浙江省pcr上崗證考試試題及答案

一、單項選擇題（每題2分，共10題）

1.PCR技術(shù)中，Taq聚合酶的最適溫度是多少？

A.50℃

B.72℃

C.94℃

D.37℃

答案：B

2.PCR反應(yīng)中，變性步驟的溫度通常設(shè)置為多少？

A.94℃

B.55℃

C.72℃

D.37℃

答案：A

3.在PCR反應(yīng)中，引物的作用是什么？

A.提供DNA聚合酶

B.提供模板DNA

C.提供dNTPs

D.提供起始點

答案：D

4.PCR技術(shù)中，哪個步驟是DNA合成的主要階段？

A.變性

B.退火

C.延伸

D.終止

答案：C

5.PCR產(chǎn)物的電泳分析中，通常使用哪種染色劑？

A.伊紅

B.金胺O

C.乙酰胺基苯甲酰胺

D.甲基綠

答案：C

6.PCR反應(yīng)中，dNTPs的作用是什么？

A.提供DNA聚合酶

B.提供模板DNA

C.提供引物

D.提供DNA合成的原料

答案：D

7.PCR反應(yīng)中，Mg2+離子的作用是什么？

A.提供DNA聚合酶

B.提供模板DNA

C.提供引物

D.激活DNA聚合酶

答案：D

8.PCR產(chǎn)物的純化中，常用的方法是什么？

A.離心

B.過濾

C.色譜

D.沉淀

答案：D

9.PCR技術(shù)中，哪個步驟是DNA模板與引物結(jié)合的過程？

A.變性

B.退火

C.延伸

D.終止

答案：B

10.PCR產(chǎn)物的測序中，常用的終止劑是什么？

A.甲酰胺

B.硫酸銨

C.乙酰胺基苯甲酰胺

D.四氫呋喃

答案：C

二、多項選擇題（每題2分，共10題）

1.PCR技術(shù)中，以下哪些因素會影響PCR擴增效率？

A.引物濃度

B.Mg2+離子濃度

C.模板DNA的純度

D.反應(yīng)體系的體積

答案：ABC

2.PCR產(chǎn)物分析時，以下哪些方法可以用來檢測DNA？

A.紫外分光光度計

B.瓊脂糖凝膠電泳

C.質(zhì)譜分析

D.PCR產(chǎn)物測序

答案：ABD

3.PCR反應(yīng)中，以下哪些物質(zhì)是必需的？

A.模板DNA

B.引物

C.dNTPs

D.緩沖液

答案：ABC

4.PCR產(chǎn)物純化時，以下哪些方法可以被采用？

A.柱純化

B.乙醇沉淀

C.透析

D.離心

答案：AB

5.PCR技術(shù)中，以下哪些步驟是PCR反應(yīng)的三個基本步驟？

A.變性

B.退火

C.延伸

D.終止

答案：ABC

6.PCR產(chǎn)物的定量分析中，以下哪些方法可以被采用？

A.PicoGreen熒光定量

B.NanoDrop紫外分光光度計

C.瓊脂糖凝膠電泳

D.實時定量PCR

答案：ABD

7.PCR技術(shù)中，以下哪些因素會影響PCR產(chǎn)物的特異性？

A.引物的特異性

B.反應(yīng)體系中Mg2+離子的濃度

C.反應(yīng)體系中dNTPs的濃度

D.反應(yīng)體系中DNA聚合酶的活性

答案：AB

8.PCR產(chǎn)物的克隆中，以下哪些載體可以被采用？

A.質(zhì)粒

B.噬菌體

C.人工染色體

D.酵母人工染色體

答案：ABC

9.PCR產(chǎn)物的測序中，以下哪些方法可以被采用？

A.Sanger測序

B.焦磷酸測序

C.納米孔測序

D.質(zhì)譜測序

答案：ABC

10.PCR技術(shù)中，以下哪些因素會影響PCR產(chǎn)物的產(chǎn)量？

A.模板DNA的濃度

B.引物的濃度

C.反應(yīng)體系中dNTPs的濃度

D.PCR反應(yīng)的循環(huán)次數(shù)

答案：ABCD

三、判斷題（每題2分，共10題）

1.PCR技術(shù)是一種體外擴增DNA片段的技術(shù)。（對）

2.PCR反應(yīng)中，變性步驟的溫度通常設(shè)置為94℃。（對）

3.PCR反應(yīng)中，延伸步驟的溫度通常設(shè)置為37℃。（錯）

4.PCR產(chǎn)物的電泳分析中，通常使用乙酰胺基苯甲酰胺作為染色劑。（對）

5.PCR反應(yīng)中，dNTPs是DNA合成的原料。（對）

6.PCR反應(yīng)中，Mg2+離子可以激活DNA聚合酶。（對）

7.PCR產(chǎn)物的純化中，常用的方法是乙醇沉淀。（對）

8.PCR技術(shù)中，退火步驟是DNA模板與引物結(jié)合的過程。（對）

9.PCR產(chǎn)物的測序中，常用的終止劑是甲酰胺。（錯）

10.PCR技術(shù)中，終止步驟是PCR反應(yīng)的三個基本步驟之一。（錯）

四、簡答題（每題5分，共4題）

1.簡述PCR技術(shù)的原理。

答案：PCR技術(shù)是一種體外擴增DNA片段的技術(shù)，通過反復(fù)的變性、退火和延伸三個步驟，實現(xiàn)目標(biāo)DNA片段的指數(shù)級擴增。

2.描述PCR反應(yīng)體系的基本組成。

答案：PCR反應(yīng)體系通常包括模板DNA、引物、dNTPs、DNA聚合酶、Mg2+離子、緩沖液等。

3.說明PCR產(chǎn)物純化的方法及其原理。

答案：PCR產(chǎn)物純化的方法包括柱純化和乙醇沉淀等。柱純化利用吸附材料特異性吸附DNA，通過洗脫液洗脫DNA；乙醇沉淀則是利用乙醇降低DNA溶解度，使DNA沉淀出來。

4.描述PCR產(chǎn)物測序的基本原理。

答案：PCR產(chǎn)物測序的基本原理是利用DNA聚合酶在特定條件下合成新的DNA鏈，通過引入終止劑在特定位置終止DNA鏈的合成，從而獲得一系列不同長度的DNA片段，通過電泳分析確定DNA序列。

五、討論題（每題5分，共4題）

1.討論PCR技術(shù)在分子生物學(xué)研究中的應(yīng)用。

答案：PCR技術(shù)在分子生物學(xué)研究中應(yīng)用廣泛，包括基因克隆、基因表達分析、基因突變檢測、病原體檢測等。

2.討論PCR產(chǎn)物非特異性擴增的可能原因及解決方案。

答案：PCR產(chǎn)物非特異性擴增可能由于引物設(shè)計不當(dāng)、Mg2+離子濃度不適宜、退火溫度過低等原因引起。解決方案包括優(yōu)化引物設(shè)計、調(diào)整Mg2+離子濃度、提高退火溫度等。

3.討論PCR技術(shù)在臨床診斷中的重要性。

答案：PCR技術(shù)在臨床診斷中具有重要意義，能夠快速、準(zhǔn)確地檢測