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DB11/T1804—DB11/T1804—Laboratoryanimal—Breedingandgenetic 北京市市場監(jiān)督管理 發(fā)DB11/TDB11/T1804—DB11/TDB11/T1804— 前 附錄A（規(guī)范性）實驗動物微衛(wèi)星DNA標(biāo)記遺傳檢測方 附錄B（規(guī)范性）實驗斑馬魚SNP遺傳標(biāo)記的檢測方 附錄C（規(guī)范性）MHC單倍型實驗雞和實驗鴨直接測序檢測方 前本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起本文件代替DB11/T1804—2020A；7.2.21461.2—2017、DB11/T1461.3—2017、DB11/T1461.4—2018、DB11/T1461.5—2018；——2020年發(fā)布為DB11/T1804—DB11/TDB11/T1804—DB11/TDB11/T1804—GB14923實驗動物NY/T14NY625標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)殖場標(biāo)準(zhǔn)化養(yǎng)殖場實驗動物laboratory實驗種群experimental封閉群closed近交系inbred注:經(jīng)典近交系經(jīng)至少連續(xù)20代的全同胞兄妹交配培育而成。品系內(nèi)所有個體都可追湖到起源于第20代或以后代數(shù)的一對共同祖先。經(jīng)連續(xù)20代以上親子交配與全同胞兄妹交配有等同效果。近交系的近交系數(shù)(inbreeding單倍型群體haplotype雜交群注：子一代簡稱F1PCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReaction）SNP:(SingleNucleotidePolymorphism)STR:短串聯(lián)重復(fù)序列（ShortTandemRepeat）表1實驗豬按照NY625實驗羊應(yīng)按照GB14923和NY/T2665的規(guī)定進(jìn)行。實驗狨猴和雪貂應(yīng)按GB14923的規(guī)定進(jìn)行。封閉群實驗小型豬、實驗長爪沙鼠、實驗鴿和實驗樹鼩繁殖方法按照GB14923的規(guī)定執(zhí)行。實驗雞、實驗鴨、實驗鵝應(yīng)按照NY/T1901的規(guī)定進(jìn)行。近交系實驗動物可分為基礎(chǔ)群（foundationstock）、血緣擴(kuò)大群（pedigreeexpansionstock）和生產(chǎn)群（productionstock），當(dāng)近交系動物生產(chǎn)供應(yīng)數(shù)量不是很大時，可不設(shè)血緣擴(kuò)大群，僅設(shè)基礎(chǔ)群和生產(chǎn)群。各基礎(chǔ)群、血緣擴(kuò)大群和生產(chǎn)群的繁育方式按照GB14923執(zhí)行。表2群體大?。ㄖ?頭/羽抽樣數(shù)量（只/頭/羽樣數(shù)量按照表3規(guī)定執(zhí)行。一般不超過30只。表3群體大小（只/頭/羽/尾抽樣數(shù)量（只/頭/羽/尾≥群體數(shù)量表4GB/T22283GB/T22284GB/T22285GB/T3157GB/T19166GB/T19376GB/T22909GB/T2416ABC附錄表A.1引物序列Mg2+A.1實驗小型豬微衛(wèi)星位點的引物序列、退火溫度、等位基因數(shù)及等位基因分布范圍（續(xù)引物序列Mg2+A.1實驗小型豬微衛(wèi)星位點的引物序列、退火溫度、等位基因數(shù)及等位基因分布范圍（續(xù)引物序列Mg2+表A.2引物序列退火溫度A.2實驗狨猴微衛(wèi)星位點的引物序列、退火溫度、等位基因數(shù)及等位基因分布范圍（續(xù)引物序列退火溫度表A.3引物序列退火溫度A.3實驗長爪沙鼠微衛(wèi)星位點的引物序列、退火溫度、等位基因數(shù)及等位基因分布范圍（續(xù)引物序列退火溫度表A.4引物序列TT(AG)A.4實驗雪貂微衛(wèi)星位點的引物序列、等位基因數(shù)及等位基因分布范圍（續(xù)引物序列表A.5引物序列Mg2+濃度A.5實驗貓微衛(wèi)星位點的擴(kuò)增條件和染色體分布（續(xù)引物序列Mg2+濃度A.5實驗貓微衛(wèi)星位點的擴(kuò)增條件和染色體分布（續(xù)引物序列Mg2+濃度表A.6引物序列退火溫度A.6實驗雞微衛(wèi)星位點的引物序列、退火溫度、等位基因數(shù)及等位基因分布范圍（續(xù)引物序列退火溫度表A.7引物序列退火溫度A.7實驗鴨微衛(wèi)星位點的引物序列、退火溫度、等位基因數(shù)及等位基因分布范圍（續(xù)引物序列退火溫度表A.8引物序列退火溫度A.8實驗鵝微衛(wèi)星位點的引物序列、退火溫度、等位基因數(shù)及等位基因分布范圍（續(xù)引物序列退火溫度BcaBcaG-G-G-G-表A.9引物序列退火溫度UU-UU-UU-A.9實驗鴿微衛(wèi)星位點的引物序列、退火溫度、等位基因數(shù)及等位基因分布范圍（續(xù)引物序列退火溫度UU-UU-表A.10引物序列品系片段長度A.10常用實驗斑馬魚微衛(wèi)星分子標(biāo)記的遺傳特征（續(xù)引物序列品系片段長度134134134，177190，134表A.11實驗樹鼩微衛(wèi)星位點的名稱、引物序列、PCR引物序列135-196-166-386-206-220-418-134-149-182-PCR總反應(yīng)體積為15μL,其中含10×PCRbuffer:1.5μL，上下游引物(100pmol/μL)各1μL，4×dNTP100μmol/L:1μL,Taq1U:1μL,50ng～100ngDNA:1μL(ddH2O):8.5μL。PCR反應(yīng)程序為：95℃預(yù)變性，4min；94℃變性，30s；退火溫度（各位點序列、PCR反應(yīng)條件見表A.1～A.10），30s；72℃延伸，30s；35個循環(huán)；72℃繼續(xù)延伸7min；擴(kuò)增產(chǎn)物4℃保存。據(jù)各位點的等位基因數(shù)計算封閉群的基因頻率，進(jìn)行卡方（chi-squaretest）檢驗。當(dāng)群體達(dá)到平衡表A.12表A.13A.13近交系廣西巴馬小型豬和培育過程中遺傳質(zhì)量控制的微衛(wèi)星座位及優(yōu)勢等位基因（續(xù)表A.14表A.15 附錄取10μLPCR產(chǎn)物用25μL的水稀釋，并用槍頭吹打混勻。然后取1μL為模板，用表B.1程序軟件分析B.1SNPSNP引物dbSNP表SNP引物dbSNP表SNP引物dbSNP附錄C.1PCR片段384片段442C.2PCR984PCR總反應(yīng)體積為15μL,其中含10×PCRbuffer:1.5μL，上下游引物(100pmol/μL)各1μL,4×dNTP100μmol/L:1μL,Taq酶1U:1μL,50ng～100ng基因組DNA:1μL(ddH2O8.5μL。PCR反應(yīng)程序為：954min；94，30s；退火溫度（各位點序片段片段AAGGCTGAGCTGGGCAGGAGAGGTGAGCAGGGT--------GGGGGGGGGGC片段片段片段片段片段片段AAGGCTGAGCTGGGCAGGAGAGGTGAGTGGGGT--------GGGGGGGGGGC片段片段片段片段參考文GB14925—2023[J]2010,5:張媛,李曉飛,李振宇,等.滇西亞種樹鼩微衛(wèi)星分子標(biāo)記的篩選[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志,2015,25:36－41.FanY,HuangZY,CaoCC,etal.2013.GenomeoftheChinesetreeshrew[J].Naturecommunications,4:1426.LiuXH,YaoYG.Characterizationof12polymorphicmicrosatellitemarkersintheChinesetreeshrew(Tupaiabelangerichinensis)[J],2013,34(E2):E62-8.XuL,ChenSY,NieWH,etal.EvaluatingthephylogeneticpositionofChinesetreeshrew(Tupaiabelangerichinensis)basedon