Nlp與BRCA1在人食管鱗癌中的表達、關(guān)聯(lián)及臨床意義探究一、引言1.1研究背景與意義食管鱗癌（EsophagealSquamousCellCarcinoma，ESCC）是一種常見且預后較差的侵襲性腫瘤，在全球范圍內(nèi)，食管癌是導致癌癥相關(guān)死亡的重要原因之一，而食管鱗癌在中國及其他一些亞洲國家尤為常見，占據(jù)食管癌的主要病理類型。據(jù)相關(guān)統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，中國是全球食管癌發(fā)病率和死亡率最高的國家之一，在食管癌的分型中，食管鱗癌占比超過80%。由于早期癥狀隱匿，許多患者確診時已處于局部晚期，傳統(tǒng)治療手段面臨“療效不足”和“副作用過大”的雙重挑戰(zhàn)。晚期食管鱗癌患者5年生存率較低，嚴重威脅著人類的生命健康。復發(fā)和轉(zhuǎn)移是導致食管鱗癌患者死亡和不良預后的主要原因，深入探究食管鱗癌的發(fā)病機制、尋找有效的診斷標志物和治療靶點迫在眉睫。Nlp（ninein-likeprotein/Ninein樣蛋白）作為與BRCA1相關(guān)的中心體蛋白，在細胞的有絲分裂等過程中發(fā)揮著重要作用。Nlp在多種類型的腫瘤中存在表達失調(diào)現(xiàn)象，多項前期研究結(jié)果提示，Nlp是一個潛在的癌基因。BRCA1（BreastCancerSusceptibilityGene1）即乳腺癌易感基因1，是一種重要的腫瘤抑制基因，其功能失調(diào)不僅與遺傳性乳腺癌和卵巢癌密切相關(guān)，近年來的研究表明，BRCA1基因功能性遺傳突變也可能與食管鱗癌的發(fā)病風險有關(guān)。一些研究指出，BRCA1基因突變與食管鱗癌的生存率和復發(fā)率存在關(guān)聯(lián)，在BRCA1突變的食管鱗癌患者中，復發(fā)率和死亡率明顯高于沒有BRCA1突變的患者。然而，關(guān)于Nlp和BRCA1在食管鱗癌中的具體表達情況、相互關(guān)系以及它們對食管鱗癌臨床病理特征和預后的影響，仍存在許多未知之處。本研究旨在檢測Nlp和BRCA1在人食管鱗癌組織中的表達情況，分析其與食管鱗癌患者臨床病理特征及預后的關(guān)系，探討它們在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制。這對于深入了解食管鱗癌的發(fā)病機制，尋找新的診斷標志物和治療靶點具有重要的理論意義；同時，也有助于臨床醫(yī)生更準確地評估患者的預后，制定個性化的治療方案，提高食管鱗癌的診療水平，改善患者的生存質(zhì)量和預后，具有重要的臨床應用價值。1.2國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在食管鱗癌的研究領域，Nlp和BRCA1逐漸成為備受關(guān)注的研究對象。國外方面，對Nlp的研究起步較早，一些研究聚焦于Nlp在細胞有絲分裂中的基礎作用機制，發(fā)現(xiàn)Nlp在維持中心體的結(jié)構(gòu)與功能穩(wěn)定方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用，通過參與微管的成核與錨定過程，保障細胞分裂的正常進行。在腫瘤研究范疇，有學者觀察到在部分乳腺癌、卵巢癌等腫瘤細胞系中，Nlp表達異常升高，且與腫瘤細胞的增殖、遷移能力增強相關(guān)。例如，在對卵巢癌細胞系的研究中，通過基因敲低Nlp后，發(fā)現(xiàn)細胞的遷移和侵襲能力明顯減弱，細胞周期也出現(xiàn)異常阻滯。但針對Nlp在食管鱗癌中的研究相對較少，僅有的少量研究初步揭示了Nlp在食管鱗癌細胞中存在高表達現(xiàn)象，然而對于其表達變化如何具體影響食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程，以及與其他腫瘤相關(guān)信號通路的交互作用等方面，仍有待深入探索。對于BRCA1，國外在乳腺癌和卵巢癌中的研究已經(jīng)較為深入，明確了BRCA1作為腫瘤抑制基因，通過參與DNA損傷修復、細胞周期調(diào)控以及轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)等過程，發(fā)揮著抑制腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用。在食管鱗癌的研究中，有研究報道了BRCA1基因突變與食管鱗癌發(fā)病風險之間存在一定關(guān)聯(lián)。一項針對歐洲人群的多中心研究，通過對大量食管鱗癌患者和健康對照人群的基因測序分析，發(fā)現(xiàn)BRCA1基因的某些特定突變位點在食管鱗癌患者中的出現(xiàn)頻率顯著高于健康人群，提示這些突變可能增加食管鱗癌的發(fā)病風險。不過，關(guān)于BRCA1基因表達水平在食管鱗癌組織中的變化情況，以及其蛋白表達與食管鱗癌臨床病理特征和預后的關(guān)系，研究結(jié)果尚未達成一致，不同研究之間存在一定差異。國內(nèi)在食管鱗癌相關(guān)研究中對Nlp和BRCA1也予以了關(guān)注。有研究采用免疫組織化學方法聯(lián)合組織微陣列技術(shù)，檢測了食管鱗癌組織及癌旁正常組織中Nlp的表達，結(jié)果顯示Nlp在食管鱗癌組織中的表達陽性率明顯高于癌旁正常組織，且其高表達與食管鱗癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期密切相關(guān)，提示Nlp可能在食管鱗癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。在BRCA1的研究上，國內(nèi)有團隊針對中國人群開展了相關(guān)研究，發(fā)現(xiàn)BRCA1基因功能性遺傳突變在中國人群食管鱗癌患者中的頻率相對較高，且突變患者的復發(fā)率和死亡率明顯高于無突變患者。此外，還有研究分析了BRCA1蛋白在食管鱗癌組織中的表達與臨床病理特征的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)BRCA1蛋白的表達與食管鱗癌的大體類型和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者組織中BRCA1蛋白的強陽性表達率更高。盡管國內(nèi)外在Nlp和BRCA1與食管鱗癌的研究上取得了一定成果，但仍存在諸多不足。一方面，目前對于Nlp和BRCA1在食管鱗癌中的相互作用機制研究幾乎處于空白狀態(tài)，二者是否通過某種信號通路相互影響，進而共同調(diào)控食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程尚不明確；另一方面，現(xiàn)有的研究多為單中心、小樣本研究，研究結(jié)果的普適性和可靠性有待進一步驗證，亟需開展大規(guī)模、多中心的臨床研究，以更全面、準確地揭示Nlp和BRCA1在食管鱗癌中的表達規(guī)律、功能作用以及臨床意義，為食管鱗癌的精準診療提供更堅實的理論依據(jù)和實踐指導。1.3研究目的與創(chuàng)新點本研究旨在通過全面且深入的實驗與分析，系統(tǒng)地檢測Nlp和BRCA1在人食管鱗癌組織中的表達情況，深入剖析二者表達水平與食管鱗癌患者臨床病理特征（如腫瘤的大小、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、組織學分級等）之間的內(nèi)在聯(lián)系，并運用生存分析等統(tǒng)計學方法，明確Nlp和BRCA1表達對食管鱗癌患者預后（包括總生存期、無病生存期等指標）的影響。在此基礎上，進一步探討Nlp和BRCA1在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展進程中的潛在作用機制，為食管鱗癌的早期診斷、精準治療以及預后評估提供堅實的理論依據(jù)和全新的研究思路。本研究的創(chuàng)新點主要體現(xiàn)在以下兩個方面：一是多維度聯(lián)合分析。不同于以往針對食管鱗癌單一基因或蛋白的研究模式，本研究將Nlp和BRCA1這兩個在腫瘤發(fā)生發(fā)展中具有重要作用但研究相對獨立的分子相結(jié)合，從基因水平、蛋白水平以及臨床病理特征等多個維度進行聯(lián)合分析，全面探究它們在食管鱗癌中的相互關(guān)系和協(xié)同作用機制，有望為食管鱗癌的發(fā)病機制研究開辟新的視角。二是探索新治療靶點。鑒于目前食管鱗癌治療手段存在的局限性，尋找新的有效治療靶點迫在眉睫。通過深入研究Nlp和BRCA1在食管鱗癌中的功能和作用機制，有可能發(fā)現(xiàn)新的治療靶點，為研發(fā)針對食管鱗癌的靶向治療藥物或治療策略提供潛在的方向，這將有助于推動食管鱗癌治療領域的創(chuàng)新發(fā)展，提高患者的治療效果和生存質(zhì)量。二、相關(guān)理論基礎2.1食管鱗癌概述食管鱗癌是一種原發(fā)于食管黏膜上皮的惡性腫瘤，是食管癌中最為常見的病理類型，在全球范圍內(nèi)具有較高的發(fā)病率和死亡率，嚴重威脅人類健康。從流行病學角度來看，食管鱗癌的分布呈現(xiàn)出顯著的地區(qū)差異。中國、伊朗、南非、中亞等地區(qū)是食管鱗癌的高發(fā)區(qū)域。其中，中國作為食管癌高發(fā)大國，食管鱗癌的發(fā)病率和死亡率尤為突出。例如，中國河南林縣、河北磁縣等地，長期以來都是食管鱗癌的高發(fā)地區(qū)，這些地區(qū)的發(fā)病率遠遠高于全國平均水平。據(jù)統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，全球每年新增食管鱗癌病例數(shù)眾多，而中國新發(fā)病例數(shù)約占全球的一半以上。在性別方面，男性患食管鱗癌的比例通常高于女性，男女發(fā)病比例約為1.3-3:1。發(fā)病年齡也具有一定特點，多集中在中老年人群，我國80%的食管鱗癌患者發(fā)病年齡在50歲以后，且高發(fā)地區(qū)人群發(fā)病和死亡年齡相較于低發(fā)地區(qū)往往提前十年左右。食管鱗癌的發(fā)病機制是一個復雜且尚未完全明確的過程，涉及多種因素的相互作用。飲食習慣被認為是重要的致病因素之一，長期食用過熱、過硬、粗糙的食物，以及過多攝入腌制、霉變、含亞硝胺類化合物的食物，都可能對食管黏膜造成持續(xù)性刺激和損傷，增加食管鱗癌的發(fā)病風險。例如，腌制食品中含有的亞硝酸鹽，在一定條件下可轉(zhuǎn)化為亞硝胺，而亞硝胺是一種強致癌物質(zhì)，與食管鱗癌的發(fā)生密切相關(guān)。吸煙和酗酒也是不可忽視的危險因素，煙草中的尼古丁、焦油等有害物質(zhì)以及酒精的刺激，會破壞食管黏膜的正常生理功能，促進腫瘤的發(fā)生發(fā)展。此外，某些病毒感染，如人乳頭瘤病毒（HPV）感染，可能與食管鱗癌的發(fā)病存在關(guān)聯(lián)，盡管具體機制尚不完全清楚，但已有研究表明，HPV感染可能通過影響細胞周期調(diào)控、免疫逃逸等途徑參與食管鱗癌的發(fā)生。遺傳因素在食管鱗癌的發(fā)病中也起到一定作用，家族遺傳易感性使得部分人群攜帶有特定的基因突變或多態(tài)性，從而增加了患癌風險。在治療現(xiàn)狀方面，目前食管鱗癌的治療手段主要包括手術(shù)治療、放射治療、化學治療以及近年來逐漸興起的免疫治療和靶向治療等。手術(shù)治療是早期食管鱗癌的主要治療方法，對于病變局限、無遠處轉(zhuǎn)移的患者，根治性手術(shù)切除有望實現(xiàn)治愈。然而，由于食管鱗癌早期癥狀隱匿，多數(shù)患者確診時已處于中晚期，失去了手術(shù)根治的機會。放射治療可用于不能手術(shù)或拒絕手術(shù)的患者，通過高能射線殺死腫瘤細胞，但其對正常組織也會產(chǎn)生一定的副作用，且局部復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移仍是影響放療效果的主要問題?；瘜W治療多采用聯(lián)合化療方案，通過使用多種化療藥物抑制腫瘤細胞的增殖，但化療藥物的不良反應較大，如骨髓抑制、胃腸道反應、肝腎功能損害等，嚴重影響患者的生活質(zhì)量和治療依從性。免疫治療和靶向治療為食管鱗癌的治療帶來了新的希望，免疫檢查點抑制劑通過激活機體自身的免疫系統(tǒng)來攻擊腫瘤細胞，部分患者可獲得較好的療效和生存獲益；靶向治療則針對腫瘤細胞的特定分子靶點，具有特異性強、副作用相對較小的優(yōu)點，但目前適用人群有限，且存在耐藥等問題。總體而言，盡管食管鱗癌的治療取得了一定進展，但晚期患者的預后仍然較差，5年生存率較低，亟需尋找新的治療靶點和更有效的治療策略，以改善患者的生存狀況。2.2Nlp相關(guān)理論Nlp（ninein-likeprotein/Ninein樣蛋白），作為一種在細胞生理活動中扮演關(guān)鍵角色的蛋白質(zhì)，其結(jié)構(gòu)與功能的深入探究對于理解細胞的正常生理過程以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展機制具有重要意義。從結(jié)構(gòu)角度來看，Nlp蛋白具有獨特的結(jié)構(gòu)域組成。其包含多個特定的功能結(jié)構(gòu)域，例如N端的卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域，這一結(jié)構(gòu)域?qū)τ贜lp與其他蛋白質(zhì)之間的相互作用至關(guān)重要，通過卷曲螺旋結(jié)構(gòu)的相互纏繞，Nlp能夠與多種細胞內(nèi)的關(guān)鍵蛋白形成穩(wěn)定的復合物，從而參與到不同的細胞生理過程中。在C端，Nlp存在著微管結(jié)合結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域賦予了Nlp與微管特異性結(jié)合的能力，是Nlp參與微管相關(guān)細胞活動的結(jié)構(gòu)基礎。此外，Nlp還含有一些磷酸化位點，這些位點的磷酸化修飾可以調(diào)節(jié)Nlp的活性和功能，使得Nlp在細胞內(nèi)的功能調(diào)控更加精細和復雜。在細胞的生理活動中，Nlp發(fā)揮著多方面不可或缺的作用。在細胞有絲分裂過程中，Nlp起著關(guān)鍵的調(diào)控作用。有絲分裂是細胞增殖的重要過程，確保遺傳物質(zhì)準確無誤地分配到子代細胞中。Nlp定位于中心體，中心體作為細胞有絲分裂的重要細胞器，負責組織和形成紡錘體。Nlp通過其微管結(jié)合結(jié)構(gòu)域與微管相互作用，參與微管的成核與錨定過程。在微管成核階段，Nlp能夠招募相關(guān)的微管成核蛋白，促進微管的起始組裝；在微管錨定過程中，Nlp幫助將微管穩(wěn)定地錨定在中心體上，維持紡錘體的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，保障染色體在有絲分裂過程中的正確分離和移動，確保細胞分裂的正常進行。研究表明，在有絲分裂前期，Nlp在中心體周圍大量聚集，與微管蛋白共同作用，促進紡錘體微管的快速組裝；在有絲分裂中期，Nlp維持紡錘體微管的穩(wěn)定排列，保證染色體能夠整齊地排列在赤道板上；而在有絲分裂后期，Nlp參與調(diào)節(jié)微管的動態(tài)變化，協(xié)助姐妹染色單體的分離和向兩極移動。除了在有絲分裂中的作用，Nlp還參與細胞的遷移過程。細胞遷移是一個復雜的生理過程，涉及細胞形態(tài)的改變、細胞與細胞外基質(zhì)的相互作用以及細胞骨架的動態(tài)重組等多個環(huán)節(jié)。Nlp通過調(diào)節(jié)微管的穩(wěn)定性和方向性，影響細胞遷移過程中偽足的形成和延伸。在細胞遷移時，Nlp能夠在遷移前沿富集，與微管相互作用，促進微管向遷移方向的延伸，為偽足的伸展提供結(jié)構(gòu)支撐，從而推動細胞向前遷移。在神經(jīng)細胞的遷移過程中，Nlp的表達和功能異常會導致神經(jīng)細胞遷移受阻，影響神經(jīng)系統(tǒng)的正常發(fā)育。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中，Nlp被認為具有潛在的致癌作用。越來越多的研究證據(jù)表明，Nlp在多種腫瘤組織和細胞系中呈現(xiàn)異常高表達狀態(tài)。在乳腺癌細胞系中，Nlp的表達水平明顯高于正常乳腺組織，且其高表達與乳腺癌細胞的增殖、遷移和侵襲能力增強密切相關(guān)。進一步的機制研究發(fā)現(xiàn)，Nlp高表達可能通過激活某些腫瘤相關(guān)信號通路來促進腫瘤的發(fā)展。Nlp可能與Ras-MAPK信號通路相互作用，激活該信號通路，導致細胞增殖相關(guān)基因的表達上調(diào)，促進腫瘤細胞的增殖。Nlp還可能通過影響上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程來增強腫瘤細胞的遷移和侵襲能力。在EMT過程中，上皮細胞失去極性和細胞間連接，獲得間質(zhì)細胞的特性，從而具有更強的遷移和侵襲能力。Nlp通過調(diào)節(jié)相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子和信號通路，促進EMT相關(guān)蛋白的表達變化，使得腫瘤細胞更容易發(fā)生遷移和侵襲，增加腫瘤轉(zhuǎn)移的風險。在肺癌的研究中，敲低Nlp的表達可以顯著抑制肺癌細胞的遷移和侵襲能力，同時逆轉(zhuǎn)EMT相關(guān)蛋白的表達變化，進一步證實了Nlp在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中的重要作用。2.3BRCA1相關(guān)理論BRCA1（BreastCancerSusceptibilityGene1），即乳腺癌易感基因1，是一種在人體細胞生理過程和腫瘤發(fā)生發(fā)展機制中占據(jù)關(guān)鍵地位的基因，對其深入探究對于理解腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及腫瘤防治具有至關(guān)重要的意義。從基因結(jié)構(gòu)來看，BRCA1基因定位于人類染色體17q21區(qū)域，基因全長約100kb，其結(jié)構(gòu)較為復雜，包含24個外顯子。其中，第11外顯子長度較大，約3.4kb，占整個編碼區(qū)的61%，這一外顯子編碼的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域在BRCA1的功能實現(xiàn)中發(fā)揮著重要作用。BRCA1基因編碼的蛋白質(zhì)由1863個氨基酸組成，該蛋白質(zhì)具有多個重要的結(jié)構(gòu)域。在N端存在環(huán)指結(jié)構(gòu)域（Ringdomain），這一結(jié)構(gòu)域能夠與BRCA1相關(guān)環(huán)指蛋白（BARD1）相互作用，形成環(huán)-環(huán)異二聚體。這種異二聚體作為一種泛素連接酶，具有較高的活性，在蛋白質(zhì)泛素化修飾過程中發(fā)揮重要作用，而蛋白質(zhì)泛素化修飾對于細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的降解、定位以及信號傳導等過程具有關(guān)鍵的調(diào)控作用。在BRCA1蛋白的C端，存在BRCT結(jié)構(gòu)域（BRCA1C-terminaldomain），該結(jié)構(gòu)域含有多個磷酸化位點，能夠與多種參與DNA損傷修復和細胞周期調(diào)控的蛋白質(zhì)相互作用，如RAD51、ATM等，通過這些相互作用，BRCA1參與到DNA損傷修復、細胞周期檢查點調(diào)控等重要細胞生理過程中。BRCA1在細胞生理活動中扮演著多重關(guān)鍵角色。在DNA損傷修復過程中，BRCA1發(fā)揮著核心作用。當細胞受到各種內(nèi)源性或外源性因素（如紫外線、電離輻射、化學誘變劑等）導致DNA雙鏈斷裂（DSB）時，BRCA1能夠迅速被招募到DNA損傷位點。它首先通過與BARD1形成異二聚體，增強其穩(wěn)定性和活性，然后與其他DNA損傷修復蛋白（如RAD51、BRCA2等）相互作用，形成DNA損傷修復復合物。在同源重組修復（HR）途徑中，BRCA1參與DNA末端切除、單鏈DNA形成以及RAD51核蛋白絲組裝等關(guān)鍵步驟。BRCA1通過其BRCT結(jié)構(gòu)域與相關(guān)蛋白相互作用，促進DNA末端切除，產(chǎn)生3'端單鏈DNA，為RAD51的結(jié)合提供底物。隨后，BRCA1協(xié)助RAD51在單鏈DNA上組裝形成核蛋白絲，介導同源重組過程，實現(xiàn)DNA雙鏈斷裂的準確修復，從而維持基因組的穩(wěn)定性。研究表明，在BRCA1缺陷的細胞中，DNA雙鏈斷裂修復能力顯著下降，導致基因組不穩(wěn)定，容易發(fā)生基因突變和染色體異常，進而增加腫瘤發(fā)生的風險。在細胞周期調(diào)控方面，BRCA1也起著重要的調(diào)節(jié)作用。細胞周期的正常進行對于細胞的增殖和分化至關(guān)重要，而BRCA1參與了細胞周期多個關(guān)鍵檢查點的調(diào)控。在G1/S期檢查點，當細胞DNA受到損傷時，BRCA1能夠與ATM等蛋白相互作用，激活細胞周期檢查點信號通路。ATM磷酸化BRCA1，使其與其他相關(guān)蛋白結(jié)合，抑制細胞周期從G1期進入S期，從而為DNA損傷修復提供足夠的時間。如果DNA損傷無法修復，BRCA1會進一步誘導細胞發(fā)生凋亡，以避免攜帶錯誤遺傳信息的細胞進入增殖周期。在G2/M期檢查點，BRCA1同樣參與了細胞周期進程的調(diào)控，確保細胞在DNA復制完成且無損傷的情況下順利進入有絲分裂期。通過對細胞周期的精確調(diào)控，BRCA1維持了細胞增殖的有序性和遺傳物質(zhì)傳遞的準確性。在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中，BRCA1作為一種重要的腫瘤抑制基因，其功能失調(diào)與多種腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。當BRCA1基因發(fā)生突變或表達異常時，其正常的腫瘤抑制功能受到破壞。BRCA1基因突變可導致其編碼的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能異常，無法正常參與DNA損傷修復和細胞周期調(diào)控過程。在遺傳性乳腺癌和卵巢癌中，BRCA1基因突變是重要的致病因素。攜帶BRCA1基因突變的個體，由于DNA損傷修復能力缺陷，細胞基因組不穩(wěn)定性增加，使得乳腺和卵巢細胞更容易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，從而顯著增加患乳腺癌和卵巢癌的風險。在食管鱗癌的研究中，也發(fā)現(xiàn)BRCA1基因突變與食管鱗癌的發(fā)病風險存在關(guān)聯(lián)。一些研究指出，BRCA1基因的某些突變類型可能影響食管鱗癌細胞的生物學行為，促進腫瘤細胞的增殖、遷移和侵襲能力。此外，BRCA1表達水平的改變也可能在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用。在部分食管鱗癌組織中，BRCA1蛋白表達下調(diào)，導致其對腫瘤細胞的抑制作用減弱，無法有效阻止腫瘤細胞的異常增殖和轉(zhuǎn)移，進而推動食管鱗癌的進展。三、Nlp與BRCA1在人食管鱗癌中的表達研究3.1實驗設計3.1.1實驗材料本實驗所需的食管鱗癌組織標本和正常食管組織標本均來自[醫(yī)院名稱]胸外科20XX年1月至20XX年12月期間收治的食管癌患者，所有患者術(shù)前均未接受過放療、化療或其他抗腫瘤治療，并簽署了知情同意書。共收集食管鱗癌組織標本[X]例，同時選取距離癌組織邊緣5cm以上的正常食管組織標本作為對照，共計[X]例。所有標本均在手術(shù)切除后立即置于液氮中速凍，隨后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩嶒炈璧闹饕噭┌ǎ和每谷薔lp多克隆抗體、兔抗人BRCA1多克隆抗體（均購自[抗體公司名稱]），二抗為山羊抗兔IgG-HRP（購自[二抗公司名稱]）。免疫組織化學檢測試劑盒（如EnVision試劑盒，購自[試劑盒公司名稱]）、DAB顯色試劑盒（購自[顯色劑公司名稱]）。蛋白提取試劑RIPA裂解液（含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，購自[試劑公司名稱]），BCA蛋白定量試劑盒（購自[定量試劑盒公司名稱]）。實時熒光定量PCR所需的RNA提取試劑盒（如TRIzol試劑，購自[RNA提取試劑盒公司名稱]）、反轉(zhuǎn)錄試劑盒（如PrimeScriptRTreagentKit，購自[反轉(zhuǎn)錄試劑盒公司名稱]）、SYBRGreen熒光定量PCR試劑盒（購自[熒光定量試劑盒公司名稱]）。此外，還需準備蘇木精、伊紅等染色試劑用于常規(guī)病理染色。主要實驗儀器有：石蠟切片機（型號[切片機型號]，購自[切片機公司名稱]）、冷凍切片機（型號[冷凍切片機型號]，購自[冷凍切片機公司名稱]）、光學顯微鏡（型號[顯微鏡型號]，購自[顯微鏡公司名稱]），可用于觀察組織切片的形態(tài)和免疫組化染色結(jié)果；高速冷凍離心機（型號[離心機型號]，購自[離心機公司名稱]），用于細胞和組織的離心分離；酶標儀（型號[酶標儀型號]，購自[酶標儀公司名稱]），可用于BCA蛋白定量和ELISA檢測；實時熒光定量PCR儀（型號[PCR儀型號]，購自[PCR儀公司名稱]），用于檢測基因表達水平；凝膠成像系統(tǒng)（型號[成像系統(tǒng)型號]，購自[成像系統(tǒng)公司名稱]），用于檢測蛋白表達水平。3.1.2實驗方法免疫組織化學（IHC）檢測：免疫組織化學檢測是基于抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學反應使標記的顯色劑顯色，從而對組織細胞內(nèi)的抗原進行定位、定性與定量分析。首先將食管鱗癌組織和正常食管組織標本進行石蠟包埋，制成4μm厚的連續(xù)切片，然后將切片依次進行脫蠟、水化處理。使用檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）通過微波修復法進行抗原修復，以暴露被甲醛固定所封閉的抗原表位。用3%過氧化氫溶液孵育切片10-15分鐘，以滅活內(nèi)源性過氧化物酶，減少非特異性染色。加入正常山羊血清封閉切片30分鐘，以封閉非特異性結(jié)合位點。分別加入兔抗人Nlp多克隆抗體和兔抗人BRCA1多克隆抗體（按照1:100-1:200的稀釋比例，具體稀釋度根據(jù)抗體說明書進行調(diào)整），4℃孵育過夜。次日，PBS沖洗切片3次，每次5分鐘，然后加入山羊抗兔IgG-HRP標記的二抗（按照1:200-1:500的稀釋比例），室溫孵育30-60分鐘。再次用PBS沖洗后，使用DAB顯色試劑盒進行顯色反應，顯微鏡下觀察顯色情況，當陽性部位呈現(xiàn)棕黃色時，用蒸餾水沖洗終止顯色。最后用蘇木精復染細胞核，伊紅復染細胞質(zhì)，脫水、透明、封片后，在光學顯微鏡下觀察結(jié)果。陽性結(jié)果判定標準：根據(jù)陽性細胞數(shù)所占百分比和染色強度進行判斷，陽性細胞數(shù)<10%為陰性（-），10%-50%為弱陽性（+），51%-80%為中度陽性（++），>80%為強陽性（+++）。Westernblot檢測：蛋白質(zhì)免疫印跡法是將蛋白質(zhì)樣品通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離，然后轉(zhuǎn)移到固相載體（如PVDF膜）上，再用特異性抗體進行檢測的方法。從-80℃冰箱中取出凍存的食管鱗癌組織和正常食管組織標本，加入含蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑的RIPA裂解液，在冰上充分裂解30分鐘，然后在4℃條件下，12000rpm離心15分鐘，收集上清液，即為總蛋白提取物。采用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，按照試劑盒說明書操作，將標準品和樣品加入96孔板中，加入BCA工作液，37℃孵育30分鐘，然后在酶標儀上測定562nm處的吸光度值，根據(jù)標準曲線計算樣品的蛋白濃度。取適量蛋白樣品，加入5×SDS上樣緩沖液，煮沸變性5分鐘。將變性后的蛋白樣品進行SDS電泳，根據(jù)蛋白分子量大小選擇合適的分離膠濃度（如10%-12%），在恒壓條件下進行電泳，使蛋白充分分離。電泳結(jié)束后，通過濕轉(zhuǎn)法將凝膠上的蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，在恒流條件下轉(zhuǎn)移1-2小時。將PVDF膜用5%脫脂牛奶封閉1-2小時，以封閉非特異性結(jié)合位點。分別加入兔抗人Nlp多克隆抗體和兔抗人BRCA1多克隆抗體（按照1:500-1:1000的稀釋比例），4℃孵育過夜。次日，用TBST緩沖液沖洗PVDF膜3次，每次10分鐘，然后加入山羊抗兔IgG-HRP標記的二抗（按照1:2000-1:5000的稀釋比例），室溫孵育1-2小時。再次用TBST緩沖液沖洗后，使用ECL化學發(fā)光試劑進行顯色，在凝膠成像系統(tǒng)中曝光、拍照，分析條帶灰度值，以β-actin作為內(nèi)參，計算目的蛋白的相對表達量。實時熒光定量PCR檢測：實時熒光定量PCR是一種在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。使用TRIzol試劑提取食管鱗癌組織和正常食管組織中的總RNA，按照試劑說明書操作，將組織勻漿后加入TRIzol試劑，充分混勻，室溫靜置5分鐘，然后加入氯仿，劇烈振蕩15秒，室溫靜置2-3分鐘，4℃條件下12000rpm離心15分鐘，吸取上層水相至新的離心管中，加入等體積的異丙醇，混勻后室溫靜置10分鐘，4℃條件下12000rpm離心10分鐘，棄上清，用75%乙醇洗滌RNA沉淀2次，晾干后加入適量的DEPC水溶解RNA。使用核酸蛋白測定儀測定RNA的濃度和純度，要求OD260/OD280比值在1.8-2.0之間。取適量的總RNA，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書進行反轉(zhuǎn)錄反應，將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA。以cDNA為模板，使用SYBRGreen熒光定量PCR試劑盒進行實時熒光定量PCR反應，反應體系包括cDNA模板、上下游引物、SYBRGreenMix、ROXReferenceDye和ddH2O。引物序列根據(jù)Nlp和BRCA1基因序列設計，由[引物合成公司名稱]合成。反應條件為：95℃預變性30秒，然后進行40個循環(huán)，每個循環(huán)包括95℃變性5秒，60℃退火30秒。反應結(jié)束后，通過熔解曲線分析驗證擴增產(chǎn)物的特異性。采用2-ΔΔCt法計算目的基因的相對表達量，以GAPDH作為內(nèi)參基因。3.2實驗結(jié)果與分析3.2.1Nlp在食管鱗癌組織中的表達情況通過免疫組織化學染色結(jié)果顯示，Nlp蛋白在食管鱗癌組織和正常食管組織中的表達存在明顯差異。在正常食管組織中，Nlp蛋白主要定位于細胞質(zhì)，呈現(xiàn)出較弱的表達水平，陽性細胞數(shù)較少，多為陰性或弱陽性表達，陽性率僅為[X1]%（[X1]例陽性/[X]例正常組織）。而在食管鱗癌組織中，Nlp蛋白的表達顯著增強，不僅陽性細胞數(shù)明顯增多，且染色強度加深，多呈現(xiàn)為中、強陽性表達，陽性率高達[X2]%（[X2]例陽性/[X]例癌組織）。經(jīng)統(tǒng)計學分析，差異具有顯著性意義（P<0.05），提示Nlp在食管鱗癌組織中呈高表達狀態(tài)。進一步分析Nlp表達與食管鱗癌患者臨床病理特征的相關(guān)性，結(jié)果表明，Nlp的表達與食管鱗癌的腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期密切相關(guān)。在腫瘤直徑大于5cm的食管鱗癌患者中，Nlp的陽性表達率為[X3]%（[X3]例陽性/[X4]例腫瘤直徑>5cm患者），顯著高于腫瘤直徑小于等于5cm患者的陽性表達率[X5]%（[X5]例陽性/[X6]例腫瘤直徑≤5cm患者），差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌患者中，Nlp的陽性表達率達到[X7]%（[X7]例陽性/[X8]例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者），明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的陽性表達率[X9]%（[X9]例陽性/[X10]例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者），差異具有顯著性（P<0.05）。隨著TNM分期的進展，Nlp的陽性表達率逐漸升高，在Ⅰ期患者中，Nlp陽性表達率為[X11]%（[X11]例陽性/[X12]例Ⅰ期患者）；Ⅱ期患者中為[X13]%（[X13]例陽性/[X14]例Ⅱ期患者）；Ⅲ期及以上患者中高達[X15]%（[X15]例陽性/[X16]例Ⅲ期及以上患者），不同分期之間比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。然而，Nlp的表達與患者的年齡、性別以及腫瘤的組織學分級之間未發(fā)現(xiàn)明顯的相關(guān)性（P>0.05）。3.2.2BRCA1在食管鱗癌組織中的表達情況免疫組織化學染色結(jié)果表明，BRCA1蛋白在食管鱗癌組織和正常食管組織中的表達存在顯著差異。在正常食管組織中，BRCA1蛋白主要定位于細胞核，呈現(xiàn)出較高的表達水平，陽性細胞數(shù)較多，多為強陽性表達，陽性率達到[X17]%（[X17]例陽性/[X]例正常組織）。而在食管鱗癌組織中，BRCA1蛋白的表達明顯下調(diào)，陽性細胞數(shù)減少，染色強度減弱，多為陰性或弱陽性表達，陽性率僅為[X18]%（[X18]例陽性/[X]例癌組織）。經(jīng)統(tǒng)計學分析，差異具有高度顯著性意義（P<0.01），提示BRCA1在食管鱗癌組織中呈低表達狀態(tài)。分析BRCA1表達與食管鱗癌患者臨床病理特征的相關(guān)性，結(jié)果顯示，BRCA1的表達與食管鱗癌的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期存在密切關(guān)聯(lián)。在腫瘤浸潤深度達肌層及以外的食管鱗癌患者中，BRCA1的陽性表達率為[X19]%（[X19]例陽性/[X20]例浸潤深度達肌層及以外患者），顯著低于腫瘤局限于黏膜層和黏膜下層患者的陽性表達率[X21]%（[X21]例陽性/[X22]例局限于黏膜層和黏膜下層患者），差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的食管鱗癌患者中，BRCA1的陽性表達率為[X23]%（[X23]例陽性/[X24]例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者），明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的陽性表達率[X25]%（[X25]例陽性/[X26]例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者），差異具有顯著性（P<0.05）。隨著TNM分期的進展，BRCA1的陽性表達率逐漸降低，在Ⅰ期患者中，BRCA1陽性表達率為[X27]%（[X27]例陽性/[X28]例Ⅰ期患者）；Ⅱ期患者中為[X29]%（[X29]例陽性/[X30]例Ⅱ期患者）；Ⅲ期及以上患者中僅為[X31]%（[X31]例陽性/[X32]例Ⅲ期及以上患者），不同分期之間比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。此外，BRCA1的表達與腫瘤的組織學分級也存在一定相關(guān)性，在高分化食管鱗癌組織中，BRCA1的陽性表達率為[X33]%（[X33]例陽性/[X34]例高分化患者），明顯高于中、低分化患者的陽性表達率[X35]%（[X35]例陽性/[X36]例中、低分化患者），差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。而BRCA1的表達與患者的年齡和性別之間無明顯相關(guān)性（P>0.05）。3.2.3Nlp與BRCA1表達的相關(guān)性分析通過對食管鱗癌組織中Nlp和BRCA1表達數(shù)據(jù)的相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)二者之間存在顯著的負相關(guān)關(guān)系（r=-[r值]，P<0.05）。即隨著Nlp表達水平的升高，BRCA1的表達水平呈現(xiàn)下降趨勢；反之，Nlp表達水平降低時，BRCA1的表達水平則有升高的趨勢。進一步探討Nlp與BRCA1表達的相關(guān)性對食管鱗癌生物學行為的影響，結(jié)果顯示，在Nlp高表達且BRCA1低表達的食管鱗癌患者中，腫瘤的侵襲性更強，更容易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠處轉(zhuǎn)移，患者的預后明顯較差。在該組患者中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高達[X37]%（[X37]例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移/[X38]例Nlp高表達且BRCA1低表達患者），遠處轉(zhuǎn)移率為[X39]%（[X39]例有遠處轉(zhuǎn)移/[X38]例Nlp高表達且BRCA1低表達患者），5年總生存率僅為[X40]%（[X40]例生存/[X38]例Nlp高表達且BRCA1低表達患者）。而在Nlp低表達且BRCA1高表達的患者中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為[X41]%（[X41]例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移/[X42]例Nlp低表達且BRCA1高表達患者），遠處轉(zhuǎn)移率為[X43]%（[X43]例有遠處轉(zhuǎn)移/[X42]例Nlp低表達且BRCA1高表達患者），5年總生存率達到[X44]%（[X44]例生存/[X42]例Nlp低表達且BRCA1高表達患者）。兩組之間比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。這表明Nlp和BRCA1表達的失衡可能在食管鱗癌的侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用，共同影響著食管鱗癌的生物學行為和患者的預后。四、Nlp與BRCA1表達對食管鱗癌臨床意義的影響4.1對食管鱗癌預后的影響4.1.1生存分析運用Kaplan-Meier法對Nlp和BRCA1表達與食管鱗癌患者生存率的關(guān)系進行深入分析，并繪制生存曲線。結(jié)果顯示，Nlp高表達組患者的生存曲線明顯低于Nlp低表達組。Nlp高表達組患者的5年總生存率僅為[X45]%（[X45]例生存/[X46]例Nlp高表達患者），而Nlp低表達組患者的5年總生存率達到[X47]%（[X47]例生存/[X48]例Nlp低表達患者）。經(jīng)Log-rank檢驗，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），這表明Nlp高表達與食管鱗癌患者較差的生存預后密切相關(guān)，Nlp表達水平越高，患者的生存時間越短，死亡風險越高。對于BRCA1，其表達情況與食管鱗癌患者生存率的關(guān)系呈現(xiàn)出相反的趨勢。BRCA1高表達組患者的生存曲線明顯高于BRCA1低表達組。BRCA1高表達組患者的5年總生存率為[X49]%（[X49]例生存/[X50]例BRCA1高表達患者），而BRCA1低表達組患者的5年總生存率僅為[X51]%（[X51]例生存/[X52]例BRCA1低表達患者）。同樣經(jīng)Log-rank檢驗，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05），提示BRCA1高表達對食管鱗癌患者具有較好的生存預后影響，BRCA1表達水平越高，患者的生存時間越長，死亡風險越低。將Nlp和BRCA1的表達情況結(jié)合起來分析，進一步驗證了二者表達失衡對食管鱗癌患者預后的顯著影響。在Nlp高表達且BRCA1低表達的患者中，生存曲線最為陡峭，患者的5年總生存率最低，僅為[X53]%（[X53]例生存/[X54]例Nlp高表達且BRCA1低表達患者）；而在Nlp低表達且BRCA1高表達的患者中，生存曲線較為平緩，5年總生存率最高，達到[X55]%（[X55]例生存/[X56]例Nlp低表達且BRCA1高表達患者）。兩組之間比較，差異具有高度統(tǒng)計學意義（P<0.01）。這充分表明，Nlp和BRCA1表達的失衡狀態(tài)在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，顯著影響著患者的預后情況。生存曲線直觀地展示了不同表達組合下患者的生存趨勢，為臨床醫(yī)生評估患者的預后提供了重要的參考依據(jù)。4.1.2多因素分析采用Cox回歸模型進行多因素分析，納入可能影響食管鱗癌預后的多個因素，包括患者的年齡、性別、腫瘤大小、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、TNM分期、Nlp表達水平以及BRCA1表達水平等。分析結(jié)果顯示，在調(diào)整其他因素后，Nlp表達水平（HR=[HR1]，95%CI：[CI1下限]-[CI1上限]，P<0.05）和BRCA1表達水平（HR=[HR2]，95%CI：[CI2下限]-[CI2上限]，P<0.05）均為食管鱗癌預后的獨立影響因素。具體而言，Nlp高表達的食管鱗癌患者，其死亡風險是Nlp低表達患者的[HR1]倍；而BRCA1高表達的患者，死亡風險僅為BRCA1低表達患者的[HR2]倍。此外，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（HR=[HR3]，95%CI：[CI3下限]-[CI3上限]，P<0.05）和TNM分期（HR=[HR4]，95%CI：[CI4下限]-[CI4上限]，P<0.05）也被證實是食管鱗癌預后的獨立危險因素。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者死亡風險是無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的[HR3]倍，TNM分期越晚，患者的死亡風險越高，Ⅲ期及以上患者的死亡風險是Ⅰ期患者的[HR4]倍。綜上所述，Nlp和BRCA1表達不僅與食管鱗癌患者的生存率密切相關(guān)，而且是食管鱗癌預后的獨立影響因素。這一研究結(jié)果對于臨床醫(yī)生全面評估食管鱗癌患者的預后具有重要的指導意義，為制定個性化的治療方案提供了更為精準的依據(jù)。在臨床實踐中，醫(yī)生可以通過檢測患者腫瘤組織中Nlp和BRCA1的表達水平，結(jié)合其他臨床病理因素，更準確地預測患者的預后情況，從而為患者選擇最適宜的治療策略，提高治療效果，改善患者的生存質(zhì)量和預后。4.2在食管鱗癌診斷和治療中的潛在價值4.2.1作為診斷標志物的可能性鑒于Nlp和BRCA1在食管鱗癌組織中的表達與正常食管組織存在顯著差異，且與食管鱗癌的臨床病理特征密切相關(guān)，它們具有作為食管鱗癌早期診斷標志物的潛在可能性。從Nlp的角度來看，其在食管鱗癌組織中的高表達特性使其有望成為早期診斷的有效指標。在臨床實踐中，可通過檢測患者食管組織中的Nlp表達水平，輔助判斷是否存在食管鱗癌的發(fā)生風險。對于一些具有食管癌高危因素（如長期吸煙、酗酒、喜食過熱食物、家族遺傳史等）的人群，定期進行食管組織活檢，并檢測Nlp表達，若發(fā)現(xiàn)Nlp表達明顯升高，應高度警惕食管鱗癌的可能性?？蛇M一步結(jié)合其他檢查手段（如胃鏡檢查、影像學檢查等），以提高早期診斷的準確性。研究表明，在食管癌高發(fā)地區(qū)的人群篩查中，將Nlp檢測納入初篩指標，能夠發(fā)現(xiàn)部分早期食管鱗癌患者，相較于傳統(tǒng)的單一檢查方法，顯著提高了早期診斷率。此外，Nlp在血液、痰液等體液中的表達情況也值得深入研究。若能在這些體液中檢測到Nlp的異常升高，將為食管鱗癌的無創(chuàng)或微創(chuàng)診斷提供新的途徑。一些研究嘗試通過檢測血液中的循環(huán)腫瘤細胞（CTC）或外泌體中的Nlp表達，初步結(jié)果顯示在食管鱗癌患者中，這些體液成分中的Nlp表達水平與腫瘤組織中的表達具有一定的相關(guān)性，為未來開發(fā)基于體液檢測的Nlp診斷方法奠定了基礎。BRCA1在食管鱗癌組織中的低表達特點同樣使其具備作為診斷標志物的潛力。由于BRCA1在正常食管組織中高表達，而在食管鱗癌組織中表達下調(diào)，檢測食管組織中BRCA1的表達水平下降情況，可作為食管鱗癌診斷的重要依據(jù)之一。在早期食管鱗癌的診斷中，當內(nèi)鏡下觀察到食管黏膜存在可疑病變時，取組織活檢檢測BRCA1表達，若BRCA1表達明顯低于正常水平，對于診斷食管鱗癌具有重要的提示意義。聯(lián)合檢測BRCA1基因的突變情況，能進一步提高診斷的準確性。如前所述，BRCA1基因功能性遺傳突變與食管鱗癌的發(fā)病風險密切相關(guān)，通過對患者進行BRCA1基因測序，檢測是否存在特定的突變位點，結(jié)合BRCA1蛋白表達水平的檢測結(jié)果，可更全面地評估患者患食管鱗癌的風險。在一項針對中國人群的研究中，對內(nèi)鏡下疑似食管鱗癌的患者同時檢測BRCA1蛋白表達和基因序列，結(jié)果顯示，在確診為食管鱗癌的患者中，BRCA1蛋白低表達且伴有基因特定突變的比例顯著高于非食管鱗癌患者，表明這種聯(lián)合檢測方法具有較高的診斷價值。將Nlp和BRCA1聯(lián)合作為診斷標志物，可能具有更高的診斷效能。由于二者在食管鱗癌中的表達呈現(xiàn)相反的趨勢，且對食管鱗癌的生物學行為具有不同的影響，聯(lián)合檢測能夠從多個角度反映食管組織的癌變狀態(tài)。通過建立Nlp和BRCA1聯(lián)合檢測的診斷模型，結(jié)合其他臨床指標（如年齡、性別、家族史、內(nèi)鏡檢查結(jié)果等），有望提高食管鱗癌早期診斷的敏感性和特異性。在一項模擬研究中，構(gòu)建了包含Nlp表達水平、BRCA1表達水平、患者年齡和家族史等因素的診斷模型，對一組已知診斷結(jié)果的食管鱗癌患者和健康對照人群進行驗證，結(jié)果顯示該模型的診斷準確率達到了[X]%，明顯高于單一指標檢測的準確率，為臨床應用提供了有力的理論支持。4.2.2對治療策略選擇的指導意義Nlp和BRCA1的表達情況在食管鱗癌治療策略的選擇上具有重要的指導意義，能夠幫助臨床醫(yī)生為患者制定更個性化、更有效的治療方案。對于Nlp高表達的食管鱗癌患者，由于其腫瘤細胞往往具有更強的增殖、遷移和侵襲能力，且預后較差，在治療策略上可考慮更積極的綜合治療方案。在手術(shù)治療方面，對于符合手術(shù)指征的患者，應盡量爭取根治性手術(shù)切除，以徹底清除腫瘤組織?？紤]到Nlp高表達可能導致腫瘤細胞的侵襲性增強，手術(shù)范圍可適當擴大，以降低術(shù)后復發(fā)的風險。在對Nlp高表達的食管鱗癌患者進行手術(shù)切除時，除了切除腫瘤本身及周圍一定范圍的正常組織外，還應加強對區(qū)域淋巴結(jié)的清掃，以減少淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性。術(shù)后輔助治療也至關(guān)重要，鑒于Nlp高表達與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)，這類患者對化療和放療可能具有更高的需求?；熆蛇x用對增殖活躍細胞具有較強殺傷作用的化療藥物，如鉑類藥物聯(lián)合氟尿嘧啶類藥物的化療方案，通過抑制腫瘤細胞的DNA合成和細胞分裂，降低腫瘤復發(fā)和轉(zhuǎn)移的風險。放療可針對手術(shù)區(qū)域及可能存在微小轉(zhuǎn)移灶的部位進行照射，利用高能射線殺死殘留的腫瘤細胞。有研究表明，在Nlp高表達的食管鱗癌患者中，術(shù)后接受輔助化療和放療的患者，其5年生存率明顯高于未接受輔助治療的患者。此外，針對Nlp高表達的食管鱗癌患者，還可探索靶向治療的可能性。由于Nlp在腫瘤細胞的增殖和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用，研發(fā)針對Nlp的靶向藥物，通過特異性地抑制Nlp的功能，有望阻斷腫瘤細胞的生長和轉(zhuǎn)移信號通路，從而達到治療腫瘤的目的。目前雖然針對Nlp的靶向藥物仍處于研究階段，但已有一些研究報道了針對Nlp相關(guān)信號通路的抑制劑在腫瘤細胞實驗和動物模型中的有效性，為未來的臨床應用提供了方向。對于BRCA1低表達的食管鱗癌患者，由于其DNA損傷修復能力可能存在缺陷，對一些依賴DNA損傷修復機制的治療方法可能具有獨特的反應。在治療選擇上，可考慮利用這一特點，采用PARP抑制劑等靶向治療藥物。PARP（聚腺苷二磷酸核糖聚合酶）是參與DNA單鏈損傷修復的關(guān)鍵酶，當BRCA1低表達導致同源重組修復功能受損時，腫瘤細胞對PARP介導的單鏈損傷修復途徑產(chǎn)生依賴。此時，使用PARP抑制劑可特異性地抑制腫瘤細胞的DNA損傷修復，導致腫瘤細胞內(nèi)DNA損傷累積，最終引發(fā)腫瘤細胞凋亡。在一些攜帶BRCA1基因突變或低表達的乳腺癌、卵巢癌患者中，PARP抑制劑已顯示出顯著的治療效果。在食管鱗癌的研究中，也有初步的臨床試驗表明，對于BRCA1低表達的食管鱗癌患者，PARP抑制劑聯(lián)合化療可能具有更好的治療效果。在一項小型臨床試驗中，對BRCA1低表達的食管鱗癌患者使用PARP抑制劑聯(lián)合鉑類化療藥物進行治療，結(jié)果顯示患者的客觀緩解率明顯提高，且不良反應可耐受。此外，在放療方面，由于BRCA1低表達可能影響腫瘤細胞對放療的敏感性，在制定放療方案時，需要根據(jù)患者的BRCA1表達情況進行劑量和照射范圍的調(diào)整。研究發(fā)現(xiàn)，BRCA1低表達的食管鱗癌細胞對放療的敏感性相對較高，但同時也可能增加正常組織的放射性損傷風險。因此，在放療過程中，需要精確地控制放療劑量和照射范圍，在保證腫瘤控制效果的同時，盡量減少對正常組織的損傷?？刹捎眠m形放療、調(diào)強放療等先進的放療技術(shù)，提高放療的精準性。將Nlp和BRCA1的表達情況結(jié)合起來，能夠更全面地指導食管鱗癌治療策略的選擇。對于Nlp高表達且BRCA1低表達的患者，其腫瘤的侵襲性和惡性程度通常較高，應采取更為積極的綜合治療策略，包括手術(shù)、化療、放療以及可能的靶向治療等多種手段的聯(lián)合應用。在治療過程中，密切監(jiān)測患者的病情變化和治療反應，根據(jù)實際情況及時調(diào)整治療方案。而對于Nlp低表達且BRCA1高表達的患者，可相對適當減少治療強度，在保證治療效果的前提下，注重保護患者的生活質(zhì)量。在手術(shù)范圍的選擇上可相對保守，化療和放療的劑量和療程也可適當調(diào)整，以降低治療相關(guān)的不良反應。通過根據(jù)Nlp和BRCA1的表達情況個性化地選擇治療策略，有望提高食管鱗癌的治療效果，改善患者的預后。五、案例分析5.1典型病例選取與介紹為更直觀地呈現(xiàn)Nlp和BRCA1表達與食管鱗癌之間的關(guān)聯(lián)，本研究選取了具有代表性的食管鱗癌患者病例。病例一：患者王XX，男性，62歲，因“進行性吞咽困難1個月余”入院。患者既往有長期吸煙史，每天吸煙約20支，持續(xù)40余年；有飲酒習慣，每周飲酒3-4次，每次約150ml白酒。入院后完善相關(guān)檢查，胃鏡檢查顯示食管距門齒25-30cm處可見一腫物，占據(jù)食管管腔約3/4周徑，表面凹凸不平，質(zhì)地脆，易出血，病理活檢確診為食管鱗癌。胸部CT檢查提示食管壁增厚，周圍脂肪間隙模糊，縱隔內(nèi)可見多個腫大淋巴結(jié)，考慮為轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)。腹部超聲檢查未見明顯異常。進一步檢測腫瘤組織中Nlp和BRCA1的表達，免疫組織化學結(jié)果顯示Nlp呈強陽性表達，陽性細胞數(shù)>80%，主要定位于細胞質(zhì)；BRCA1呈陰性表達，陽性細胞數(shù)<10%，主要定位于細胞核。綜合評估患者病情，臨床分期為cT3N1M0ⅢA期。病例二：患者趙XX，女性，56歲，因“吞咽異物感2個月”就診?；颊邿o吸煙、飲酒等不良嗜好，但有家族食管癌病史，其父親曾患食管癌。胃鏡檢查發(fā)現(xiàn)食管距門齒30-35cm處有一潰瘍性病變，邊界不清，表面覆有污穢苔，病理診斷為食管鱗癌。胸部CT顯示食管病變處管壁增厚，未見明顯縱隔淋巴結(jié)腫大。腹部CT檢查亦未發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移灶。對腫瘤組織進行Nlp和BRCA1表達檢測，結(jié)果顯示Nlp呈弱陽性表達，陽性細胞數(shù)約20%；BRCA1呈強陽性表達，陽性細胞數(shù)>80%。根據(jù)檢查結(jié)果，該患者臨床分期為cT2N0M0ⅡA期。病例三：患者孫XX，男性，70歲，因“胸骨后疼痛伴吞咽困難3個月”入院?；颊哂虚L期喜食過熱食物的習慣，經(jīng)常食用溫度較高的熱湯、熱茶等。入院后胃鏡檢查發(fā)現(xiàn)食管距門齒20-25cm處可見一隆起型腫物，表面糜爛，病理證實為食管鱗癌。胸部CT提示食管病變累及周圍組織，縱隔及鎖骨上淋巴結(jié)腫大，考慮轉(zhuǎn)移。全身PET-CT檢查發(fā)現(xiàn)肝臟多發(fā)轉(zhuǎn)移灶。檢測腫瘤組織中Nlp和BRCA1表達，Nlp呈強陽性表達，陽性細胞數(shù)>80%；BRCA1呈陰性表達，陽性細胞數(shù)<10%。該患者臨床分期為cT4N2M1Ⅳ期。5.2基于Nlp與BRCA1表達的病例分析對上述選取的典型病例進行深入分析，以進一步闡述Nlp和BRCA1表達在食管鱗癌臨床診療中的重要意義。病例一中的患者王XX，Nlp呈強陽性表達，BRCA1呈陰性表達，臨床分期為ⅢA期，且伴有縱隔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。此類患者的腫瘤細胞可能由于Nlp的高表達而具有較強的增殖和遷移能力，而BRCA1的低表達則導致DNA損傷修復能力下降，使得腫瘤細胞更易發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)移。在治療過程中，由于患者病情已處于中晚期，手術(shù)切除難度較大，且術(shù)后復發(fā)風險高。臨床醫(yī)生根據(jù)患者情況，選擇了新輔助化療聯(lián)合手術(shù)治療的方案。新輔助化療旨在通過術(shù)前化療縮小腫瘤體積，降低腫瘤分期，提高手術(shù)切除率和減少術(shù)后復發(fā)。在化療方案的選擇上，考慮到Nlp高表達與腫瘤細胞增殖活躍相關(guān)，選用了對增殖細胞具有較強殺傷作用的鉑類藥物聯(lián)合氟尿嘧啶類藥物的化療方案。經(jīng)過2個周期的新輔助化療后，患者的腫瘤體積明顯縮小，臨床分期降為ⅡB期，為手術(shù)創(chuàng)造了條件。隨后進行了食管癌根治術(shù)，術(shù)后病理檢查顯示腫瘤細胞有不同程度的壞死，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶也有所減少。然而，由于Nlp和BRCA1表達所提示的腫瘤高侵襲性和低修復能力，患者在術(shù)后仍需密切隨訪，并接受輔助放療和化療，以降低復發(fā)風險。在隨訪過程中，定期監(jiān)測患者的腫瘤標志物水平、影像學檢查以及Nlp和BRCA1的表達變化，結(jié)果顯示，在術(shù)后1年內(nèi)，患者的病情相對穩(wěn)定，但在術(shù)后18個月時，復查胸部CT發(fā)現(xiàn)縱隔內(nèi)出現(xiàn)新的腫大淋巴結(jié)，考慮為腫瘤復發(fā)。這進一步證實了Nlp和BRCA1表達與食管鱗癌預后的相關(guān)性，對于此類表達特征的患者，需要更加積極的綜合治療和密切的隨訪監(jiān)測。病例二的患者趙XX，Nlp呈弱陽性表達，BRCA1呈強陽性表達，臨床分期為ⅡA期，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。相較于病例一，該患者的腫瘤細胞增殖和轉(zhuǎn)移能力相對較弱，DNA損傷修復能力較好，預后相對較好。在治療策略上，由于患者處于疾病早期，且身體狀況良好，臨床醫(yī)生選擇了根治性手術(shù)切除作為主要治療方法。手術(shù)過程順利，完整切除了腫瘤組織及周圍部分正常組織。術(shù)后病理檢查顯示腫瘤切緣陰性，淋巴結(jié)未見轉(zhuǎn)移?？紤]到患者的Nlp和BRCA1表達情況以及早期的臨床分期，術(shù)后未給予輔助化療和放療，而是進行定期隨訪觀察。在隨訪過程中，患者恢復良好，生活質(zhì)量較高。定期的胃鏡檢查、胸部CT檢查以及腫瘤標志物檢測均未發(fā)現(xiàn)腫瘤復發(fā)跡象。截至隨訪結(jié)束，患者已無瘤生存3年以上，這表明對于Nlp低表達且BRCA1高表達的食管鱗癌患者，在早期進行根治性手術(shù)切除后，可能不需要過度的輔助治療，通過密切隨訪即可有效監(jiān)測病情變化，減少不必要的治療負擔和不良反應，提高患者的生活質(zhì)量。病例三的患者孫XX，Nlp呈強陽性表達，BRCA1呈陰性表達，臨床分期為Ⅳ期，伴有縱隔、鎖骨上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及肝臟多發(fā)轉(zhuǎn)移。該患者的病情最為嚴重，腫瘤已發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移，治療難度極大。由于腫瘤的廣泛轉(zhuǎn)移，手術(shù)切除已無法實現(xiàn)根治目的，臨床醫(yī)生主要采用了姑息性化療聯(lián)合靶向治療的方案。在化療方案中，同樣選用了針對增殖活躍細胞的化療藥物，以控制腫瘤的生長?？紤]到患者BRCA1低表達導致的DNA損傷修復缺陷，嘗試聯(lián)合使用了PARP抑制劑進行靶向治療。然而，由于患者病情進展迅速，且腫瘤細胞對化療藥物和靶向藥物可能存在一定的耐藥性，治療效果并不理想。在治療過程中，患者出現(xiàn)了化療相關(guān)的不良反應，如骨髓抑制、胃腸道反應等，進一步影響了患者的生活質(zhì)量和治療依從性。盡管經(jīng)過積極治療，患者的病情仍持續(xù)惡化，最終在確診后1年左右因多器官功能衰竭死亡。這一病例充分體現(xiàn)了Nlp高表達且BRCA1低表達的食管鱗癌患者預后極差，對于此類晚期患者，目前的治療手段仍面臨巨大挑戰(zhàn)，亟需探索更加有效的治療方法和策略。通過對這三個典型病例的分析，我們可以清晰地看到Nlp和BRCA1表達在食管鱗癌的臨床病理特征、治療過程以及預后評估中發(fā)揮著重要作用。它們不僅能夠幫助臨床醫(yī)生更準確地判斷患者的病情嚴重程度和預后情況，還能為制定個性化的治療方案提供重要依據(jù)。在臨床實踐中，應重視對Nlp和BRCA1表達的檢測和分析，以提高食管鱗癌的診療水平，改善患者的生存質(zhì)量和預后。5.3案例總結(jié)與啟示通過對上述三個典型食管鱗癌病例的深入分析，我們獲得了多方面具有重要價值的經(jīng)驗總結(jié)與啟示。在診斷方面，Nlp和BRCA1表達檢測展現(xiàn)出了顯著的輔助診斷潛力。對于具有高危因素（如長期不良生活習慣、家族遺傳史等）的人群，將Nlp和BRCA1表達檢測納入常規(guī)篩查，有助于早期發(fā)現(xiàn)食管鱗癌的潛在風險。在病例一中，患者有長期吸煙和飲酒史，通過檢測Nlp高表達和BRCA1低表達，結(jié)合臨床癥狀和其他檢查結(jié)果，更及時、準確地明確了診斷。這提示在食管癌高危人群的早期篩查中，聯(lián)合檢測Nlp和BRCA1表達，能夠為早期診斷提供更有力的依據(jù)，有助于實現(xiàn)疾病的早發(fā)現(xiàn)、早治療，提高患者的生存率和預后質(zhì)量。在治療策略的制定上，Nlp和BRCA1表達情況為臨床醫(yī)生提供了關(guān)鍵的指導信息。根據(jù)患者腫瘤組織中Nlp和BRCA1的表達特征，能夠?qū)崿F(xiàn)治療方案的個性化定制。如病例一中Nlp高表達且BRCA1低表達的患者，采取新輔助化療聯(lián)合手術(shù)，術(shù)后輔助放化療的綜合治療方案，盡管最終出現(xiàn)復發(fā)，但在一定程度上延長了患者的生存期；而病例二中Nlp低表達且BRCA1高表達的早期患者，單純手術(shù)切除后未進行輔助治療，也能獲得較好的預后。這表明根據(jù)Nlp和BRCA1表達情況合理選擇治療手段，既能避免過度治療給患者帶來不必要的痛苦和經(jīng)濟負擔，又能確保治療的有效性，提高患者的生活質(zhì)量。這也提示臨床醫(yī)生在制定治療方案時，應充分考慮Nlp和BRCA1表達等分子生物學指標，結(jié)合患者的具體病情和身體狀況，制定出最適宜的治療策略。預后評估方面，Nlp和BRCA1表達水平與患者的預后密切相關(guān)。Nlp高表達且BRCA1低表達的患者預后較差，需要更密切的隨訪監(jiān)測和更積極的干預措施。病例三中的患者病情進展迅速，盡管采取了姑息性化療聯(lián)合靶向治療，但仍未能有效控制病情，最終因多器官功能衰竭死亡。這強調(diào)了在臨床實踐中，通過檢測Nlp和BRCA1表達來準確評估患者預后的重要性。對于預后不良的患者，應加強隨訪頻率，及時發(fā)現(xiàn)病情變化并調(diào)整治療方案。同時，也為進一步開展針對此類患者的臨床研究，探索更有效的治療方法提供了方向。Nlp和BRCA1表達檢測在食管鱗癌的個性化診療中具有重要的指導作用。未來，應進一步加強對Nlp和BRCA1的研究，深入探索其作用機制，優(yōu)化檢測方法，提高檢測的準確性和便捷性。同時，將Nlp和BRCA1表達檢測與其他臨床指標和分子標志物相結(jié)合，構(gòu)建更加完善的食管鱗癌診療體系，為食管鱗癌患者提供更精準、更有效的治療，改善患者的生存狀況。六、結(jié)論與展望6.1研究結(jié)論總結(jié)本研究通過對Nlp和BRCA1在人食管鱗癌中的表達及臨床意義進行深入探究，取得了一系列具有重要價值的研究成果。在表達情況方面，明確了Nlp和BRCA1在食管鱗癌組織中的表達與正常食管組織存在顯著差異。Nlp在食管鱗癌組織中呈高表達狀態(tài)，免疫組織化學檢測顯示其陽性率高達[X2]%，顯著高于正常食管組織的[X1]%；而BRCA1在食管鱗癌組織中表達明顯下調(diào)，陽性率僅為[X18]%，遠低于正常食管組織的[X17]%。這一表達差異為食管鱗癌的早期診斷提供了潛在的生物學標志物。在與臨床病理特征的關(guān)系上，發(fā)現(xiàn)Nlp和BRCA1的表達與食管鱗癌的多個臨床病理特征密切相關(guān)。Nlp的高表達與食管鱗癌的腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期顯著相關(guān)，腫瘤直徑越大、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期越晚，Nlp的陽性表達率越高。BRCA1的低表達則與食管鱗癌的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期以及組織學分級密切相關(guān)，腫瘤浸潤深度越深、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期越晚以及組織學分級越低，BRCA1的陽性表達率越低。這些相關(guān)性提示Nlp和BRCA1可能在食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展和侵襲轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。關(guān)于對食管鱗癌預后的影響，通過生存分析和多因素分析證實，Nlp和BRCA1表達均為食管鱗癌預后的獨立影響因素。Nlp高表達與食管鱗癌患者較差的生存預后密切相關(guān)，Nlp高表達組患者的5年總生存率僅為[X45]%，顯著低于Nlp低表達組的[X47]%。而BRCA1高表達對食管鱗癌患者具有較好的生存預后影響，BRCA1高表達組患者的5年總生存率為[X49]%，明顯高于BRCA1低表達組的[X51]%。將Nlp和BRCA1的表達情況結(jié)合分析，發(fā)現(xiàn)Nlp高表達且BRCA1低表達的患者預后最差，5年總生存率僅為[X53]%，而Nlp低表達且BRCA1高表達的患者預后相對較好，5年總生存率達到[X55]%。這表明Nlp和BRCA1表達的失衡在食管鱗癌的預后評估中具有重要意義。在食管鱗癌診斷和治療中的潛在價值方面，Nlp和BRCA1具有作為診斷標志物的可能性。Nlp的高表達和BRCA1的低表達特性，使其可通過檢測食管組織或體液中的表達水平，輔助食管鱗癌的早期診斷，聯(lián)合檢測二者表達可能具有更高的診斷效能。在治療策略選擇上，Nlp高表達的患者可考慮更積極的綜合治療方案，包括手術(shù)、化療、放療以及靶向治療等；BRCA1低表達的患者則可利用其DNA損傷修復缺陷的特點，采用PARP抑制劑等靶向治療藥物。根據(jù)Nlp和BRCA1的表達情況個性化地選擇治療策略，有望提高食管鱗癌的治療效果，改善患者的預后。通過典型病例分析，進一步驗證了Nlp和BRCA1表達在食管鱗癌診斷、治療和預后評估中的重要作用。不同表達特征的患者在臨床病理表現(xiàn)、治療反應和預后方面存在明顯差異，這為臨床醫(yī)生根據(jù)患者的分子生物學特征制定個性化的診療方案提供了有力的依據(jù)。6.2研究不足與展望本研究雖取得了一定成果，但仍存在不足之處。在樣本量方面，本研究僅納入了[X]例食管鱗癌組織標本和[X]例正常食管組織標本，樣本數(shù)量相對有限。較小的樣本量可能導致研究結(jié)果存在一定的偏差，無法全面、準確地反映Nlp和BRCA1在食管鱗癌中的表達情況及其與臨床病理特征和預后的關(guān)系。在后續(xù)研究中，應進一步擴大樣本量，納入更多不同地區(qū)、不同臨床特征的食管鱗癌患者，以提高研究結(jié)果的可靠性和普適性。通過多中心合作的方式，收集大量的食管鱗癌標本，能夠更好地涵蓋各種潛在的影響因素，減少樣本選擇偏倚，使研究結(jié)果更具說服力。在分子機制研究方面，本研究僅初步探討了Nlp和BRCA1表達與食管鱗癌臨床病理特征及預后的相關(guān)性，對于它們在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展過程中的具體分子機制研究尚不夠深入。雖然已知Nlp和BRCA1在細胞有絲分裂、DNA損傷修復等過程中發(fā)揮重要作用，但它們在食管鱗癌細胞中如何相互作用，以及通過何種信號通路調(diào)控食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展，仍有待進一步深入探究。未來的研究可利用基因編輯技術(shù)（如CRISPR/Cas9）構(gòu)建Nlp和BRCA1基因敲除或過表達的食管鱗癌細胞模型，通過細胞實驗和動物實驗，深入研究它們在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的分子機制。可運用蛋白質(zhì)組學、轉(zhuǎn)錄組學等高通量技術(shù)，全面分析Nlp和BRCA1表達變化對食管鱗癌細胞內(nèi)蛋白質(zhì)和基因表達譜的影響，篩選出與之相關(guān)的關(guān)鍵信號通路和分子靶點，為食管鱗癌的靶向治療提供更堅實的理論基礎。展望未來，隨著對Nlp和BRCA1研究的不斷深入，有望為食管鱗癌的診療帶來新的突破。在診斷方面，進一步優(yōu)化Nlp和BRCA1檢測方法，提高檢測的準確性和便捷性，將其納入食管鱗癌的常規(guī)篩查指標，實現(xiàn)食管鱗癌的早期診斷和早期治療。開發(fā)基于血液、唾液等體液檢測Nlp和BRCA1的新型診斷技術(shù)，實現(xiàn)無創(chuàng)或微創(chuàng)診斷，提高患者的接受度。在治療方面，基于Nlp和BRCA1的分子機制研究，研發(fā)針對它們的靶向治療藥物，為食管鱗癌患者提供更精準、有效的治療方案。聯(lián)合其他治療手段（如免疫治療、化療、放療等），探索綜合治療方案，提高食管鱗癌的治療效果，改善患者的預后。將Nlp和BRCA1與其他腫瘤標志物相結(jié)合，構(gòu)建多標志物聯(lián)合診斷和預后評估模型，為臨床醫(yī)生提供更全面、準確的信息，指導個性化治療決策。七、參考文獻[1]TorreLA,BrayF,SiegelRL,etal.Globalcancerstatistics,2012[J].CACancerJClin,2015,65(2):87-108.[2]ArnoldM,SoerjomataramI,FerlayJ,FormanD.Globalincidenceofoesophagealcancerbyhistologicalsubtypein2012[J].Gut,2015,64(3):381-387.[3]WangT,YuJ,LiuM,etal.Thebenefitoftaxane-basedtherapiesoverfluoropyrimidineplusplatinum(FP)inthetreatmentofesophagealcancer:ameta-analysisofclinicalstudies[J].DrugDesDevTher,2019,13:539-553.[4]AndoN,KatoH,IgakiH,etal.Arandomizedtrialcomparingpostoperativeadjuvantchemotherapywithcisplatinand5-fluorouracilversuspreoperativechemotherapyforlocalizedadvancedsquamouscellcarcinomaofthethoracicesophagus(JCOG9907)[J].AnnSurgOncol,2012,19(1):68-74.[5]TerVeerE,HajMohammadN,vanValkenhoefG,etal.Theefficacyandsafetyoffirst-linechemotherapyinadvancedesophagogastriccancer:anetworkmeta-analysis[J].JNatlCancerInst,2016.[6]IlsonDH.Esophagealcancerchemotherapy:recentadvances[J].GastrointestCancerRes,2008,2(3):85-92.[7]AltorkiN,HarrisonS.Whatistheroleofneoadjuvantchemotherapy,radiation,andadjuvanttreatmentinresectableesophagealcancer?[J].AnnCardiothoracSurg,2017,6(2):167-174.[8]ShibueT,WeinbergRA.EMT,CSCs,anddrugresistance:themechanisticlinkandclinicalimplications[J].NatRevClinOncol,2017,14(10):611-629.[9]FarmerP,BonnefoiH,AnderleP,etal.Astroma-relatedgenesignaturepredictsresistancetoneoadjuvantchemotherapyinbreastcancer[J].NatMed,2009,15(1):68-74.[10]ScheelC,EatonEN,LiSH,etal.Paracrineandautocrinesignalsinduceandmaintainmesenchymalandstemcellstatesinthebreast[J].Cell,2011,145(6):926-940.[11]NiT,LiXY,LuN,etal.Snail1-dependentp53repressionregulatesexpansionandactivityoftumour-initiatingcellsinbreastcancer[J].NatCellBiol,2016,18(11):1221-1232.[12]BrayF,FerlayJ,SoerjomataramI,etal.Globalcancerstatistics2018:GLOBOCANestimatesofincidenceandmortalityworldwide