微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)高中生物

選擇性必修3第2節(jié)第1課時(shí)第1章發(fā)酵工程概述培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成；概述無菌技術(shù)的原理、常用設(shè)備和方法；通過進(jìn)行酵母菌的純培養(yǎng)，說明微生物純培養(yǎng)的基本操作要求(重、難點(diǎn))。家庭自制成功率低葡萄酒、泡菜發(fā)霉變質(zhì)食用自制酸奶導(dǎo)致腸胃不適屢見不鮮制作過程中有雜菌混入應(yīng)該先對(duì)制作用具和原料進(jìn)行滅菌處理，再接種純的菌種，并控制發(fā)酵條件，避免雜菌進(jìn)入。情境導(dǎo)入原因解決思路微生物情境導(dǎo)入微生物是難以用肉眼觀察的微小生物的統(tǒng)稱，包括細(xì)菌、真菌、病毒及一些原生生物等。衣藻本章中提及的微生物主要指用于發(fā)酵的細(xì)菌和真菌。1.微生物：大腸桿菌酵母菌毛霉草履蟲新冠病毒提供微生物生長(zhǎng)繁殖所需營(yíng)養(yǎng)和環(huán)境條件確保其它微生物無法混入培養(yǎng)基無菌技術(shù)2.實(shí)驗(yàn)室微生物培養(yǎng)條件：難以用肉眼觀察到的微生物該如何培養(yǎng)呢？

培養(yǎng)基的配制一

無菌技術(shù)二目錄

微生物的純培養(yǎng)三一

培養(yǎng)基的配制一1.培養(yǎng)基概念：人們按照微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。2.作用：①培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物；②積累其代謝物。無有凝固劑瓊脂液體培養(yǎng)基3.種類：固體培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)、工業(yè)生產(chǎn)微生物的分離與鑒定，活菌計(jì)數(shù)，保藏菌種①分類依據(jù)：物理性質(zhì)瓊脂僅作為凝固劑，不能為微生物生長(zhǎng)提供能量和碳源。微生物在瓊脂固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長(zhǎng)，可以形成肉眼可見的菌落(子細(xì)胞群體)。半固體培養(yǎng)基觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類鑒定

陽性

陰性

空白一

培養(yǎng)基的配制一3.種類：②分類依據(jù)：來源/化學(xué)性質(zhì)天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基定義：由動(dòng)植物組織或微生物細(xì)胞以及它們的提取物或粗消化物配制而成。實(shí)例：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基材料牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水用量5g10g5g20g1000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基成分列表定義：由準(zhǔn)確稱量的高純度化學(xué)試劑加蒸餾水配制而成。實(shí)例：培養(yǎng)細(xì)菌的葡萄糖銨鹽培養(yǎng)基、培養(yǎng)放線菌的淀粉硝酸鹽培養(yǎng)基（高氏1號(hào)培養(yǎng)基）、培養(yǎng)真菌的蔗糖硝酸鹽培養(yǎng)基等材料可溶性淀粉KNO3K2HPO4MgSO4·7H2ONaClFeSO4·7H2O瓊脂水用量20g1g0.5g0.5g0.5g0.01g20g1000mL高氏1號(hào)培養(yǎng)基成分列表一

培養(yǎng)基的配制一3.種類：③分類依據(jù)：功能用途混合樣品選擇培養(yǎng)基上部分菌種才能生長(zhǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基上所有菌種都能生長(zhǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基目的菌目的菌周圍出現(xiàn)特殊現(xiàn)象非目的菌非目的菌周圍無明顯現(xiàn)象選擇培養(yǎng)基按一般微生物生長(zhǎng)繁殖所需要的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)配制的培養(yǎng)基即成為基礎(chǔ)培養(yǎng)基。根據(jù)某一種(類)環(huán)境微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或?qū)σ恍┪锢怼⒒瘜W(xué)抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。在培養(yǎng)基中加入某種試劑或化學(xué)藥品，使培養(yǎng)后會(huì)發(fā)生某種變化（如顯色反應(yīng)），從而區(qū)別不同類型的微生物的培養(yǎng)基。學(xué)習(xí)筆記P14一

培養(yǎng)基的配制一鑒別培養(yǎng)基金屬光澤的紫黑色1、大腸桿菌在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上典型特征

2、纖維素分解菌在剛果紅培養(yǎng)基上典型特征

紅色消失，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈學(xué)習(xí)筆記P14剛果紅與纖維素能形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈一

培養(yǎng)基的配制一具體處理原理目的選擇培養(yǎng)基加入青霉素、四環(huán)素青霉素、四環(huán)素等能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，對(duì)真菌無作用加入高濃度食鹽金黃色葡萄球菌耐高鹽不加氮源固氮微生物能利用空氣中的氮?dú)獠患佑袡C(jī)碳源自養(yǎng)型微生物能利用無機(jī)碳源鑒別培養(yǎng)基加入酚紅培養(yǎng)基尿素被分解產(chǎn)生氨，培養(yǎng)基呈堿性，酚紅指示劑變紅。加入剛果紅剛果紅與纖維素能形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈。分離酵母菌、霉菌等真菌分離固氮菌分離自養(yǎng)微生物鑒別分解尿素的細(xì)菌鑒別纖維素分解菌分離金黃色葡萄球菌學(xué)習(xí)筆記P12、14一

培養(yǎng)基的配制一補(bǔ)充：加富培養(yǎng)基概念：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入有利于某些微生物生長(zhǎng)和繁殖所需的特殊物質(zhì)（如血液、血清、酵母浸膏、動(dòng)植物組織液），使這類微生物的增殖速度比其他微生物快，從而使這類微生物能夠在混有多種微生物的情況下占優(yōu)勢(shì)地位的培養(yǎng)基。用途：用于培養(yǎng)對(duì)營(yíng)養(yǎng)比較苛刻的異養(yǎng)微生物，分離微生物百日咳博德氏菌核心歸納劃分培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途物理性質(zhì)化學(xué)成分功能用途不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng),促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,與微生物的代謝物或培養(yǎng)基中的成分發(fā)生特定反應(yīng)鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基按一般微生物生長(zhǎng)繁殖所需要的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)配制的培養(yǎng)基生產(chǎn)、培養(yǎng)微生物基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)基種類概述培養(yǎng)基的種類和營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成任務(wù)1組分含量提供的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)牛肉膏5g碳源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10g氮源和維生素等NaCl5g無機(jī)鹽H2O定容至1000mL水1000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)稱取去皮的馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000mL，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向?yàn)V液中加入20g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15~20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000mL。酵母菌純培養(yǎng)培養(yǎng)基的配方分析討論培養(yǎng)酵母菌的培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基組成成分的異同點(diǎn)1.按物理性質(zhì)劃分上述兩種培養(yǎng)基的種類：2.上述兩種培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成。

培養(yǎng)酵母菌的培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基，而牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基。都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽和維生素等，其中培養(yǎng)酵母菌的培養(yǎng)基中主要由糖類提供碳源，蛋白質(zhì)提供氮源，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中主要由牛肉膏提供碳源，主要由蛋白胨提供氮源。一

培養(yǎng)基的配制一4．培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成(1)主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：一般都含有

等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。水、碳源、氮源、無機(jī)鹽碳源氮源水無機(jī)鹽——水是微生物生長(zhǎng)和代謝必不可少的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。①良好的溶劑；②維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。提供碳元素的物質(zhì)。①種類：無機(jī)碳源：有機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-等含碳無機(jī)物。糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、石油等含碳有機(jī)物，常用：糖類，尤其是葡萄糖。自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物②功能：主要用于合成微生物體內(nèi)的各種有機(jī)物；有機(jī)碳還是異養(yǎng)微生物的主要能源物質(zhì)。提供氮元素的物質(zhì)。①種類：無機(jī)氮源：有機(jī)氮源：NH4＋、NO3-、NH3等。牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等。自生固氮微生物普通微生物②功能：主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮代謝產(chǎn)物等是微生物合成各有機(jī)物所必需的【說明】含有C、H、O、N的化合物既可以作為碳源，又可以作為氮源，如氨基酸等。NaCl、K2HPO4、MgSO4等——調(diào)節(jié)酸堿平衡、

維持滲透壓、提供無機(jī)營(yíng)養(yǎng)除上述營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)外，培養(yǎng)基是否還需要其他物質(zhì)呢？成分含義來源功能碳源提供碳元素的物質(zhì)無機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-等含碳無機(jī)物①構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物；②有機(jī)碳既是碳源又是能源有機(jī)碳源：糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、有機(jī)酸、石油、牛肉膏和蛋白胨等氮源提供氮元素的物質(zhì)無機(jī)氮源：N2、NH3，氨鹽、硝酸鹽等將無機(jī)氮合成含氮的代謝產(chǎn)物有機(jī)氮源：牛肉膏、蛋白胨、尿素、氨基酸等合成蛋白質(zhì)、核酸和含氮代謝產(chǎn)物水生物體內(nèi)含量最多的化合物外界攝入(培養(yǎng)基、代謝產(chǎn)物)①良好的溶劑，參與化學(xué)反應(yīng)；②維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定無機(jī)鹽提供除碳、氮以外的元素，包括大量元素和微量元素?zé)o機(jī)化合物①提供無機(jī)營(yíng)養(yǎng)；②調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH；③維持滲透壓自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物一

培養(yǎng)基的配制一4．培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成(1)主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組分含量提供的主要營(yíng)養(yǎng)牛肉膏5g碳源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10g氮源和維生素等NaCl5g無機(jī)鹽H2O定容至1000mL水表1-11000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成注：牛肉膏和蛋白胨來源于動(dòng)物，含有糖、維生素和蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。碳源、氮源、水、無機(jī)鹽還需滿足微生物對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、O2

的需求。乳酸桿菌霉菌細(xì)菌厭氧微生物培養(yǎng)基中添加維生素培養(yǎng)基pH調(diào)至酸性提供無氧的條件培養(yǎng)基pH調(diào)至中性或弱堿性（7.0-8.0）特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要指生長(zhǎng)因子（微生物生長(zhǎng)所必須的、微量的、自身不能合成或合成很少的有機(jī)物）

種類：維生素、氨基酸、堿基、嘌呤、嘧啶、胺類等

來源：酵母膏、蛋白胨、動(dòng)植物組織提取液等(2)其他需求思考：2.任何培養(yǎng)基都必須含有有機(jī)碳源、有機(jī)氮源嗎？3.碳源都可以提供能量？含C、N的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能量。1.同一種物質(zhì)能否既做作碳源又做氮源？自養(yǎng)微生物無需有機(jī)碳源。自生固氮菌無需有機(jī)氮源。CO2是自養(yǎng)微生物的碳源，但不提供能量。4.無機(jī)氮源能提供能量嗎？通常不能直接提供能量，但：硝化細(xì)菌可NH3----HNO2-----HNO3（釋放化學(xué)能）。5.培養(yǎng)基的配置原則？目的要明確、營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)、pH要適宜。幾種微生物的營(yíng)養(yǎng)和能量來源分析用無碳培養(yǎng)基可以篩選培養(yǎng)？

用無氮培養(yǎng)基可以篩選培養(yǎng)？

自養(yǎng)微生物固氮微生物微生物碳源氮源能源藍(lán)細(xì)菌CO2NH4＋、NO3-等光能硝化細(xì)菌CO2NH3NH3的氧化根瘤菌糖類等有機(jī)物N2有機(jī)物大腸桿菌糖類、蛋白質(zhì)等有機(jī)物蛋白質(zhì)等有機(jī)物概述培養(yǎng)基的種類和營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成任務(wù)1概述培養(yǎng)基的種類和營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成任務(wù)16.下表是某微生物培養(yǎng)基的成分，請(qǐng)分析該培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)哪種微生物？若除去①，此培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)圓褐固氮菌嗎？編號(hào)①②③④⑤成分(NH4)2SO4KH2PO4FeSO4CaCl2H2O含量0.4g4.0g0.5g0.5g100mL圓褐固氮菌雖可以固氮，但其同化作用類型為異養(yǎng)型，培養(yǎng)基中必須提供有機(jī)碳源，所以該培養(yǎng)基不能用來培養(yǎng)圓褐固氮菌。此培養(yǎng)基可用來培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物。旁欄思考題：

為什么培養(yǎng)基需要氮源？培養(yǎng)基中的氮元素是微生物合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)所必需的。(1)牛肉膏和蛋白胨來源于動(dòng)物，含有糖、維生素和有機(jī)氮等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(

)(2)所有微生物在培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基中都需加入氮源(

)√×培養(yǎng)自生固氮菌的培養(yǎng)基中可以不添加氮源。(3)培養(yǎng)不同微生物的培養(yǎng)基成分完全一樣(

)×培養(yǎng)不同微生物的培養(yǎng)基成分不完全一樣，如培養(yǎng)自養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基不需要碳源，培養(yǎng)自生固氮菌的培養(yǎng)基中可以不添加氮源。跟蹤訓(xùn)練1.關(guān)于微生物的營(yíng)養(yǎng)，下列說法正確的是A.同一種物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源B.凡是碳源都能提供能量C.除水以外的無機(jī)物僅提供無機(jī)鹽D.無機(jī)氮源也可能提供能量√跟蹤訓(xùn)練2.(多選)下列有關(guān)微生物培養(yǎng)基種類及配制原則的敘述，不正確的是A.任何培養(yǎng)基都必須含有碳源、氮源、水、無機(jī)鹽及特殊的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)B.液體培養(yǎng)基可用于觀察菌落，固體培養(yǎng)基可用于工業(yè)生產(chǎn)C.微生物的生長(zhǎng)除受營(yíng)養(yǎng)因素影響外，還受pH、O2、滲透壓等的影響D.淀粉可作為所有微生物的碳源√√√培養(yǎng)基配方中一般都含有碳源、氮源、水、無機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì);一般固體培養(yǎng)基可用于觀察菌落，液體培養(yǎng)基可用于工業(yè)生產(chǎn);某些微生物不能利用淀粉，而只能利用葡萄糖、果糖、蔗糖和麥芽糖等糖類。

培養(yǎng)基的配制一

無菌技術(shù)二目錄

微生物的純培養(yǎng)三一

無菌技術(shù)二1.概念：____________

的培養(yǎng)微生物的操作技術(shù)。2.防止雜菌污染手段：主要包括

____和

____。（1）對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的

____、操作者的

________，進(jìn)行清潔和消毒。（2）將用于微生物培養(yǎng)的

____、________和

______等進(jìn)行滅菌。防止雜菌污染消毒滅菌空間衣著和手器皿接種用具培養(yǎng)基培養(yǎng)皿接種環(huán)培養(yǎng)基操作的空間、操作者的衣著和手等無菌技術(shù)除用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么作用？無菌技術(shù)還能有效避免操作者被微生物感染。超凈工作臺(tái)一

無菌技術(shù)二3.消毒使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。巴氏消毒法紫外線消毒對(duì)牛奶、啤酒、果酒和醬油等不耐高溫的液體：

62~65℃煮30min或80~90℃下處理0.5~1min?？蓺⑺澜^大部分微生物，不破壞食物的營(yíng)養(yǎng)成分。對(duì)接種室、接種箱或超凈工作臺(tái)用30W紫外線照射30min（損傷細(xì)菌DNA），以殺死物體表面或空氣中的微生物。在照射前，適量噴灑石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加強(qiáng)消毒效果。煮沸消毒法家庭餐具等生活用品用100℃煮沸5~6min?？蓺⑺牢⑸锏臓I(yíng)養(yǎng)細(xì)胞和一部分芽孢?；瘜W(xué)藥物消毒法用70%酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等。超凈工作臺(tái)原理注意事項(xiàng)優(yōu)點(diǎn)利用工作臺(tái)內(nèi)紫外線燈的殺菌作用，并通過空氣過濾器過濾確保工作臺(tái)內(nèi)空氣的無菌、無污染。超凈工作臺(tái)開機(jī)殺菌30min后，需先關(guān)掉紫外線燈，約10min后方可使用超凈工作臺(tái)。操作方便。在各種無菌操作和發(fā)酵工程產(chǎn)品的工廠化生產(chǎn)中，超凈工作臺(tái)是理想的無菌操作設(shè)備一種經(jīng)過空氣凈化而形成高潔凈操作環(huán)境的設(shè)備。無菌操作器具一

無菌技術(shù)二4.滅菌用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外的所有的微生物，包括芽孢和孢子。某些細(xì)菌在其生長(zhǎng)發(fā)育后期，在細(xì)胞內(nèi)形成的一個(gè)橢圓形的抗逆性強(qiáng)的休眠體(不是繁殖體)。芽孢萌發(fā)可形成細(xì)菌體。芽孢孢子細(xì)菌、原生動(dòng)物、真菌和植物等產(chǎn)生的一種有繁殖作用的無性生殖細(xì)胞，能直接發(fā)育成新個(gè)體。芽孢和孢子具有高度的耐熱性，可抗化學(xué)藥物和抗輻射。

芽孢壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3小時(shí)以后才死亡。4.滅菌濕熱滅菌法干熱滅菌法灼燒滅菌法高壓蒸汽滅菌鍋干熱滅菌箱接種環(huán)灼燒滅菌利用沸水、流通蒸汽、高壓蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。高壓蒸汽滅菌效果最好：培養(yǎng)基滅菌160~170℃的熱空氣中，2~3h進(jìn)行滅菌的方法耐高溫和需要保持干燥的物品（玻璃器皿、金屬用具等）充分燃燒層（外焰）接種工具（接種環(huán)、涂布器等）、其他金屬工具及接種過程（試管口或瓶口等）100kPa、121℃的條件下，維持15~30min空的玻璃器皿（如培養(yǎng)皿、離心管、移液管）、金屬用具（如鑷子、手術(shù)刀）和其他耐高溫的物品（如菌種保藏采用的沙土管、石蠟油、碳酸鈣）使滅菌器皿保持干燥。帶有膠皮或塑料的物品、液體及固體培養(yǎng)基一般不能采用電熱鼓風(fēng)干燥箱干熱滅菌。對(duì)象優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)1．電熱鼓風(fēng)干燥箱滅菌設(shè)備菌體蛋白的凝固溫度與含水量密切相關(guān)，細(xì)菌芽孢含水量低，蛋白質(zhì)凝固溫度較高。采用電熱鼓風(fēng)干燥箱干熱滅菌時(shí)，一般以能否殺死細(xì)菌的芽孢作為徹底滅菌的標(biāo)準(zhǔn)。滅菌原理注意事項(xiàng)：不得將易腐、易燃、易爆物品放入箱內(nèi)干燥滅菌；干燥箱在工作時(shí)，必須將風(fēng)機(jī)開關(guān)打開，否則會(huì)導(dǎo)致電機(jī)或傳感器燒壞；箱內(nèi)應(yīng)經(jīng)常保持清潔，長(zhǎng)期不用應(yīng)套好防塵罩，放置在干燥的室內(nèi)等。1．電熱鼓風(fēng)干燥箱滅菌設(shè)備一種高壓蒸汽滅菌鍋的結(jié)構(gòu)示意圖在一個(gè)密閉的鍋內(nèi)，水的沸點(diǎn)隨蒸汽壓力的增高而上升，加壓的同時(shí)提高蒸汽的溫度，使鍋內(nèi)的待滅菌物品在一定壓力和溫度等條件下，殺死其中所有微生物的營(yíng)養(yǎng)體及其芽孢。滅菌原理手動(dòng)式高壓蒸汽滅菌鍋；全自動(dòng)高壓蒸汽滅菌鍋。培養(yǎng)基、玻璃器皿、工作服等。種類對(duì)象2．高壓蒸汽滅菌鍋滅菌設(shè)備（最常用）操作人員必須在現(xiàn)場(chǎng)規(guī)范操作，嚴(yán)格控制熱源維持滅菌時(shí)的壓力。鍋內(nèi)壓力過高，不僅培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)被破壞，而且高壓鍋超過耐壓范圍后可能會(huì)發(fā)生爆炸，造成傷人事故等。使用高壓蒸汽滅菌鍋有什么注意事項(xiàng)？滅菌設(shè)備加水裝鍋加熱排空冷空氣保溫保壓出鍋在外層鍋內(nèi)加入適量的水，水量達(dá)到水位標(biāo)記線即可將待滅菌物品放在滅菌桶中(不要裝得太滿)，加蓋，對(duì)稱固定螺栓接通電源，打開開關(guān)，開始加熱打開排氣閥，排出鍋內(nèi)殘留的冷空氣。當(dāng)壓力表指針回降到“0”時(shí)，關(guān)閉氣閥，繼續(xù)加熱。鍋內(nèi)壓力升至約100kPa、溫度達(dá)到121℃時(shí)控制熱源，保持壓力，維持15～30min后，再關(guān)閉電源。關(guān)閉電源；當(dāng)壓力表指針降至“0”點(diǎn)，待溫度下降后，打開排氣閥，旋開固定螺栓，開蓋，取出滅菌物品。高壓蒸汽滅菌鍋的使用步驟：否則可能引起鍋內(nèi)壓力達(dá)到設(shè)定值而溫度不能達(dá)到滅菌要求。滅菌完取出物品后，將鍋內(nèi)余水倒出，保持滅菌鍋內(nèi)壁及內(nèi)膽干燥，并蓋好鍋蓋。高壓蒸汽滅菌開始之前，為什么要將鍋內(nèi)的冷空氣排盡？滅菌完畢后，為什么要待壓力降到“0”時(shí)才能打開排氣閥？在同一溫度下，濕熱的滅菌能力比干熱大，在使用高壓蒸汽滅菌時(shí)，滅菌鍋內(nèi)冷空氣的排出是否完全極為重要，因?yàn)榭諝獾呐蛎泬捍笥谒魵獾呐蛎泬海?，?dāng)水蒸氣中含有空氣時(shí)，在同一壓力下，含空氣蒸汽的溫度低于飽和蒸汽的溫度。

如果在壓力未降到“0”時(shí)打開排氣閥，會(huì)導(dǎo)致鍋內(nèi)壓力突然下降，使容器內(nèi)的培養(yǎng)基由于內(nèi)外壓力不平衡而沖出燒瓶口或試管口，造成棉塞沾培養(yǎng)基而發(fā)生污染。

思考·討論3．空氣除菌設(shè)備除菌設(shè)備（1）進(jìn)行空氣除菌的原因是什么？許多微生物產(chǎn)品是通過培養(yǎng)好氧微生物獲得的。通常在空氣中含有灰塵顆粒和各種雜菌，在陰雨天氣或環(huán)境污染比較嚴(yán)重的情況下，空氣中會(huì)懸浮大量的微生物。這些微生物一旦進(jìn)入營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基中，會(huì)很快繁殖，影響發(fā)酵過程。3．空氣除菌設(shè)備除菌設(shè)備（2）作用機(jī)理讓含菌空氣通過____________________，以阻截空氣中所含微生物。空氣除菌設(shè)備不是滅菌，而是濾除了空氣中的各種雜菌。無菌干燥的過濾介質(zhì)（3）作用通過過濾除菌處理的空氣可達(dá)到___________的程度，并有足夠的壓力和適宜的溫度，以滿足___________________的需要。幾乎無菌好氧微生物純培養(yǎng)4．微孔濾膜除菌設(shè)備

濾膜的選擇與菌體大小和特性密切相關(guān)?。

濾膜的孔徑大小直接影響其截留微生物的能力。0.1μm濾膜：去除樣品中的支原體。0.22μm濾膜：(常用)通常用于過濾99.99%的細(xì)菌?？捎行У剡^濾掉大多數(shù)常見的細(xì)菌，因此常常用于無菌過濾。0.45μm濾膜：通常用于過濾大部分細(xì)菌和一些微小的顆粒。它也經(jīng)常用于制備樣品，比如在高效液相色譜（HPLC）分析中去除樣品中的微小顆粒，例如真菌孢子及菌絲片段。0.8-1.0μm濾膜：這種孔徑的濾膜通常用于過濾較大的微生物和顆粒，例如酵母和霉菌。1-5μm濾膜：這種孔徑的濾膜通常用于過濾大顆粒，例如細(xì)胞、顆粒、沉淀物等一

無菌技術(shù)二5.無菌技術(shù)的內(nèi)容消毒和滅菌的主要方面對(duì)實(shí)驗(yàn)操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌消毒和滅菌工作之后避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸為避免周圍微生物污染，實(shí)驗(yàn)操作都應(yīng)在超凈工作臺(tái)并在酒精燈火焰旁進(jìn)行。比較項(xiàng)理化因素的作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)量芽孢和孢子能否被消滅消毒滅菌

較為溫和強(qiáng)烈部分微生物全部微生物一般不能能1.比較消毒和滅菌對(duì)微生物作用效果的差異消毒和滅菌的比較及無菌技術(shù)的其他作用任務(wù)22.牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時(shí)消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩種方法的優(yōu)點(diǎn)是什么？在達(dá)到消毒目的的同時(shí)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)損失較少。3.為什么體積分?jǐn)?shù)為70%～75%的酒精殺菌效果最好？若酒精濃度過高，菌體表面蛋白質(zhì)變性過快而凝固成一層保護(hù)膜，酒精不能滲入其中；若酒精濃度過低，殺菌能力減弱。4.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么作用？無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。目的：①防止培養(yǎng)物被污染；②防止感染實(shí)驗(yàn)操作者。消毒和滅菌的比較及無菌技術(shù)的其他作用任務(wù)25.請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。(1)培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿(2)玻棒、試管、燒瓶和吸管(3)實(shí)驗(yàn)操作者的雙手需要滅菌培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌；培養(yǎng)皿、玻璃棒、試管、燒瓶、吸管可以采用干熱滅菌法；實(shí)驗(yàn)操作者的雙手可以用酒精擦拭?！枰?1)生物消毒法是指利用生物或其代謝物去除環(huán)境中的部分微生物的方法(

)(2)與消毒相比，滅菌對(duì)微生物的殺滅更徹底(

)(3)無菌操作的對(duì)象只要是沒有生物活性的材料(如培養(yǎng)基、接種環(huán)等)，都可采用干熱滅菌法進(jìn)行滅菌(

)√√×培養(yǎng)基的滅菌一般采用濕熱滅菌法。類型適用范圍操作方法消毒滅菌較為溫和理化方法，殺死部分微生物（不包括芽孢、孢子）強(qiáng)烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法日常生活用品100℃煮沸5～6min巴氏消毒法不耐高溫的液體63～65℃消毒30min或72-76℃處理15s或80-85℃處理10-15s化學(xué)藥劑生物活體、水源等擦拭等,如用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源紫外線紫外線照射30min灼燒滅菌接種的金屬工具、接種時(shí)用的試管口或瓶口等直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒干熱滅菌耐高溫、需要保持干燥的物品,如玻璃器皿和金屬用具等干熱滅菌箱中,160～170℃的熱空氣中維持1～2h濕熱滅菌培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿等,生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)室常用高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi),100kPa,溫度121℃,15～30min接種室、接種箱，超凈工作臺(tái)小結(jié)：消毒與滅菌跟蹤訓(xùn)練3.下列有關(guān)無菌技術(shù)的說法，正確的是A.無菌技術(shù)的關(guān)鍵是殺滅實(shí)驗(yàn)室中所有的微生物B.培養(yǎng)微生物的試劑和器具都要進(jìn)行濕熱滅菌C.經(jīng)巴氏消毒法處理的食品因微生物未被徹底消滅，不能在常溫下長(zhǎng)期保存D.無菌技術(shù)中，若處理對(duì)象為液體，則只能消毒，不能滅菌√無菌技術(shù)的關(guān)鍵是防止雜菌污染，A錯(cuò)誤；無菌技術(shù)中，若處理對(duì)象為液體，可以用濕熱滅菌法滅菌，D錯(cuò)誤。跟蹤訓(xùn)練4.(2024·滄州高二月考)下列關(guān)于實(shí)驗(yàn)室無菌技術(shù)的敘述，錯(cuò)誤的是A.接種室、超凈工作臺(tái)可以用紫外線照射進(jìn)行消毒B.在100℃條件下煮沸5～6min屬于滅菌方法C.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后使用過的培養(yǎng)基應(yīng)滅菌處理后再丟棄D.金屬接種工具直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒滅菌√在100℃條件下煮沸5～6min屬于煮沸消毒法，B錯(cuò)誤。跟蹤訓(xùn)練√教材P10〔相關(guān)信息〕生物消毒法是指利用生物或其代謝物除去環(huán)境中的部分微生物的方法。例如，有的微生物能夠寄生于多種細(xì)菌體內(nèi)，使細(xì)菌裂解，因此可以用它們來凈化污水、污泥。5.(2023·山西陽泉高二期中)無菌技術(shù)圍繞著如何避免雜菌的污染展開。下列說法正確的是A.在100℃條件下煮沸5～6min屬于滅菌方法B.對(duì)接種室、涂布器、操作者的衣著和雙手只需要進(jìn)行消毒處理C.培養(yǎng)基可借助高壓蒸汽滅菌鍋或干熱滅菌箱進(jìn)行滅菌D.利用某些寄生于細(xì)菌體內(nèi)的微生物裂解細(xì)菌來凈化污水屬于生物消毒法

培養(yǎng)基的配制一

無菌技術(shù)二目錄

微生物的純培養(yǎng)三微生物在固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長(zhǎng)，可以形成肉眼可見的菌落菌落：是指由單個(gè)微生物細(xì)胞在適宜固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部生長(zhǎng)繁殖到一定程度，形成以母細(xì)胞為中心的一團(tuán)肉眼可見的、有一定形態(tài)、構(gòu)造等特征的子細(xì)胞集團(tuán)。念珠菌霉菌酵母菌放線菌注：菌落的大小、形狀、顏色、透明度、光澤度等是鑒定菌種的重要依據(jù)。強(qiáng)調(diào)：不同種類微生物的菌落特征各有特點(diǎn),但彼此之間存在一定的相似性;同種微生物的菌落特征受培養(yǎng)時(shí)間、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的含量與種類等影響也會(huì)有所差異。一

微生物的純培養(yǎng)三一

微生物的純培養(yǎng)三純培養(yǎng)物培養(yǎng)物純培養(yǎng)在微生物學(xué)中，將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含有特定種類微生物的群體獲得純培養(yǎng)物的過程由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體配制培養(yǎng)基滅菌接種分離培養(yǎng)一

微生物的純培養(yǎng)三探究

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實(shí)踐：酵母菌的純培養(yǎng)1.實(shí)驗(yàn)原理①分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，這就是菌落。馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基能滿足酵母菌生長(zhǎng)、繁殖的營(yíng)養(yǎng)需要。酵母菌培養(yǎng)基②采用平板劃線法和稀釋涂布平板法能將單個(gè)微生物分散在固體培養(yǎng)基上，之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個(gè)微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。分散或稀釋繁殖單個(gè)細(xì)胞微生物群?jiǎn)蝹€(gè)菌落平板劃線法稀釋涂布平板法把含有多種微生物的雜菌樣品，通過在特定的瓊脂平板表面劃線稀釋，從而獲得_________的方法。將微生物樣品在瓊脂平板表面多次做___________的稀釋劃線，經(jīng)過這樣的操作可得到________________________。經(jīng)過平板培養(yǎng)后，會(huì)形成部分__________________________的純種菌落。概念單個(gè)菌落“由點(diǎn)到線”較多獨(dú)立分布的單個(gè)微生物由單個(gè)微生物生長(zhǎng)、繁殖而成原理平板劃線法灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將最后一次的劃線和第一次的劃線相連。（1）五區(qū)劃線法（2）幾種劃線方法示意圖拓展平板劃線的方法平板劃線法三區(qū)劃線一

微生物的純培養(yǎng)三探究

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實(shí)踐：酵母菌的純培養(yǎng)2.實(shí)驗(yàn)?zāi)康蘑賹W(xué)會(huì)配制培養(yǎng)酵母菌的培養(yǎng)基并倒平板②學(xué)會(huì)進(jìn)行無菌操作③嘗試通過平板劃線操作來獲得純化的酵母菌菌落3.材料用具酵母菌培養(yǎng)液提供接種用的酵母菌配制酵母菌固體培養(yǎng)基馬鈴薯葡萄糖（或蔗糖）蒸餾水瓊脂一

微生物的純培養(yǎng)三探究

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實(shí)踐：酵母菌的純培養(yǎng)天平，小刀，紗布，燒杯，錐形瓶，棉塞、牛皮紙（或報(bào)紙）；皮筋，培養(yǎng)皿，接種環(huán)，酒精燈，超凈工作臺(tái)；高壓蒸汽滅菌鍋，干熱滅菌箱和恒溫培養(yǎng)箱等；超凈工作臺(tái)3.材料用具高壓蒸汽滅菌鍋干熱滅菌箱探究

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實(shí)踐：酵母菌的純培養(yǎng)一

微生物的純培養(yǎng)三探究

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實(shí)踐：酵母菌的純培養(yǎng)去皮切塊加水(1000mL)加熱煮沸軟爛馬鈴薯紗布過濾加瓊脂（15～20g）酵母菌培養(yǎng)基加蒸餾水定容(1000mL)稱取馬鈴薯馬鈴薯塊(200g)濾液加葡萄糖/蔗糖（20g）①制備培養(yǎng)基4.方法步驟調(diào)pH配制培養(yǎng)基一

微生物的純培養(yǎng)三探究

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實(shí)踐：酵母菌的純培養(yǎng)a.培養(yǎng)基——高壓蒸汽滅菌轉(zhuǎn)移滅菌15~30min皮筋勒緊包牛皮紙放入高壓蒸汽滅菌鍋中（100kPa、121℃）酵母菌培養(yǎng)基錐形瓶加棉塞高壓蒸汽滅菌鍋1.避免因水蒸氣凝結(jié)而浸濕棉塞。2.

避免再次污染①制備培養(yǎng)基4.方法步驟滅菌配制培養(yǎng)基一

微生物的純培養(yǎng)三探究

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實(shí)踐：酵母菌的純培養(yǎng)4.方法步驟b.培養(yǎng)皿——干熱滅菌滅菌2h幾層牛皮紙包緊放入干熱滅菌箱（160～170℃）5～8套培養(yǎng)皿干熱滅菌箱①制備培養(yǎng)基滅菌配制培養(yǎng)基探究

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實(shí)踐：酵母菌的純培養(yǎng)4.方法步驟培養(yǎng)基冷卻到50℃左右，在酒精燈火焰附近倒平板。1拔出錐形瓶的棉塞。2將瓶口迅速通過火焰。3用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿（10～20mL），立即蓋上皿蓋。4等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒過來放置。1.防止培養(yǎng)基水分揮發(fā)。2.防止皿蓋上冷凝水滴落，造成污染。通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。不能完全打開，以免雜菌污染培養(yǎng)基。①制備培養(yǎng)基滅菌配制培養(yǎng)基倒平板溫度過高易燙傷；低于50℃時(shí)，若不及時(shí)操作，瓊脂會(huì)凝固。分析酵母菌的純培養(yǎng)任務(wù)31.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，那么該平板還可以用來培養(yǎng)微生物嗎？最好不要再用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。防止空氣中的微生物在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。倒平板的注意事項(xiàng)

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)進(jìn)行倒平板操作。

要使錐形瓶的瓶口通過酒精燈火焰，通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。

倒平板時(shí)，要用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，不要完全打開，以免雜菌污染培養(yǎng)基。

整個(gè)操作過程要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，避免雜菌污染。探究

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實(shí)踐：酵母菌的純培養(yǎng)接種器具在無菌條件下將微生物接入培養(yǎng)基的操作過程稱為_____。在這一操作過程中，常用的接種器具包括__________________________等。接種玻璃涂布器、接種針、接種環(huán)無菌操作器具厭氧微生物接觸氧氣會(huì)受到抑制、損傷甚至死亡，常采用__________。穿刺接種一

微生物的純培養(yǎng)三探究

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實(shí)踐：酵母菌的純培養(yǎng)4.方法步驟②接種和分離酵母菌分離的方法平板劃線法

通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)過數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到單菌落。連續(xù)劃線法分區(qū)劃線法劃3個(gè)平板（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）；1個(gè)不劃線（空白對(duì)照）平板劃線法：灼燒接種環(huán)①灼燒接種環(huán)，直至接種環(huán)金屬絲燒紅。冷卻②在火焰旁冷卻接種環(huán)，拔出酵母菌培養(yǎng)液試管的棉塞。③試管口通過火焰。

蘸取菌液④在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液。⑤試管口通過火焰，并塞上棉塞。

【思考1】實(shí)驗(yàn)前灼燒接種環(huán)的目的是什么？

殺死接種環(huán)上原有微生物。避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染?！舅伎?】在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再蘸取一環(huán)菌液？避免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。平板劃線法：④在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液。⑤試管口通過火焰，并塞上棉塞。

⑥將皿蓋打開一條縫隙，將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃3-5條平行線，蓋上皿蓋。⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。灼燒接種環(huán)冷卻蘸取菌液第1區(qū)劃線灼燒接種環(huán)冷卻第2區(qū)劃線灼燒接種環(huán)冷卻12345平板劃線法：灼燒接種環(huán)冷卻蘸取菌液第1區(qū)劃線灼燒接種環(huán)冷卻第2區(qū)劃線灼燒接種環(huán)冷卻

劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落?！舅伎?】在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

殺死上次劃線時(shí)殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時(shí)菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個(gè)細(xì)胞?！舅伎?】為什么每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？12345平板劃線法：灼燒接種環(huán)冷卻蘸取菌液第1區(qū)劃線灼燒接種環(huán)冷卻第2區(qū)劃線灼燒接種環(huán)冷卻【思考5】在劃線操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？需要。殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。

不能。最后一次劃線通常已經(jīng)將微生物稀釋成單個(gè)的細(xì)胞，如果與第一次劃線相連則增加了微生物的數(shù)目，得不到純化的效果。【思考6】最后一次劃線與第一次劃線能否相連？為什么？注意：劃線時(shí)不能劃破培養(yǎng)基表面，否則會(huì)影響培養(yǎng)、分離的效果，難以達(dá)到分離單菌落的目的。【思考7】若要按照如圖進(jìn)行劃線，那么在接種劃線的操作過程中，共灼燒了幾次接種環(huán)？

如圖共劃了5個(gè)區(qū)域，在每次劃線前后均需要對(duì)接種環(huán)灼燒滅菌，因此共需灼燒接種環(huán)6次。12345一

微生物的純培養(yǎng)三探究

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實(shí)踐：酵母菌的純培養(yǎng)③培養(yǎng)酵母菌

完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個(gè)未接種的平板倒置，放入28℃左右（培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異）的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h。在實(shí)驗(yàn)室中，切不可吃東西、喝水，離開實(shí)驗(yàn)室時(shí)一定要洗手，以防止被微生物感染。使用后的培養(yǎng)基在丟棄前一定要進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境。警示4.方法步驟對(duì)照：通過觀察未接種平板是否有菌落存在以檢測(cè)培養(yǎng)基是否被污染或滅菌是否徹底。一

微生物的純培養(yǎng)三①在未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長(zhǎng)？如果有，說明了什么？②在接種酵母菌的培養(yǎng)基上，如果你觀察到了不同形態(tài)的菌落，可能是由哪些原因引起的？如果有，說明培養(yǎng)基被雜菌污染。如果觀察到了不同形態(tài)的菌落，可能是接種的菌種不純或者無菌操作不規(guī)范等原因引起的。5.結(jié)果分析與評(píng)價(jià)：探究

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實(shí)踐：酵母菌的純培養(yǎng)平板劃線法操作的注意事項(xiàng)劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。第一次劃線及每次劃線之前都需灼燒接種環(huán)滅菌，劃線操作結(jié)束后仍需灼燒接種環(huán)。灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后才能挑取菌體，以免溫度太高殺死菌種。在做第二次以及其后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線，使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終得到由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來的菌落。多次劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。接種和劃線操作需要在酒精燈火焰附近進(jìn)行。三區(qū)劃線示意圖培養(yǎng)獲得的酵母菌菌落分析酵母菌的純培養(yǎng)任務(wù)33.下列接種過程正確的順序是

。b、a、e、f、c、g、d(1)只有平板劃線法接種培養(yǎng)后可獲得單菌落(

)×獲得單菌落的方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。(2)每次劃線都要從上一次劃線的起始端開始(

)×在第二次以及其后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線。(3)經(jīng)培養(yǎng)后，只有在最后一次劃線上才會(huì)出現(xiàn)單菌落(

)×經(jīng)培養(yǎng)后，在稀釋度高的區(qū)域都會(huì)出現(xiàn)單菌落，不一定只有在最后一次劃線上才會(huì)出現(xiàn)單菌落。跟蹤訓(xùn)練5.(2023·海南三沙高二期末)下列有關(guān)微生物的分離與培養(yǎng)的敘述，錯(cuò)誤的是A.獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止雜菌污染B.倒置平板可防止培養(yǎng)皿皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基C.倒平板時(shí)將培養(yǎng)皿的皿蓋拿開，以便于將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿D.檢驗(yàn)培養(yǎng)基是否被雜菌污染的最有效方法是將未接種的培養(yǎng)基放在恒

溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)√倒平板時(shí)用食指和拇指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋，C錯(cuò)誤。跟蹤訓(xùn)練6.(多選)(2024·黑吉遼，19)某些香蕉植株組織中存在的內(nèi)生菌可防治香蕉枯萎病，其篩選流程及抗性檢測(cè)如圖。下列操作正確的是A.在大量感染香蕉枯萎病的香蕉種植園內(nèi)，從感病植株上采集樣品B.將采集的樣品充分消毒后，用蒸餾水沖洗，收集沖洗液進(jìn)行無菌檢測(cè)C.將無菌檢測(cè)合格的樣品研磨，經(jīng)稀釋涂布平板法分離得到內(nèi)生菌的單菌落D.判斷內(nèi)生菌的抗性效果需比較有無接種內(nèi)生菌的平板上的病原菌菌斑大小√√跟蹤訓(xùn)練7.在分離、純化細(xì)菌的實(shí)驗(yàn)中，劃線接種(甲)、培養(yǎng)結(jié)果(乙)如圖，a、b、c、d是劃線的四個(gè)區(qū)域。下列敘述錯(cuò)誤的是A.每次劃線前后都要對(duì)接種環(huán)灼燒滅菌B.連續(xù)劃線的目的是獲得單個(gè)細(xì)菌形成的菌落C.圖甲中的a區(qū)域?yàn)閯澗€的起始區(qū)域D.蘸取菌液和劃線要在酒精燈火焰旁進(jìn)行√題圖中a對(duì)應(yīng)的區(qū)域出現(xiàn)了單個(gè)菌落，d對(duì)應(yīng)的區(qū)域菌落最多，因此a區(qū)