光譜鑒別法主講教師：邊虹錚紫外光譜鑒別法

原理：

藥物的分子結(jié)構(gòu)中含有共軛體系、芳香環(huán)、雜環(huán)等發(fā)色團，可在紫外光區(qū)產(chǎn)生特征的吸收光譜，可將吸收光譜的形狀、吸收峰的數(shù)目、最大吸收波長（吸收峰）的位置、最小吸收波長（吸收谷的位置）、吸收強度、及吸收系數(shù)等作為鑒別依據(jù)。紫外光譜鑒別法共軛體系芳雜環(huán)芳香環(huán)紫外光譜鑒別法?

特點：?

紫外吸收光譜鑒別的專屬性不強，宜采用多種不同的方法增加方法的專屬性；紫外光譜鑒別法規(guī)定最大吸收波長，或同時測定最小吸收波長規(guī)定一定濃度的供試液在最大吸收波長處的吸收值常用方法規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法規(guī)定吸收波長和吸收度比值法經(jīng)化學處理后，測定反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜常見方法規(guī)定最大吸收波長，或同時測定最小吸收波長規(guī)定一定濃度的供試液在最大吸收波長處的吸收值規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法規(guī)定吸收波長和吸收度比值法經(jīng)化學處理后，測定反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜紫外光譜鑒別法例如：

可采用在指定溶劑中測定2~3個特定波長處的吸收度比值；

增加方法的專屬性；氟胞嘧啶紫外光譜鑒別最大吸收峰最小吸收峰本品8μ/ml的鹽酸溶液(9→100≈0.1mol/L)，最大吸收波長286nm，吸光度約為0.57，最小吸收波長244nm。方法：規(guī)定最大吸收波長，或同時測定最小吸收波長

示例一

布洛芬的鑒別取本品

→

加0.4%

NaOH溶液

→

制成0.25mg/ml的溶液

→

照紫外-可見吸收光譜法測定結(jié)果：在265nm與273nm的波長處有最大吸收，在245nm與271nm的波長處有最小吸收，在256nm的波長處有一肩峰布洛芬的紫外光譜紫外光譜鑒別法示例二

氯貝丁酯的鑒別取本品

→

加無水乙醇

→

制成0.10mg/ml的溶液1，和10μg/ml的溶液2

→

照紫外-可見分光光度法結(jié)果：溶液2在226nm的波長處有最大吸收，溶液1在280nm與288nm的波長處有最大吸收討論

氯貝丁酯在紫外光區(qū)有數(shù)個吸收峰，但由于不同吸收峰處的吸收系數(shù)差距大，采用單一濃度不易觀察到全部吸收峰，可采用兩種濃度的供試液分別檢測其最大吸收波長。紫外光譜鑒別法方法：規(guī)定一定濃度的供試品溶液在最大吸收波長處的吸收度值

示例

頭孢噻吩鈉的鑒別取本品

→

加水制成20μg/ml的溶液結(jié)果：在237nm的波長處測定，其吸光度為0.65~0.72紫外光譜鑒別法方法：規(guī)定吸收波長和吸收系數(shù)法

示例

貝諾酯的鑒別取含量測定項下溶液，照紫外-可見分光光度法測定，在240nm的波長處有最大吸收，在240nm的波長處測定吸收度，按干燥品計算，吸收系數(shù)為730~760。貝諾酯的紫外光譜最大吸收波長240紫外光譜鑒別法方法：規(guī)定吸收波長和吸收度比值法

示例

地蒽酚的鑒別取含量測定項下溶液，于240~400nm波長范圍內(nèi)測定吸光度，在257nm、289nm與356nm的波長處有最大吸收。在257nm與289nm處的吸光度比值應(yīng)為1.06~1.10；在356nm與289nm處的吸光度比值應(yīng)為0.90~0.94。討論

該法不僅規(guī)定了測定波長范圍，同時規(guī)定了兩個波長處的吸光度比值，進一步增強了方法的專屬性。地蒽酚的紫外光譜紫外光譜鑒別法方法：經(jīng)化學處理后，測定反應(yīng)產(chǎn)物的吸收光譜

示例

苯妥英鈉的鑒別取本品約10mg

→加高錳酸鉀10mg，氫氧化鈉0.25g與水10ml→小火加熱5min

→放冷

→取上清液5ml

→加正庚烷20ml，振搖提取，靜置分層

→取正庚烷提取液

→照紫外-可見分光光度法測定結(jié)果：在248nm的波長處有最大吸收。討論

該方法是應(yīng)用苯妥英鈉在堿性溶液中與高錳酸鉀共熱，生成氧化產(chǎn)物二苯甲酮，在正庚烷溶液中于248nm波長處有最大吸收。USP的紫外光譜鑒別法

方

法

采

用

對

照

品

法

，

將

樣

品

與

對

照

品

按

同

處

理

，

在200~400nm波長范圍內(nèi)掃描。

要求

在相同的波長處有最大吸收、最小吸收和相同的吸收系數(shù)，或吸收比在規(guī)定的限度內(nèi)。

示例

阿替洛爾的鑒別本品50μg/ml甲醇溶液顯示的紫外光譜圖在同樣條件下測得的USP阿替洛爾對照品的紫外光譜圖一致。阿替洛爾的紫外光譜BP的紫外光譜鑒別法

方法

采用在一定波長范圍內(nèi)掃描，尋找最大吸收，并測定其吸收系數(shù)。

要求

規(guī)定在此范圍內(nèi)的最大吸收、最小吸收及吸收系數(shù)等光譜參數(shù)。

示例

鹽酸嗎啡的鑒別取供試品溶液A

10.0ml，加水稀釋成100.0ml的溶液，作為供試品溶液1，于250~350nm波長范圍內(nèi)測定，溶液顯示在285nm處有一最大吸收峰，其吸收系數(shù)為37~43。取供試品溶液A10.0ml，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液稀釋成100.0ml的溶液，作為供試品溶液2，在250~350nm波長范圍內(nèi)測定，溶液顯示在298nm處有一最大吸收峰，其吸收系數(shù)為64~72。鹽酸嗎啡的紫外光譜紅外光譜鑒別法

特點：紅外光譜是一種特征性強、專屬性高、應(yīng)用較廣的鑒別方法。

適用性：固體、液體、氣體樣品。特別適合于用結(jié)構(gòu)復(fù)雜、結(jié)構(gòu)間差別小的同類藥物的鑒別與區(qū)分。

應(yīng)用：主要用于組分單一、結(jié)構(gòu)明確的原料藥；藥物制劑經(jīng)提取后也可以采用紅外光譜法加以鑒別；也常用于晶型鑒別。

方法：在用紅外光譜進行鑒別試驗時，中國藥典采用標準圖譜對照法，美國藥典采用對照品法。

原理：由于物質(zhì)吸收紅外輻射，藥物的分子振動能級（同時伴隨轉(zhuǎn)動能級）躍遷而產(chǎn)生的紅外光譜。每一種化合物都有自己的特征紅外光譜，所以把紅外光譜分析形象的稱為物質(zhì)分子的“指紋”分析。棕櫚氯霉素的石蠟糊片IR譜aA晶型bB晶型有效晶型原料藥鑒別

除另有規(guī)定外，按照《藥品紅外光譜集》規(guī)定方法制備樣品。

固體制樣技術(shù)中的多晶現(xiàn)象。

應(yīng)按該藥品光譜圖中備注的方法或各品種正文中規(guī)定的方法進行預(yù)處理，再繪制光譜進行比對。

如未規(guī)定該品供試藥用的晶型或預(yù)處理方法，則可使用對照品，采用適當?shù)娜軇┰嚻放c對照品在相同條件下進行重結(jié)晶，再進行光譜對比。

如已規(guī)定特定的藥用晶型，則應(yīng)采用相應(yīng)晶型的對照品對比。

當固體制樣技術(shù)不能滿足鑒別需要時，可改用溶液法測定光譜

。制劑的鑒別

與原料藥相比，制劑鑒別一般需采取提取分離、經(jīng)適當干燥后再壓片繪制圖譜。

提取時應(yīng)選擇適宜的溶劑，減少輔料的干擾，避免晶型轉(zhuǎn)變

制劑中輔料和晶型的問題。

輔料無干擾，待測物晶型無變化，可與原料藥標準光譜比對。

輔料無干擾，但待測成分晶型有變化，可用對照品同法處理后光譜對比。

待測物晶型無變化，而輔料有干擾，可參照原料藥標準光譜，在指紋區(qū)選擇3~5個不受輔料干擾的待測。實測譜帶波數(shù)誤差應(yīng)小于0.5%。

待測物晶型有變化，輔料也有干擾，不宜采用紅外鑒別。直接用有機溶劑提取主成分，去除輔料干擾后做紅外圖譜與對照圖譜比較。對于有機酸的堿鹽或有機堿的酸鹽，可加酸液或堿液來使有機酸或堿游離沉淀，直接取沉淀干燥，或采用有機溶劑提取有機酸或堿并干燥后做紅外圖譜與相應(yīng)的有機酸堿的對照圖譜比較。常用方法對于主成分為有機酸的藥物，可先加堿使主成分溶解，再加過量的酸使主成分游離并產(chǎn)點，干燥后做紅外圖譜與對照圖譜比較。對未加輔料或輔料干擾小的制劑，可直接取樣品做紅外圖譜比較。常見方法直接用有機溶劑提取主成分，去除輔料干擾后做紅外圖譜與對照圖譜比較。對于有機酸的堿鹽或有機堿的酸鹽，可加酸液或堿液來使有機酸或堿游離沉淀，直接取沉淀干燥，或采用有機溶劑提取有機酸或堿并干燥后做紅外圖譜與相應(yīng)的有機酸堿的對照圖譜比較。對于主成分為有機酸的藥物，可先加堿使主成分溶解，再加過量的酸使主成分游離并產(chǎn)點，干燥后做紅外圖譜與對照圖譜比較。對未加輔料或輔料干擾小的制劑，可直接取樣品做紅外圖譜比較。直接用有機溶劑提取主成分

示例布洛芬片（丙酮提?。┉h(huán)磷酰胺片（乙醚提取）氯氮平片（三氯甲烷提?。}酸四環(huán)素片（熱乙醇提取）螺內(nèi)酯片（三氯甲烷提?。┯袡C酸的堿鹽或有機堿的酸鹽，加酸液或堿液游離沉淀

示例

磷酸氯喹片的IR鑒別采用先加水溶解，加堿（氫氧化鈉試液）使氯喹游離，用乙醚提取干燥并制作紅外圖譜與氯喹的對照圖譜比較。有機酸可先加堿使主成分游離，再加過量酸使主成分游離沉淀再做紅外圖譜比較。

示例

吉非貝奇膠囊的鑒別采用先加堿使吉非貝齊溶解，濾過，濾液加酸酸化，主成分沉淀，干燥后做紅外圖譜與對照圖譜比較。直接取樣品做紅外圖譜比較

示例

氨甲環(huán)酸膠囊的鑒別直接取內(nèi)容做紅外光譜圖。注意事項

壓片法對紅外光譜的影響。供試片的制備條件可能影響圖譜形狀及各譜帶強度。采用溴化鉀作為壓片基質(zhì)需注意樣品鹽酸呀是否與溴化鉀發(fā)生離子交換反應(yīng)，否則，鹽酸鹽樣品制片時必須采用氯化鉀基質(zhì)。

供試品制備時研磨程度的差異或吸水程度等原因，均會影響光譜的形狀，如二氧化碳和水汽等大氣干擾，必要時，應(yīng)采取干燥氮氣吹掃等措施改善。

應(yīng)校正不同儀器間分辨率及不同操作條件的差異，如狹縫程序、掃描速度等，可采用聚苯乙烯薄膜