)合，在游離狀態(tài)下幾乎不發(fā)出熒光，而一旦與雙鏈DNA結(jié)合，就會(huì)發(fā)出強(qiáng)烈的熒光信號(hào)。在PCR擴(kuò)增過程中，每擴(kuò)增出一條雙鏈DNA，SYBRGreen就會(huì)與之結(jié)合并發(fā)出熒光，熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的量成正比，通過檢測(cè)熒光強(qiáng)度的變化，就可以實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR反應(yīng)進(jìn)程，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)基因的定量分析。該方法的優(yōu)點(diǎn)是對(duì)DNA模板沒有選擇性，適用于任何DNA，使用方便，無需設(shè)計(jì)復(fù)雜的探針，成本較低且靈敏度高；缺點(diǎn)是容易受到引物二聚體、非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物等的干擾，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差。TaqMan探針法則是利用了Taq酶的5'-3'外切酶活性。TaqMan探針是一段與目標(biāo)DNA序列互補(bǔ)的寡核苷酸，其5'端標(biāo)記有熒光報(bào)告基團(tuán)（如FAM、VIC等），3'端標(biāo)記有熒光淬滅基團(tuán)（如TAMRA等）。在PCR反應(yīng)過程中，當(dāng)引物延伸到探針結(jié)合部位時(shí)，Taq酶的5'-3'外切酶活性會(huì)將探針?biāo)?，使熒光?bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，從而發(fā)出熒光信號(hào)。每擴(kuò)增一條DNA鏈，就會(huì)有一個(gè)探針被水解，釋放出一個(gè)熒光信號(hào)，熒光信號(hào)的強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的量成正比。該方法的優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，能夠有效避免非特異性擴(kuò)增的干擾，準(zhǔn)確性高；缺點(diǎn)是需要針對(duì)每個(gè)目標(biāo)基因設(shè)計(jì)特異性探針，成本較高，且探針的設(shè)計(jì)和合成較為復(fù)雜。免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry，IHC）技術(shù)是應(yīng)用免疫學(xué)的基本原理，即抗原抗體特異性結(jié)合的原理，來檢測(cè)組織細(xì)胞內(nèi)的抗原（主要是多肽和蛋白質(zhì)），并對(duì)其進(jìn)行定位、定性以及相對(duì)定量分析的一種技術(shù)。在大腸癌組織中Bmi-1蛋白的檢測(cè)中，其基本操作流程如下：首先將石蠟包埋的組織切片進(jìn)行脫蠟和水化處理，使組織中的抗原暴露出來。然后采用抗原修復(fù)方法，如高溫高壓修復(fù)、微波修復(fù)等，進(jìn)一步增強(qiáng)抗原的免疫活性，以提高檢測(cè)的敏感性。接著用正常血清封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，減少非特異性染色。之后將特異性的Bmi-1抗體加入到切片中，在合適的溫度和時(shí)間條件下孵育，使抗體與組織中的Bmi-1抗原特異性結(jié)合。孵育結(jié)束后，用緩沖液沖洗切片，去除未結(jié)合的抗體。再加入與一抗特異性結(jié)合的二抗，二抗通常標(biāo)記有酶（如辣根過氧化物酶，HRP）或熒光素（如異硫氰酸熒光素，F(xiàn)ITC）等標(biāo)記物。如果二抗標(biāo)記的是酶，加入相應(yīng)的底物后，酶會(huì)催化底物發(fā)生顯色反應(yīng)，使含有Bmi-1抗原的部位呈現(xiàn)出特定的顏色（如DAB顯色后呈棕黃色）；如果二抗標(biāo)記的是熒光素，則在熒光顯微鏡下可以觀察到熒光信號(hào)。通過對(duì)染色結(jié)果的觀察和分析，可以確定Bmi-1蛋白在組織中的表達(dá)部位和相對(duì)表達(dá)量。根據(jù)陽性細(xì)胞的數(shù)量和染色強(qiáng)度，通常采用半定量的方法對(duì)Bmi-1蛋白的表達(dá)進(jìn)行評(píng)估，如將表達(dá)強(qiáng)度分為陰性、弱陽性、陽性和強(qiáng)陽性等不同等級(jí)，以便于進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和結(jié)果比較。3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果與數(shù)據(jù)分析3.2.1Bmi-1在大腸癌和正常組織中的表達(dá)差異利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)[X]例大腸癌組織和[X]例癌旁正常組織中Bmi-1基因的mRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，大腸癌組織中Bmi-1mRNA的相對(duì)表達(dá)量為[X1]±[X2]，顯著高于癌旁正常組織中的[X3]±[X4]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。以β-actin作為內(nèi)參基因，通過2-ΔΔCt法計(jì)算Bmi-1mRNA的相對(duì)表達(dá)量，繪制的柱狀圖清晰地展示了兩組之間的差異（圖1）。從圖中可以直觀地看出，大腸癌組織中Bmi-1mRNA的表達(dá)水平明顯高于癌旁正常組織，這表明Bmi-1基因在大腸癌組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了Bmi-1在蛋白質(zhì)水平的表達(dá)差異。Bmi-1蛋白主要定位于細(xì)胞核，陽性染色呈棕黃色。在癌旁正常組織中，Bmi-1蛋白的陽性表達(dá)率較低，僅為[X5]%（[X6]/[X]），且染色強(qiáng)度多為弱陽性或陰性，陽性細(xì)胞散在分布；而在大腸癌組織中，Bmi-1蛋白的陽性表達(dá)率高達(dá)[X7]%（[X8]/[X]），染色強(qiáng)度多為陽性或強(qiáng)陽性，陽性細(xì)胞彌漫性分布，尤其是在腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核中表達(dá)更為明顯（圖2）。通過對(duì)免疫組化染色切片進(jìn)行半定量評(píng)分，即根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)和染色強(qiáng)度進(jìn)行綜合評(píng)分（陰性為0分，弱陽性為1分，陽性為2分，強(qiáng)陽性為3分），大腸癌組織的平均評(píng)分顯著高于癌旁正常組織，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。蛋白質(zhì)免疫印跡法的檢測(cè)結(jié)果同樣表明，大腸癌組織中Bmi-1蛋白的表達(dá)量顯著高于癌旁正常組織。以GAPDH作為內(nèi)參蛋白，對(duì)Bmi-1蛋白條帶進(jìn)行灰度值分析，計(jì)算Bmi-1蛋白與GAPDH蛋白灰度值的比值，結(jié)果顯示大腸癌組織中Bmi-1蛋白的相對(duì)表達(dá)量為[X9]±[X10]，明顯高于癌旁正常組織中的[X11]±[X12]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（圖3）。蛋白質(zhì)免疫印跡法的結(jié)果從蛋白質(zhì)定量的角度，再次證實(shí)了Bmi-1蛋白在大腸癌組織中的高表達(dá)。綜上所述，通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫組織化學(xué)和蛋白質(zhì)免疫印跡法三種不同的檢測(cè)技術(shù)，從基因和蛋白質(zhì)水平均證實(shí)了Bmi-1在大腸癌組織中的表達(dá)顯著高于癌旁正常組織，提示Bmi-1可能在大腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。3.2.2Bmi-1表達(dá)與大腸癌臨床病理特征的相關(guān)性將Bmi-1蛋白的表達(dá)情況與大腸癌患者的臨床病理特征進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Bmi-1蛋白的表達(dá)與腫瘤大小、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)（P＜0.05），而與患者的年齡、性別、腫瘤部位和組織學(xué)類型無明顯相關(guān)性（P＞0.05）。在腫瘤大小方面，以腫瘤最大直徑[X13]cm為界，將患者分為腫瘤直徑≤[X13]cm組和腫瘤直徑＞[X13]cm組。Bmi-1蛋白在腫瘤直徑＞[X13]cm組中的陽性表達(dá)率為[X14]%（[X15]/[X16]），顯著高于腫瘤直徑≤[X13]cm組中的[X17]%（[X18]/[X19]），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這表明隨著腫瘤體積的增大，Bmi-1蛋白的表達(dá)水平也相應(yīng)升高，提示Bmi-1可能參與了腫瘤細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)過程，促進(jìn)腫瘤的體積增大。在TNM分期方面，Bmi-1蛋白在TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期的患者中的陽性表達(dá)率為[X20]%（[X21]/[X22]），明顯高于Ⅰ+Ⅱ期患者中的[X23]%（[X24]/[X25]），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。TNM分期是評(píng)估腫瘤進(jìn)展程度的重要指標(biāo)，分期越高，腫瘤的侵襲性和轉(zhuǎn)移性越強(qiáng)。Bmi-1蛋白在晚期患者中的高表達(dá)，說明Bmi-1與大腸癌的病情進(jìn)展密切相關(guān)，可能在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。對(duì)于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中Bmi-1蛋白的陽性表達(dá)率為[X26]%（[X27]/[X28]），顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的[X29]%（[X30]/[X31]），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這表明Bmi-1蛋白的高表達(dá)與大腸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示Bmi-1可能通過某種機(jī)制促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，增加腫瘤的擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)。在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移方面，有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者中Bmi-1蛋白的陽性表達(dá)率高達(dá)[X32]%（[X33]/[X34]），遠(yuǎn)高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者中的[X35]%（[X36]/[X37]），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。這進(jìn)一步說明Bmi-1蛋白的高表達(dá)與大腸癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，可能是導(dǎo)致腫瘤患者預(yù)后不良的重要因素之一。綜上所述，Bmi-1蛋白的表達(dá)與大腸癌的腫瘤大小、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等臨床病理特征密切相關(guān)，提示Bmi-1在大腸癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中可能發(fā)揮著重要作用，有望成為評(píng)估大腸癌病情和預(yù)后的重要指標(biāo)。四、Bmi-1在大腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制4.1Bmi-1對(duì)抑癌基因的調(diào)控4.1.1p16基因的失活機(jī)制p16基因，又稱多腫瘤抑制基因1（multipletumorsuppressor1，MTS1），定位于人類染色體9p21區(qū)域，是細(xì)胞周期調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵負(fù)調(diào)控因子，在細(xì)胞周期進(jìn)程的監(jiān)控和細(xì)胞增殖的調(diào)節(jié)中發(fā)揮著核心作用。p16基因編碼的p16蛋白由148個(gè)氨基酸組成，其相對(duì)分子質(zhì)量約為16kDa。p16蛋白通過特異性地與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4（CDK4）和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶6（CDK6）結(jié)合，形成p16-CDK4/6復(fù)合物，從而抑制CDK4/6的激酶活性。在正常細(xì)胞周期中，CDK4/6與細(xì)胞周期蛋白D（CyclinD）結(jié)合形成CyclinD-CDK4/6復(fù)合物，該復(fù)合物可使視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（pRb）磷酸化，磷酸化的pRb釋放出轉(zhuǎn)錄因子E2F，E2F進(jìn)而激活一系列與DNA復(fù)制和細(xì)胞周期進(jìn)展相關(guān)的基因，推動(dòng)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期。而當(dāng)p16蛋白表達(dá)正常時(shí)，它與CDK4/6的結(jié)合會(huì)阻止CyclinD-CDK4/6復(fù)合物的形成，使pRb保持低磷酸化狀態(tài)，E2F被pRb持續(xù)結(jié)合而無法激活下游基因轉(zhuǎn)錄，細(xì)胞周期停滯于G1期，從而有效抑制細(xì)胞的過度增殖，維持細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和分化平衡。在大腸癌的發(fā)生發(fā)展過程中，Bmi-1對(duì)p16基因的表達(dá)具有顯著的抑制作用，這一調(diào)控機(jī)制涉及多個(gè)層面。Bmi-1主要通過與p16基因的啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合，招募組蛋白修飾酶等相關(guān)蛋白，對(duì)組蛋白進(jìn)行修飾，從而改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，抑制p16基因的轉(zhuǎn)錄起始。具體而言，Bmi-1可以招募組蛋白去乙酰化酶（HDACs），使p16基因啟動(dòng)子區(qū)域的組蛋白H3和H4發(fā)生去乙酰化修飾。組蛋白的乙?；揎椡ǔＥc基因的活躍轉(zhuǎn)錄相關(guān)，而去乙?；揎梽t會(huì)導(dǎo)致染色質(zhì)結(jié)構(gòu)緊密，使轉(zhuǎn)錄因子難以結(jié)合到啟動(dòng)子區(qū)域，從而抑制基因轉(zhuǎn)錄。Bmi-1還可能通過招募其他轉(zhuǎn)錄抑制因子，如多梳抑制復(fù)合物1（PRC1）等，與p16基因啟動(dòng)子區(qū)域形成穩(wěn)定的抑制性復(fù)合物，進(jìn)一步阻礙轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的組裝，降低p16基因的轉(zhuǎn)錄水平。Bmi-1對(duì)p16基因表達(dá)的抑制作用，會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞周期調(diào)控機(jī)制的紊亂，進(jìn)而促進(jìn)大腸癌細(xì)胞的增殖。當(dāng)Bmi-1高表達(dá)時(shí)，p16基因表達(dá)受到抑制，p16蛋白水平下降，無法有效抑制CDK4/6的活性。CyclinD-CDK4/6復(fù)合物大量形成并持續(xù)激活，促使pRb過度磷酸化，釋放出大量E2F，E2F激活的下游基因如c-Myc、CyclinE等過度表達(dá)，這些基因產(chǎn)物驅(qū)動(dòng)細(xì)胞周期進(jìn)程加速，細(xì)胞獲得持續(xù)增殖的能力，從而為大腸癌的發(fā)生發(fā)展提供了有利條件。研究表明，在大腸癌細(xì)胞系中，通過RNA干擾技術(shù)敲低Bmi-1的表達(dá)后，p16基因的表達(dá)顯著上調(diào)，細(xì)胞周期阻滯于G1期，細(xì)胞增殖能力明顯下降；而在Bmi-1過表達(dá)的細(xì)胞模型中，p16基因表達(dá)被抑制，細(xì)胞增殖速度加快，表明Bmi-1通過抑制p16基因表達(dá)，在大腸癌的細(xì)胞周期調(diào)控和增殖過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。4.1.2p14ARF和p21基因的調(diào)控作用p14ARF基因（在小鼠中為p19ARF）同樣定位于人類染色體9p21區(qū)域，與p16基因共享部分外顯子，但由于不同的閱讀框，編碼產(chǎn)生截然不同的蛋白產(chǎn)物。p14ARF蛋白在細(xì)胞內(nèi)主要定位于細(xì)胞核和核仁，是細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)和腫瘤抑制網(wǎng)絡(luò)中的重要成員。p14ARF蛋白的主要功能是通過與鼠雙微體2（MDM2）蛋白結(jié)合，抑制MDM2對(duì)腫瘤抑制蛋白p53的泛素化降解作用。在正常細(xì)胞中，p53蛋白處于相對(duì)低水平，MDM2作為E3泛素連接酶，能夠識(shí)別并結(jié)合p53蛋白，將泛素分子連接到p53蛋白上，使其被蛋白酶體識(shí)別并降解，從而維持p53蛋白的穩(wěn)態(tài)平衡。當(dāng)細(xì)胞受到各種應(yīng)激刺激，如DNA損傷、癌基因激活等，p14ARF蛋白表達(dá)上調(diào)，它與MDM2的結(jié)合能力增強(qiáng)，阻斷MDM2對(duì)p53的泛素化降解途徑，導(dǎo)致p53蛋白在細(xì)胞內(nèi)積累并激活。激活的p53蛋白作為轉(zhuǎn)錄因子，能夠調(diào)控一系列下游基因的表達(dá)，這些基因產(chǎn)物參與細(xì)胞周期阻滯、細(xì)胞凋亡、DNA修復(fù)等過程，從而抑制腫瘤的發(fā)生發(fā)展。例如，p53可以上調(diào)p21基因的表達(dá)，p21蛋白作為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑，能夠抑制CDK的活性，使細(xì)胞周期停滯于G1期或G2期，阻止受損細(xì)胞的增殖；p53還可以激活促凋亡基因如Bax、PUMA等的表達(dá)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，清除可能發(fā)生癌變的細(xì)胞。在大腸癌中，Bmi-1對(duì)p14ARF基因的表達(dá)具有負(fù)向調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn)，Bmi-1通過與p14ARF基因的啟動(dòng)子區(qū)域相互作用，招募轉(zhuǎn)錄抑制復(fù)合物，抑制p14ARF基因的轉(zhuǎn)錄起始。Bmi-1可能與多梳抑制復(fù)合物2（PRC2）協(xié)同作用，使p14ARF基因啟動(dòng)子區(qū)域的組蛋白H3賴氨酸27發(fā)生三甲基化修飾（H3K27me3），這種修飾是一種典型的轉(zhuǎn)錄抑制標(biāo)記，會(huì)導(dǎo)致染色質(zhì)結(jié)構(gòu)緊密，轉(zhuǎn)錄因子難以結(jié)合，從而降低p14ARF基因的轉(zhuǎn)錄活性。當(dāng)Bmi-1高表達(dá)導(dǎo)致p14ARF基因表達(dá)被抑制時(shí)，p14ARF蛋白水平降低，無法有效抑制MDM2對(duì)p53的降解，p53蛋白被大量降解，其下游的腫瘤抑制信號(hào)通路被阻斷，細(xì)胞逃避了p53介導(dǎo)的細(xì)胞周期阻滯和凋亡機(jī)制，獲得了更強(qiáng)的增殖和存活能力，進(jìn)而促進(jìn)了大腸癌的發(fā)生發(fā)展。在大腸癌細(xì)胞中，敲低Bmi-1的表達(dá)可使p14ARF基因表達(dá)上調(diào)，p53蛋白水平升高，細(xì)胞凋亡增加，腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)受到抑制；而在Bmi-1過表達(dá)的細(xì)胞中，p14ARF基因表達(dá)下降，p53蛋白穩(wěn)定性降低，細(xì)胞增殖和侵襲能力增強(qiáng)。p21基因，全稱為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子1A（cyclin-dependentkinaseinhibitor1A，CDKN1A），定位于人類染色體6p21.2區(qū)域，編碼的p21蛋白是一種重要的細(xì)胞周期負(fù)調(diào)控因子。p21蛋白可以與多種細(xì)胞周期蛋白-CDK復(fù)合物結(jié)合，如CyclinD-CDK4/6、CyclinE-CDK2等，抑制這些復(fù)合物的激酶活性，從而使細(xì)胞周期停滯在G1期或G2期。p21蛋白的表達(dá)主要受p53蛋白的調(diào)控，當(dāng)細(xì)胞受到DNA損傷等應(yīng)激刺激時(shí)，p53蛋白激活，其作為轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到p21基因的啟動(dòng)子區(qū)域，促進(jìn)p21基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。除了p53依賴的調(diào)控途徑外，p21基因的表達(dá)還受到其他多種信號(hào)通路和轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)節(jié)，如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）信號(hào)通路、核因子κB（NF-κB）等。Bmi-1對(duì)p21基因的表達(dá)也存在調(diào)控作用，但其調(diào)控機(jī)制較為復(fù)雜，且在不同的細(xì)胞環(huán)境和實(shí)驗(yàn)條件下可能存在差異。一方面，Bmi-1可能通過抑制p53信號(hào)通路間接影響p21基因的表達(dá)。如前文所述，Bmi-1抑制p14ARF基因表達(dá)，導(dǎo)致p53蛋白被MDM2降解，p53對(duì)p21基因的轉(zhuǎn)錄激活作用減弱，從而使p21基因表達(dá)下調(diào)。另一方面，有研究表明Bmi-1可能直接與p21基因的啟動(dòng)子區(qū)域相互作用，招募轉(zhuǎn)錄抑制因子，抑制p21基因的轉(zhuǎn)錄。在某些大腸癌細(xì)胞系中，過表達(dá)Bmi-1會(huì)導(dǎo)致p21基因表達(dá)降低，細(xì)胞周期進(jìn)程加快，細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)；而敲低Bmi-1則可使p21基因表達(dá)上調(diào)，細(xì)胞周期阻滯，細(xì)胞增殖受到抑制。這表明Bmi-1通過對(duì)p21基因的調(diào)控，參與了大腸癌的細(xì)胞周期調(diào)控和腫瘤發(fā)展過程，其具體的調(diào)控機(jī)制仍有待進(jìn)一步深入研究。4.2Bmi-1與腫瘤干細(xì)胞的維持4.2.1腫瘤干細(xì)胞的特性與作用腫瘤干細(xì)胞（CancerStemCells，CSCs）是腫瘤組織中一小部分具有干細(xì)胞特性的細(xì)胞群體，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移過程中扮演著核心角色。腫瘤干細(xì)胞學(xué)說認(rèn)為，腫瘤干細(xì)胞具有自我更新和多向分化的能力，是腫瘤形成和發(fā)展的根源。與普通腫瘤細(xì)胞相比，腫瘤干細(xì)胞具有一系列獨(dú)特的生物學(xué)特性。腫瘤干細(xì)胞具有極強(qiáng)的自我更新能力，這是其區(qū)別于普通腫瘤細(xì)胞的重要特征之一。自我更新是指腫瘤干細(xì)胞能夠通過不對(duì)稱分裂，產(chǎn)生一個(gè)與自身相同的腫瘤干細(xì)胞和一個(gè)分化的子代細(xì)胞，從而維持腫瘤干細(xì)胞群體的數(shù)量穩(wěn)定，并為腫瘤的持續(xù)生長(zhǎng)提供源源不斷的細(xì)胞來源。這種自我更新能力使得腫瘤干細(xì)胞能夠在腫瘤組織中長(zhǎng)期存在，即使在常規(guī)的腫瘤治療手段如手術(shù)、化療和放療后，大部分普通腫瘤細(xì)胞被清除，腫瘤干細(xì)胞仍可憑借其自我更新能力重新增殖，導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)。研究表明，在大腸癌組織中，腫瘤干細(xì)胞能夠通過自我更新不斷產(chǎn)生新的腫瘤細(xì)胞，這些新產(chǎn)生的腫瘤細(xì)胞進(jìn)一步分化形成腫瘤組織的不同細(xì)胞類型，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和發(fā)展。在對(duì)大腸癌患者的臨床研究中發(fā)現(xiàn)，手術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)的患者，其腫瘤組織中腫瘤干細(xì)胞的含量明顯高于未復(fù)發(fā)患者，這進(jìn)一步證實(shí)了腫瘤干細(xì)胞的自我更新能力在腫瘤復(fù)發(fā)中的關(guān)鍵作用。腫瘤干細(xì)胞還具有多向分化潛能，能夠分化為構(gòu)成腫瘤組織的各種不同類型的細(xì)胞，從而形成具有異質(zhì)性的腫瘤細(xì)胞群體。在大腸癌中，腫瘤干細(xì)胞可以分化為腸上皮細(xì)胞、黏液細(xì)胞、內(nèi)分泌細(xì)胞等多種細(xì)胞類型，這些不同類型的細(xì)胞共同構(gòu)成了大腸癌組織的復(fù)雜結(jié)構(gòu)。腫瘤干細(xì)胞的多向分化潛能使得腫瘤組織具有高度的異質(zhì)性，這種異質(zhì)性不僅增加了腫瘤的復(fù)雜性和治療難度，還使得腫瘤細(xì)胞對(duì)不同的治療方法產(chǎn)生不同的反應(yīng)，導(dǎo)致腫瘤治療效果不佳。例如，部分腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感，而另一部分則可能具有耐藥性，這使得化療難以徹底清除腫瘤細(xì)胞，為腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移埋下隱患。腫瘤干細(xì)胞在大腸癌的轉(zhuǎn)移過程中也發(fā)揮著重要作用。腫瘤干細(xì)胞具有較強(qiáng)的遷移和侵襲能力，能夠脫離原發(fā)腫瘤部位，進(jìn)入血液循環(huán)或淋巴循環(huán)，進(jìn)而在遠(yuǎn)處器官定植并形成轉(zhuǎn)移灶。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤干細(xì)胞表面表達(dá)多種與遷移和侵襲相關(guān)的分子，如上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)標(biāo)志物（E-cadherin、N-cadherin、Vimentin等）、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等，這些分子能夠調(diào)節(jié)腫瘤干細(xì)胞與周圍細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用，促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞的遷移和侵襲。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，將標(biāo)記的大腸癌腫瘤干細(xì)胞注射到小鼠體內(nèi)，能夠觀察到這些腫瘤干細(xì)胞在肺部、肝臟等遠(yuǎn)處器官形成轉(zhuǎn)移灶，進(jìn)一步證實(shí)了腫瘤干細(xì)胞在大腸癌轉(zhuǎn)移中的重要作用。腫瘤干細(xì)胞還具有較高的耐藥性，能夠逃避常規(guī)化療藥物和放療的殺傷作用，這也是導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的重要原因之一。腫瘤干細(xì)胞高表達(dá)多種耐藥相關(guān)蛋白，如ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族成員（ABCB1、ABCG2等），這些蛋白能夠?qū)⒒熕幬锉贸黾?xì)胞外，降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，從而使腫瘤干細(xì)胞對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。腫瘤干細(xì)胞處于相對(duì)靜止的細(xì)胞周期狀態(tài)，對(duì)化療藥物的敏感性較低，因?yàn)榇蠖鄶?shù)化療藥物作用于細(xì)胞周期中的活躍期細(xì)胞，而腫瘤干細(xì)胞的低增殖活性使其能夠逃避化療藥物的殺傷。4.2.2Bmi-1維持腫瘤干細(xì)胞的分子途徑Bmi-1在維持腫瘤干細(xì)胞的自我更新和增殖能力方面發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，其分子機(jī)制涉及多個(gè)信號(hào)通路和基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。Bmi-1通過抑制INK4a/ARF基因座的表達(dá)來維持腫瘤干細(xì)胞的特性。INK4a/ARF基因座可編碼p16INK4a和p14ARF（在小鼠中為p19ARF）兩種重要的腫瘤抑制蛋白。p16INK4a通過與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4/6（CDK4/6）結(jié)合，抑制其活性，進(jìn)而阻止視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（pRb）的磷酸化，使細(xì)胞停滯于G1期，抑制細(xì)胞增殖；p14ARF則通過與鼠雙微體2（MDM2）結(jié)合，抑制MDM2對(duì)p53的泛素化降解，穩(wěn)定p53蛋白，激活p53下游的凋亡相關(guān)基因，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。Bmi-1作為INK4a/ARF的上游調(diào)節(jié)因子，在轉(zhuǎn)錄水平負(fù)向調(diào)控INK4a/ARF的表達(dá)。在大腸癌腫瘤干細(xì)胞中，Bmi-1高表達(dá)，抑制INK4a/ARF基因座的表達(dá)，使p16INK4a和p14ARF的表達(dá)降低，解除對(duì)細(xì)胞增殖和凋亡的抑制作用，從而維持腫瘤干細(xì)胞的自我更新和增殖能力。研究表明，在大腸癌細(xì)胞系中，敲低Bmi-1的表達(dá)后，INK4a/ARF基因座的表達(dá)上調(diào)，p16INK4a和p14ARF蛋白水平升高，腫瘤干細(xì)胞的自我更新和增殖能力受到顯著抑制。Bmi-1與Wnt/β-catenin信號(hào)通路密切相關(guān)，該信號(hào)通路在腫瘤干細(xì)胞的維持和腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵作用。在經(jīng)典的Wnt信號(hào)通路中，當(dāng)Wnt配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合后，會(huì)抑制糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）的活性，使β-catenin蛋白在細(xì)胞質(zhì)中積累并進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，激活下游靶基因的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)細(xì)胞增殖和干細(xì)胞特性的維持。Bmi-1可以通過上調(diào)Wnt信號(hào)通路中的關(guān)鍵分子如Wnt1、Wnt3a等的表達(dá)，激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，維持腫瘤干細(xì)胞的自我更新和增殖能力。Bmi-1還可以與β-catenin相互作用，增強(qiáng)β-catenin在細(xì)胞核內(nèi)的穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)錄活性，進(jìn)一步促進(jìn)下游靶基因的表達(dá)，如c-Myc、CyclinD1等，這些基因產(chǎn)物在維持腫瘤干細(xì)胞特性和促進(jìn)腫瘤干細(xì)胞增殖過程中發(fā)揮著重要作用。在大腸癌腫瘤干細(xì)胞中，抑制Bmi-1的表達(dá)可阻斷Wnt/β-catenin信號(hào)通路的激活，導(dǎo)致腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物如CD133、EpCAM等的表達(dá)下調(diào)，腫瘤干細(xì)胞的自我更新和克隆形成能力減弱。Bmi-1還可以通過調(diào)控其他干細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子來維持腫瘤干細(xì)胞的特性。研究發(fā)現(xiàn)，Bmi-1與SOX2、OCT4等干細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子相互作用，形成轉(zhuǎn)錄調(diào)控復(fù)合物，共同維持腫瘤干細(xì)胞的干性基因表達(dá)譜。SOX2和OCT4是維持干細(xì)胞多能性的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，它們?cè)谀[瘤干細(xì)胞中高表達(dá)，與腫瘤干細(xì)胞的自我更新和多向分化能力密切相關(guān)。Bmi-1與SOX2、OCT4的相互作用能夠增強(qiáng)這些轉(zhuǎn)錄因子的活性，促進(jìn)干性基因的表達(dá)，從而維持腫瘤干細(xì)胞的特性。在大腸癌腫瘤干細(xì)胞中，敲低Bmi-1的表達(dá)會(huì)導(dǎo)致SOX2和OCT4的表達(dá)下調(diào)，腫瘤干細(xì)胞的干性基因表達(dá)譜發(fā)生改變，腫瘤干細(xì)胞的自我更新和多向分化能力受到抑制。4.3Bmi-1參與的信號(hào)通路4.3.1Wnt/β-catenin信號(hào)通路Wnt/β-catenin信號(hào)通路是一條在生物進(jìn)化過程中高度保守的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，在胚胎發(fā)育、組織穩(wěn)態(tài)維持以及腫瘤發(fā)生發(fā)展等多個(gè)生物學(xué)過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。該信號(hào)通路的核心分子是β-catenin，在正常生理狀態(tài)下，細(xì)胞內(nèi)的β-catenin處于動(dòng)態(tài)平衡。細(xì)胞質(zhì)中的β-catenin與由腺瘤性息肉病蛋白（APC）、軸蛋白（Axin）和糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）組成的降解復(fù)合物結(jié)合，被GSK-3β磷酸化修飾，隨后被泛素化并經(jīng)蛋白酶體降解，使得細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的β-catenin維持在較低水平，無法進(jìn)入細(xì)胞核發(fā)揮作用。當(dāng)Wnt信號(hào)通路被激活時(shí)，Wnt配體與細(xì)胞膜上的卷曲蛋白（Frizzled，F(xiàn)z）受體和低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白5/6（LRP5/6）共受體結(jié)合，形成Wnt-Fz-LRP5/6復(fù)合物。該復(fù)合物招募并激活離散型蛋白（Dishevelled，Dvl），Dvl通過抑制GSK-3β的活性，破壞β-catenin降解復(fù)合物的功能，使β-catenin的磷酸化受阻，從而在細(xì)胞質(zhì)中大量積累。積累的β-catenin隨后進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子T細(xì)胞因子/淋巴增強(qiáng)因子（TCF/LEF）家族成員結(jié)合，形成β-catenin-TCF/LEF轉(zhuǎn)錄復(fù)合物，進(jìn)而激活一系列下游靶基因的轉(zhuǎn)錄，如c-Myc、CyclinD1、基質(zhì)金屬蛋白酶7（MMP7）等。這些靶基因的產(chǎn)物參與細(xì)胞增殖、分化、遷移、侵襲以及腫瘤干細(xì)胞特性維持等多個(gè)生物學(xué)過程，對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生重要影響。例如，c-Myc是一種原癌基因，能夠促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞分化，并參與細(xì)胞代謝和凋亡的調(diào)控；CyclinD1是細(xì)胞周期調(diào)控的關(guān)鍵蛋白，能夠促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，加速細(xì)胞周期進(jìn)程，促進(jìn)細(xì)胞增殖；MMP7則是一種蛋白水解酶，能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。在大腸癌中，Bmi-1與Wnt/β-catenin信號(hào)通路之間存在密切的相互作用關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)，Bmi-1可以通過多種方式激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)大腸癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。Bmi-1能夠上調(diào)Wnt信號(hào)通路中關(guān)鍵配體如Wnt1、Wnt3a等的表達(dá)，增加Wnt信號(hào)的強(qiáng)度，從而激活下游信號(hào)傳導(dǎo)。在大腸癌細(xì)胞系中，過表達(dá)Bmi-1可顯著提高Wnt1和Wnt3a的mRNA和蛋白表達(dá)水平，同時(shí)伴隨著β-catenin在細(xì)胞核內(nèi)的積累和下游靶基因c-Myc、CyclinD1的表達(dá)上調(diào)；而敲低Bmi-1則導(dǎo)致Wnt1和Wnt3a表達(dá)下降，β-catenin入核減少，下游靶基因表達(dá)受到抑制。這表明Bmi-1通過上調(diào)Wnt配體的表達(dá)，激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路，促進(jìn)大腸癌細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)。Bmi-1還可以與β-catenin直接相互作用，增強(qiáng)β-catenin在細(xì)胞核內(nèi)的穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)錄活性。研究表明，Bmi-1與β-catenin的armadillo重復(fù)結(jié)構(gòu)域相互結(jié)合，這種結(jié)合不僅能夠阻止β-catenin被蛋白酶體降解，延長(zhǎng)其半衰期，還能增強(qiáng)β-catenin與TCF/LEF轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合能力，從而提高下游靶基因的轉(zhuǎn)錄效率。在大腸癌組織中，Bmi-1和β-catenin的表達(dá)呈正相關(guān)，且二者的高表達(dá)與腫瘤的惡性程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后密切相關(guān)。通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在大腸癌細(xì)胞中Bmi-1與β-catenin存在相互作用，干擾Bmi-1與β-catenin的結(jié)合可抑制Wnt/β-catenin信號(hào)通路的激活，降低大腸癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。這進(jìn)一步說明Bmi-1通過與β-catenin的相互作用，在大腸癌中發(fā)揮促進(jìn)腫瘤發(fā)展的作用。4.3.2Notch信號(hào)通路Notch信號(hào)通路同樣是一條在進(jìn)化上高度保守的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，在胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化、組織穩(wěn)態(tài)維持以及腫瘤發(fā)生發(fā)展等過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。該信號(hào)通路的核心組成部分包括Notch受體、Notch配體以及下游的效應(yīng)分子。在哺乳動(dòng)物中，Notch受體家族包括Notch1、Notch2、Notch3和Notch4，它們均為單次跨膜的受體蛋白；Notch配體家族則包括Delta樣配體（DLL1、DLL3、DLL4）和鋸齒樣配體（Jagged1、Jagged2），這些配體也是跨膜蛋白。Notch信號(hào)通路的激活始于Notch受體與配體的結(jié)合。當(dāng)配體與受體結(jié)合后，會(huì)引發(fā)Notch受體的兩次蛋白水解切割。首先，在細(xì)胞外區(qū)域，腫瘤壞死因子-α轉(zhuǎn)換酶（TACE）對(duì)Notch受體進(jìn)行第一次切割，釋放出Notch受體的胞外片段；接著，在細(xì)胞膜上，γ-分泌酶對(duì)Notch受體進(jìn)行第二次切割，釋放出Notch受體的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域（Notchintracellulardomain，NICD）。NICD隨后進(jìn)入細(xì)胞核，與轉(zhuǎn)錄因子重組信號(hào)結(jié)合蛋白Jκ（RBP-Jκ）相互作用，形成NICD-RBP-Jκ復(fù)合物。在沒有NICD結(jié)合時(shí)，RBP-Jκ與轉(zhuǎn)錄抑制因子結(jié)合，抑制下游基因的轉(zhuǎn)錄；而當(dāng)NICD與RBP-Jκ結(jié)合后，會(huì)招募轉(zhuǎn)錄激活因子，如Mastermind樣蛋白（MAML）等，形成轉(zhuǎn)錄激活復(fù)合物，從而激活Notch信號(hào)通路的下游靶基因，如Hairy增強(qiáng)子分裂（HES）家族和HES相關(guān)蛋白（HEY）家族等。這些靶基因的產(chǎn)物作為轉(zhuǎn)錄因子，進(jìn)一步調(diào)控其他基因的表達(dá)，參與細(xì)胞增殖、分化、凋亡以及干細(xì)胞特性維持等生物學(xué)過程。例如，HES1能夠抑制細(xì)胞分化相關(guān)基因的表達(dá)，維持細(xì)胞的未分化狀態(tài)，促進(jìn)細(xì)胞增殖；HEY1則在血管生成、細(xì)胞遷移和侵襲等過程中發(fā)揮重要作用。在腫瘤領(lǐng)域，Notch信號(hào)通路的異常激活與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，其作用具有雙重性，在不同的腫瘤類型和腫瘤發(fā)展階段可能發(fā)揮促進(jìn)或抑制腫瘤的作用。在大腸癌中，Notch信號(hào)通路通常處于激活狀態(tài)，并且與腫瘤的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移以及腫瘤干細(xì)胞特性維持等過程密切相關(guān)。研究表明，Notch信號(hào)通路的激活能夠促進(jìn)大腸癌細(xì)胞的增殖和存活，抑制細(xì)胞凋亡。激活Notch信號(hào)通路可上調(diào)CyclinD1、c-Myc等細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程，使細(xì)胞獲得持續(xù)增殖的能力；還可以通過抑制促凋亡基因如Bax的表達(dá)，上調(diào)抗凋亡基因如Bcl-2的表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的存活能力。Notch信號(hào)通路的激活還與大腸癌的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。激活Notch信號(hào)可上調(diào)MMPs等蛋白水解酶的表達(dá)，降解細(xì)胞外基質(zhì)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲；還可以誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程，使上皮細(xì)胞失去極性和細(xì)胞間連接，獲得間質(zhì)細(xì)胞的特性，從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力。在大腸癌腫瘤干細(xì)胞中，Notch信號(hào)通路對(duì)于維持腫瘤干細(xì)胞的自我更新和多向分化能力至關(guān)重要。抑制Notch信號(hào)通路可導(dǎo)致腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物如CD133、EpCAM等的表達(dá)下調(diào)，腫瘤干細(xì)胞的自我更新和克隆形成能力減弱，腫瘤的致瘤性降低。Bmi-1在Notch信號(hào)通路中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用，并且與大腸癌的腫瘤發(fā)生發(fā)展存在密切聯(lián)系。研究發(fā)現(xiàn)，Bmi-1可以通過上調(diào)Notch信號(hào)通路中關(guān)鍵分子的表達(dá)，激活Notch信號(hào)傳導(dǎo)。在大腸癌細(xì)胞系中，過表達(dá)Bmi-1可顯著提高Notch1、Notch2及其配體DLL1、Jagged1的mRNA和蛋白表達(dá)水平，同時(shí)伴隨著NICD的核積累和下游靶基因HES1、HEY1的表達(dá)上調(diào)；而敲低Bmi-1則導(dǎo)致Notch信號(hào)通路相關(guān)分子的表達(dá)下降，NICD入核減少，下游靶基因表達(dá)受到抑制。這表明Bmi-1通過上調(diào)Notch信號(hào)通路相關(guān)分子的表達(dá)，激活Notch信號(hào)通路，促進(jìn)大腸癌細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。Bmi-1還可以與Notch信號(hào)通路的關(guān)鍵分子相互作用，協(xié)同調(diào)節(jié)相關(guān)生物學(xué)過程。研究表明，Bmi-1與NICD存在相互作用，這種相互作用能夠增強(qiáng)NICD與RBP-Jκ的結(jié)合能力，促進(jìn)下游靶基因的轉(zhuǎn)錄激活。在大腸癌組織中，Bmi-1和NICD的表達(dá)呈正相關(guān)，且二者的高表達(dá)與腫瘤的惡性程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和不良預(yù)后密切相關(guān)。通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)，在大腸癌細(xì)胞中Bmi-1與NICD存在相互作用，干擾Bmi-1與NICD的結(jié)合可抑制Notch信號(hào)通路的激活，降低大腸癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。這進(jìn)一步說明Bmi-1通過與Notch信號(hào)通路關(guān)鍵分子的相互作用，在大腸癌中發(fā)揮促進(jìn)腫瘤發(fā)展的作用。五、Bmi-1在大腸癌診斷與預(yù)后評(píng)估中的意義5.1Bmi-1作為診斷標(biāo)志物的潛力5.1.1診斷效能分析為了深入評(píng)估Bmi-1對(duì)大腸癌的診斷價(jià)值，本研究對(duì)[X]例大腸癌患者的組織標(biāo)本進(jìn)行了全面分析。通過免疫組織化學(xué)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR以及蛋白質(zhì)免疫印跡法等多種檢測(cè)技術(shù)，精確測(cè)定了Bmi-1在大腸癌組織和癌旁正常組織中的表達(dá)水平。以免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果為例，Bmi-1蛋白在大腸癌組織中的陽性表達(dá)率高達(dá)[X7]%（[X8]/[X]），而在癌旁正常組織中的陽性表達(dá)率僅為[X5]%（[X6]/[X]），二者差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。運(yùn)用受試者工作特征（ROC）曲線對(duì)Bmi-1的診斷效能進(jìn)行量化評(píng)估，結(jié)果顯示，Bmi-1診斷大腸癌的曲線下面積（AUC）達(dá)到了[X38]，具有較高的準(zhǔn)確性。當(dāng)設(shè)定最佳臨界值時(shí)，Bmi-1診斷大腸癌的敏感性為[X39]%，特異性為[X40]%。與傳統(tǒng)的腫瘤標(biāo)志物癌胚抗原（CEA）相比，CEA診斷大腸癌的AUC為[X41]，敏感性為[X42]%，特異性為[X43]%。這表明Bmi-1在診斷大腸癌方面具有與CEA相當(dāng)甚至更優(yōu)的診斷效能，尤其是在特異性方面表現(xiàn)更為突出，能夠更準(zhǔn)確地區(qū)分大腸癌組織與正常組織。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Bmi-1基因mRNA表達(dá)水平的結(jié)果同樣支持其在大腸癌診斷中的重要價(jià)值。大腸癌組織中Bmi-1mRNA的相對(duì)表達(dá)量為[X1]±[X2]，顯著高于癌旁正常組織中的[X3]±[X4]（P＜0.01）。通過建立基于Bmi-1mRNA表達(dá)水平的診斷模型，進(jìn)行交叉驗(yàn)證后，該模型對(duì)大腸癌的診斷準(zhǔn)確率達(dá)到了[X44]%。這進(jìn)一步證實(shí)了Bmi-1在基因水平上對(duì)大腸癌具有較高的診斷效能，為大腸癌的早期診斷提供了新的分子生物學(xué)指標(biāo)。5.1.2與傳統(tǒng)診斷指標(biāo)的聯(lián)合應(yīng)用盡管Bmi-1在大腸癌診斷中展現(xiàn)出了一定的潛力，但單獨(dú)使用Bmi-1進(jìn)行診斷仍存在一定的局限性。為了進(jìn)一步提高大腸癌的診斷準(zhǔn)確性，本研究深入探討了Bmi-1與傳統(tǒng)診斷指標(biāo)聯(lián)合應(yīng)用的優(yōu)勢(shì)。癌胚抗原（CEA）作為臨床上常用的大腸癌診斷標(biāo)志物，在大腸癌患者的血清中常常呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。然而，CEA的特異性相對(duì)較低，在一些良性疾病如炎癥性腸病、腸道息肉等情況下也可能出現(xiàn)升高，導(dǎo)致假陽性結(jié)果的出現(xiàn)。糖類抗原19-9（CA19-9）同樣是常用的腫瘤標(biāo)志物之一，其在大腸癌的診斷和病情監(jiān)測(cè)中具有一定的價(jià)值，但也存在類似的特異性不足問題。本研究將Bmi-1與CEA、CA19-9進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了全面分析。結(jié)果顯示，聯(lián)合檢測(cè)時(shí)診斷大腸癌的AUC為[X45]，顯著高于單獨(dú)使用Bmi-1（AUC=[X38]）、CEA（AUC=[X41]）或CA19-9（AUC=[X46]）的AUC。在敏感性方面，聯(lián)合檢測(cè)的敏感性達(dá)到了[X47]%，高于單獨(dú)使用Bmi-1的[X39]%、CEA的[X42]%和CA19-9的[X48]%；在特異性方面，聯(lián)合檢測(cè)的特異性為[X49]%，同樣高于單獨(dú)使用CEA的[X43]%和CA19-9的[X50]%，與單獨(dú)使用Bmi-1的特異性（[X40]%）相當(dāng)。進(jìn)一步的分層分析表明，在早期大腸癌患者中，聯(lián)合檢測(cè)的診斷效能提升更為顯著。對(duì)于TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期的患者，聯(lián)合檢測(cè)的AUC為[X51]，敏感性為[X52]%，特異性為[X53]%；而單獨(dú)使用Bmi-1的AUC為[X54]，敏感性為[X55]%，特異性為[X56]%，單獨(dú)使用CEA的AUC為[X57]，敏感性為[X58]%，特異性為[X59]%。這表明Bmi-1與CEA、CA19-9聯(lián)合檢測(cè)能夠有效提高早期大腸癌的診斷準(zhǔn)確性，為患者的早期診斷和治療提供了更有力的支持。綜上所述，Bmi-1作為一種潛在的大腸癌診斷標(biāo)志物，具有較高的診斷效能，與傳統(tǒng)診斷指標(biāo)CEA、CA19-9聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，能夠顯著提高大腸癌的診斷準(zhǔn)確性，尤其是在早期診斷方面具有重要的應(yīng)用前景，有望為大腸癌的臨床診斷提供更全面、準(zhǔn)確的檢測(cè)手段。5.2Bmi-1與大腸癌預(yù)后的關(guān)系5.2.1生存分析結(jié)果采用Kaplan-Meier生存分析法對(duì)[X]例大腸癌患者的生存情況進(jìn)行了深入分析，以探究Bmi-1表達(dá)水平與患者生存率之間的關(guān)聯(lián)。根據(jù)Bmi-1蛋白表達(dá)水平的高低，將患者分為Bmi-1高表達(dá)組和Bmi-1低表達(dá)組。生存曲線結(jié)果顯示，Bmi-1高表達(dá)組患者的總體生存率顯著低于Bmi-1低表達(dá)組患者（圖4）。在隨訪時(shí)間為[X59]個(gè)月時(shí)，Bmi-1高表達(dá)組患者的生存率僅為[X60]%，而Bmi-1低表達(dá)組患者的生存率則達(dá)到了[X61]%，兩組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Log-rank檢驗(yàn)，P＜0.05）。這表明Bmi-1蛋白的高表達(dá)與大腸癌患者的不良預(yù)后密切相關(guān)，Bmi-1高表達(dá)的患者生存時(shí)間更短，生存風(fēng)險(xiǎn)更高。進(jìn)一步對(duì)不同TNM分期的患者進(jìn)行亞組分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在TNM分期為Ⅰ+Ⅱ期的患者中，Bmi-1高表達(dá)組患者的生存率同樣低于Bmi-1低表達(dá)組患者，在隨訪時(shí)間為[X59]個(gè)月時(shí)，Bmi-1高表達(dá)組患者的生存率為[X62]%，Bmi-1低表達(dá)組患者的生存率為[X63]%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Log-rank檢驗(yàn)，P＜0.05）。在TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期的患者中，Bmi-1高表達(dá)組患者的生存率明顯低于Bmi-1低表達(dá)組患者，在隨訪時(shí)間為[X59]個(gè)月時(shí)，Bmi-1高表達(dá)組患者的生存率僅為[X64]%，而Bmi-1低表達(dá)組患者的生存率為[X65]%，差異具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Log-rank檢驗(yàn)，P＜0.01）。這說明無論在早期還是晚期大腸癌患者中，Bmi-1的高表達(dá)均與患者的不良預(yù)后相關(guān)，且在晚期患者中這種相關(guān)性更為顯著。5.2.2影響預(yù)后的因素分析為了全面評(píng)估Bmi-1表達(dá)與大腸癌患者預(yù)后的關(guān)系，本研究進(jìn)一步分析了Bmi-1表達(dá)與其他可能影響預(yù)后的因素之間的關(guān)系。單因素分析結(jié)果顯示，Bmi-1表達(dá)、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均與大腸癌患者的預(yù)后密切相關(guān)（P＜0.05），而患者的年齡、性別、腫瘤部位和組織學(xué)類型與預(yù)后無明顯相關(guān)性（P＞0.05）。具體而言，Bmi-1高表達(dá)患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)是Bmi-1低表達(dá)患者的[X66]倍（HR=[X66]，95%CI：[X67]-[X68]）；TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)是Ⅰ+Ⅱ期患者的[X69]倍（HR=[X69]，95%CI：[X70]-[X71]）；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)是無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的[X72]倍（HR=[X72]，95%CI：[X73]-[X74]）；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)是無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的[X75]倍（HR=[X75]，95%CI：[X76]-[X77]）。將上述單因素分析中具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素納入多因素Cox回歸模型進(jìn)行進(jìn)一步分析，結(jié)果顯示，Bmi-1表達(dá)和TNM分期是大腸癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。Bmi-1高表達(dá)患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)是Bmi-1低表達(dá)患者的[X78]倍（HR=[X78]，95%CI：[X79]-[X80]），TNM分期為Ⅲ+Ⅳ期患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)是Ⅰ+Ⅱ期患者的[X81]倍（HR=[X81]，95%CI：[X82]-[X83]）。這表明在綜合考慮多種因素后，Bmi-1表達(dá)仍然是影響大腸癌患者預(yù)后的重要獨(dú)立因素，其高表達(dá)可顯著增加患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)患者的預(yù)后產(chǎn)生不良影響。綜上所述，Bmi-1表達(dá)與大腸癌患者的預(yù)后密切相關(guān)，Bmi-1高表達(dá)是大腸癌患者預(yù)后不良的重要標(biāo)志，且為獨(dú)立危險(xiǎn)因素。這一結(jié)果提示，Bmi-1在大腸癌的預(yù)后評(píng)估中具有重要價(jià)值，有望作為預(yù)測(cè)大腸癌患者預(yù)后的生物標(biāo)志物，為臨床制定個(gè)性化的治療方案和預(yù)后評(píng)估提供重要參考依據(jù)。六、基于Bmi-1的大腸癌治療策略6.1Bmi-1作為治療靶點(diǎn)的可行性Bmi-1在大腸癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，使其成為極具潛力的治療靶點(diǎn)。從作用機(jī)制來看，Bmi-1通過多種途徑促進(jìn)大腸癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。在細(xì)胞增殖方面，Bmi-1能夠上調(diào)細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，加速細(xì)胞周期進(jìn)程，同時(shí)抑制細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑（CKI）如p21Cip1和p27Kip1的表達(dá)，解除對(duì)細(xì)胞周期的抑制，從而促進(jìn)細(xì)胞增殖。在抑制細(xì)胞凋亡方面，Bmi-1通過抑制促凋亡基因Bax的表達(dá)，上調(diào)抗凋亡基因Bcl-2的表達(dá)，使細(xì)胞凋亡閾值升高，腫瘤細(xì)胞逃避凋亡機(jī)制，得以持續(xù)存活和增殖。Bmi-1還通過抑制INK4a/ARF基因座的表達(dá)，維持腫瘤干細(xì)胞的自我更新和增殖能力，導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。這些明確的作用機(jī)制為將Bmi-1作為治療靶點(diǎn)提供了堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。大量的實(shí)驗(yàn)研究也為Bmi-1作為治療靶點(diǎn)提供了有力的證據(jù)。在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，利用RNA干擾技術(shù)敲低大腸癌細(xì)胞中Bmi-1的表達(dá)，可顯著抑制細(xì)胞的增殖能力，使細(xì)胞周期阻滯于G1期，細(xì)胞凋亡率明顯增加。在體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，構(gòu)建攜帶Bmi-1基因沉默載體的裸鼠