第57課時(shí)微生物的培養(yǎng)技術(shù)與應(yīng)用課標(biāo)要求1.通過(guò)配制培養(yǎng)基、滅菌、接種和培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)操作獲得純化的酵母菌菌落。2.分離土壤中分解尿素的細(xì)菌，并進(jìn)行計(jì)數(shù)?？记榉治?.微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)2023·全國(guó)乙·T·天津·T32021·天津·T12.微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)2023·山東·T·廣東·T·北京·T·全國(guó)甲·T372022·全國(guó)乙·T·廣東·T·江蘇·T18考點(diǎn)一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)1．培養(yǎng)基的配制(1)培養(yǎng)基的概念、用途和類(lèi)型①概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出的供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。②用途：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。③培養(yǎng)基的種類(lèi)(按物理性質(zhì)分)培養(yǎng)基種類(lèi)培養(yǎng)基特點(diǎn)作用固體培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂微生物的分離與鑒定，活菌計(jì)數(shù)，保藏菌種半固體培養(yǎng)基容器放倒不致流出，劇烈震動(dòng)則破散觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類(lèi)鑒定液體培養(yǎng)基不加凝固劑常用于工業(yè)生產(chǎn)、微生物的擴(kuò)大培養(yǎng)(2)培養(yǎng)基的配方①主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽。②其他條件：pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣。如表：微生物乳酸桿菌霉菌細(xì)菌厭氧微生物特殊需求添加維生素一般pH調(diào)至酸性一般pH調(diào)至中性或弱堿性無(wú)氧2.無(wú)菌技術(shù)(1)目的：獲得純凈的微生物培養(yǎng)物。(2)關(guān)鍵：防止雜菌污染。(3)消毒與滅菌的比較項(xiàng)目消毒滅菌作用強(qiáng)度較為溫和的理化因素強(qiáng)烈的理化因素作用程度殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物殺死物體內(nèi)外所有的微生物芽孢和孢子一般不能殺滅能殺滅適用對(duì)象實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和雙手微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等常用方法煮沸消毒法、巴氏消毒法等濕熱滅菌法、干熱滅菌法、灼燒滅菌法等(4)注意事項(xiàng)①實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周?chē)奈锲方佑|。②為避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在超凈工作臺(tái)上并在酒精燈火焰附近進(jìn)行。3．微生物的純培養(yǎng)概念辨析4．純培養(yǎng)的過(guò)程(以酵母菌為例)：包括配制培養(yǎng)基、滅菌、接種、分離和培養(yǎng)等步驟。(1)制備培養(yǎng)基倒平板注意事項(xiàng)：a.溫度：50℃左右；b.操作：在酒精燈火焰附近；c.冷凝后平板倒置。提醒平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，將平板倒置，既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，又可以避免培養(yǎng)基中的水分過(guò)快揮發(fā)。(2)接種和分離酵母菌①平板劃線(xiàn)法的原理：通過(guò)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線(xiàn)的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線(xiàn)后培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。②平板劃線(xiàn)法的操作步驟(3)培養(yǎng)酵母菌將接種后的平板和一個(gè)未接種的平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48h。判斷正誤(1)培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽，有時(shí)還需要加入一些特殊的物質(zhì)(√)(2)倒平板時(shí)，應(yīng)將打開(kāi)的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上(×)提示倒平板時(shí)，用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，將錐形瓶中的培養(yǎng)基(10～20mL)倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，不能打開(kāi)皿蓋。(3)為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)趁熱快速挑取菌落(×)提示接種環(huán)灼燒滅菌后，應(yīng)冷卻后再挑取菌落，以免高溫殺死菌種。(4)對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和滅菌(×)提示對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。發(fā)酵生產(chǎn)啤酒的過(guò)程中，雜菌產(chǎn)生的微量副產(chǎn)物是啤酒“上頭”的原因之一，可采用平板劃線(xiàn)法對(duì)酵母菌進(jìn)行純化。如圖是平板劃線(xiàn)操作的示意圖，據(jù)圖回答下列問(wèn)題：(1)用圖中字母和箭頭表示平板劃線(xiàn)操作的正確步驟：d→b→f→a→e→c→h→g。(2)在劃線(xiàn)操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？提示需要；劃線(xiàn)結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者。(3)在第二次以及其后的劃線(xiàn)操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始劃線(xiàn)？提示劃線(xiàn)后，線(xiàn)條末端菌種的數(shù)目比線(xiàn)條起始處要少，每次從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始，能使菌種的數(shù)目隨著劃線(xiàn)次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)微生物繁殖而來(lái)的菌落。(4)接種結(jié)束后，為什么要將一個(gè)未接種的培養(yǎng)基和一個(gè)已接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)，未接種的培養(yǎng)基表面如果有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明了什么？提示培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基的作用是對(duì)照，未接種的培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的；若有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基滅菌不徹底，或培養(yǎng)基被污染了，需要重新制備。考向一微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)1．(2020·江蘇，19)為純化菌種，在鑒別培養(yǎng)基上劃線(xiàn)接種纖維素降解細(xì)菌，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是()A．倒平板后需間歇晃動(dòng)，以保證表面平整B．圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落C．該實(shí)驗(yàn)結(jié)果因單菌落太多，不能達(dá)到菌種純化的目的D．菌落周?chē)睦w維素被降解后，可被剛果紅染成紅色答案B解析溫度降低后，培養(yǎng)基易凝固，因此倒平板后要及時(shí)輕輕晃動(dòng)，以保持均一性，A錯(cuò)誤；由題圖可知，隨著劃線(xiàn)次數(shù)增多，細(xì)菌密度逐漸減小，Ⅲ區(qū)開(kāi)始出現(xiàn)單菌落，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，B正確；菌落是由單個(gè)微生物細(xì)胞或多個(gè)同種細(xì)胞繁殖到一定程度后形成的，能得到單菌落即可以達(dá)到菌種純化的目的，C錯(cuò)誤；剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物，菌落周?chē)睦w維素被降解后紅色消失，出現(xiàn)透明圈，D錯(cuò)誤。2.(2021·山東，20)含硫蛋白質(zhì)在某些微生物的作用下產(chǎn)生硫化氫導(dǎo)致生活污水發(fā)臭。硫化氫可以與硫酸亞鐵銨結(jié)合形成黑色沉淀。為探究發(fā)臭水體中甲、乙菌是否產(chǎn)生硫化氫及兩種菌的運(yùn)動(dòng)能力，用穿刺接種的方法，分別將兩種菌接種在含有硫酸亞鐵銨的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，如圖所示。若兩種菌繁殖速度相等，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A．乙菌的運(yùn)動(dòng)能力比甲菌強(qiáng)B．為不影響菌的運(yùn)動(dòng)需選用液體培養(yǎng)基C．該實(shí)驗(yàn)不能比較出兩種菌產(chǎn)生硫化氫的量D．穿刺接種等接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染答案B解析從圖中可以看出甲菌在試管中分布范圍小于乙菌，說(shuō)明了乙菌的運(yùn)動(dòng)能力比甲菌強(qiáng)，A正確；為不影響菌的運(yùn)動(dòng)需選用半固體培養(yǎng)基，B錯(cuò)誤；該實(shí)驗(yàn)可以根據(jù)黑色沉淀的多少初步比較菌產(chǎn)生硫化氫的能力，但不能測(cè)定產(chǎn)生硫化氫的量，C正確；微生物接種技術(shù)的核心是防止雜菌的污染，D正確?？键c(diǎn)二微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)1．區(qū)分選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基種類(lèi)特點(diǎn)用途舉例選擇培養(yǎng)基允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)從眾多微生物中分離所需的微生物以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基分離得到尿素分解菌鑒別培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品，進(jìn)而產(chǎn)生特定的顏色或其他變化鑒別不同種類(lèi)的微生物用伊紅—亞甲藍(lán)培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌提醒常見(jiàn)選擇培養(yǎng)基舉例：(1)缺少氮源的培養(yǎng)基可以篩選能利用大氣中N2的微生物。(2)含青霉素的培養(yǎng)基可淘汰細(xì)菌，篩選出真菌。(3)無(wú)有機(jī)碳源的培養(yǎng)基可篩選出自養(yǎng)微生物。2．微生物的選擇培養(yǎng)和數(shù)量測(cè)定(1)稀釋涂布平板法步驟①系列稀釋操作：該操作常用在將細(xì)胞接種到培養(yǎng)基之前，通過(guò)液體稀釋的方法分散細(xì)胞，隨著稀釋程度的增大，單位體積中的微生物細(xì)胞數(shù)量減少，細(xì)胞得以分散。操作步驟：②涂布平板操作步驟(2)微生物的數(shù)量測(cè)定方法①顯微鏡直接計(jì)數(shù)法提醒顯微鏡直接計(jì)數(shù)法本身不能區(qū)分細(xì)菌的死活，但是通過(guò)一定的輔助處理，可以實(shí)現(xiàn)活菌計(jì)數(shù)，如在計(jì)數(shù)前用臺(tái)盼藍(lán)染液進(jìn)行染色，可以通過(guò)統(tǒng)計(jì)無(wú)色細(xì)胞的個(gè)數(shù)來(lái)對(duì)活菌進(jìn)行計(jì)數(shù)。②間接計(jì)數(shù)法——活菌計(jì)數(shù)法(即稀釋涂布平板法)a．原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)單菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。b．計(jì)數(shù)原則：為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。c．誤差分析：用此種方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)目往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低(填“高”或“低”)，因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。3．土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)的實(shí)驗(yàn)操作(1)實(shí)驗(yàn)原理(2)實(shí)驗(yàn)流程(3)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評(píng)價(jià)判斷正誤(1)利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)就是活菌的實(shí)際數(shù)(×)提示當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的是一個(gè)菌落，故稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目少。(2)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)為保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)目最多的平板進(jìn)行統(tǒng)計(jì)(×)提示統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目時(shí)為保證結(jié)果準(zhǔn)確，在同一稀釋度下，應(yīng)至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值。(3)利用稀釋涂布平板法和平板劃線(xiàn)法均可實(shí)現(xiàn)細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)(×)提示利用稀釋涂布平板法和平板劃線(xiàn)法均可實(shí)現(xiàn)細(xì)菌的分離，但平板劃線(xiàn)法不能用于微生物的計(jì)數(shù)。(4)利用顯微鏡直接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的細(xì)菌數(shù)量就是活菌的數(shù)量(×)提示顯微鏡直接計(jì)數(shù)法不能區(qū)分細(xì)菌的死活，因此統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般是活菌數(shù)和死菌數(shù)的總和。在發(fā)酵生產(chǎn)啤酒過(guò)程中，要隨時(shí)檢測(cè)培養(yǎng)液中的酵母菌數(shù)量、產(chǎn)物濃度等，以了解發(fā)酵進(jìn)程。甲、乙、丙三位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一培養(yǎng)液的酵母菌數(shù)。在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下三種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。(1)甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230，該同學(xué)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果是否真實(shí)可靠？為什么？提示不可靠；為增加實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性，應(yīng)設(shè)置重復(fù)實(shí)驗(yàn)，在同一稀釋度下至少涂布3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)結(jié)果后計(jì)算平均值。(2)乙同學(xué)在該濃度下涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學(xué)將21舍去，然后取平均值。該同學(xué)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的處理是否合理？為什么？提示不合理；微生物計(jì)數(shù)時(shí)，如果實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)重復(fù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果差別很大的情況，應(yīng)分析實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能的影響因素，找出差異的原因，而不能簡(jiǎn)單地將結(jié)果舍棄后進(jìn)行計(jì)數(shù)。(3)在稀釋涂布平板法中，為何需至少涂布3個(gè)平板？提示作為重復(fù)實(shí)驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)時(shí)取平均值，以減少偶然因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的說(shuō)服力。(4)為什么要選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果？提示盡量縮小統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)與實(shí)際活菌數(shù)的差值，因?yàn)榉敝陈木w開(kāi)始看不出明顯的菌落特征。(5)丙同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為234個(gè)(涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL)，那么稀釋倍數(shù)為106的試管中細(xì)菌的濃度是2.34×103個(gè)/mL。每克樣品中的細(xì)菌數(shù)是2.34×109個(gè)。歸納總結(jié)考向二目標(biāo)微生物的篩選與鑒定3.(2023·廣東，10)研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線(xiàn)(如圖)和選擇培養(yǎng)基篩選原理來(lái)判斷，下列最可能篩選到目標(biāo)菌的條件組合是()A．a(chǎn)點(diǎn)時(shí)取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B．b點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C．b點(diǎn)時(shí)取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D．c點(diǎn)時(shí)取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基答案D解析研究目的是篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌，因此目標(biāo)菌既要耐高溫，又要能夠高效降解角蛋白，所以應(yīng)在c點(diǎn)時(shí)取樣，并且用角蛋白氮源培養(yǎng)基進(jìn)行選擇培養(yǎng)，D符合題意。4．(2022·江蘇，3)下列是某同學(xué)分離高產(chǎn)脲酶菌的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，不合理的是()A．選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B．在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C．適當(dāng)稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D．可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌答案D解析農(nóng)田或公園土壤中含有較多的產(chǎn)脲酶的微生物，A正確；為了篩選可分解尿素的細(xì)菌，配制的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，能合成脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長(zhǎng)，B正確；當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，C正確；在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會(huì)使培養(yǎng)基的pH升高，酚紅指示劑將變紅，因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，能對(duì)分離的菌種做進(jìn)一步鑒定，D錯(cuò)誤。考向三微生物的分離與計(jì)數(shù)5．(不定項(xiàng))(2021·江蘇，18)為提高一株石油降解菌的凈化能力，將菌涂布于石油為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，以致死率為90%的輻照劑量誘變處理。下列敘述不合理的是()A．將培養(yǎng)基分裝于培養(yǎng)皿中后滅菌，可降低培養(yǎng)基污染的概率B．涂布用的菌濃度應(yīng)控制在30～300個(gè)/mLC．需通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)考察輻射時(shí)間對(duì)存活率的影響，以確定最佳誘變時(shí)間D．挑取培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的較大單菌落，純化后進(jìn)行降解效率分析答案AB解析培養(yǎng)基應(yīng)先滅菌再分裝于培養(yǎng)皿中，A錯(cuò)誤；涂布時(shí)所用菌液一般為0.1mL，平板上的菌落數(shù)應(yīng)為30～300，涂布用的菌濃度應(yīng)控制在300～3000個(gè)/mL，B錯(cuò)誤；需通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)考察輻射時(shí)間對(duì)存活率的影響，再進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)，以確定最佳誘變時(shí)間，C正確；石油降解菌能分解石油獲得碳源，形成菌落，挑取培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的較大單菌落，純化后進(jìn)行降解效率分析，以獲得能高效降解石油的菌種，D正確。6．(2020·江蘇，31)產(chǎn)脂肪酶酵母可用于含油廢水處理。為篩選產(chǎn)脂肪酶酵母菌株，科研人員開(kāi)展了相關(guān)研究。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：(1)常規(guī)微生物實(shí)驗(yàn)中，下列物品及其滅菌方法錯(cuò)誤的是________(填編號(hào))。編號(hào)①②③④物品培養(yǎng)基接種環(huán)培養(yǎng)皿涂布器滅菌方法高壓蒸汽火焰灼燒干熱臭氧(2)稱(chēng)取1.0g某土壤樣品，轉(zhuǎn)入99mL無(wú)菌水中，制備成菌懸液，經(jīng)__________后，獲得細(xì)胞密度不同的菌懸液。分別取0.1mL菌懸液涂布在固體培養(yǎng)基上，其中10倍稀釋的菌懸液培養(yǎng)后平均長(zhǎng)出了46個(gè)酵母菌落，則該樣本中每克土壤約含酵母菌________個(gè)。(3)為了進(jìn)一步提高酵母菌產(chǎn)酶能力，對(duì)分離所得的菌株，采用射線(xiàn)輻照進(jìn)行____________育種。將輻照處理后的酵母菌涂布在以______為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時(shí)間后，按照菌落直徑大小進(jìn)行初篩，選擇直徑______的菌落，純化后獲得A、B兩突變菌株。(4)在處理含油廢水的同時(shí)，可獲得單細(xì)胞蛋白，實(shí)現(xiàn)污染物資源化。為評(píng)價(jià)A、B兩菌株的相關(guān)性能，進(jìn)行了培養(yǎng)研究，結(jié)果如圖。據(jù)圖分析，應(yīng)選擇菌株________進(jìn)行后續(xù)相關(guān)研究，理由是________________________________________________________________________。答案(1)④(2)等比稀釋4.6×105(或)(3)誘變脂肪較大(4)B該菌株增殖速度快，單細(xì)胞蛋白產(chǎn)量高；降解脂肪能力強(qiáng)，凈化效果好解析(2)利用稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)活菌數(shù)目時(shí)，需要將制備的菌懸液進(jìn)行等比稀釋?zhuān)垣@得細(xì)胞密度不同的菌懸液，一般來(lái)說(shuō)，菌落數(shù)為30～300的平板最適于計(jì)數(shù)。0.1mL菌懸液中含有46個(gè)酵母菌落，則1mL菌懸液中含有460個(gè)酵母菌落；1.0g土壤樣品首先稀釋100倍，然后稀釋10倍，共稀釋了1000倍，因此樣本中每克土壤約含酵母菌460×1000＝4.6×105(個(gè))。(3)采用射線(xiàn)輻照引起酵母菌基因突變，此種方法屬于誘變育種。檢查誘變酵母菌產(chǎn)脂肪酶的能力，需要把酵母菌接種到以脂肪為唯一碳源的培養(yǎng)基上，按照產(chǎn)生菌落直徑大小進(jìn)行初步篩選，直徑大的說(shuō)明產(chǎn)酶能力強(qiáng)，利用的脂肪(碳源)多，直徑小的說(shuō)明產(chǎn)酶能力弱，利用的脂肪(碳源)少。(4)通過(guò)分析題圖可知，相同時(shí)間內(nèi)，菌株B細(xì)胞密度大，說(shuō)明該菌株增殖速度快，單細(xì)胞蛋白產(chǎn)量高；相同時(shí)間內(nèi)，菌株B利用的脂肪多，脂肪剩余量少，說(shuō)明該菌株降解脂肪的能力強(qiáng)，凈化效果好。1．(選擇性必修3P10)培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源等。2．(選擇性必修3P11)無(wú)菌技術(shù)的選擇：對(duì)于一些不耐高溫的液體，如牛奶，可使用巴氏消毒法；用氯氣消毒水源；培養(yǎng)基一般采用濕熱滅菌法進(jìn)行滅菌；培養(yǎng)皿可以采用干熱滅菌法滅菌；接種環(huán)可以采用灼燒滅菌法滅菌。3．(選擇性必修3P13)平板劃線(xiàn)操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線(xiàn)前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線(xiàn)結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線(xiàn)時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線(xiàn)的末端，從而通過(guò)劃線(xiàn)次數(shù)的增加，使每次劃線(xiàn)時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單菌落。劃線(xiàn)結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。4．(選擇性必修3P16)選擇培養(yǎng)基是指在微生物學(xué)中，將允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。5．(選擇性必修3P19)檢測(cè)培養(yǎng)物中是否有雜菌污染的方法是同時(shí)培養(yǎng)滅菌后的未接種的培養(yǎng)基，觀察是否有菌落產(chǎn)生。判斷選擇培養(yǎng)基是否起到篩選作用的方法是配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對(duì)照，觀察選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)是否遠(yuǎn)少于牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目。6．(2023·新課標(biāo)，35節(jié)選)從豆科植物的根瘤中分離根瘤菌進(jìn)行培養(yǎng)，可以獲得純培養(yǎng)物，此實(shí)驗(yàn)中的純培養(yǎng)物是由根瘤菌繁殖形成的單菌落。7．(2021·廣東，21節(jié)選)基于菌株H嗜鹽、酸堿耐受能力強(qiáng)等特性，研究人員設(shè)計(jì)了一種不需要滅菌的發(fā)酵系統(tǒng)，其培養(yǎng)基鹽濃度設(shè)為60g/L，pH為10，菌株H可正常持續(xù)發(fā)酵60d以上。該系統(tǒng)不需要滅菌的原因是鹽濃度為60g/L的條件下，其他雜菌因失水過(guò)多而死亡；pH為10的條件下，其他雜菌的酶變性失活，生長(zhǎng)繁殖受抑制(答出兩點(diǎn)即可)。8．(2023·全國(guó)乙，37節(jié)選)在粉碎的秸稈中接種菌T，培養(yǎng)一段時(shí)間后發(fā)現(xiàn)菌T能夠?qū)⒔斩捴械睦w維素大量分解，其原因是菌T能夠分泌纖維素酶。9．(2022·河北，23節(jié)選)枯草芽孢桿菌為好氧微生物，液體培養(yǎng)時(shí)應(yīng)采用搖床震蕩(填“靜置”或“搖床震蕩”)培養(yǎng)。培養(yǎng)過(guò)程中抽樣檢測(cè)活菌數(shù)量時(shí)，應(yīng)采用稀釋涂布平板法(填“稀釋涂布平板法”或“顯微鏡直接計(jì)數(shù)法”)，其原因是用稀釋涂布平板法在培養(yǎng)基上看到的每一個(gè)菌落都來(lái)自一個(gè)活細(xì)胞，而顯微鏡直接計(jì)數(shù)法會(huì)將死亡的枯草芽孢桿菌也計(jì)算在內(nèi)。10．(2021·湖南，21節(jié)選)簡(jiǎn)要寫(xiě)出測(cè)定大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌活菌數(shù)的實(shí)驗(yàn)思路：將大熊貓新鮮糞便樣液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后，取0.1mL涂布到若干個(gè)平板(每個(gè)稀釋度至少涂布三個(gè)平板)，對(duì)菌落數(shù)為30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，則可根據(jù)公式推測(cè)大熊貓新鮮糞便中纖維素分解菌活菌數(shù)。課時(shí)精練一、選擇題：每小題給出的四個(gè)選項(xiàng)中只有一個(gè)符合題目要求。1．(2024·青島高三聯(lián)考)微生物培養(yǎng)時(shí)常利用無(wú)菌技術(shù)避免雜菌的污染。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A．配制好的培養(yǎng)基應(yīng)放入干熱滅菌箱中進(jìn)行干熱滅菌B．實(shí)驗(yàn)中避免已滅菌處理的材料用具與周?chē)锲方佑|C．接種前后的接種環(huán)都要在酒精燈火焰上進(jìn)行灼燒D．實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)實(shí)驗(yàn)室噴灑石炭酸同時(shí)配合紫外線(xiàn)照射答案A解析對(duì)培養(yǎng)基滅菌的方法是濕熱滅菌法，A錯(cuò)誤。2．(2023·淮安高三模擬)如圖為實(shí)驗(yàn)室中酵母菌純培養(yǎng)過(guò)程的部分操作步驟，下列說(shuō)法正確的是()A．微生物的純培養(yǎng)物就是指不含代謝廢物的微生物培養(yǎng)物B．步驟①中，用手觸摸估計(jì)培養(yǎng)基冷卻至室溫后開(kāi)始倒平板C．步驟①使用的培養(yǎng)基制備過(guò)程是先調(diào)pH再滅菌D．③到④過(guò)程中，每次劃線(xiàn)后都需要灼燒接種環(huán)并蘸取菌液答案C解析由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱(chēng)為純培養(yǎng)物，A錯(cuò)誤；步驟①中，用手觸摸估計(jì)培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時(shí)，開(kāi)始倒平板，B錯(cuò)誤；③到④過(guò)程中，每次劃線(xiàn)后對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒處理，是為了殺死接種環(huán)上殘留的菌種，使劃線(xiàn)時(shí)接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線(xiàn)的末端，不需要重新蘸取菌液，D錯(cuò)誤。3．(2021·山東，14)解脂菌能利用分泌的脂肪酶將脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收利用。脂肪酸會(huì)使醇溶青瓊脂平板變?yōu)樯钏{(lán)色。將不能直接吸收脂肪的甲、乙兩種菌分別等量接種在醇溶青瓊脂平板上培養(yǎng)。甲菌菌落周?chē)尸F(xiàn)深藍(lán)色，乙菌菌落周?chē)蛔兩?，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A．甲菌屬于解脂菌B．實(shí)驗(yàn)中所用培養(yǎng)基以脂肪為唯一碳源C．可將兩種菌分別接種在同一平板的不同區(qū)域進(jìn)行對(duì)比D．該平板可用來(lái)比較解脂菌分泌脂肪酶的能力答案B解析乙菌菌落周?chē)鷽](méi)有出現(xiàn)深藍(lán)色，說(shuō)明乙菌不能產(chǎn)生脂肪酶，不能利用脂肪為其供能，但乙菌可以在培養(yǎng)基上生存，說(shuō)明該培養(yǎng)基不是以脂肪為唯一碳源，B錯(cuò)誤。4．(2023·山東，15)平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說(shuō)法正確的是()A．不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)B．平板涂布時(shí)涂布器使用前必須進(jìn)行消毒C．接種后未長(zhǎng)出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄D．利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物答案D解析不含氮源的平板可用于固氮菌的培養(yǎng)，A錯(cuò)誤；平板涂布時(shí)涂布器使用前必須先浸在酒精中，然后在火焰上灼燒滅菌，這種操作屬于滅菌，B錯(cuò)誤；使用后的培養(yǎng)基即使未長(zhǎng)出菌落也要在丟棄前進(jìn)行滅菌處理，不能直接丟棄，以免污染環(huán)境，C錯(cuò)誤；脲酶可以催化尿素分解，在以尿素為唯一氮源的平板上，能合成脲酶的微生物可以分解尿素進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖，D正確。5．(2024·長(zhǎng)沙高三調(diào)研)為加速我國(guó)北方冬春季秸稈原位還田的腐化過(guò)程，研究人員以?xún)雠＜S為材料篩選出耐低溫(10℃)的纖維素降解菌。下列相關(guān)敘述正確的是()A．選用凍牛糞為材料與其富含纖維素及含耐低溫微生物有關(guān)B．初篩菌種前，要利用固體培養(yǎng)基在37℃條件下擴(kuò)大培養(yǎng)目標(biāo)菌種C．用于篩選的培養(yǎng)基是加入剛果紅染料的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基D．應(yīng)選擇菌落直徑與周?chē)该魅χ睆奖戎荡蟮木溥M(jìn)行純化答案A解析篩選耐低溫的纖維素降解菌需要到其所生活的環(huán)境中尋找，凍牛糞中富含纖維素和耐低溫微生物，所以選用凍牛糞為材料可篩選出耐低溫的纖維素降解菌，A正確；初篩菌種前，要利用液體培養(yǎng)基在10℃條件下擴(kuò)大培養(yǎng)目標(biāo)菌種，B錯(cuò)誤；用于篩選的培養(yǎng)基是以纖維素為唯一碳源的固體培養(yǎng)基，加入剛果紅染料起鑒別作用，C錯(cuò)誤；菌落直徑與透明圈直徑比值越小，分解纖維素的能力越強(qiáng)，應(yīng)選擇菌落直徑與周?chē)该魅χ睆奖戎敌〉木溥M(jìn)行純化，D錯(cuò)誤。6．(2024·萊蕪高三三模)野生型谷氨酸棒狀桿菌能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，精氨酸依賴(lài)型谷氨酸棒狀桿菌因缺乏將鳥(niǎo)氨酸轉(zhuǎn)化為精氨酸的酶不能在基本培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，但可作為鳥(niǎo)氨酸生產(chǎn)的優(yōu)良菌種。如圖為純化精氨酸依賴(lài)型谷氨酸棒狀桿菌(目的菌)的部分流程圖。下列相關(guān)敘述正確的是()注：①②③④代表培養(yǎng)基，a、b、c表示操作步驟，d、e為菌落。A．步驟a誘導(dǎo)菌種基因突變可增加突變株的數(shù)量B．步驟b用平板劃線(xiàn)法將菌種接種在②的表面C．培養(yǎng)基③因缺少精氨酸導(dǎo)致菌落數(shù)目比④少D．目的菌e擴(kuò)大培養(yǎng)后可用于工業(yè)化生產(chǎn)鳥(niǎo)氨酸答案C解析紫外線(xiàn)處理可以提高突變的頻率，a操作的目的是提高突變菌株的濃度，誘導(dǎo)菌種基因突變應(yīng)是題圖中進(jìn)行紫外線(xiàn)照射的那一步，A錯(cuò)誤；步驟b用稀釋涂布平板法將菌種接種在②的表面，B錯(cuò)誤；根據(jù)題干信息和圖示分析可知，圖中①②④為完全培養(yǎng)基，③為基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)基③因缺少精氨酸導(dǎo)致菌落數(shù)目比④少，C正確；從圖中可看出，d在基本培養(yǎng)基中無(wú)法生長(zhǎng)，在完全培養(yǎng)基中可生長(zhǎng)，說(shuō)明d是精氨酸依賴(lài)型菌落，目的菌d擴(kuò)大培養(yǎng)后可用于工業(yè)化生產(chǎn)鳥(niǎo)氨酸，D錯(cuò)誤。二、選擇題：每小題給出的四個(gè)選項(xiàng)中有一個(gè)或多個(gè)符合題目要求。7．(2024·婁底高三調(diào)研)研究人員擬從土壤樣品中分離出高效降解甲醇的酵母菌并進(jìn)行大量培養(yǎng)，操作流程如下。下列相關(guān)敘述正確的是()A．為保證無(wú)菌操作，接種環(huán)使用前必須干熱滅菌B．平板澆注分離法適宜于厭氧型或兼性厭氧型的微生物的分離和計(jì)數(shù)C．挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)菌落，分別測(cè)定酵母菌細(xì)胞中甲醇的含量D．為了獲得甲醇耐受酵母菌，可通過(guò)逐步提高培養(yǎng)基中甲醇的濃度來(lái)實(shí)現(xiàn)答案BD解析為保證無(wú)菌操作，接種環(huán)使用前必須灼燒滅菌，A錯(cuò)誤；挑取菌落時(shí)，應(yīng)挑取多個(gè)菌落，分別測(cè)定培養(yǎng)液中甲醇的含量，C錯(cuò)誤。8．(2024·張家界高三三模)為研究山藥儲(chǔ)藏過(guò)程中發(fā)生腐爛的原因，從多個(gè)品種中分離得到一種酵母菌。在不同條件下培養(yǎng)并用不同生防劑對(duì)這種酵母菌進(jìn)行研究，得到數(shù)據(jù)如圖(圖1不同生防劑的作用結(jié)果，圖2山藥酵母菌在不同pH下生長(zhǎng)情況)。下列相關(guān)說(shuō)法不正確的是()A．分離導(dǎo)致山藥腐爛的酵母菌可以通過(guò)多次稀釋涂布平板法實(shí)現(xiàn)B．可以根據(jù)酵母菌菌落大小、外觀及基因測(cè)序等方法進(jìn)行菌種鑒別C．生防劑的抑制率可以用(對(duì)照菌落直徑－處理菌落直徑)/處理菌落直徑×100%表示D．為防止山藥貯藏期間發(fā)生腐爛，可采用細(xì)黃鏈霉菌對(duì)山藥進(jìn)行處理，并適當(dāng)調(diào)高pH答案C解析稀釋涂布平板法是分離目的菌常用的接種方法，因此分離導(dǎo)致山藥腐爛的酵母菌可以通過(guò)多次稀釋涂布平板法實(shí)現(xiàn)，A正確；在相同的條件下，不同的菌種長(zhǎng)成的菌落不同，因而可以根據(jù)酵母菌菌落大小、外觀特征進(jìn)行菌種鑒別，也可以進(jìn)行基因測(cè)序，B正確；生防劑能抑制微生物的生長(zhǎng)，進(jìn)而起到防腐的作用，其抑制率可以用(對(duì)照菌落直徑－處理菌落直徑)/對(duì)照菌落直徑×100%表示，C錯(cuò)誤；實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，細(xì)黃鏈霉菌對(duì)酵母菌的抑制率最高，即防腐效果最好，且調(diào)高pH之后效果更好，因此為防止山藥貯藏期間發(fā)生腐爛，可采用細(xì)黃鏈霉菌對(duì)山藥進(jìn)行處理，并適當(dāng)調(diào)高pH，D正確。9．(2024·德州高三調(diào)研)為篩選出可高效抑制番茄枯萎病菌(一類(lèi)真菌)的土壤芽孢桿菌菌株，科研人員從土壤中采集、分離、篩選芽孢桿菌菌株作為待測(cè)菌株，并采用平板對(duì)峙培養(yǎng)法觀察各待測(cè)菌株的抑菌能力。如圖為研究過(guò)程示意圖，下列敘述正確的有()A．過(guò)程①常利用涂布器沾取0.1mL菌液涂布平板B．過(guò)程②可根據(jù)芽孢桿菌菌落的形態(tài)、顏色進(jìn)行挑選C．若甲、乙、丙三個(gè)平板的平均菌落數(shù)為12個(gè)，則10g土樣中芽孢桿菌約有1.2×109個(gè)D．實(shí)驗(yàn)篩選出的菌株仍需進(jìn)行大田種植試驗(yàn)以檢測(cè)防治效果答案BD解析過(guò)程①常利用移液器取0.1mL菌液涂布平板，A錯(cuò)誤；若甲、乙、丙三個(gè)平板的平均菌落數(shù)為12個(gè)，平均菌落數(shù)是12個(gè)不符合30～300的菌落計(jì)數(shù)要求，C錯(cuò)誤。三、非選擇題10．(2022·全國(guó)乙，37)化合物S被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品和化工工業(yè)。用菌株C可生產(chǎn)S，S的產(chǎn)量與菌株C培養(yǎng)所利用的碳源關(guān)系密切。為此，某小組通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較不同碳源對(duì)菌體生長(zhǎng)和S產(chǎn)量的影響，結(jié)果見(jiàn)表。碳源細(xì)胞干重(g/L)S產(chǎn)量(g/L)葡萄糖3.120.15淀粉0.010.00制糖廢液2.300.18回答下列問(wèn)題：(1)通常在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物時(shí)，需要對(duì)所用的玻璃器皿進(jìn)行滅菌，滅菌的方法有_________________________________________________________________________(答出2點(diǎn)即可)。(2)由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，菌株C生長(zhǎng)的最適碳源是______________；用菌株C生產(chǎn)S的最適碳源是______________。菌株C的生長(zhǎng)除需要碳源外，還需要______________________(答出2點(diǎn)即可)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(3)由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，碳源為淀粉時(shí)菌株C不能生長(zhǎng)，其原因是_____________________。(4)若以制糖廢液作為碳源，為進(jìn)一步確定生產(chǎn)S的最適碳源濃度，某同學(xué)進(jìn)行了相關(guān)實(shí)驗(yàn)。請(qǐng)簡(jiǎn)要寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)思路：_____________________________________________________。(5)利用制糖廢液生產(chǎn)S可以實(shí)現(xiàn)廢物利用，其意義是__________________________。答案(1)干熱滅菌、濕熱滅菌(或高壓蒸汽滅菌)(2)葡萄糖制糖廢液氮源、無(wú)機(jī)鹽(3)缺少淀粉酶(4)設(shè)計(jì)一系列不同濃度的制糖廢液分別培養(yǎng)菌株C，測(cè)定不同濃度制糖廢液中S產(chǎn)量，尋找S產(chǎn)量最大的碳源濃度，確定最適碳源濃度(5)減少污染、節(jié)省原料、降低生產(chǎn)成本解析(1)防止雜菌污染是獲得純凈的微生物培養(yǎng)物的關(guān)鍵，對(duì)所需的玻璃器皿進(jìn)行滅菌，滅菌的方法有干熱滅菌、濕熱滅菌(或高壓蒸汽滅菌，濕熱滅菌中效果最好的方法)、灼燒滅菌。(2)分析題干實(shí)驗(yàn)結(jié)果，以葡萄糖為碳源時(shí)，細(xì)胞干重最大，故菌株C生長(zhǎng)的最適碳源是葡萄糖；以制糖廢液為碳源時(shí)，S產(chǎn)量最高，故用菌株C生產(chǎn)S的最適碳源是制糖廢液。微生物的生長(zhǎng)需要水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源以及特殊的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，故菌株C的生長(zhǎng)除需要碳源外，還需要氮源、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(3)由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，菌株C可以利用葡萄糖，但在以淀粉為碳源時(shí)，菌株C不能生長(zhǎng)，說(shuō)明菌株C無(wú)法利用淀粉，分析其原因是菌株C不能合成淀粉酶，導(dǎo)致其無(wú)法利用淀粉。(4)以制糖廢液作為碳源，進(jìn)一步確定生產(chǎn)S的最適碳源濃度，可以以碳源濃度作為自變量，不同碳源濃度下S產(chǎn)量作為因變量，實(shí)驗(yàn)思路為：設(shè)計(jì)一系列不同濃度的制糖廢液分別培養(yǎng)菌株C，測(cè)定不同濃度制糖廢液中S產(chǎn)量，尋找S產(chǎn)量最大的碳源濃度，從而確定最適碳源濃度。11．(2024·菏澤高三調(diào)研)生物興趣小組試圖探究牛和山羊的瘤胃中的微生物對(duì)尿素是否有分解作用，設(shè)計(jì)了以下實(shí)驗(yàn)，并成功篩選到能降解尿素的細(xì)菌(目的菌)。培養(yǎng)基成分如表所示，實(shí)驗(yàn)步驟如圖所示。請(qǐng)分析回答問(wèn)題：KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10g尿素1g瓊脂15g溶解后蒸餾水定容到1000mL(1)本實(shí)驗(yàn)所使用的培養(yǎng)基按功能來(lái)分應(yīng)為_(kāi)_____培養(yǎng)基，原理是______________________。(2)用來(lái)篩選分解尿素細(xì)菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有_________________________________________________________________________________________________。(3)實(shí)驗(yàn)是否需要振蕩培養(yǎng)來(lái)提高溶氧量：______(填“是”或“否”)，原因是_____________。轉(zhuǎn)為固體培養(yǎng)時(shí)，常采用__________________________法接種，獲得單菌落后繼續(xù)篩選。(4)若在稀釋倍數(shù)為105的三個(gè)培養(yǎng)基中，菌落數(shù)分別是156、174、183，則每克內(nèi)容物中尿素分解菌的數(shù)目為_(kāi)_________個(gè)。(5)為證明分離得到的細(xì)菌是否可以分解尿素，可在培養(yǎng)基中加入________指示劑，看指示劑是否______________。(6)為進(jìn)一步確定取自瘤胃中液體的適當(dāng)稀釋倍數(shù)，將接種的培養(yǎng)皿放置在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48h，觀察并統(tǒng)計(jì)具有紅色環(huán)帶的菌落數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表，其中合理的稀釋倍數(shù)為_(kāi)_________。稀釋倍數(shù)103104105106107菌落數(shù)>5003672483618答案(1)選擇只有能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素，才能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)(2)為細(xì)菌生長(zhǎng)提供無(wú)機(jī)鹽、作為緩沖劑維持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH的穩(wěn)定(3)否瘤胃中的微生物多為厭氧菌，接觸空氣后會(huì)死亡平板劃線(xiàn)法或稀釋涂布平板(4)1.71×108(5)酚紅變紅(6)106或10512．菌落總數(shù)可作為判定食品被污染程度的標(biāo)志，也可以用于觀察細(xì)菌在食品中繁殖的動(dòng)態(tài)，以便對(duì)送檢樣品進(jìn)行衛(wèi)生學(xué)評(píng)估提供證據(jù)。下圖是某樣品培養(yǎng)簡(jiǎn)化流程圖，請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題：(1)該營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基配制過(guò)程中，其基本步驟包括按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確計(jì)算、稱(chēng)量、溶化、調(diào)節(jié)pH、____________________法滅菌等。然后將培養(yǎng)基放入47℃水浴鍋保溫，選擇此溫度的理由是_____________________________________________________________________。(2)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中須將樣品剪碎并使用均質(zhì)器10000r·min－1處理