TNAIA0351-2024葡萄酒中布魯塞爾酒香酵母的檢測實時熒光PCR法_第1頁
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ICSCCSC T/NAIA0351-PCR法IdentificationofDekkerabruxellensisinwineReal-timePCRmethod2024-12-25發(fā) 2025-01-01實寧夏化學分析測試協(xié) 發(fā)T/NAIA0351-T/NAIA0351- 本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定T/NAIA0351-T/NAIA0351-PCR本文件規(guī)定了葡萄酒中布魯塞爾德克酵母的實時熒光PCRGB/T GB/T 實時熒光 Real-time在PCR反應體系中加入熒光基團，通過熒光信號的積累實時監(jiān)控整個PCRCt Cycle除另有規(guī)定外，試劑為分析純或生化試劑。實驗用水符合GB6682的要求。所有試劑均用無DNA酶DNAAPCR1.5mL離心管，50mL離心管，PCRPCR分析天平（0.1mg）在樣本制備區(qū)進行。取45mL酒樣置于具有無菌螺旋塞的50mL離心管中，9000r/min離心5min，棄DNA采用等效的真菌基因組DNA提取試劑盒進行DNAPCR表 實時熒光PCR反應體體積2至注1：空白對照實驗時，用ddH2ODNAPCR實時熒光PCR反應參數(shù)為：95℃30s；95℃5s、60℃30s，40個循環(huán)，在每次循環(huán)的退火時收集熒FAM熒光信號檢出，Ct值FAM熒光信號檢出，Ct值FAMFAM通道出現(xiàn)典型的擴增曲線，Ct值在符合9.1Ct值≤35.0Ct值≥40.035.0＜Ct值＜40.0Ct35.0＜Ct值＜40.0，則判定Ct值≥40.0，測判定被檢樣品陰性。按照GB/T27403-2008附錄D附錄（資料性真菌基因組DNA提取試劑盒（離心柱型）DNA以某真菌基因組DNA提取試劑盒（離心柱型）K（10mg/mL12000r/min離心2min12000r/min離心1min，12000r/min至少重復步驟2.6將吸

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