ICS65.150

CCSB50

12

天津市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB12/T1359—2024

水產(chǎn)養(yǎng)殖用非規(guī)范藥品中喹諾酮類(lèi)、磺胺類(lèi)、

酰胺醇類(lèi)抗生素殘留的測(cè)定液相色譜-質(zhì)

譜/質(zhì)譜法

Determinationofquinolones,sulfonamidesandamidolantibioticresiduesin

non-standarddrugsforaquaculturebyliquidchromatography-tandemmass

spectrometry

2024-11-27發(fā)布2025-01-01實(shí)施

天津市市場(chǎng)監(jiān)督管理委員會(huì)發(fā)布

DB12/T1359—2024

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由天津市農(nóng)業(yè)農(nóng)村委提出并歸口。

本文件起草單位：天津市農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)與農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心、山東省科學(xué)院海洋儀器儀表研

究所。

本文件主要起草人：陳永平、成振華、王輝、韓現(xiàn)芹、時(shí)文博、史艷艷、高麗娜、王愿寧、高麗、

李灝、曹建新、易偉、蘇夢(mèng)寒。

1

DB12/T1359—2024

水產(chǎn)養(yǎng)殖用非規(guī)范藥品中喹諾酮類(lèi)、磺胺類(lèi)、酰胺醇類(lèi)抗生素殘留

的測(cè)定液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法

1范圍

本文件規(guī)定了水產(chǎn)養(yǎng)殖用非規(guī)范藥品中喹諾酮類(lèi)、磺胺類(lèi)、酰胺醇類(lèi)抗生素留量測(cè)定的原理、試劑

和材料、儀器、分析步驟、結(jié)果計(jì)算、正確度與精密度。

本文件適用于水產(chǎn)養(yǎng)殖用非規(guī)范藥品中諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、培氟沙星、洛

美沙星、磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺甲基異噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺多辛、磺胺喹噁

啉、磺胺異噁唑、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考共17種抗生素殘留量檢測(cè)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法

GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

非規(guī)范藥品non-standarddrugs

水產(chǎn)養(yǎng)殖過(guò)程中用來(lái)凈化水質(zhì)、改良地質(zhì)、除雜等的非藥品，包括水質(zhì)改良劑、底質(zhì)改良劑、微生

態(tài)制劑、除雜劑及促生長(zhǎng)劑等。

4原理

非規(guī)范藥品中喹諾酮類(lèi)、磺胺類(lèi)、酰胺醇類(lèi)抗生素，先加水溶解或稀釋?zhuān)儆盟峄译孑腿?，?jīng)固

相萃取柱凈化，液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法檢測(cè)，內(nèi)標(biāo)法定量。

5試劑材料

除非另有說(shuō)明，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

5.1試劑

5.1.1甲醇（CH3OH，CAS號(hào)：67-56-1）：色譜純。

5.1.2乙腈（CH3CN，CAS號(hào)：75-05-8）：色譜純。

5.1.3甲酸（HCOOH，CAS號(hào)：64-18-6）：色譜純。

2

DB12/T1359—2024

5.1.4二氯甲烷（CH2Cl2，CAS號(hào)：75-09-2）：分析純。

5.1.5乙酸乙酯（C4H8O2，CAS號(hào)：141-78-6）：分析純。

5.1.6氯化鈉（NaCl，CAS號(hào)：7647-14-5）：分析純。

5.1.7乙酸銨（CH3COONH4，CAS號(hào)：631-61-8）：分析純。

5.2溶液配制

5.2.1乙酸銨（2.0mmoL/L）-甲酸溶液（0.1%）：稱(chēng)取0.077g無(wú)水乙酸銨，用0.1%甲酸水溶液溶解

并稀釋至500mL。

5.2.2甲醇-水溶液（15+85，體積比）：量取甲醇15mL加入85mL水中，混勻。

5.2.3甲酸-乙腈（0.1+99.9，體積比）：量取甲酸0.5mL，加乙腈稀釋至500mL，混勻。

5.3標(biāo)準(zhǔn)品

17種抗生素類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)符合附錄A，純度≥95%。

5.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

5.4.1標(biāo)準(zhǔn)貯備液

100μg/mL。取諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、磺胺嘧啶、磺

胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲基異噁唑、磺胺多辛、磺胺喹惡啉、磺胺異噁唑、氯

霉素、甲砜霉素、氟苯尼考各適量（相當(dāng)于各活性成分10mg），精密稱(chēng)定，于各自容量瓶中，喹諾酮

類(lèi)需加0.2mL甲酸，均用甲醇溶解后并稀釋定容至100mL，配制成濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。避

光-18℃以下保存，有效期1年。

5.4.2氘代同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

500μg/mL。取氘代磺胺鄰二甲氧嘧啶、氘代磺胺間二甲氧嘧啶、氘代諾氟沙星、氘代環(huán)丙沙星、

氘代恩諾沙星、氘代氯霉素內(nèi)標(biāo)各適量（相當(dāng)于各活性成分5mg），精密稱(chēng)定，于各自容量瓶中，用甲

醇溶解稀釋定容至10mL。配制成濃度為500μg/mL同位素內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，避光-18℃以下保存，有

效期1年。

5.4.3喹諾酮類(lèi)與磺胺類(lèi)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液

準(zhǔn)確吸取各喹諾酮類(lèi)和磺胺類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.4.1）適量，用甲醇稀釋制成1.0μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)工

作液，避光4℃冷藏保存，有效期1個(gè)月。

5.4.4酰胺醇類(lèi)混合標(biāo)準(zhǔn)工作液

準(zhǔn)確吸取各酰胺醇類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.4.1）適量，用甲醇稀釋制成氯霉素、氟苯尼考0.1μg/mL，

甲砜霉素0.5μg/mL混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，避光4℃冷藏保存，有效期1個(gè)月。

5.4.5磺胺類(lèi)與喹諾酮類(lèi)混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液：

準(zhǔn)確吸取各磺胺類(lèi)和喹諾酮類(lèi)內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.4.2）適量，用甲醇稀釋制成10.0μg/mL混合

標(biāo)準(zhǔn)工作液，避光4℃冷藏保存，有效期1個(gè)月。

5.4.6酰胺醇類(lèi)混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工作液

準(zhǔn)確吸取各酰胺醇類(lèi)內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.4.2）適量，用甲醇稀釋制成1.0μg/mL混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)工

作液，避光4℃冷藏保存，有效期1個(gè)月。

3

DB12/T1359—2024

5.5材料

通過(guò)式固相萃取柱，200mg/6mL，或性能相當(dāng)者。

6儀器

6.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧（ESI）離子源。

6.2分析天平：感量0.01g、0.01mg。

6.3高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速大于10000r/min。

6.4超聲波震蕩儀。

6.5渦旋振蕩器。

6.6氮吹儀。

6.7粉碎裝置：如杵或研缽。

6.8篩：篩孔為1mm金屬網(wǎng)。

7試樣制備

7.1試樣制備

7.1.1固態(tài)非規(guī)范藥品

按GB/T20195的規(guī)定制備試樣，至少100g，粉碎使其全部通過(guò)1.0mm孔徑的分析篩，裝入密閉容

器中備用。

7.1.2液態(tài)非規(guī)范藥品

將樣液過(guò)0.45μm濾膜，收集樣液體積20mL，于密閉容器中保存。

7.2試樣保存

將試樣于4℃及以下條件下保存。

8分析步驟

8.1樣品處理

稱(chēng)取非規(guī)范藥品0.1g（準(zhǔn)確至0.01g)，用水稀釋至100mL，渦旋1min，超聲波超聲5min，取5mL

置于50mL離心管中，加入50μL混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)使用液（5.4.5、5.4.6），加入2.0gNaCl，再加入10mL

酸化乙腈，渦旋1min，超聲波超聲5min，8000r/min離心3min，取上清液過(guò)固相萃取柱于20mL玻璃

離心管中，再加入5mL酸化乙腈，重復(fù)上述操作，2mL乙腈淋洗固相萃取柱，合并收集液于40℃條件

下，氮?dú)獯抵两?，殘留物加入甲醇溶液?.2.2）1mL，充分渦旋混勻，轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中，20000

r/min離心5min，取上清液過(guò)0.2μm有機(jī)相濾膜后，取100μL濾液，用甲醇溶液（5.2.2）定容至10.0

mL，上機(jī)測(cè)定。

注：對(duì)在本實(shí)驗(yàn)條件下測(cè)定濃度過(guò)高或過(guò)低時(shí)，應(yīng)適當(dāng)增加或降低稀釋倍數(shù)。

8.2測(cè)定

8.2.1磺胺類(lèi)與喹諾酮類(lèi)

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DB12/T1359—2024

8.2.1.1色譜條件

8.2.1.1.1色譜柱：C18色譜柱，1.7μm，100mm×2.1mm（內(nèi)徑），或性能相當(dāng)。

8.2.1.1.2柱溫：35℃。

8.2.1.1.3流速：0.25mL/min。

8.2.1.1.4進(jìn)樣體積：5.0μL。

8.2.1.1.5流動(dòng)相：甲醇-（乙酸銨-甲酸溶液，5.2.1）；洗脫程序見(jiàn)表1。

表1流動(dòng)相梯度洗脫程序

時(shí)間（min）VA/%VB/%

11090

64060

6.19010

89010

8.11090

101090

8.2.1.2質(zhì)譜條件

8.2.1.2.1離子化模式：電噴霧離子源（ESI+），多反應(yīng)監(jiān)測(cè)。

8.2.1.2.2噴霧電壓：5500v。

8.2.1.2.3氣簾氣壓力：0.24MPa。

8.2.1.2.4碰撞氣壓力：0.02MPa。

8.2.1.2.5離子源溫度：550℃。

8.2.1.2.6碰撞室入口電壓：10v。

8.2.1.2.7碰撞室出口電壓：10v。

8.2.1.2.8駐留時(shí)間：50ms。

8.2.1.2.9離子源Gas1：0.6MPa。

8.2.1.2.10離子源Gas2：0.2MPa。

8.2.1.2.11多反應(yīng)監(jiān)測(cè)母離子、子離子、解簇電壓和碰撞能量見(jiàn)表2。

表2多反應(yīng)監(jiān)測(cè)母離子、子離子、解簇電壓和碰撞能量

母離子子離子解簇電壓碰撞能量

目標(biāo)化合物

m/zm/zvev

1088522

磺胺噻唑256

156*8516

1088525

磺胺嘧啶251

156*8516

1088522

磺胺甲基異噁唑254

156*8516

1868517

磺胺二甲嘧啶279

156*8519

1728517

磺胺甲基嘧啶265

156*8517

5

DB12/T1359—2024

1088529

磺胺多辛311

156*8519

1088529

磺胺喹噁啉301

156*8519

1088525

磺胺異噁唑268

156*8517

233.48526

諾氟沙星320.3

276.3*8526

245.38535

環(huán)丙沙星332.2

288.3*8525

245.2*9039

恩諾沙星360.2

316.39027

2618527

氧氟沙星362

318*8518

2908518

培氟沙星334

316*8520

2658522

洛美沙星352

308*8516

氘代諾氟沙星325.3307.28530

氘代環(huán)丙沙星340.3322.38529

氘代恩諾沙星365.3321.39428

氘代磺胺間二甲氧

3171568520

嘧啶

氘代磺胺鄰二甲氧

3141568517

嘧啶

注：*為定量碎片離子

8.2.1.3標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)

分別準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)工作液適量，甲醇溶液（5.2.1）定容至1mL，喹諾酮類(lèi)與磺胺類(lèi)稀釋成質(zhì)量濃

度為5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL、200ng/mL，內(nèi)標(biāo)液濃度均為50ng/mL。

8.2.2酰胺醇類(lèi)測(cè)定

8.2.2.1色譜條件

8.2.2.1.1色譜柱：C18色譜柱，1.7μm，100mm×2.1mm（內(nèi)徑），或性能相當(dāng)。

8.2.2.1.2柱溫：35℃。

8.2.2.1.3流動(dòng)相：甲醇-水；流動(dòng)相洗脫程序見(jiàn)表3。

8.2.2.1.4流速：0.3mL/min。

8.2.2.1.5進(jìn)樣體積：5.0μL。

表3流動(dòng)相梯度洗脫程序

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時(shí)間（min）VA/%VB%

11090

64060

6.19010

89010

8.11090

101090

8.2.2.2質(zhì)譜條件

8.2.2.2.1離子化模式：電噴霧離子源（ESI-），多反應(yīng)監(jiān)測(cè)。

8.2.2.2.2噴霧電壓：-5500v。

8.2.2.2.3氣簾氣壓力：0.24MPa。

8.2.2.2.4碰撞氣壓力：0.02MPa。

8.2.2.2.5離子源溫度：550℃。

8.2.2.2.6碰撞室入口電壓：10v。

8.2.2.2.7碰撞室出口電壓：10v。

8.2.2.2.8駐留時(shí)間：100ms。

8.2.2.2.9離子源Gas1：0.6MPa。

8.2.2.2.10離子源Gas2：0.2MPa。

8.2.2.2.11多反應(yīng)監(jiān)測(cè)母離子、子離子、解簇電壓和碰撞能量見(jiàn)表4。

表4多反應(yīng)監(jiān)測(cè)母離子、子離子、解簇電壓和碰撞能量

母離子子離子解簇電壓碰撞能量

目標(biāo)化合物

m/zm/zvev

152*-55-24

氯霉素321

257-55-18

290-55-18

甲砜霉素354

185*-55-27

185-55-14

氟苯尼考356

336*-55-27

氘代氯霉素334.1318.1*-55-26

注：*為定量碎片離子

8.2.2.3標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)

分別準(zhǔn)確移取標(biāo)準(zhǔn)工作液適量，甲醇溶液（5.2.1）定容至1mL，氯霉素、氟苯尼考稀釋至0.5ng/mL、

1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL，甲砜霉素稀釋至2.5ng/mL、5.0ng/mL、

10.0ng/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL，內(nèi)標(biāo)液濃度均為5.0ng/mL，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)

譜儀測(cè)定。

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8.2.3定性和定量

8.2.3.1保留時(shí)間

被測(cè)試樣中目標(biāo)物色譜峰的保留時(shí)間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時(shí)間相比較，相對(duì)誤差應(yīng)在±2.5%之

內(nèi)。

8.2.3.2離子豐度比

在相同實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行樣品測(cè)定時(shí)，如果檢出的色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)樣品相一致，同一檢測(cè)批

次，對(duì)同一化合物，樣品中目標(biāo)化合物的離子豐度比與質(zhì)量濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液相比，其允許相對(duì)偏差

不超過(guò)表5規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在目標(biāo)物。

表5定性時(shí)離子豐度比最大允許偏差

離子豐度比（%）＞50＞20～50＞10～20≤10

允許相對(duì)偏差(%)±20±25±30±50

8.2.3.3定量

內(nèi)標(biāo)法定量，其中磺胺異噁唑、磺胺喹噁啉、磺胺多辛以氘代磺胺間二甲氧嘧啶為內(nèi)標(biāo)，磺胺噻唑、

磺胺嘧啶、磺胺甲基異噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲基嘧啶以氘代磺胺鄰二甲氧嘧啶為內(nèi)標(biāo)，氯霉素、

甲砜霉素、氟苯尼考以氘代氯霉素為內(nèi)標(biāo)。在上述液相色譜-質(zhì)譜條件下,標(biāo)準(zhǔn)溶液中特征離子質(zhì)量色譜

圖見(jiàn)附錄B。

8.2.4試樣溶液測(cè)定

將標(biāo)準(zhǔn)工作液和試樣溶液依次注入液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀中，保留時(shí)間和離子豐度比定性，測(cè)

得定量用子離子色譜峰面積，待測(cè)樣液中化合物的響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測(cè)的定量測(cè)定線(xiàn)性范圍之內(nèi)。

8.2.5平行試驗(yàn)

按以上步驟對(duì)同一試樣進(jìn)行平行試驗(yàn)測(cè)定。

8.2.6空白試驗(yàn)

除不加試樣外，采用完全相同的測(cè)定步驟進(jìn)行平行測(cè)定。

9結(jié)果計(jì)算

試樣中各藥物殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì)，單位為毫克每千克（mg/kg），按公式（1）或公式（2）計(jì)

算。

AAV1000

1i1

AsAism1000

V1000

22

m1000

式中：

——試樣中被測(cè)物殘留量的數(shù)值，單位為毫克每千克（mg/kg）；

8

DB12/T1359—2024

1——標(biāo)準(zhǔn)工作液中被測(cè)物的質(zhì)量濃度數(shù)值，單位為毫克每升（mg/L）；

2——標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(xiàn)中得到的試樣溶液中被測(cè)物的質(zhì)量濃度數(shù)值，單位為毫克每升（mg/L）；

A——試樣溶液中被測(cè)物的質(zhì)量色譜圖峰面積；

As——標(biāo)準(zhǔn)工作液中被測(cè)物的質(zhì)量色譜圖峰面積；

Ai——試樣溶液中內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量色譜圖峰面積；

Ais——標(biāo)準(zhǔn)工作液中內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量色譜圖峰面積；

V——提取液體積的數(shù)值，單位為毫升（mL）；

m——試樣質(zhì)量數(shù)值，單位為（g）.

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的2次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，保留2位有效數(shù)字，含量超1

mg/kg時(shí)保留3位有效數(shù)字。

10正確度和精密度

10.1正確度

磺胺類(lèi)、喹諾酮類(lèi)、酰胺醇類(lèi)測(cè)定回收率為70%～110%。

10.2精密度

本方法的批內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%，批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%。

11其他

本實(shí)驗(yàn)條件下非規(guī)范藥品中喹諾酮類(lèi)、磺胺類(lèi)定量限為1.0mg/kg；氯霉素、氟苯尼考定量限為0.1

mg/kg，氟苯尼考定量限為0.5mg/kg。

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DB12/T1359—2024

A

A

附錄A

（規(guī)范性）

17種抗生素中英文對(duì)照索引

17種抗生素中英文對(duì)照索引，見(jiàn)表A.1。

表A.117種抗生素中英文對(duì)照索引

序號(hào)藥物中文名藥物英文名CAS號(hào)分子式

1諾氟沙星Norfloxacin70458-96-7C16H18FN3O3

2環(huán)丙沙星Ciprofloxacin85721-33-1C17H18FN3O3

3恩諾沙星Enrofloxacin93106-60-6C19H22FN3O3

4氧氟沙星Ofloxacin82419-36-1C18H20FN3O4

5培氟沙星Pefloxacin70458-92-3C17H20FN3O3

6洛美沙星Lomefloxacin98079-51-7C17H19F2N3O3

7磺胺噻唑Sulfathiazole72-14-0C9H9N3O2S2

8磺胺嘧啶Sulfadiazine68-35-9C10H10N4O2S

9磺胺甲基異噁唑Sulfamethoxazole723-46-6C10H11N3O3S

10磺胺二甲嘧啶Sulfam