抗原抗體反應：是指抗原與相應抗體在體內或體外發(fā)生的特異性結合反應。

抗原抗體間的結合力涉及爭電引力、范德華力、氫鍵和疏水作用力，其中疏水作用力最強,

它是在水溶液中兩個疏水基團相互接觸，由于對水分子的排斥而趨向聚集的力。

親和性（affinity）：是指抗體分子上一個抗原結合點與一個相應抗原表位（AD）之間的結合

強度，取決于兩者空間結構的互補程度。

親合力（avidity）：是指一個完整抗體分子的抗原結合部位與若干相應抗原表位之間的結合

強度，它與親和性、抗體的結合價、抗原的有效AD數(shù)目有關。

抗原抗體反應的特點：特異性、可逆性、比例性、階段性。

帶現(xiàn)象（zonephenomenon）：一種抗原-抗體反應的現(xiàn)象。在凝集反應或沉淀反應中，由于

抗體過?；蚩乖^剩，抗原與抗體結合但不能形成大的復合物，從而不出現(xiàn)肉眼可見的反應

現(xiàn)象?？贵w過量稱為前帶，抗原過量稱為后帶。

免疫原（immunogen）：是指能誘導機體免疫系統(tǒng)產生特異性抗體或致敏淋巴細胞的抗原。

免疫佐劑（immunoadjuslvant）：簡稱佐劑，是指某些預先或與抗原同時注入體內，可增強

機體對該抗原的免疫應答或改變免疫應答類型的物質。

半抗原（hapten）：又稱不完全抗原，是指僅具有與抗體結合的能力（抗原性），而單獨不能誘

導抗體產生（無免疫原性）的物質。當半抗原與蛋白質載體結合后即可成為完全抗原。

載體（carrier）：結合后能給予半抗原以免疫原性的物質,

載體效應：初次免疫與再次免疫時，只有使半抗原結合在同一載體上，才能使機體產生對半

抗原的免疫應答，該現(xiàn)象稱為?。

單克隆抗體（McAB）：將單個B細胞分離出來，加以增殖形成一個克隆群落，該B細胞克

隆產生的針對單一表位、結構相同、功能均一的抗體，即~。

多克隆抗體（PcAb）：天然抗原分子中常含多種不同抗原特異性的抗原表位，以該抗原物質

刺激機體免疫系統(tǒng)，體內多個B細胞克隆被激活，產生含有針對不同抗原表位的免疫球蛋

白,即~

基因工程抗體（GEAb）：是利用DNA重組及蛋白工程技術，從基因水平對編碼抗體的基因

進行改造和裝配，經導入適當?shù)氖荏w細胞后重新表達的抗體。

雜交瘤技術

【原理】以聚乙二醇（PEG）為細胞融合劑，使免疫后能產生抗體的小鼠脾細胞與能在體外

長期繁殖的小鼠骨髓瘤細抱融合產生雜交瘤細胞，通過次黃喋吟、氨基蝶吟和胸腺嗑噪核首

（HAT）選擇性培養(yǎng)基的作用，只讓融合成功的雜交瘤細胞生長，經反復的免疫學檢測篩選

和單個細胞培養(yǎng)（克隆化），最終獲得機能產生所需單克隆抗體又能長期體外繁殖的雜交瘤

細胞系。將這種細胞擴大培養(yǎng)，接種于小鼠腹腔，可從小鼠腹水中得到高效價的單克隆抗體。

（一）小鼠骨髓瘤細胞

理想骨髓瘤細胞的條件：①細胞株穩(wěn)定，易于傳代培養(yǎng)：②細胞株本身不產生免疫球蛋白或

細胞因子；③該細胞是HGPRT或TK的缺陷株；④能與B細胞融合成穩(wěn)定的雜交瘤細胞；

⑤融合率高。

目前最常用的是NS-1和SP2/O細胞株

（-）免疫脾細胞

多采用與骨髓瘤細胞同源的純系BALB/c小鼠；免疫途徑多為腹腔內或皮內多點注射法。若

抗原微量，可用脾臟內直接注射法進行免疫。細胞性抗原不需加佐劑，可溶性抗原需加完全

弗氏佐劑。

（三）細胞融合

是產生雜交瘤細胞的中心環(huán)節(jié)。一般用分子量1000D、1500D、4000DPEG作細胞融合劑，

濃度30~50%之間，基本方法是將骨髓瘤細胞與脾細胞按1:2~1:10比例混合，加入PEG,

誘導兩種細胞融合，時間控制在2min以內，再加入培養(yǎng)液緩慢稀釋PEG融合液，直至失去

融合作用，融合細胞形成具有兩個或多個核的異核體，最終產生雜交細胞。

（四）雜交瘤細胞的選擇性培養(yǎng)

腫瘤細胞合成DNA有兩條途徑：一條為生物合成途徑，可被葉酸拮抗物（氨基蝶吟）阻斷;

另一條為替代途徑，葉酸代謝受阻時，細胞通過HGPRT和TK,利用核甘酸前體物合成核

甘酸，進而合成DNA。HAT培養(yǎng)液含三種成分：次黃嚎吟（H）、氨基蝶吟（A）和腦腺喘

咤核首（T）,經HAT培養(yǎng)液篩選后，只有具備兩親本細胞雙重特性的雜交瘤細胞能長期

生存并產生抗體，成為制造單克隆抗體的細胞源。

細胞類型正常培養(yǎng)細TK缺陷細HGPRT缺陷細雜交瘤細

胞胞胞胞

正常培養(yǎng)基++十+

HAT培養(yǎng)+--+

基

凝集反應（agglutinationreaction）：是指細菌和紅細胞或紅細胞等顆粒性抗原或表面包被可

溶性抗原（或抗體）的顆粒性載體與相應抗體（或抗原）特異性結合后，在適當電解質存在

下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。

①直接在適當電解質參與下，細菌、螺旋體和紅細胞等顆粒性抗原直接與相應抗體結合

后出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象，稱為

②間接~:可溶性抗原（或抗體）先吸附十適當大小的顆粒性載體（如止常人0型紅細胞、

細菌、膠乳顆粒等）的表面，然后與相應抗體（抗原）作用，在適宜的電解質存在條件下出

現(xiàn)特異性凝集現(xiàn)象，稱為其敏感度高于直接凝集反應和沉淀反應。

正向間接凝集反應：用可溶性抗原致敏載體以檢測標本中的待檢抗體。

反向間接凝集反應：用特異性抗體致敏載體以檢測標本中的待檢抗原。

間接凝集抑制反應：用抗原致敏的載體顆粒及相應的抗體作為診斷試劑，檢測標本中是否存

在與致敏抗原相同的抗原，

間接血凝試驗：是以紅細胞為載體的間接凝集試驗，即用已知的抗原（或抗體）致敏紅細胞,

與標本中相應的抗體（或抗原）特異結合，出現(xiàn)紅細胞凝集現(xiàn)象。

膠乳凝集抑制試驗（LAT）：將抗原（或抗體）致敏膠乳顆粒，直接與待檢標本中的抗體（或

抗原）發(fā)生凝集反應。（常用的載體顆粒為聚苯乙烯膠乳）

直接coombs試驗：將抗人球蛋白試劑直接加到表面結合抗體的受檢紅細胞中，即可見細胞

凝集。用于檢測吸附于紅細胞表面的不完全抗體。（如HDN、AIHA）

間接coombs試驗：將受檢血清和具有相應抗原性的紅細胞相結合，再加入抗人球蛋白抗體

即可出現(xiàn)可見的紅細胞凝集。用于檢測血清中游離的不完全抗體。

沉淀反應（precipiiationreaction）：是指可溶性抗原與相應抗體在適當條件下發(fā)生特異性結合

而出現(xiàn)可見的沉淀現(xiàn)象。

免疫濁度測定：是應用抗原抗體結合在液體中形成的免疫復合物干擾光線可用儀器檢測的特

點，將現(xiàn)代光學測量儀器與自動分析檢測系統(tǒng)相結合應月于沉淀反應，對各種液體介質中的

微量抗原、抗體和藥物及其他小分子半抗原物質進行定量測定的技術。

鉤狀效應（highdosehookeffect）：免疫濁度測定，抗原過量導致形成的免疫復合物（IC）

分子小，發(fā)生再解離，濁度下降，光散射減少。

單向免疫擴散實驗：是先將一定量的抗體混于瓊脂凝膠中，使待測的抗原溶液在瓊脂內由局

部向周圍自由擴散，在一定區(qū)域內形成可見的沉淀環(huán)。環(huán)的直徑或面積的大小與抗原含量正

相關。常用于IgG/A/M、補體C3/C4等血漿蛋白的測定。

雙向免疫擴散試驗：是將抗原核抗體加在同一瓊脂板的對應孔中，各自向對方擴散，在濃度

比例恰當處形成沉淀線。①沉淀線靠近抗原孔，說明抗體濃度較大；靠近抗體孔則說明抗原

濃度大。②形成的沉淀線彎向分子量大的一方。③（待測物為兩種抗原）兩條沉淀線互相吻

合相連，兩抗原中存在相同表位；兩條沉淀線交叉，說明兩抗原完全不同；兩條沉淀線相切,

提示兩抗原之間有部分相同。

對流免疫電泳（CIEP）：實質上是雙擴和電泳的結合。在pH8.6的堿性緩沖液瓊脂中進行電

泳，分子量小、等電點低、帶有較多負電荷的Ag泳向陽極，而Ab球蛋白等電點偏高（約

為6-7）,在pH8.6時帶負電荷較少，加上分子量較大，泳動慢，受電滲（指電場中液體對

固體支持物的相對移動）干擾后向陰極倒退，這樣抗原抗體作相對運動，在較短時間內即可

相遇，在孔間兩者分子比例合適的地方形成沉淀線。（抗原加在一級，抗體加在+級）

抗原濃度越高，沉淀線越接近抗體孔，甚至超過抗體孔。小法簡便快速，靈敏度是雙擴的

8~16倍，可檢出蛋白質濃度達ug/ml,常用于Ag/Ab的性質/效價/純度測定。

火箭免疫電泳（RIE）：實質上是單擴和電泳的結合。是將抗體混合于瓊脂中，電泳時，抗

體不移動，抗原由負極向正極移動，并隨抗原濃度的下降，抗原泳動的基底區(qū)也逐漸變窄，

抗原抗體免疫復合物形成的沉淀西安也越來越窄，形成一個火箭狀的不溶性復合物沉淀峰。

抗體濃度一定時，沉淀峰的高度與抗原量呈正相關。其靈敏度可達ng/ml,常用于IgA/G等

蛋白定量。

免疫電泳（IEP）：將待測標本（蛋白質抗原）置丁?瓊脂凝膠中電泳，樣品中各蛋白成分因所

帶電荷、分子量及構型不同，被分成肉眼不可見的若干區(qū)帶。然后沿與電泳方向開一平行的

抗體槽并加入抗血清，置室溫或37度使兩者擴散。l8-24h后，各區(qū)帶蛋白與相應的Ab在

相應的位置上形成弧形沉淀線。Ag越多，沉淀線越靠近Ab槽，其沉淀線越粗，可做細微

的蛋白質組分分析，僅為定性實驗。

免疫固定電泳（IFE）：實質是區(qū)帶電泳和沉淀反應相結合。先將血清蛋白質置于瓊脂激膠中

進行區(qū)帶電泳分離，再將固定劑和各型免疫球蛋白及輕鏈抗血清加于凝膠表面的泳道上，經

過孵育，固定劑和抗血清在凝膠內滲透、擴散，抗原抗體直接發(fā)生沉淀反應，洗脫游離的抗

體，形成的抗原抗體復合物則保留在凝膠中。經氨基黑，參考泳道和抗原抗體沉淀區(qū)被著色,

根據(jù)電泳移動距離分離單克隆組分，可對各類Ig及其輕鏈進行分型。最常用于M蛋白的鑒

定。

放射性核素：具有放射性的核素，在自然條件下可發(fā)生自發(fā)性的轉化變?yōu)榱硪环N（放射性）

核素，并同時釋放射線。這一轉變過程稱為放射性衰變。

放射化學純度：指在標記物中結合在抗原（或抗體）上的放射活性占該標記物總放射活性的

百分比。

比放射活性：是指單位質量標記物中所含的放射性活度，或每分子抗原（或抗體）平均所結

合的放射性原子數(shù)目。

放射免疫分析（RIA）：是利用放射性核素標記抗原與非標記抗原（待測/標準抗原）同時和

限量特異性抗體進行競爭性結合反應，通過測定放射性核素標記抗原與抗體復合物的放射性

活度，經相應的數(shù)學函數(shù)關系推算待測抗原的含量。

免疫放射分析（IRMA）：是利用放射性標記的抗體來測定樣品中抗原的方法，所用的標記

抗體是過量的，抗原全部是非標記的。待測抗原與過量標記抗體結合反應形成標記抗律-抗

原里合物及游離的標記抗體，測定的是標記抗體■?抗原更合物的量.

熒光免疫技術：是將抗原抗體反應與熒光技術相結合而建立的一種免疫熒光技術，具有高度

特異性、敏感性和直觀性。

熒光抗體技術（FAT）：以熒光素標記抗體對抗原進行定位染色，并借助熒光顯微鏡觀察標

本片上熒光染色的形態(tài)，從而判斷是否存在待測抗原，這種技術就是

熒光抗體染色方法：直接法（簡便快速特異性強，但敏感性不如間接法，一種熒光抗體只能

檢測一種抗原）、間接法（敏感性比直接法高5?10倍，一種熒光二抗可檢測多種抗原/抗體,

但容易產生非特異性熒光）、雙標記法（用于檢測同一標本中的兩種抗原）

熒光：熒光物質吸收激發(fā)光的能最后，使原來處于基態(tài)的電子躍遷到激發(fā)態(tài)，當其回更至基

態(tài)時，激發(fā)態(tài)的電子以發(fā)射光的形式釋放出能量，這種發(fā)射光稱為一

①發(fā)射光譜：是指固定激發(fā)光波長，在不同波長下所記錄到的樣品發(fā)射熒光的譜圖

②激發(fā)光譜：是指固定檢測發(fā)射光（熒光）波長，用不同波長的激發(fā)光照射樣品得到的熒光

的譜圖。

③熒光效率：是指熒光分子將吸收的光能轉變成熒光的百分率，與發(fā)射熒光光量子的數(shù)值成

正比。

④熒光效率=發(fā)射熒光的光最分子數(shù)（熒光強度）/吸收光的光量子數(shù)（激發(fā)光強度）

⑤熒光猝滅：熒光分子的輻射能力在受到激發(fā)光較長時間的照射后會減弱的現(xiàn)象。

只有那些能產生明顯熒光的有機化合物才能作為熒光色素。

stokes位移：即激發(fā)光譜加發(fā)射光譜的波長差。制系元素stokes位移大（273nm）,激發(fā)/發(fā)

射光譜不重疊，可減少干擾。

施免疫技術：是將防高效催化反應的專一性和抗原抗體反應的特異性相結合的一種免疫標記

檢測技術。

是將酶與抗原或抗體結合成酹標記結合物（晦標抗原/抗體），酶標結合物既保留了抗京/抗

體的免疫學活性，同時也保留了酶對底物的催化活性。在酶標記抗體（抗原）與抗原（抗體）

的特異性反應完成后，加入酸作用的相應底物，通過酶催化底物產生顯色反應，對抗原或抗

體進行定位、定性或定量的測定。

常用的能：辣根過氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶（ALP）、B-半乳糖甘酶（B-Gal）

常用的底物：HRP有鄰東二胺（OPD）、四甲基聯(lián)茉胺（TMB）。ALP為對-硝基茶磷酸酯

（p-NPP）oB-Gal為4-甲基傘形酮-B-D半乳糖昔（4MUG）

常用的標記方法：交聯(lián)法（戊二酷?）和直接法（改良過碘酸鈉法）

固相載體的選擇：塑料制品（聚苯乙烯、聚氯乙烯）、微粒、膜載體

包被（coating）：將抗體或抗原結合在固相載體上的過程。

封閉（blocking）：用1%~5%的牛血清蛋白或5%~20%小牛血清消除固相載體表面未結合的

位點，消除非特異性吸附的干擾。

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

【基本原理】把抗原或抗體結合到某種固相載體表面并保持其免疫活性（即形成固相抗原或

抗體）；將抗原或抗體與酶連接成酶標記抗原或抗體（既保留免疫活性又保留酶的活性）；在

測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體

表面的抗原或抗體起反應，用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其它物質分

開，最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量有一定的比例，加入酶反應的底物

后，底物被酷催化變?yōu)橛猩a物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，根據(jù)顏色反應

的深淺進行定性或定量分析。

（一）ELISA檢測抗原的方法主要有：

I、雙抗體夾心法：適用于至少兩個抗原決定族（AD）的Ag。

先將特異性抗體與固相載體結合，形成固相抗體，加入待測標本并溫育，使標本中的抗原與

固相抗體充分反應，形成固相抗體抗原復合物，洗滌去除其他游離成分；然后加入酹標記抗

體并溫育，使固相抗體抗原復合物與酶標記抗體結合，形成固相抗體-待測抗原-酶標記抗

體復合物，為“雙抗體夾心”；洗滌去除游離酶標記抗體。加入底物，固相載體結合的酶可

催化底物成為有色產物，根據(jù)產物的顯色程度進行抗原的定性或定量檢測。

臨床上常用于乙肝表面抗原HBsAgs甲胎蛋白AFP、人絨毛膜促性腺激素HCG等項目的檢

測。

2、雙位點一步法：該法是針對抗原分子上兩個不同且空間距離較遠的抗原決定簇，

分別制備兩種單克隆抗體，在包被時使用一種單抗，能標記時使用另一種單抗。測定時將含

待測抗原標本和酶標記抗體同時加入反應體系，兩種抗體分別與不同的抗原決定簇結合，只

進行一次溫育，在洗滌后即可加底物進行顯色反應。擔當待測抗原濃度過高時，可出現(xiàn)鉤狀

效應，甚至出現(xiàn)假陰性結果，必要時可將標本適當稀釋后重新測定。）

3、競爭法：適用于小分子Ag或半抗原（只有一個AD）。

先用特異性抗體包被固相載體，然后同時加入待測抗原和能標記的抗原，待測樣本中的抗原

與酶標記抗原競爭性的與固相載體上的特異性抗體結合，溫育一段時間后洗滌，加入底物

顯色。

（-）ELISA檢測抗體的方法主要有：

I、間接法：檢測Ab最常用的方法“

常用酶標記羊抗人IgG。

2、雙抗原夾心法：靈敏度和特異性高于間接法，

原理類似雙抗體夾心法，操作步驟也基本相同，也可采用一步法，但一般不會出現(xiàn)鉤狀效應。

臨床上乙型肝炎表面抗體HBsAb的測定常用此法。

3、競爭法：當相應抗原材料中含有難以去除的雜質，不易得到足夠的純化抗原或抗原性質

不穩(wěn)定時，可采用此方法,主要用于測定HBcAb和HBoAb。原理見下：

（1）HBcAb的競爭法：先將核心抗原包被在固相載體上形成固相抗原，，然后加入待測標

木和酶標記的特異性核心抗體，此時待測標木中的HBcAb與酶標記HBcAb競爭性地與固

相載體上的核心抗原結合，溫育后洗滌，加入底物顯色，顯色的強弱與待測標本中的HBcAb

的含量負相關。

（2）HBeAb的競爭法：先將HBcAb包被在固相載體上形成固相抗體，同時加入待測標本

和中和抗原HBeAg,此時待測標本中的HBeAb和固相抗體競爭性地結合中和抗原HBeAg,

溫育后洗滌，加入酶標記的HBcAb,酶標記抗體與結合于固相抗體上的特異性抗原結合，

溫育后洗滌，加入底物顯色，顯色強弱與待測標本中HBeAb的含量呈負相關。

4、捕獲法：又稱反向間接法，主要用于血清中特定Ig類別的測定，最常用于病原體急性感

染診斷中IgM型抗體檢測。

原理；首先將針對IgM的第二抗體包被于固相載體形成固相抗體，加入待測標本后，標本

中所有的IgM（特異/非將異）即可被固相抗體捕獲。第二步加入特異性抗原，其與固相載

體上捕獲的IgM特異性抗體結合，再加入針對特異性抗原的酶標記抗體，形成固相抗人U

鏈IgM.抗原.酶標記抗體復合物，最后加入底物顯色，即可對待測標本中抗原特異性IgM

進行定性或定顯測定。

此法臨床上常用于病原體急性感染的實驗室診斷，如急性甲肝時可檢測HAV-IgM抗體，急

性乙型肝炎時可檢測抗HBc-IgM抗體。

發(fā)光免疫分析（CLIA）：是將發(fā)光分析和免疫反應相結合而建立起來的-?種檢測微量抗原或

抗體的新型標記免疫分析技術。兼有高靈敏性和高特異性。

發(fā)光：分子/原子中的電子吸收能最后，由基態(tài)（較低能級）躍遷到激發(fā)態(tài)（較高能級），然

后再返回到基態(tài)，并施放光子的過程。

化學發(fā)光：伴隨化學反應過程所產生的光的發(fā)射現(xiàn)象。

發(fā)光效率：又稱化學發(fā)光反應量子產率，是指發(fā)光劑在反應中的發(fā)光分子數(shù)與參加反應的分

子數(shù)之比，取決于生成激發(fā)態(tài)產物分子的化學激發(fā)效率和激發(fā)態(tài)分子的發(fā)射效率。

化學發(fā)光免疫技術可分為均相反應（不需分離）和非均用反應（需要分離）

非均相分離方式有：固相分離、過濾分離、珠式分離、順磁性顆粒分離。

【化學發(fā)光劑】

直接化學發(fā)光劑：魯米諾和口丫咤酯（常用）

間接化學發(fā)光劑：魯米諾及其衍生物、AMPPD、歌菁/二甲基噪吩衍生物/Eu整合物

【標記技術】

常用標記方法：碳二亞胺縮合法、過碘酸鈉氧化法、重氮鹽偶聯(lián)法

影響標記的因素：發(fā)光劑的選擇、被標記蛋白質的性質、標記方法的選擇、原料比、標記率、

溫度、純化與保存。

化學發(fā)光陋免疫分析（CLEIA）

【原理】：是用參與催化某一化學發(fā)光反應的酶如辣根過氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶

（ALP）來標記抗體（或抗原），與待測標本中相應的抗原（或抗體）發(fā)生免疫反應后，形

成固相包被抗體-待測抗原-酶標記抗體復合物，經洗滌后加入底物（發(fā)光劑），酶催化和分

解底物發(fā)光。由光量子閱讀系統(tǒng)接收，光電倍增管將光信號轉變?yōu)殡娦盘柌⒓右苑糯?，再?/p>

它們傳送至計算機數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計算出測定物的濃度。

【特點】：①屬酶免疫測定范疇，測定過程與ELISA類似，僅最后一步酶反應的底物改為發(fā)

光劑、測定的儀器改為光信號檢測儀；②旃標記抗原或抗體結合穩(wěn)定；③酶催化魯米諾、

AMPPD等發(fā)光劑發(fā)出的光穩(wěn)定，持續(xù)時間長，便于記錄和測定。

電化學發(fā)光免疫分析（ECLIA）

【原理】是以電化學發(fā)光劑三聯(lián)毗咤釘標記抗體（抗原），以三丙胺（TPA）為電子供體，

在電場中因電子轉移而發(fā)生特異性化學發(fā)光反應（它包括電化學和化學發(fā)光兩個過程）。在

反應體系內待測標本與相應的抗體發(fā)生免疫反應，形成磁性微粒包被抗體-待測抗原-三聯(lián)毗

咤釘標記抗體復合物，復合物進入流動室，同時注入TPA緩沖液。當磁性微粒流經電極表

面時，被安裝在點擊下面的電磁鐵吸引住，而未結合的標記抗體和標本緩沖液被沖走。與此

同時電極加壓，啟動電化學發(fā)光反應，使三聯(lián)叱咤釘和TPA在電極表面進行電子轉移，產

生電化學發(fā)光。光信號由安裝在流動室上方的光信號檢測器檢測，光的強度與待測抗原的濃

度成正比。

【特點】：①三聯(lián)叱咤釘在電場中因不斷得到三丙胺提供的電子，可周而復始的發(fā)光，持續(xù)

時間長，信號強度高，容易測定、控制；②三聯(lián)毗噬釘直接標記抗原或抗體，結合穩(wěn)定，不

影響標記物的理化特性；③試劑靈敏度高，穩(wěn)定性好。

生物素（B）又稱維生素H,分子式為C10H16O3N2S,等電點（pl）為3.5。生物素結構

中，

維生素慌構式

I環(huán)為咪哇酮環(huán)，，是與親合素結合的主要部位；

II環(huán)為嗨吩環(huán)，含有一個戊酸側鏈，末端段基是標記抗體或其他分子的唯一結構。

抗體分子經生物素化后，其結合抗原的活性不受影響。多種酶經生物素化后，其催化能力保

持不變或梢有降低。

生物素-親合素系統(tǒng)

【特點】：高特異性、高般感性、穩(wěn)定強、實用性強

【應用】：在標記免疫技術中可應用于標記信號放大環(huán)節(jié)，也可用于固相包被（或分離）環(huán)

節(jié)

一、應用于固相載體的包被環(huán)節(jié)

鏈霉親合素（親合素）為弱酸性蛋白，可以吸附在固相載體（聚苯乙烯微孔板或納米微球）

表面，形成鏈霉親合素包被固相載體：利用生物素標記抗原（或抗體），使待包被的抗原（抗

體）通過生物素與固相材料表面的鏈霉親合素結合，實現(xiàn)間接包被。

此種包被模式不但可增加抗原（或抗體）包被數(shù)量，也可減少空間位阻效應，提高抗原（或

抗體）的利用效率。

此外，若固相材料不與生物素化抗原（或抗體）結合，待生物素化抗原（或抗體）與待檢抗

體（或抗原）反應后，再加入鏈霉親合素預包被磁性納米微球，含有生物素的免疫復合物可

結合在固相載體表面，達到同樣的分離效果。

二、應用于檢測系統(tǒng)的信號放大

生物素-親合素系統(tǒng)用于檢測信號放大，可提高標記免疫分析的敏感性?；痉绞接猩锼?/p>

-親合素-生物素模式（BAB）和生物素-親合素模式（BA）或標記親合素模式。如將生物

素標記在第一抗體上稱為直接法，如生物素標記在第二抗體上稱為間接法。

①生物素-親合素-生物素模式的特點是生物素標記分子（如生物素標記抗體/酶蛋白），以游

離親合素為橋，連接抗原-抗體和信號檢測系統(tǒng)；由于一個親合素分子能同時結合4個生

物素，且一個生物素大分子可標記多個生物素而產生級聯(lián)放大效應，提升檢測敏感性。

②實際應用中的ABC法：預先按一定比例將親合素與生物素標記示蹤物質（如生物素標記

ALP）混合，形成可溶性的親合素-生物素化能標復合物，同時確保預留一定位點與生物

素化的抗體（或抗原）結合。此種方法能減少操作步驟，又能實現(xiàn)標準化操作（有商品化的

試劑）。將ABC法應用于雙抗體夾心ELISA中，形成ABC-EL1SA,為常用方法。

固相膜免疫分析技術：是以微孔膜作為固相載體，利用液體可以流過微孔膜也可以通過毛細

管作用在膜上向前移行的特性，以酶標記或各種有色微粒子（如彩色膠乳、膠體金或膠體硒

等）標記抗體或抗原作為標記物，通過抗原抗體反應進行抗原或抗體檢測的快速檢驗方法。

膠體金免疫技術：是以膠體金作為示蹤標記物或顯色劑，應用于抗原抗體反應的一種標記免

疫測定技術。

膠體金：也稱金溶膠，是金鹽被還原為金原子后形成的金顆粒懸液。膠體金顆粒由一個基礎

金核（原子金Au）及包用在外的雙離子層構成（內層為負離子層AuC12-,外層是帶正電荷

的H+）。由于靜電作用，金顆粒之間相互排斥而懸浮成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，形成帶負電

的疏水膠溶液，故稱膠體金。

免疫金：是指膠體金與抗原或抗體等大分子物質的結合物。其制備過程實質上是抗體蛋白等

大分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。

（一）斑點金免疫滲濾試驗（DIGFA）

【原理】是在以硝酸纖維素膜為載體并包被了抗原或抗體的滲濾裝置中，依次滴加標本、免

疫金及洗滌液，因微孔濾膜貼置于吸水材料上，故溶液流經滲濾裝置時與膜上的抗原或抗體

快速結合并起到濃縮作用，達到快速檢測目的（一般5min左右完成）陽性反應在膜上呈現(xiàn)

紅色斑點。

本法簡化了操作步驟，達到簡便的目的，已成為“床旁檢測（POCT）”的主要方法之一。

【方法類型工

①雙抗體夾心法：將抗體包被在硝酸纖維素膜中央，滴加待檢標本，若標本中有待測抗原則

在滲濾過程中與膜上抗體結合，然后滴加膠體金標記抗體，加洗滌液洗滌后，陽性者即在膜

中央呈紅色斑點（膠體金聚集）。

②間接法：將抗原包被在硝酸纖維素膜上，依次滴加待測標本、洗滌液和膠體金標記抗人

IgG抗體，再加洗滌液洗滌，陽性者即在膜中央呈紅色斑點（膠體金聚集）。本法因受非目

的IgG的干擾，易產生假陽性，臨床上較少使用。

（-）斑點金免疫層析試驗（DICA）

【原理】是將膠體金標記和蛋白質層析技術相結合的，以硝酸纖維素膜為載體的快速固相

膜免疫分析技術。在DICA中，滴加在膜一端的標本溶液受載體末的毛細管作用向另一端移

動，猶如層析一般，在移動過程中被分析物與固定于載體膜上某一區(qū)域的抗體或抗原結合而

被固相化，無關物則越過該M域而被分離，然后通過膠體金的呈色條帶來判讀實驗結果。

【方法類型上雙抗體夾心法、競爭法、間接法

（三）臨床應用及評價

1、特點：操作簡便、快捷以及操作人員不需技術培訓，無需特殊儀器設備，試劑穩(wěn)定、便

于保存等特點。

2、靈敏度問題：靈敏度不及酶標法和酶發(fā)光免疫測定法，臨床應用中應引起高度重視。

3、臨床應用：臨床只能佗為定性/半定量試驗，目前主要應用于正常體液中不存在的物質

（如傳染病抗原和抗體以及毒品類藥物）和正常含量極低而在特殊情況下異常升高的物質

（如人絨毛膜促性腺激素HCG）。

斑點酶免疫吸附試驗（Dct-ELISA）

【原理】與常規(guī)的ELISA相同，不同之處在于斑點-ELISA所用載體為對?蛋白質具有極強吸

附力（近100%）的硝酸纖維素（NC）膜，此外酶作用底物后形成有色的沉淀物，使NC染

色。

【技術要點】

1、抗原包被膜：加少量U~2uL）抗原于膜上。由于NC膜吸附力強，故需在包被后進行

封閉。

2、抗原抗體反應：滴加樣品血清，其中的待檢抗體即與NC膜上抗原結合；洗滌后再滴加

酷標二抗。

3、顯色反應：滴加能形成不溶有色沉淀的底物溶液（如HRP標記物，常用二氨基聯(lián)苯胺）;

陽性者即可在膜上出現(xiàn)肉眼可見的染色斑點。

【方法評價】

斑點?ELISA的優(yōu)點為：NC膜吸附蛋白力強，微量抗原吸附完全，故檢出靈敏度可較普通

ELISA高6~8倍；試劑用量較ELISA約節(jié)約10倍；操作簡單，實驗及結果判斷不需特殊設

備條件；吸附抗原（抗體）或已有結果的NC膜可長期保存（-20C可長達半年），不影響其

活性。

免疫印跡試驗（IBT）

亦稱酶聯(lián)免疫電轉移印跡法（EITB）,通常乂稱Wes〔ern-blol。

【原理】是一種將高分辨率凝膠電泳和免疫化學分析相結合的技術，具有分析容量大、敏感

性高、特異性強等優(yōu)點，是檢測蛋白質特性、表達與分布的一種常用方法，如組織抗原的定

性定量檢測、多肽分子的質量測定及病毒的抗體或抗原檢測等。

【技術要點】

1、SDS-聚丙烯酰胺凝膠目泳（SDS）：抗原等蛋白樣品經SDS處理后帶負電荷，在

聚丙烯酰胺凝膠中從陰極向陽極涌動，分子最越小，涌動速度就越快。此階段分離效果肉眼

不可見（只有染色后才顯出電泳區(qū)帶）。

2、電轉移：將在凝膠中已經分離的條帶轉移至硝酸纖維素膜上，選用低電壓（100V）和大

電流（1~2A）,通電45min轉移即可完成。此階段分離效果肉眼仍不可見。

3、酶免疫定位：將印有蛋白質條帶的硝酸纖維素膜（相當于包被了抗原的固相載體）依次

與特異性抗體和酶標第二抗體作用后，加入能形成不溶性顯色物的酶反應底物，使區(qū)帶染色。

常用的HRP底物為3,3-二氨基聯(lián)芾胺（呈棕色）或4-氯J-茶酚（呈藍紫色）。陽性反應的條

帶清晰可辨。并可根據(jù)SDS時加入的分子量標準，確定各組分的分子量。

【方法學評價】

1、抗體的性質：影響本試驗成敗的一個主要因素是抗原分子中可.被抗體時別的表位的性質。

只有那些能識別耐變形表位的抗體可與抗原結合，所以在該試驗中常選用多克隆抗體。

2、IBT的靈敏度：一?種是在電泳之前應用免疫沉淀法將抗原進行純化和濃縮。其他方法都

是針對增強信號本身設計的，包括使用信號更好和更強的熒光實際或使條帶局部陶的活性增

強等。

3、IBT法在臨床應用中存在一定局限性。

非標記抗體酶免疫組織化學染色

首先用酶免疫動物，制備效價高、特異性強的抗酶抗體，通過免疫學反應將抗酶抗體與組織

抗原聯(lián)系在一起。該方法避免了酶標記時對抗體的損傷，同時也提高了方法的敏感性

【技術類型】

（-）酶橋法

抗酶抗體作為第三抗體，通過橋抗體（第二抗體）將特異性識別組織抗原的第一抗體連接，

形成酶聯(lián)的抗原-抗體復合物，加底物顯色。

本法較酶標法的敏感性有所提高，但操作分四步較為復雜。

（二）過氧化物酶抗過氧化物酶酶（PAP）法

是在海橋法的基礎上加以改良。本法首先將陶橋法的第三抗體（抗酶抗體）與能組成可溶性

復合物（PAP復合物）。該復合物由兩個抗酶抗體和三個過氧化物酶分子組成，呈五角形結

構，非常穩(wěn)定。

ZX

過弱化

V糠體（AP）

過氧化,*>>）

抗M體(AP)

U

S12-2PAP1［合，示意圖

通過橋抗體（第二抗體），將特異性識別組織抗原的第一抗體與PAP復合物的抗酶抗體連接

起來，此時要求特異性第一抗體與第二抗體的動物種屬相同

與酷橋法相比，PAP法操作簡便，分三步；PAP復合物結構穩(wěn)定，避免了防橋法中標記易脫

落的弊端；敏感性高；背景著色淡一因為即使橋聯(lián)抗體存在有非特異性抗體的可能，但因

其與第一抗體并非同種屬，故不能與抗酶抗體結合。并且，如果抗酶抗體中存在著非抗酶抗

體，當其與橋抗體或組織成分結合時，由于其不能與酶結合，也不會產生非特異性反應。

（三）雙橋PAP法

該法建立在PAP法的基礎上。其基本原理是在PAP法中通過兩次連接橋抗體和PAP兔合物

而建立起來的，通過雙橋可結合更多的PAP復合物于抗原分子上，以增強敏感性。這種放

大方式重復使用橋抗體，受橋抗體與PAP復合物中抗酶抗體的未飽和Fc段結合，或橋抗體

與特異性第一抗體未飽和的Fc段結合。如此對抗原有明顯放大作用，對于組織細胞微量抗

原的檢測又實用價值。

（四）堿性磷酸的抗堿性璘酸酹法（APAAP）法

因部分組織細胞內含內源性過氧化物酶，限制了HRP的廣泛應用，需選用其他酶免疫組織

化學反應。本法是用堿性璘酸酶（ALP）代替HRP建立的堿性磷酸酶（ALP）-抗堿性磷酸

酶（AAP）法，簡稱APAAP。其技術要點與PAP法相似。

【常用酶及顯色底物】

最常用的是辣根過氧化物酶（HRP）,常用的供氫體有二氨基聯(lián)苯胺（DAB）,反應產物呈

棕色

其他有：氨基乙基卡巴噗（AEC）,反應產物為橘紅色；4-氯-1-蔡酚，反應產物為灰藍色。

堿性磷酸酶為磷酸酯的水解酶，可通過兩種反應顯色：①偶氮偶聯(lián)反應，最終與重氮化合物

作用生成不溶沉淀，如快藍為深藍色，快紅為紅色。②靛藍四喋反應，最終形成紫藍色不溶

沉淀。

其他標記酶還有葡萄糖氧化酶（GO）、B-半乳糖酣等；前者底物為葡萄糖，配以NBT和

PMS,呈藍色沉淀。

對含有豐富內源性過氧化物酶的組織切片（如淋巴/腫瘤組織），首選ALP標記的免疫組織

化學方法（但HRP比ALP染色結果的保存時間長）。GO存在敏感性不高、顯色底物不易保

存等缺點。ALP和HRP結合可進行雙重或三重免疫組織化學標記。

流式細胞術（FCM）：是以流式細胞儀為檢測手段的一項能快速、精確地對單個細胞理化特

性進行多參數(shù)定量分析和分選的新技術。

【工作原理】采用激光作為激發(fā)光源，保證其具有更好的單色性與激發(fā)效率；利用熒光染料

與單克隆抗體技術結合的標記技術，保證檢測的靈敏度和特異性；用計算機系統(tǒng)對流動的單

細胞懸液中單個細胞的多個參數(shù)信號進行分析處理，保證了檢測速度與統(tǒng)計分析精確性。因

而能同時從一個細胞上獲取多種參數(shù)資料，保證對該細胞進行詳細的分析。

外周血單個核細胞（PBMCs）：包括淋巴細胞和單核細胞，其比重在1.075~1.090,而紅細胞

和多核白細胞比重在1.092左右。分離淋巴細胞以密度1.077±0.001的分層液為佳。

Ficoll分離液法主要用于分離PBMCs,是一種單次差速密度梯度離心法。聚蔗糖-泛影葡胺

是一種較理想的細胞分層液，商品名Ficoll。分離時先將分層液置試管底層，然后將肝素抗

凝全血以Hanks液或PBS液做適當稀釋后，輕輕疊加在分層液的上面，使兩者形成一個清

晰的界面。水平式離心后，離心管中會出現(xiàn)幾個不同層次的液體和細胞帶：

__血漿

之一淋巴的胞層、單核的胞層（白腹層）

--分層液

-一粒細延.紅錨19

由于紅細胞和粒細胞比重大于分層液，同時因紅細胞在FicoH液中凝聚成串而沉于管底，血

小板則因密度小而懸浮于血漿中，只有與分層液密度相當?shù)膯蝹€核細胞密集在血漿層和分層

液的界面之中，呈白膜狀為白膜層。吸取該層細胞，經洗滌離心重懸即為單個核細胞。本法

分離單個核細胞純度可達95%,淋巴細胞約占90?95%,細胞收率可達80%以上，但室溫超

過25c時可影響細胞收率。

輔助性T細胞的典型表面標志：CD3+CD4+CD8+。（Thl主要分泌IL-2,IFN-丫或TNF-B

等輔助細胞免疫或參與遲發(fā)型超敏反應；Th2主要分泌IL-4/5/6/10等輔助體液免疫、參與速

發(fā)型超敏反應）

細胞毒性T細胞的典型表面標志是CD3+CD4-CD8+4CD3+CD8+CD30-可認定為Tel細胞;

CD3+CD8+CD30+可認定為Tc2）

調節(jié)性T細胞：自然存在的，其典型標志為CD4+CD25+Foxp3+（最重要的分子標記是一

種轉錄因子Foxp3）

成熟B細胞均表達CDI9,B1細胞CDI9+CD5+,B2細胞CDI9+CD5-

NK細胞的典型標志：CD3-CD16+CD56+o單核-巨噬細胞的典型表面標志為CD14。人成熟

DC的主要特征表面標志為CDla、CDIlc和CD83,但不表達MPS、T/B/NK細胞的典型表

面標志（CD14/3/19和CD20/16/56）。

T細胞增殖試驗有：形態(tài)學檢查法，3H-TdR摻入法、MTT比色法

溶血空斑實驗（PFC）：將經SRBC免疫過的小鼠脾細胞與一定量的SRBC混合，在補體參

與卜，使抗體形成細胞周圍那些受到抗體分子致敏的綿羊紅細胞溶解，形成肉眼可見的溶血

空斑，每一個空斑中央含一個抗體形成細胞，空斑數(shù)目即為抗體形成細胞數(shù)目。

細胞因子（CK）：是由機體活化的免疫細胞及某些基質細胞分泌的小分子蛋白質，通過結合

細胞表面的相應受體發(fā)揮生物學效應（有旁分泌、自分泌、內分泌）。

細胞粘附分子（CAM）：是由細胞產生、介導細胞與細胞間或細胞與基質間相互接觸和結合

的分子。

能聯(lián)免疫斑點實驗（ELISPOT）：在包被有待測CK抗體的微孔板上，加入可分泌相應細胞

因子的待測細胞，在有或無刺激物存在的條件下培養(yǎng)后，待測細胞向其周圍分泌細胞因子，

并被板上的特異性抗體捕獲。洗去細胞后用解標抗體為一抗或二抗，分別做直接法和間接法。

所選底物應在酶促反應后形成不溶性產物。一個斑點代表一個細胞因子分泌細胞，斑點的顏

色深淺程度與細胞因子量相關。

免疫球蛋白（Ig）：是指具有抗體活性或化學結構與抗體相似的球蛋白。可分為分泌型和膜型

兩類。（現(xiàn)在認為，1g與Ab沒有什么區(qū)別）臨床上常用速率散射免疫比濁法檢測Ig。

選擇性蛋白尿指數(shù)（SPI）：

卬[—C.c_尿IgG/血清[gG

=/=尿TRF/血清TRF

SPK0.2為選擇性蛋白尿,腎小球損害較輕（如微小病變腎?。委煼磻皖A后大多較好;

SPI>0.2為非選擇性蛋白尿，腎小球損害較重（如膜性腎病、膜增殖性腎炎與腎病綜合征）,

預后大多不良。

M蛋白（MP）：是B淋巴細胞或漿細胞單克隆異常增殖所產生的一種在氨基酸組成,及順序

上十分均一的異常單克隆但。

本周蛋白：即尿液中游離的免疫球蛋白輕鏈。

補體：是存在于人和動物血清、組織液和某些細胞膜上的一組經激活后具有酶活性的、不耐

熱的蛋白質。

血液中大部分補體由肝臟合成，均為糖蛋白，多為8球蛋白，少數(shù)為a/y球蛋白；其中C3

含量最高（1.2g/L）,D因子含量最低（l~2mg/L）。補體應保存于-20℃以下（56℃加熱30min

即可滅火，常溫下很快失活）

經典途徑MBL途徑旁路途徑

激活物質抗原抗體復合物MBL相關絲斑酸蛋白肽聚糖、酵母多糖、脂

酶多糖

起始分子ClqC2、C4C3

參與成分CLC4、C2、C3C4、C2、C3、MASPC3、B因子、D因子

共同末端C5-C9C5-C9C5-C9

所需離子Ca2+,Mg2+Ca2+Mg2+

C3轉化酶C4b2bC4b2bC3bBb(p)

C5轉化酶C4b2b3bC4b2b3bC3bnBb(p)

是否依賴Ab是否否

生物學作用參與特異性免疫的效參與非特異性免疫的參與非特異性免疫的

應階段，于感染后期發(fā)效應階段，于感染早期效應階段，于感染早期

揮作用發(fā)揮作用發(fā)揮作用

補體的生物學功能：溶解細胞/細菌/病毒、調理作用、清除免疫復合物、引起炎癥反應、

免疫調節(jié)作用

補體CH50實驗：補體與抗體（溶血素）致敏的羊紅細胞接觸后，被激活（C1、經典途徑）,

從而使致敏的SKBC溶解，在特定體系中，其溶血程度與補體量呈正比。因此，將新鮮待

檢血清做不同稀釋后，與致敏紅細胞反應，測定溶血程發(fā)，以50%溶血時的最小血清量判

定終點，可測知補體總溶血活性。以50%溶血判斷結果比100%溶血靈敏、準確。

補體結合試驗（CFT）利用抗原抗體復合物可激活補體的特點，用一定量的補體和致敏的

SRBC來檢測有無抗原抗體特異性結合的方法。試驗中有5種成分參與反應，分屬3個系

統(tǒng)：

1、反應系統(tǒng)：已知抗原［或抗體）與待測抗體（或抗原）

2、指示系統(tǒng)：綿羊紅細胞與相應溶血素結合，成為致敏綿羊紅細胞。

3、補體系統(tǒng)

常用豚鼠新鮮血清。反應系統(tǒng)與補體系統(tǒng)先發(fā)生反應，然后再加入指示系統(tǒng)，根據(jù)致敏綿羊

紅細胞有無溶血來判斷實驗結果。（不溶血為陽性+,溶血則為陰性-）

肝炎病毒感染

（一）甲型肝炎病毒感染

主要經糞-口傳播，其實驗室診斷主要依賴血清中特異性抗體的檢測，

通常呈采用ELISA和化學發(fā)光技術對HAVIgG及IgM進行檢測。HAVIgM在急性感染時

出現(xiàn)較早（發(fā)病后卜4周），上升快，高峰效價高，持續(xù)時間短（常于3~6個月后轉陰），

是急性HAV感染或復發(fā)的可靠指標，并且有助于區(qū)分現(xiàn)癥感染和既往感染。HAVIgG一般

于感染4周后出現(xiàn)，24周達高峰，可維持多年甚至終生。

（二）乙型肝炎病毒感染

1、HBsAg（乙肝病毒表面抗原）：可采用固相RIA、ELISA、反向間接血凝實驗等方法檢測，

是乙型肝炎早期診斷的重要指標。目前可采用CLIA對血清中的HBsAg進行定量檢測，對

肝炎患者動態(tài)評價病情與藥物療效很有價值。

乙型肝炎表面抗原，存在于HBV的外殼部分。血清中檢出HBsAg是乙肝的早期診斷指標

之一，是乙肝患者血清中首先出現(xiàn)的病毒標志物，急性肝炎潛伏期即可出現(xiàn)養(yǎng)性，先于患者

臨床癥狀級肝功能異常（如血清轉氨隨ALT升高）1~7冏，到恢更期HBsAg滴度逐漸降低

乃至消失。僅為HBV感染的標志，不反映病毒有無復制、復制程度及預后。

2、HBsAb（乙肝病毒表面抗體）：是一種保護性抗體，也是機體感染或接種乙肝疫苗的標志。

目前常用固相RIA與ELISA法檢測之。

接受HBV疫苗接種后，血清中可出現(xiàn)HBsAb陽性。作為疫苗免疫機體產生的抗體，對HBV

的感染具有保護性免疫作用。乙肝疫苗接種者一旦出現(xiàn)除抗HBs以外的標志物，則應視為

既往感染。HBsAb陽性可提示急性感染后的恢復期。

3、HBeAg（乙肝病毒e抗原）：為病毒復制標志，多存在于HBsAg陽性的標木中，急性乙

肝患者血清HBeAg持續(xù)陽性3個月以上，則有疾病慢性化傾向。

在血清中的出現(xiàn)時間稍后于HBsAg,是HBV復制活躍的血清學指標，其水平與病毒復制、

肝臟損害程度成正比，因此HBeAg是乙肝患者有較強傳染性的標志。

4、HBcAb（乙肝病毒c抗體）：多出現(xiàn)于急性肝炎恢復期的患者中，比HBsAb轉陽要早，

常在HBsAg即將消失或已經消失時檢出，可長期存在。

當血清HBeAg轉陰后，可出現(xiàn)抗HBe,說明病毒復制減少，傳染性弱（但不是保護性抗體）。

HBeAg的血清學轉換是指HBeAg含量消失同時伴HBeAb出現(xiàn)，是目前臨床上慢性乙肝治

療的近期目標（最初目標是減少乙肝病毒的DNA更制）。

5、HBcAb（乙肝病毒核心抗體）是乙肝急性感染的早期標志，在血清中存在的時間長，包

括IgM和IgG?？笻BcIgM是機體感染后最早在血液中出現(xiàn)的特異抗體，是新近感染或病

毒復制的標志?？笻Bc-IgG在感染后逐步產生。

高滴度的HBcAb存在常表示體內有HBV復制。HBcAb陽性時表示乙肝現(xiàn)癥感染或既往感

染?？笻Bc不是保護性抗體，高滴度抗HBc-IgM是急性或近期感染的重要指標，在慢性肝

炎活動期也可呈陽性，標志著乙肝病毒在復制，有傳染性?？笻Bc-IgG可持續(xù)存在數(shù)年至

數(shù)十年，是既往感染的標志。

大三陽：以上指標中的1、3、5為陽性；小三陽：以上指標中的1、4、5為陽性。

6、HBcAb-IgM：是早期HBV感染的特異性血清標志。初次感染早期即上升，數(shù)月后無論

HBsAg消失與否，HBcAb-IgM表達穩(wěn)定，對于急性肝炎診斷很有價值。其效價降低常提示

預后較好。長期不降至正常范圍者，提示有轉化為慢性肝炎的可能。

7、prc-S1：即乙肝病毒前S1抗原，作為病毒外膜蛋白成分存在于HBVDane顆粒和管形顆

粒上，在病毒感染、裝配、復制和刺激機體產生免疫反應等方面有著十分重要的意義。

前S1抗原與HBV-DNA、HBeAg檢測率高度符合，是一項十分重要的病毒復制指標。前S1

抗原可以隨HBeAg消失而消失，與陰轉時間正相關，互作為病毒清除與病毒轉陰的指標。

HBeAb陽性的慢性乙肝患者和HBV慢性無癥狀的攜帶考中，前S1抗原陽性可表示病毒的

復制。該指標陽性的患者傳播病毒的危險性明顯高于陰性/無癥狀的攜帶者。前SI抗原陽性

常提示急性乙肝向慢性乙肝的轉變。該指標陰轉越早、療程越短，預后也越好。

8、pre-S2：即乙肝病毒前S2抗原，其上具有高免疫性的抗原決定簇和多聚蛋白受體，為人

類T/B淋巴細胞的識別表位，prc-S2與HBV的感染和復制有密切的關系，對臨床早期診斷,

了解預后及制備乙肝高效疫苗有重要意義。

前S2抗原與HBsAg陽性存在顯著相關性。在急性乙肝中，前S2抗原與HBsAg都可作為

HBV復制標志。在慢性乙肝中，前S2抗原的出現(xiàn)提示慢性肝炎進入活動期。該抗原長期存

在，提示患者有轉為慢性乙肝的可能。前S2抗原不僅能判斷HBV的感染，而一且對觀測疾

病預后、藥物選擇及療效觀察也有作用，是對乙肝兩對半的有效補充。

以上指標中的1、2、3、4、5、7、8項，在臨床上稱為乙肝七項~

HbsAgHbsAbHbeAgHbeAbHbeAb臨床意義

++潛伏期或急性乙肝早期

+-+-+急性或慢性感染，以HbcAb-IgM鑒別；

病毒復制活躍，傳染性強（大三陽）

+--++急性HBV感染趨于恢復；

慢性乙肝攜帶者（小三陽）

-+-++急性HBV感染恢復期，有免疫力

-+--+乙肝恢復期，已有免疫力

----+過去感染，但無法檢出HbsAg；

低水平慢性感染；無癥狀攜帶者

-+---成功接種過乙肝疫苗，

或以前感染過HBV,現(xiàn)已康復，有免疫力

（三）丙型肝炎病毒感染

HCV的感染特點是慢性化幾率高，感染過程長，存在不同程度的肝組織病變并呈進行性加

重，部分患者可轉變?yōu)楦斡不案伟７派涿庖咴\斷（RIA）和ELISA檢測血清中HCV抗

體是臨床常用的檢測方法。

機體產生的HCV抗體不是中和抗體【即可與細菌毒索、病原體（如病毒）及其產物特異性結

合并發(fā)揮中和作用的抗體，能中和毒素的毒性作用或阻斷病毒感染靶細胞】，沒有保護性，

僅是感染的標志物，也可作為慢性丙肝、肝硬化的診斷指標。（HCVELISA僅為初篩試驗）

HCV-IgM陽性可作為HCV活動性復制的血清學標志，常與慢性丙肝急性發(fā)作有關。HCV

含量的多少與疾病的嚴重程度、預后以及抗病毒療效都芍非常密切的關系，所以HCV的定

量檢測對本病的預后及臨未治療有著重要的意義。

超敏反應：是指機體接觸到某種抗原并且致敏后，再次受到相同抗原刺激時表現(xiàn)出的增高的

敏感性/反應性，此類免疫應答導致的機體功能紊亂稱~。

超敏反I型II型III型IV型

應類型速發(fā)型細胞毒型免疫復合物型遲發(fā)型

參與成趾IgG/MIgGThl,Th2,CTL

分

效應細肥大細胞FcR+細胞（吞噬細FcR+細胞巨噬細胞、嗜酸性粒細胞、

胞和成嗜堿性粒細胞胞、NK細胞）補體CTL

分

初次介血管活性胺補體、MAC抗原-抗體，補IFN-丫、IL-4/5、eotaxinx

導組分體復合物細胞毒素

二次介白三烯、PGD2、PAF、溶酶體酶、穿孔素溶酶體酶趨化因子、細胞因子、細胞

導組分細胞因子毒素、炎癥介質

PS：n/in型超敏反應是AID的機制，iv型超敏反應是排斥反應的機制。

變應原：是指引起速發(fā)型超敏反應的抗原，其經吸入或食入等途徑進入人體后能引起IgE類

抗體產生并導致變態(tài)反應，（引起I型超敏反應的特異性IgE型抗體稱為變應素）

常見I型超敏反應性疾?。喝沓舴磻ㄋ幬镞^敏性伏克，青霉素引發(fā)的最常見；血清過

敏性休克），局部性超敏反應（呼吸道過敏反應、消化道過敏反應、皮膚過敏反應）

常見I型超敏反應性疾?。河溲磻琀DN,AIHA,藥物過敏性血細胞減少，肺出血腎炎

綜合征。

常見in型超敏反應性疾?。壕植棵庖邚秃衔锊。ˋrhus反應、類Arthus反應），全身免疫復

合物病（血清病、鏈球菌感染后的腎小球腎炎、類風濕關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡SLE）

常見IV型超敏反應性疾?。焊腥拘赃t發(fā)型超敏反應、接觸性皮炎、移植排斥反應。

新生兒溶血?。℉DN）

母子間血型不合是引起HDN的主要原因。如母親為Rh陰性血型，胎兒為Rh陽性血型，在

首次分娩時，胎兒血進入母體內，母親被胎兒的Rh陽性紅細胞致敏，產生以IgG類為主的

抗Rh抗體。當體內產生Rh抗體的母親再次奸姬時，母體內的Rh抗體便可通過胎盤進入胎

兒體內，與其紅細胞膜上的RhD抗原結合，使紅細胞被溶解破壞（血管外溶血），引起流產

或發(fā)生新生兒溶血。

初次分娩后，72h內給母體內注射Rh抗體，能及時清除母體內的Rh陽性紅細胞，可有效

預防再次妊娠時發(fā)生HDN。

【抗血細胞抗體的檢測】

抗血細胞抗體大多屬于不完全抗體，這種抗體與相應抗原結合后不發(fā)生凝集現(xiàn)象。

Rh抗體的檢測：為防止Rh血型不合所致死胎或HDN的發(fā)生，可對孕婦血清或胎兒羊水的

Rh抗體進行檢測，最為常用的是酶介質法。

的介質法原理：Rh（D）抗體多為IgG型不完全抗體，當它與有相應抗原的紅細胞相遇時，便

與紅細胞上的特異性抗原結合。但由于IgG型不完全抗原的兩個抗原決定簇的跨度小于紅

細胞因排斥力而產生的最小間距（250nm）,所以不能將相鄰的紅細胞彼此連接形成肉眼可

見的凝集。加入酶介質可破壞紅細胞膜表面的唾液酸糖肽，降低紅細胞表面負電荷，減小紅

細胞間斥力，使紅細胞間的距離縮短，有利于IgG型不完全抗體在兩個紅細胞抗原位點間

連接，產生肉眼可見的凝集。最常用的酶是1%木瓜/菠蘿蛋白酶。

【臨床意義】

Rh