研究黃芪精中黃芪甲苷一．產(chǎn)品概況OTC產(chǎn)品，為補(bǔ)血養(yǎng)氣，固本止汗之良藥。其療效佳，口感好，攜帶方便。

YangtzeRiverPharmaceuticalGroup揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)二.小組概況

(一)小組簡(jiǎn)介

制表人：張集盤日期：2006.3.20YangtzeRiverPharmaceuticalGroup揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)(二)QC小組成員一覽表制表人：張集盤日期：2006.3.20三．選擇課題1.薄層掃描法測(cè)定黃芪精中黃芪甲苷含量的缺陷分析基線不穩(wěn)定耗時(shí)長(zhǎng)易出現(xiàn)鬼峰偏差大缺陷51.1.掃描時(shí)基線不穩(wěn)定61.2.容易出現(xiàn)鬼峰71.3.檢測(cè)偏差大，方法的準(zhǔn)確性較差8大家應(yīng)該也有點(diǎn)累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流91.4.薄層板展開耗時(shí)長(zhǎng)，且一塊薄層板只能點(diǎn)一個(gè)批號(hào)的供試品，檢測(cè)批次很有限，導(dǎo)致出成品檢測(cè)報(bào)告的周期較長(zhǎng)。1.5.按照部頒標(biāo)準(zhǔn)，以薄層掃描法（TLCS）對(duì)黃芪精中黃芪甲苷進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果如下。10黃芪精按部頒標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定結(jié)果制表人：張集盤日期：2005.11.3TLCS法測(cè)定本品含量時(shí)偏差大，不利于產(chǎn)品質(zhì)量的控制。112.課題確定

研究黃芪精中黃芪甲苷含量測(cè)定的新方法可供直接借鑒的方法少黃芪化學(xué)成分復(fù)雜黃芪為君藥黃芪甲苷為主要有效成分12四.設(shè)定目標(biāo)擬制定黃芪精中黃芪甲苷含量測(cè)定的新方法的回收率不低于90%；含量測(cè)定結(jié)果的相對(duì)平均偏差小于2.0%。13五．提出并選擇最佳方案1.提出方案（1）HPLC-UV（高效液相色譜-紫外檢測(cè)器）法（2）HPLC-RI（高效液相色譜-示差折光檢測(cè)器）法（3）HPLC-ELSD（高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器）法142.方案的分析、評(píng)估與確定1516備注：可操作性、準(zhǔn)確性、經(jīng)濟(jì)性三個(gè)指標(biāo)均以1分（●一般）、3分（▲良好）、5分（■顯著）為評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，上述綜合得分為QC小組成員所評(píng)分?jǐn)?shù)的總和。173.確定方案的采用順序（3）HPLC-ELSD（高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)器）法（1）HPLC-UV（高效液相色譜-紫外檢測(cè)器）法（2）HPLC-RI（高效液相色譜-示差折光檢測(cè)器）法PDCA18六．制定對(duì)策

根據(jù)以上選擇的最佳方案制訂對(duì)策表192021制表人：張集盤日期：2005.11.422七．對(duì)策實(shí)施實(shí)施一：色譜條件的確定1.儀器與試藥

Agilent1100高效液相色譜儀；Attech2000蒸發(fā)光散射檢測(cè)器；梅特勒AG285電子天平。

黃芪精；天津農(nóng)藥總廠D101型大孔吸附樹脂；甲醇、乙腈為色譜純；95%乙醇為分析純；水為超純水。232.對(duì)照品溶液的制備取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解，配制成0.1mg?ml-1的對(duì)照品溶液。3.供試品溶液的制備精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水10ml，搖勻，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次20ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?0ml使溶解，0.45μm有機(jī)系微孔濾膜濾過，即得。244.色譜條件的確定25色譜條件篩選圖1色譜柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5μm）流動(dòng)相：乙腈-水(40：60)柱溫：40℃流速：1.2ml·min-1min24681012mAu100200300400500600700ADC1A,ADC1CHANNELA(ZJP\HQJ21528.D)1.4057.91726色譜條件篩選圖2色譜柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5μm）流動(dòng)相：乙腈-水(40：60)柱溫：40℃流速：1.0ml·min-127色譜條件篩選圖3色譜柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5μm）流動(dòng)相：乙腈-水(40：60)柱溫：40℃流速：0.9ml·min-128色譜條件篩選圖4色譜柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5μm）流動(dòng)相：乙腈-水(40：60)柱溫：40℃流速：0.9ml·min-129色譜條件篩選圖5色譜柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5μm）流動(dòng)相：乙腈-水(32：68)柱溫：40℃流速：1.0ml·min-130色譜條件篩選圖6色譜柱：AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5μm）流動(dòng)相：乙腈-水(32：68)柱溫：40℃流速：1.0ml·min-131色譜條件篩選圖7色譜柱：DikmaDiamonsilTM（鉆石）C18柱(4.6×250mm,5μm)流動(dòng)相：乙腈-水(40：60)柱溫：40℃流速：1.0ml·min-1前延峰32色譜條件選擇情況匯總表制表人：馬軍日期：2005.11.2033

因此，可以選擇AgilentXDB-C18柱（4.6×150mm，5μm）、以乙腈-水(32：68)為流動(dòng)相，流速為1.0ml·min-1進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。34實(shí)施二：供試品前處理方法的選擇

1.供試品溶液的制備精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水10ml，搖勻，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次20ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱，以水50ml洗脫，棄去水液，再用A％乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用B％乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，即得。35

2.提取分離條件的確定收集上述水液和各擬棄去的乙醇洗脫液，蒸干，加甲醇適量使溶解，得溶液C按照上述色譜條件分別進(jìn)樣20μl，記錄色譜峰面積。36制表人:盧晶晶日期:2005.12.1037試驗(yàn)結(jié)果表明：（1）棄去的水液中目標(biāo)物無損失；（2）當(dāng)A=40，即采用40%乙醇洗脫時(shí)，目標(biāo)物有損失；（3）當(dāng)B=60，即繼續(xù)采用60%乙醇洗脫時(shí)，則目標(biāo)物洗脫不完全。因此確定A%、B%的最佳值分別為：30%、70%，并以此值確定的提取分離條件進(jìn)行后續(xù)方法學(xué)的驗(yàn)證。38實(shí)施三：線性關(guān)系的確定取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇溶解并稀釋至8個(gè)系列濃度,分別進(jìn)樣10μl，測(cè)定峰面積，以對(duì)照品濃度X(mg?ml-1)的lg值為橫坐標(biāo)，峰面積積分值Y的lg值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：

Y=0.1819X+1.9515r=0.999239工作曲線評(píng)價(jià)：結(jié)果表明黃芪甲苷在76.560～255.20μg?ml-1

范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。40實(shí)施四：精密度試驗(yàn)取同一供試品溶液，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10μl，測(cè)得黃芪甲苷色譜峰峰面積平均值為978.57883，RSD為0.5%。41制表人：祖若玉日期：2006.2.742繪圖人：祖若玉日期：2006.2.7評(píng)價(jià)：精密度良好，達(dá)到預(yù)期目標(biāo)。43實(shí)施五：重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(hào)樣品，制備6份供試品溶液，分別精密吸取對(duì)照品溶液10μl、20μl，供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積值，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得黃芪甲苷的含量。44重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果制表人：張集盤日期：2006.2.1445

繪圖人：張集盤日期：2006.2.14評(píng)價(jià)：重復(fù)性試驗(yàn)RSD為1.2%，達(dá)到預(yù)期目標(biāo)。46實(shí)施六：穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，于0、2、4、6、12、

14h分別精密吸取10μl注入液相色譜儀分析，測(cè)得峰面積值，計(jì)算RSD。47穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果制表人：盧晶晶日期：2006.2.2048繪圖人：盧晶晶日期：2006.2.20

評(píng)價(jià)：上述結(jié)果表明供試品溶液在14h內(nèi)穩(wěn)定性良好。49實(shí)施七：方法回收率試驗(yàn)

精密吸取已知含量同一批號(hào)樣品5ml，6份，分別精密加入已知濃度的對(duì)照品溶液5ml，制備溶液，分別進(jìn)樣10μl，測(cè)得峰面積值，計(jì)算平均回收率和RSD。50回收率測(cè)定結(jié)果（n=6）制表人：張集盤日期：2006.2.2651評(píng)價(jià)：平均回收率為96.76%，RSD為1.91%，表明方法準(zhǔn)確度良好，可以用于本品的定量分析。52評(píng)價(jià)1.初步評(píng)價(jià)建立了黃芪精中黃芪甲苷含量測(cè)定的新方法，方法學(xué)研究符合《中國(guó)藥典》2005年版（一部）附錄“中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則”。532.綜合評(píng)價(jià)

取本品3批，將兩法的含量測(cè)定結(jié)果進(jìn)行對(duì)比。5455繪圖人：陸莉娟日期：2006.3.956評(píng)價(jià)：采用HPLC-ELSD法測(cè)定黃芪精中黃芪甲苷含量比采用TLCS法測(cè)定時(shí)的相對(duì)平均偏差小，測(cè)定的結(jié)果較理想。57八.效果檢查1.效果驗(yàn)證取不同批號(hào)的黃芪精，依法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣10μl，測(cè)得峰面積值，并計(jì)算黃芪甲苷含量。10批樣品含量測(cè)定結(jié)果見下表。5810批樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=4）596061上表數(shù)據(jù)反映出新的分析方法測(cè)定結(jié)果較理想，QC活動(dòng)取得了良好的效果。622.效果二活動(dòng)前后相對(duì)平均偏差柱狀圖

繪圖人：張集盤日期：2006.3.12633.效果三(社會(huì)效益)此次QC活動(dòng),解決了薄層掃描法進(jìn)行黃芪精中黃芪甲苷含量測(cè)定時(shí)基線不穩(wěn)定、易出現(xiàn)鬼峰、檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)及偏差大等問題,有助于正確地評(píng)價(jià)該產(chǎn)品的質(zhì)量和穩(wěn)定性。同時(shí)，本次QC活動(dòng)的成果已形成“部頒標(biāo)準(zhǔn)升國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)”的材料供藥檢所審核。64成果確認(rèn)表九.標(biāo)準(zhǔn)化將新的檢測(cè)方法形成文件，載入企