分子檢驗(yàn)技術(shù)試題及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共30分）1.以下哪種技術(shù)不屬于分子檢驗(yàn)技術(shù)？（）A.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）B.酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）C.熒光原位雜交（FISH）D.二代測(cè)序技術(shù)（NGS）2.PCR反應(yīng)中，引物的作用是（）A.提供模板B.激活Taq酶C.引導(dǎo)DNA合成的起始D.穩(wěn)定反應(yīng)體系3.進(jìn)行核酸提取時(shí)，常用的裂解液成分不包括（）A.蛋白酶KB.十二烷基硫酸鈉（SDS）C.乙醇D.乙二胺四乙酸（EDTA）4.熒光定量PCR中，Ct值的含義是（）A.達(dá)到熒光閾值所需的循環(huán)數(shù)B.熒光強(qiáng)度達(dá)到最大值時(shí)的循環(huán)數(shù)C.反應(yīng)結(jié)束時(shí)的循環(huán)數(shù)D.熒光信號(hào)開(kāi)始出現(xiàn)時(shí)的循環(huán)數(shù)5.以下關(guān)于Southernblotting的描述，錯(cuò)誤的是（）A.用于檢測(cè)DNAB.需要將DNA進(jìn)行電泳分離C.探針是RNAD.可用于基因的限制性酶切圖譜分析6.二代測(cè)序技術(shù)的特點(diǎn)不包括（）A.高通量B.低成本C.長(zhǎng)讀長(zhǎng)D.可同時(shí)對(duì)大量樣本進(jìn)行測(cè)序7.基因芯片技術(shù)是基于（）原理。A.核酸分子雜交B.抗原抗體反應(yīng)C.酶促反應(yīng)D.蛋白質(zhì)相互作用8.在DNA測(cè)序中，Sanger法使用的關(guān)鍵試劑是（）A.雙脫氧核苷酸（ddNTP）B.脫氧核苷酸（dNTP）C.Taq酶D.引物9.檢測(cè)微小殘留病時(shí)，常用的分子檢驗(yàn)技術(shù)是（）A.流式細(xì)胞術(shù)B.熒光定量PCRC.蛋白質(zhì)印跡法D.免疫組化10.以下哪種因素不會(huì)影響PCR反應(yīng)的特異性？（）A.引物的設(shè)計(jì)B.模板的質(zhì)量C.循環(huán)次數(shù)D.Taq酶的濃度11.核酸分子雜交中，雜交的溫度一般取決于（）A.探針的長(zhǎng)度B.探針的GC含量C.雜交液的離子強(qiáng)度D.以上都是12.蛋白質(zhì)印跡法中，轉(zhuǎn)膜的目的是（）A.將蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上B.使蛋白質(zhì)變性C.固定蛋白質(zhì)D.增加蛋白質(zhì)的抗原性13.進(jìn)行線(xiàn)粒體DNA檢測(cè)時(shí)，以下哪種樣本不適合？（）A.血液B.肌肉組織C.毛發(fā)D.糞便14.實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，常用的熒光染料是（）A.溴化乙錠（EB）B.SYBRGreenIC.異硫氰酸熒光素（FITC）D.羅丹明15.以下關(guān)于SNP檢測(cè)的描述，正確的是（）A.SNP是指基因序列中單個(gè)堿基的變異B.只能通過(guò)測(cè)序技術(shù)檢測(cè)SNPC.SNP檢測(cè)與疾病診斷無(wú)關(guān)D.SNP檢測(cè)不需要引物二、多項(xiàng)選擇題（每題3分，共15分）1.分子檢驗(yàn)技術(shù)在臨床診斷中的應(yīng)用包括（）A.感染性疾病的診斷B.遺傳性疾病的診斷C.腫瘤的診斷與預(yù)后評(píng)估D.藥物基因組學(xué)檢測(cè)2.以下屬于核酸提取方法的有（）A.酚氯仿抽提法B.硅膠膜吸附法C.磁珠法D.密度梯度離心法3.熒光定量PCR的定量方法有（）A.絕對(duì)定量B.相對(duì)定量C.終點(diǎn)定量D.實(shí)時(shí)定量4.基因編輯技術(shù)包括（）A.CRISPR/Cas9B.TALENsC.ZFNsD.RNAi5.蛋白質(zhì)組學(xué)研究中常用的技術(shù)有（）A.雙向電泳B.質(zhì)譜技術(shù)C.蛋白質(zhì)芯片技術(shù)D.免疫沉淀技術(shù)三、判斷題（每題2分，共10分）1.PCR反應(yīng)中，退火溫度越高，引物與模板的結(jié)合越穩(wěn)定。（）2.核酸分子雜交只能在DNA與DNA之間進(jìn)行。（）3.二代測(cè)序技術(shù)可以對(duì)整個(gè)基因組進(jìn)行測(cè)序。（）4.蛋白質(zhì)印跡法中，一抗是針對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)的特異性抗體。（）5.檢測(cè)病毒核酸時(shí)，不需要對(duì)樣本進(jìn)行預(yù)處理。（）四、簡(jiǎn)答題（每題10分，共30分）1.簡(jiǎn)述PCR反應(yīng)的基本原理和主要步驟。2.比較一代測(cè)序技術(shù)（Sanger法）和二代測(cè)序技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)。3.請(qǐng)說(shuō)明分子檢驗(yàn)技術(shù)在腫瘤精準(zhǔn)治療中的應(yīng)用。五、論述題（15分）結(jié)合實(shí)際案例，論述分子檢驗(yàn)技術(shù)在感染性疾病診斷中的應(yīng)用及優(yōu)勢(shì)。答案一、單項(xiàng)選擇題1.B。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）是基于抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，不屬于分子檢驗(yàn)技術(shù)。2.C。引物能與模板DNA特定區(qū)域結(jié)合，引導(dǎo)DNA聚合酶在引物的3'端開(kāi)始合成新的DNA鏈。3.C。乙醇常用于核酸的沉淀，而不是裂解液成分。4.A。Ct值即達(dá)到熒光閾值所需的循環(huán)數(shù)，可用于定量分析。5.C。Southernblotting中探針可以是DNA或RNA。6.C。二代測(cè)序技術(shù)讀長(zhǎng)較短。7.A?；蛐酒夹g(shù)是基于核酸分子雜交原理。8.A。Sanger法使用雙脫氧核苷酸（ddNTP）來(lái)終止DNA鏈的延伸。9.B。熒光定量PCR靈敏度高，常用于檢測(cè)微小殘留病。10.D。Taq酶的濃度主要影響反應(yīng)速度，對(duì)特異性影響較小。11.D。雜交溫度取決于探針長(zhǎng)度、GC含量和雜交液離子強(qiáng)度等因素。12.A。轉(zhuǎn)膜是將蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上，以便后續(xù)的免疫檢測(cè)。13.D。糞便中主要是腸道細(xì)菌等物質(zhì)，線(xiàn)粒體DNA含量極少，不適合用于線(xiàn)粒體DNA檢測(cè)。14.B。SYBRGreenI是實(shí)時(shí)熒光定量PCR常用的熒光染料。15.A。SNP是指基因序列中單個(gè)堿基的變異；檢測(cè)方法有多種，不只是測(cè)序；與疾病診斷密切相關(guān)；檢測(cè)需要引物。二、多項(xiàng)選擇題1.ABCD。分子檢驗(yàn)技術(shù)在感染性疾病、遺傳性疾病、腫瘤診斷與預(yù)后評(píng)估以及藥物基因組學(xué)檢測(cè)等方面都有應(yīng)用。2.ABC。酚氯仿抽提法、硅膠膜吸附法和磁珠法都是常見(jiàn)的核酸提取方法，密度梯度離心法一般用于分離不同密度的生物大分子或細(xì)胞等，不是核酸提取的常規(guī)方法。3.AB。熒光定量PCR的定量方法有絕對(duì)定量和相對(duì)定量。4.ABC。CRISPR/Cas9、TALENs和ZFNs都屬于基因編輯技術(shù)，RNAi是RNA干擾技術(shù)，用于基因表達(dá)的調(diào)控。5.ABC。雙向電泳、質(zhì)譜技術(shù)和蛋白質(zhì)芯片技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究常用技術(shù)，免疫沉淀技術(shù)主要用于研究蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)相互作用。三、判斷題1.×。退火溫度過(guò)高，引物與模板結(jié)合不穩(wěn)定；退火溫度過(guò)低，會(huì)導(dǎo)致引物非特異性結(jié)合。2.×。核酸分子雜交可以在DNADNA、DNARNA、RNARNA之間進(jìn)行。3.√。二代測(cè)序技術(shù)可以對(duì)整個(gè)基因組進(jìn)行高通量測(cè)序。4.√。蛋白質(zhì)印跡法中，一抗是針對(duì)目標(biāo)蛋白質(zhì)的特異性抗體。5.×。檢測(cè)病毒核酸時(shí)，需要對(duì)樣本進(jìn)行預(yù)處理，如裂解、提取核酸等。四、簡(jiǎn)答題1.基本原理：PCR是一種體外酶促合成特異DNA片段的方法，其原理類(lèi)似于DNA的體內(nèi)復(fù)制過(guò)程。以擬擴(kuò)增的DNA分子為模板，以一對(duì)分別與模板5'端和3'端互補(bǔ)的寡核苷酸片段為引物，在DNA聚合酶的作用下，按照半保留復(fù)制的機(jī)制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成。主要步驟：變性：將反應(yīng)體系加熱至9495℃，使模板DNA雙鏈解離成單鏈。退火：將溫度降至引物的退火溫度（一般5065℃），引物與模板DNA互補(bǔ)序列結(jié)合。延伸：將溫度升至72℃，在DNA聚合酶的作用下，以dNTP為原料，從引物的3'端開(kāi)始合成新的DNA鏈。重復(fù)變性、退火、延伸三個(gè)步驟，使DNA片段呈指數(shù)級(jí)擴(kuò)增。2.一代測(cè)序技術(shù)（Sanger法）優(yōu)點(diǎn)：測(cè)序準(zhǔn)確性高，是目前測(cè)序準(zhǔn)確性的金標(biāo)準(zhǔn)。技術(shù)成熟，操作相對(duì)簡(jiǎn)單。讀長(zhǎng)較長(zhǎng)，可達(dá)8001000bp。一代測(cè)序技術(shù)（Sanger法）缺點(diǎn)：通量低，一次只能對(duì)一個(gè)樣本進(jìn)行測(cè)序。成本較高，尤其是大規(guī)模測(cè)序時(shí)。自動(dòng)化程度相對(duì)較低。二代測(cè)序技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：高通量，可以同時(shí)對(duì)大量樣本進(jìn)行測(cè)序。成本低，適合大規(guī)模基因組測(cè)序。自動(dòng)化程度高，操作相對(duì)簡(jiǎn)便。二代測(cè)序技術(shù)缺點(diǎn)：讀長(zhǎng)較短，一般在幾百bp以?xún)?nèi)。測(cè)序誤差相對(duì)較高，尤其是在同聚物區(qū)域。3.分子檢驗(yàn)技術(shù)在腫瘤精準(zhǔn)治療中的應(yīng)用：腫瘤的早期診斷：通過(guò)檢測(cè)腫瘤相關(guān)基因的突變、甲基化等異常，實(shí)現(xiàn)腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)。例如檢測(cè)肺癌患者血液中游離的EGFR基因突變，有助于早期診斷和篩查。預(yù)后評(píng)估：分析腫瘤組織中的某些基因表達(dá)水平或基因突變狀態(tài)，可預(yù)測(cè)患者的預(yù)后。如乳腺癌患者的HER2基因擴(kuò)增情況與預(yù)后相關(guān)。指導(dǎo)靶向治療：檢測(cè)腫瘤患者的特定基因突變，為靶向藥物的選擇提供依據(jù)。例如，對(duì)于攜帶BRAF基因突變的黑色素瘤患者，可使用針對(duì)BRAF基因的靶向藥物。監(jiān)測(cè)治療效果和復(fù)發(fā)：通過(guò)定期檢測(cè)患者血液中的循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）等分子標(biāo)志物，監(jiān)測(cè)治療效果和腫瘤是否復(fù)發(fā)。五、論述題應(yīng)用案例：以新冠病毒（SARSCoV2）感染為例，分子檢驗(yàn)技術(shù)在其診斷中發(fā)揮了關(guān)鍵作用。應(yīng)用：核酸檢測(cè)：采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)患者呼吸道樣本（如咽拭子、鼻拭子等）中的新冠病毒核酸。其原理是提取樣本中的病毒RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后通過(guò)PCR擴(kuò)增特定的病毒基因片段，同時(shí)利用熒光染料或探針實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過(guò)程。基因測(cè)序：對(duì)新冠病毒進(jìn)行全基因組測(cè)序，有助于了解病毒的變異情況，追蹤病毒的傳播路徑和進(jìn)化趨勢(shì)。例如在疫情早期，通過(guò)對(duì)病毒的測(cè)序，確定了病毒的來(lái)源和傳播特點(diǎn)。優(yōu)勢(shì)：高靈敏度：能夠檢測(cè)到極少量的病毒核酸，在感染早期就能檢測(cè)出病毒，有助于及時(shí)發(fā)現(xiàn)感染者，控制