/練案46基因工程的基本工具和基本操作程序A組一、選擇題1．(2024·遼寧名校聯(lián)盟聯(lián)考)近年來(lái)，人工智能(AI)算法在蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域的應(yīng)用已經(jīng)被開(kāi)發(fā)，下列關(guān)于AI算法在蛋白質(zhì)工程領(lǐng)域應(yīng)用的設(shè)想中，實(shí)現(xiàn)難度最大的是()A．根據(jù)人類(lèi)對(duì)蛋白質(zhì)的功能需求設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)B．根據(jù)蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)推測(cè)其氨基酸序列C．按照設(shè)定的氨基酸序列推測(cè)mRNA的堿基序列D．按照設(shè)定的mRNA的堿基序列設(shè)計(jì)新基因答案：A解析：根據(jù)中心法則逆推以確定目的基因的堿基序列：預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有氨基酸序列→找到對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)。其中根據(jù)人類(lèi)對(duì)蛋白質(zhì)的功能需求設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)是最難實(shí)現(xiàn)的。A正確，B、C、D錯(cuò)誤。2．(2025·遼寧省朝陽(yáng)市期末試題)采用基因工程技術(shù)調(diào)控植物激素代謝，可實(shí)現(xiàn)作物改良。下列相關(guān)敘述不合理的是()A．用特異啟動(dòng)子誘導(dǎo)表達(dá)iaaM(生長(zhǎng)素合成基因)可獲得無(wú)子果實(shí)B．大量表達(dá)ipt(細(xì)胞分裂素合成關(guān)鍵基因)可抑制芽的分化C．提高ga2ox(氧化赤霉素的酶基因)的表達(dá)水平可獲得矮化品種D．在果實(shí)中表達(dá)acs(乙烯合成關(guān)鍵酶基因)的反義基因可延遲果實(shí)成熟答案：B解析：生長(zhǎng)素能促進(jìn)果實(shí)發(fā)育，用特異啟動(dòng)子誘導(dǎo)表達(dá)iaaM(生長(zhǎng)素合成基因)可獲得無(wú)子果實(shí)，A不符合題意；大量表達(dá)ipt(細(xì)胞分裂素合成關(guān)鍵基因)，細(xì)胞分裂素含量升高，細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的比例高時(shí)，有利于芽的分化，B符合題意；赤霉素能促進(jìn)細(xì)胞伸長(zhǎng)，從而引起莖稈伸長(zhǎng)和植物增高，提高ga2ox(氧化赤霉素的酶基因)的表達(dá)水平使赤霉素含量降低從而能獲得矮化品種，C不符合題意；乙烯有催熟作用，在果實(shí)中表達(dá)acs(乙烯合成關(guān)鍵酶基因)的反義基因，即是抑制乙烯的合成，果實(shí)成熟會(huì)延遲，D不符合題意。3．天然的玫瑰沒(méi)有藍(lán)色花，這是由于缺少控制藍(lán)色色素合成的基因B，而開(kāi)藍(lán)色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B?，F(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍(lán)玫瑰，下列操作對(duì)的是()A．提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的DNA，再擴(kuò)增基因BB．運(yùn)用限制性?xún)?nèi)切核酸酶從開(kāi)藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫(kù)中獲取基因BC．運(yùn)用DNA聚合酶將基因B與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞D．將基因B直接導(dǎo)入大腸桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細(xì)胞答案：A解析：提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA，逆轉(zhuǎn)錄得到DNA，然后擴(kuò)增，可獲得大量的基因B，A正確；從基因文庫(kù)中獲取目的基因，只要根據(jù)目的基因的相關(guān)信息和基因文庫(kù)中的信息進(jìn)行篩選對(duì)比即可，不需要用限制酶進(jìn)行切割，B錯(cuò)誤；目的基因與質(zhì)粒的連接需要用DNA連接酶，而不是DNA聚合酶，C錯(cuò)誤；目的基因需要和運(yùn)載體連接后形成重組質(zhì)粒再導(dǎo)入，并且應(yīng)當(dāng)用農(nóng)桿菌進(jìn)行感染，而不是大腸桿菌，D錯(cuò)誤。4．研究人員利用E.coliDNA連接酶將藥用蛋白基因與一系列調(diào)控元件、質(zhì)粒等構(gòu)建成重組質(zhì)粒后，將其導(dǎo)入哺乳動(dòng)物的受精卵中，由該受精卵發(fā)育成的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物進(jìn)入泌乳期后，可通過(guò)分泌乳汁來(lái)生產(chǎn)藥用蛋白。利用上述乳腺生物反應(yīng)器，科學(xué)家已獲得了種類(lèi)繁多的醫(yī)藥產(chǎn)品。下列說(shuō)法正確的是()A．質(zhì)粒是一種只存在于原核細(xì)胞擬核DNA外、具有自我復(fù)制能力的環(huán)狀DNA分子B．E.coliDNA連接酶只能將具有互補(bǔ)黏性末端的DNA片段連接起來(lái)C．構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)使用的啟動(dòng)子應(yīng)能啟動(dòng)藥用蛋白基因在任意細(xì)胞中表達(dá)D．“將重組質(zhì)粒導(dǎo)入哺乳動(dòng)物的受精卵中”是乳腺生物反應(yīng)器制作的核心工作答案：B解析：質(zhì)粒是一種獨(dú)立于真核細(xì)胞(如酵母菌)的細(xì)胞核或原核細(xì)胞(如細(xì)菌)擬核之外，并具有自我復(fù)制能力的環(huán)狀雙鏈DNA分子，A錯(cuò)誤；E.coliDNA連接酶只能將具有互補(bǔ)黏性末端的DNA片段連接起來(lái)，不能連接具有平末端的DNA片段，B正確；構(gòu)建重組質(zhì)粒時(shí)使用的啟動(dòng)子應(yīng)能啟動(dòng)藥用蛋白基因在乳腺細(xì)胞中表達(dá)，C錯(cuò)誤；基因表達(dá)載體的構(gòu)建是乳腺生物反應(yīng)器制作的核心工作，D錯(cuò)誤。故選B。5．利用生物工程改造生物特性，從而生產(chǎn)人類(lèi)所需的產(chǎn)品。下列有關(guān)措施的敘述中，不正確的是()A．利用基因突變?cè)砼嘤缮a(chǎn)人干擾素的酵母菌B．利用基因突變?cè)砼嘤汕嗝顾馗弋a(chǎn)菌株C．利用基因工程手段培育成生產(chǎn)人胰島素的大腸桿菌D．利用細(xì)胞工程技術(shù)培育成脫毒苗答案：A解析：利用基因工程即基因重組原理培育成生產(chǎn)人干擾素的酵母菌，A錯(cuò)誤；利用基因突變?cè)砼嘤汕嗝顾馗弋a(chǎn)菌株，該方法是誘變育種，B正確；利用基因工程手段培育成生產(chǎn)人胰島素的大腸桿菌，該過(guò)程的原理是基因重組，C正確；利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)可培育成脫毒苗，該過(guò)程的原理是植物細(xì)胞全能性，植物組織培養(yǎng)技術(shù)屬于細(xì)胞工程技術(shù)，D正確。故選A。6．(2025·浙江杭州高三階段練習(xí))科學(xué)家利用蛋白質(zhì)工程研制賴(lài)脯胰島素，與天然胰島素相比，賴(lài)脯胰島素經(jīng)皮下注射后易吸收、起效快。圖示為利用大腸桿菌制備工程菌獲取賴(lài)脯胰島素的操作過(guò)程，以下敘述錯(cuò)誤的是()A．該技術(shù)屬于第二代基因工程，需對(duì)基因進(jìn)行改造或合成B．該技術(shù)能改造現(xiàn)有的蛋白質(zhì)，也能制造一種新的蛋白質(zhì)C．圖中①②過(guò)程可同時(shí)發(fā)生D．基因表達(dá)過(guò)程中，物質(zhì)a若發(fā)生變化，物質(zhì)b一定改變答案：D解析：該技術(shù)是蛋白質(zhì)工程，是在基因工程的基礎(chǔ)上，延伸出來(lái)的第二代基因工程，操作對(duì)象也是DNA，需對(duì)基因進(jìn)行改造或合成，A正確；蛋白質(zhì)工程是以蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿(mǎn)足人類(lèi)的生產(chǎn)和生活的需求，B正確；圖中①為轉(zhuǎn)錄，②為翻譯，大腸桿菌是原核生物，沒(méi)有核膜，轉(zhuǎn)錄和翻譯可同時(shí)進(jìn)行，C正確；物質(zhì)a為mRNA，mRNA序列改變，由于密碼子的簡(jiǎn)并，最終編碼的氨基酸序列可能不變，D錯(cuò)誤。故選D。7．(2025·鐵嶺模擬)轉(zhuǎn)基因作物的推廣種植，大幅提高了糧食產(chǎn)量，取得了巨大的經(jīng)濟(jì)效益和生態(tài)效益；碩果累累的轉(zhuǎn)基因作物相關(guān)研究在帶給人們喜悅的同時(shí)，也促使人們關(guān)注轉(zhuǎn)基因作物的安全性問(wèn)題。下列有關(guān)轉(zhuǎn)基因作物安全性的敘述，錯(cuò)誤的是()A．抗性基因可能會(huì)隨花粉傳播到田間近緣野生植物體內(nèi)，造成基因污染B．轉(zhuǎn)入抗性基因的植物可能成為“入侵物種”，影響生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性C．大面積種植轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉，有可能會(huì)導(dǎo)致棉鈴蟲(chóng)群體中相關(guān)抗性基因頻率增加D．只要目的基因來(lái)自自然界，培育出的轉(zhuǎn)基因植物就不會(huì)有安全性問(wèn)題答案：D解析：轉(zhuǎn)基因作物與近緣野生植物雜交，抗性基因可能隨花粉傳播到近緣野生植物體內(nèi)，造成基因污染，A正確；轉(zhuǎn)基因生物具有某些特殊性質(zhì)，它們?cè)谀车貐^(qū)的競(jìng)爭(zhēng)能力較強(qiáng)，可能成為“外來(lái)物種”，威脅生態(tài)系統(tǒng)中其他生物的存在，從而影響生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性，B正確；大面積種植轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉，棉鈴蟲(chóng)有抗性基因的個(gè)體數(shù)量會(huì)增加，可能導(dǎo)致其群體相關(guān)抗性基因頻率增加，C正確；即使目的基因來(lái)自自然界，培育出的轉(zhuǎn)基因植物仍然可能會(huì)有安全性問(wèn)題，D錯(cuò)誤。二、非選擇題8．(2025·黑龍江黑河高三階段練習(xí))天然β淀粉酶大多耐熱性差，不利于工業(yè)化應(yīng)用。我國(guó)學(xué)者借助PCR改造β－淀粉酶基因，并將改造的基因與pLN23質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌，最終獲得耐高溫的β－淀粉酶?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)上述過(guò)程屬于________工程。(2)PCR中使用的聚合酶屬于________(填寫(xiě)編號(hào))。①以DNA為模板的RNA聚合酶②以RNA為模板的RNA聚合酶③以DNA為模板的DNA聚合酶④以RNA為模板的DNA聚合酶(3)某天然β－淀粉酶由484個(gè)氨基酸構(gòu)成，研究發(fā)現(xiàn)，將該酶第476位天冬氨酸替換為天冬酰胺，耐熱性明顯提升。在圖1所示的β－淀粉酶基因改造方案中，含已替換堿基的引物是________(填寫(xiě)編號(hào))。(4)為了使上述改造后的基因能在大腸桿菌中高效表達(dá)，由圖2所示的pLN23質(zhì)粒構(gòu)建得到基因表達(dá)載體。除圖示信息外，基因表達(dá)載體中還應(yīng)該有目的基因(即改造后的基因)和________。(5)目的基因(不含EcoRⅠ酶切位點(diǎn))全長(zhǎng)為1.5kb，將其插入BamHⅠ位點(diǎn)。用EcoRⅠ酶切來(lái)自于不同大腸桿菌菌落的質(zhì)粒DNA，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳確定DNA片段長(zhǎng)度，這一操作的目的是____________________________。正確連接的基因表達(dá)載體被EcoRⅠ酶切后長(zhǎng)度為_(kāi)_______kb。答案：(1)蛋白質(zhì)(2)③(3)②(4)標(biāo)記基因(5)篩選導(dǎo)入目的基因的大腸桿菌5.7解析：(1)根據(jù)蛋白質(zhì)的功能改變基因的結(jié)構(gòu)，最終獲得耐高溫的β－淀粉酶，這屬于蛋白質(zhì)工程。(2)PCR的原理是DNA雙鏈復(fù)制，利用的酶是耐熱的DNA聚合酶，合成子鏈時(shí)是以DNA為模板。(3)根據(jù)β－淀粉酶的編碼序列，替換的堿基在編碼序列中，則利用的引物應(yīng)該把編碼序列全部擴(kuò)增在內(nèi)，則所用的引物是②③。由題干信息可知，該酶是第476位天冬氨酸替換為天冬酰胺，說(shuō)明改變的堿基在編碼序列的后方，所以含已替換堿基的引物是②。(4)作為基因工程載體的質(zhì)粒應(yīng)該包含：復(fù)制原點(diǎn)、限制酶的切割位點(diǎn)、標(biāo)記基因、啟動(dòng)子和終止子，根據(jù)圖示的表達(dá)載體可知應(yīng)還要包括目的基因和標(biāo)記基因。(5)目的基因通過(guò)表達(dá)載體導(dǎo)入大腸桿菌中，用EcoRⅠ酶切來(lái)自不同大腸桿菌菌落的質(zhì)粒DNA，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳確定DNA片段長(zhǎng)度，這一操作的目的是篩選出導(dǎo)入目的基因的大腸桿菌。正確連接的基因表達(dá)載體只有一個(gè)EcoRⅠ酶切位點(diǎn)，則切割后的長(zhǎng)度為4.2＋1.5＝5.7kb。B組一、選擇題1．(2025·河北邯鄲高三開(kāi)學(xué)考試)生物技術(shù)與工程學(xué)相結(jié)合，可研究、設(shè)計(jì)和加工生產(chǎn)各種生物工程產(chǎn)品。下列敘述正確的是()A．由于外植體在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中不感染病毒，用任何外植體都可制備脫毒苗B．胚胎移植作為胚胎工程的“第一道工序”，推動(dòng)了胚胎工程其他技術(shù)的研究和應(yīng)用C．PCR反應(yīng)過(guò)程可以在PCR擴(kuò)增儀中自動(dòng)完成，而后常用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR的產(chǎn)物D．蛋白質(zhì)工程僅以蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ)逆中心法則進(jìn)行，就可以改造或制造新的蛋白質(zhì)答案：C解析：雖然外植體在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中不感染病毒，但外植體可能本身攜帶病毒，因此不是用任何外植體都可制備脫毒苗，一般用莖尖制備脫毒苗，A錯(cuò)誤；胚胎移植作為胚胎工程的最后技術(shù)環(huán)節(jié)，推動(dòng)了胚胎工程其他技術(shù)的研究和應(yīng)用，B錯(cuò)誤；PCR反應(yīng)過(guò)程可以在PCR擴(kuò)增儀中自動(dòng)完成，PCR的產(chǎn)物的分子量大小不同，因此常用瓊脂糖凝膠電泳來(lái)鑒定PCR的產(chǎn)物，C正確；蛋白質(zhì)工程是指以蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)規(guī)律及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)，通過(guò)基因修飾或基因合成，對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行基因改造，或制造一種新的蛋白質(zhì)，以滿(mǎn)足人類(lèi)的生產(chǎn)和生活的需要，D錯(cuò)誤。故選C。2．(2024·華南師大適應(yīng)性練習(xí))丙酮被廣泛用作生產(chǎn)塑料的原料和有機(jī)溶劑。熱乙酸穆?tīng)柺暇芤詺錇槟茉?，利用CO2或CO生產(chǎn)乙酸。研究團(tuán)隊(duì)去除了該微生物生成乙酸的相關(guān)基因，然后導(dǎo)入了其他基因，這樣可以抑制乙酸的生成并促進(jìn)丙酮的合成。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A．基因工程成功的原因之一是不同生物的DNA結(jié)構(gòu)相同B．基因工程中的目的基因可以人工合成并通過(guò)PCR進(jìn)行擴(kuò)增C．導(dǎo)入的其他基因需要與啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起D．檢測(cè)該微生物中新的基因是否表達(dá)，可采用DNA分子雜交技術(shù)答案：D解析：基因工程成功的原因之一是不同生物的DNA具有相同的雙螺旋結(jié)構(gòu)，A正確；基因工程中的目的基因獲取方式有多種，可以人工合成并通過(guò)PCR進(jìn)行擴(kuò)增，也可以從基因文庫(kù)中獲取，B正確；基因工程中需要目的基因在受體細(xì)胞中表達(dá)，就要將目的基因與該細(xì)胞的啟動(dòng)子等調(diào)控組件重組在一起，C正確；檢測(cè)該微生物中新的基因是否表達(dá)，可采用抗原—抗體雜交技術(shù)，D錯(cuò)誤。3．(2024·T8聯(lián)盟)為了提高玉米的抗蟲(chóng)能力，研究員將H與S兩種抗蟲(chóng)基因構(gòu)建成融合基因，共同導(dǎo)入植物體內(nèi)。圖1為構(gòu)建表達(dá)載體所用質(zhì)粒，圖2是H－S融合基因兩側(cè)序列，圖3為部分限制酶的識(shí)別序列。下列敘述正確的是()A．卡那霉素抗性基因可以用來(lái)篩選導(dǎo)入目的基因的植物細(xì)胞B．目的基因和質(zhì)粒應(yīng)該同時(shí)用酶B與酶C來(lái)切割，確保不會(huì)發(fā)生反向連接和自身環(huán)化C．該玉米同時(shí)轉(zhuǎn)入兩種抗性基因可延緩害蟲(chóng)抗性基因頻率增加D．重組質(zhì)粒中仍有酶A的切割位點(diǎn)答案：C解析：卡那霉素抗性基因位于T－DNA之外的區(qū)域，只能與重組質(zhì)粒一起導(dǎo)入農(nóng)桿菌細(xì)胞，用于篩選導(dǎo)入目的基因的農(nóng)桿菌細(xì)胞，只有T－DNA上的潮霉素抗性基因才能用于篩選導(dǎo)入目的基因的植物細(xì)胞，A錯(cuò)誤；質(zhì)粒應(yīng)用酶A和酶B切割，避免破壞T－DNA，B錯(cuò)誤；相比于導(dǎo)入一種抗性基因，同時(shí)導(dǎo)入兩種抗性基因可以減緩害蟲(chóng)對(duì)抗性基因的選擇，從而延緩抗性基因頻率增加，C正確；酶A與酶C的識(shí)別序列相比，酶C的識(shí)別序列特異性更低，酶A與酶C切割后產(chǎn)生的黏性末端互補(bǔ)后形成的連接位點(diǎn)只能被酶C識(shí)別，而不能被酶A識(shí)別，D錯(cuò)誤。4．(2024·黑龍江部分高中二模)為增加玉米的抗旱性，科研人員構(gòu)建含有某微生物抗旱基因E的重組質(zhì)粒，并采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將其轉(zhuǎn)入玉米幼胚組織細(xì)胞中，用E蛋白的抗體進(jìn)行抗原—抗體雜交檢測(cè)后，經(jīng)進(jìn)一步鑒定，篩選出抗旱的轉(zhuǎn)基因玉米。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A．通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄得到的抗旱基因E中不含啟動(dòng)子、內(nèi)含子和終止子B．抗原—抗體雜交檢測(cè)呈陽(yáng)性的植株還要通過(guò)抗旱實(shí)驗(yàn)進(jìn)行篩選C．要得到轉(zhuǎn)基因植株還要用到植物細(xì)胞融合技術(shù)D．用CaCl2處理農(nóng)桿菌可讓其主動(dòng)吸收重組質(zhì)粒答案：C解析：由mRNA(經(jīng)剪切加工，無(wú)啟動(dòng)子、終止子和內(nèi)含子對(duì)應(yīng)的序列)經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄得到的抗旱基因E中不含啟動(dòng)子、內(nèi)含子和終止子，A正確；抗原—抗體雜交檢測(cè)呈陽(yáng)性只能說(shuō)明E基因成功表達(dá)，植物是否具有抗旱能力，還要通過(guò)抗旱實(shí)驗(yàn)進(jìn)行篩選，B正確；要得到轉(zhuǎn)基因植物，會(huì)用到植物組織培養(yǎng)技術(shù)，不需要用到植物細(xì)胞融合技術(shù)，C錯(cuò)誤；用CaCl2處理農(nóng)桿菌可讓其處于一種能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，使其主動(dòng)吸收重組質(zhì)粒，D正確。5．(多選)(2025·承德統(tǒng)考)基因治療是指用正?；蛉〈蛐扪a(bǔ)患者細(xì)胞中有缺陷的基因，從而達(dá)到治療疾病的目的，其過(guò)程如圖所示(圖中×表示該基因的功能被替換)。下列推測(cè)或敘述正確的是()A．白化病患者、唐氏綜合征患者都可通過(guò)基因治療被治愈B．可通過(guò)基因檢測(cè)來(lái)判斷正?；蚴欠癖怀晒?dǎo)入患者細(xì)胞C．獲得正常基因的個(gè)體不一定能將正?；蜻z傳給后代D．相比于多基因遺傳病，單基因遺傳病基因治療的難度可能更小答案：BCD解析：白化病患者是常染色體隱性遺傳病，可通過(guò)基因治療被治愈，而唐氏綜合征患者是由于多了一條21號(hào)染色體，不可通過(guò)基因治療被治愈，A錯(cuò)誤；基因檢測(cè)是通過(guò)血液、其他體液或細(xì)胞對(duì)DNA進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)，正?；蛴刑囟ǖ男蛄校赏ㄟ^(guò)基因檢測(cè)來(lái)判斷正?；蚴欠癖怀晒?dǎo)入患者細(xì)胞，B正確；獲得正?；虻募?xì)胞若不是生殖細(xì)胞，則個(gè)體不能將正?；蜻z傳給后代，C正確；多基因遺傳病是由多個(gè)基因決定的，且環(huán)境因素對(duì)其影響較大，相比于多基因遺傳病，單基因遺傳病基因治療的難度可能更小，D正確。6．(多選)甲醇酵母菌是基因工程中常用的受體菌，它可以高效表達(dá)外源蛋白，但自身蛋白分泌到培養(yǎng)基的較少。研究人員將人的膠原蛋白基因?qū)爰状冀湍钢胁⒊晒Ρ磉_(dá)。下列有關(guān)敘述正確的是()A．用兩種酶切割目的基因和質(zhì)粒，可防止目的基因反向連接和質(zhì)粒的自身環(huán)化B．常用顯微注射法將膠原蛋白基因?qū)爰状冀湍钢蠧．與大腸桿菌相比，甲醇酵母作受體菌所表達(dá)出的膠原蛋白與人體產(chǎn)生的膠原蛋白結(jié)構(gòu)更相近D．與其他酵母菌相比，甲醇酵母作受體菌便于表達(dá)出的膠原蛋白的分離與純化答案：ACD解析：常用Ca2＋處理微生物細(xì)胞，使其處于一種能吸收周?chē)h(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，然后再將重組目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞，B錯(cuò)誤；與大腸桿菌作受體相比，甲醇酵母為真核生物，表達(dá)出的膠原蛋白經(jīng)過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的加工，所以與人體產(chǎn)生的膠原蛋白結(jié)構(gòu)更相近，C正確；與其他酵母菌相比，甲醇酵母可以高效表達(dá)外源蛋白，但自身蛋白分泌到培養(yǎng)基的較少，便于目的蛋白的分離和純化，D正確。7．(多選)(2025·邯鄲模擬)科研人員以β－甘露葡萄糖酶為核心研究材料，在其N(xiāo)端找到了兩個(gè)關(guān)鍵的氨基酸位點(diǎn)，將這兩個(gè)位點(diǎn)的組氨酸和脯氨酸都替換為酪氨酸后，其熱穩(wěn)定性得到了顯著提高。下列說(shuō)法正確的是()A．細(xì)胞內(nèi)合成改造后的高熱穩(wěn)定性蛋白質(zhì)的過(guò)程遵循中心法則B．替換蛋白質(zhì)中的氨基酸實(shí)際上可通過(guò)改造基因中的堿基序列實(shí)現(xiàn)C．在分子水平上，可利用PCR等技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)是否合成了新的目的蛋白質(zhì)D．制備過(guò)程中應(yīng)先獲得目標(biāo)蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)，再預(yù)期其生物學(xué)功能答案：AB解析：細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的合成過(guò)程要經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄和翻譯，遵循中心法則，A正確；蛋白質(zhì)是DNA經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)錄、翻譯得到的，所以替換蛋白質(zhì)中的氨基酸實(shí)際上可通過(guò)改造基因中的堿基序列實(shí)現(xiàn)，B正確；PCR等技術(shù)能檢測(cè)目的基因是否導(dǎo)入細(xì)胞或是否轉(zhuǎn)錄，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)是否合成了新的蛋白質(zhì)可使用抗原—抗體雜交法，C錯(cuò)誤；蛋白質(zhì)工程要先預(yù)期目標(biāo)蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能，再設(shè)計(jì)該蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)，D錯(cuò)誤。二、非選擇題8．(2024·貴州遵義一模)植物細(xì)胞中提取的高甜度蛋白質(zhì)由一條多肽鏈構(gòu)成，常作為食品工業(yè)中糖類(lèi)的替代品，但其熱穩(wěn)定性較差，植物中的提取率極低。科研人員通過(guò)基因編輯技術(shù)改造甜蛋白SB基因，以提升甜蛋白的穩(wěn)定性和在大腸桿菌中的產(chǎn)量。技術(shù)路線(xiàn)如圖所示：(1)改造甜蛋白SB基因首先需分析甜蛋白的________序列，再改造基因的堿基序列，從而獲得新SB基因，通過(guò)________技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，用于基因表達(dá)載體的構(gòu)建。(2)用限制酶NruⅠ、NoeⅠ、BamHⅠ分別切割目的基因和質(zhì)粒，能成功構(gòu)建PXasD質(zhì)粒的原因是__________________________________，再通過(guò)____________將二者連接起來(lái)。(3)選用引物1和引物2對(duì)PXasD質(zhì)粒中的SB基因進(jìn)行PCR，再電泳檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)條帶不唯一，其原因可能是______________________(答出一點(diǎn)即可)；對(duì)于PCR電泳結(jié)果符合預(yù)期的質(zhì)粒，通常需要進(jìn)一步通過(guò)基因檢測(cè)確認(rèn)，原因是_________________________________________________________________________________________________________________________________________。(4)將PXasD質(zhì)粒導(dǎo)入用________處理后的大腸桿菌中，培養(yǎng)一段時(shí)間后，從中提取大量甜蛋白，但經(jīng)科研人員檢測(cè)后，提取到的甜蛋白甜度不夠，原因可能是___