白菜型冬油菜抗寒性鑒定技術(shù)規(guī)范2019-09-30實施2019-09-30實施甘肅省市場監(jiān)督管理局發(fā)布本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由甘肅省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并監(jiān)督實施。本標(biāo)準(zhǔn)由甘肅省糧食作物栽培標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)、甘肅省油菜工程技術(shù)研究中心、天水市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所、甘肅省農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣總站、全國農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣服務(wù)中心、河西學(xué)院、甘肅省農(nóng)業(yè)科學(xué)院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：孫萬倉、劉麗君、武軍艷、王學(xué)芳、王利軍、李學(xué)才、柴鵬、張亞宏、侯獻飛、劉海卿、蒲媛媛、馬驪、王積軍、曾秀存、楊蕊菊、馮克云、陳其鮮、楊剛、劉芳、方彥、米超、賈玉娟、賈娟娟。I凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB4407.2經(jīng)濟作物種子第2部分：油料類GB/T8321.9農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則(九)十字花科蕓薹屬中以收獲籽粒榨油為種植目的的一年生或越年生草本植物之一，種名為Brassica經(jīng)國家或有關(guān)部門品種審(認)定、登記或公認的具有較強抗寒性的冬油菜品種，用于校正非同批12抗寒性級別試驗種子質(zhì)量應(yīng)符合GB4407.2,數(shù)量氣候條件適宜越冬率鑒定地區(qū)氣候條件為：年平均氣溫7℃,極端低溫-25℃,最冷月平均氣溫-10℃,≥0℃積溫3500℃,≤0℃負積溫-650℃。速效磷>10mg/kg,速效鉀>100mg/kg;全鹽含量≤0.2%。4.1.3試驗設(shè)計隨機區(qū)組排列，三次重復(fù)，對照品種(校正品種)隴油株距8~10cm,行距20cm,密度44.1.4播種4.1.5生長發(fā)育期間管理按大田管理，受試材料生長至3片真葉時間苗，4片真葉時定苗，每小區(qū)每品冬率，注明調(diào)查日期，以“月/日”表示。越冬率按式(1)計算。Ns——越冬后存活株數(shù)，%;Nt——冬前總植株數(shù)。WSR≥90.0%,為I級；80.0%≤WSR<90.0%,為Ⅱ級；70.0%≤WSR<80.0%,為II級；50.0%≤越冬率范圍I級強抗寒I級抗寒IV級耐寒不抗寒4.2春化率鑒定(春化指數(shù))同4.1.1。適宜春化率鑒定地區(qū)適宜氣候條件為：年平均氣溫9℃,夏季氣溫20℃~35℃。極端低溫-20℃,最冷月平均最低氣溫-10℃,≥0℃積溫3000℃,≤0℃負積溫-400℃。同。同4.1.3。按大田管理，受試材料生長至3片真葉時間苗，4片真葉定苗，每小區(qū)每品種120株。做好病蟲害防34調(diào)查待鑒定品種群體內(nèi)各級通過春化總植株數(shù)與待鑒定品種群體總植株數(shù)，計算待春化率按式(2)計算春化指數(shù)計算共統(tǒng)計檢測100株。通過頻次分布統(tǒng)計方法確定不同春化級(類型)的權(quán)重，分別為：未現(xiàn)蕾0.01、現(xiàn)蕾Ni——群體中某一種類型的株數(shù)；Pi——該類型的權(quán)重?？购耘卸ǖ燃塈Ⅱ強抗寒I耐寒V不抗寒等級春化指數(shù)范圍IⅡ強抗寒Ⅲ耐寒V不抗寒同4.1.1。同。同4.1.3。按大田管理，受試材料生長至3片真葉時進行間苗，4片真葉時定苗，每小區(qū)每品種保留120株。防生長至五葉期，從小區(qū)中間連續(xù)取100株調(diào)查待鑒定品種群體葉色、葉片厚度、生長習(xí)性、生長錐56生長習(xí)性分級：分為五種類型(級),完全匍匐(葉片與地表夾角<10°),I級；匍匐(10°≤葉片與地表夾角<20°),Ⅱ級；半匍匐(20°≤葉片與地表夾角<30°),Ⅲ級；半直立(30°≤葉片與地表夾角≤40°),IV級；直立(葉片與地表夾角>40°),V級。生長習(xí)性指數(shù)：統(tǒng)計每種類型的植株數(shù)，共檢測100株。通過頻次分布統(tǒng)數(shù)越小，抗寒性越強。生長習(xí)性指數(shù)按式(4)計算。根頸直徑分級：I級，1.0≤根頸直徑<1.5;Ⅱ級，0.81cm≤根頸直徑<0.99cm;Ⅲ級，0.71cm≤根頸直徑<0.8cm;IV級，0.4cm≤根頸直徑<0.7根頸直徑指數(shù)：統(tǒng)計每一個測定范圍(類型)內(nèi)的植株數(shù)，共檢測100株。通過頻次分布統(tǒng)計方法寒性。根頸直徑指數(shù)越大，抗寒性越強。根頸直徑指數(shù)按式(5)計算。根據(jù)冬前生長錐高度判定采用直尺分別測量并記載越冬前生長錐高度(生長錐距地面高度，以cm為單位，與地面相比，負值代表凹陷，正值代表凸起)。生長錐高度分級：I,生長錐高度<-1.0cm;Ⅱ,-1.0cm≤生長錐高度<0.0cm;I,0.0cm≤生長錐高度<0.5cm;IV,0.6cm≤生長錐高度<1.0cm;V,生長錐高度≥1.0cm。生長錐高度指數(shù)：統(tǒng)計每一個測定范圍(類型)的植株數(shù)，共檢測100株。通過頻次分布統(tǒng)計方法性(表4)。生長錐高度指數(shù)越小，抗寒性越強。生長錐高度指數(shù)按式(6)計算。表4植物學(xué)形態(tài)特性與抗寒指標(biāo)范圍平重習(xí)性完全匍匐(葉片與地表夾角<10°)I級1匍匐(10°≤葉片與地表夾角<20°)9強抗寒半匍匐(20°≤葉片與地表夾角<30°)I級半直立(30°≤葉片與地面夾角≤40°)IV級耐寒直立(葉片與地表夾角>40°)不抗寒冬前生長錐高度生長錐高度<-1.0I級19強抗寒0.0≤生長錐高度<0.50.6≤生長錐高度<1.0IV級耐寒生長錐高度≥1.0不抗寒冬前根頸1.0≤根頸直徑<1.5I級0.81≤根頸直徑<0.99強抗寒0.71≤根頸直徑<0.80.4≤根頸直徑<0.7IV級9耐寒1不抗寒4.4半致死溫度鑒定4.4.1樣品準(zhǔn)備同4.1.1。選取飽滿種子置于鋪有4層濕潤濾紙的培養(yǎng)皿中，在培育箱20℃條件下生長36h,取露白2-5mm的種子播種到直徑15cm、高15cm的營養(yǎng)缽中，每個材料種10個營養(yǎng)缽，每營養(yǎng)缽15粒；置人工氣候室生長，培養(yǎng)條件為8000Lex16h,恒溫25℃,濕度為55-65%。4d后幼苗高達2cm,除去生長不一致苗，每營養(yǎng)缽保留10株，繼續(xù)在人工氣候室生長。4.4.3脅迫培養(yǎng)。待苗生長至6葉期左右，取第五片葉用打孔器打取小葉圓片，去離子水沖洗3次，吸干后小心將葉圓片放入15ml離心管中，加入50ul去離子水，每管放5個葉圓片。將離心管放入預(yù)冷的低溫循環(huán)儀中，0℃平衡30min。接著在每管中加入去離子水制成的碎冰以起始冷凍實驗。溫度從0℃降到-30℃,每30min降低兩度，取樣，置于冰水混合物中直至所有樣品取材完畢。用去離子水定容至10ml,搖床上輕搖2h后進行相對電導(dǎo)率測定，實驗以去離子水為空白對照，每個溫度設(shè)置三個生物學(xué)重復(fù)。784.4.4相對電導(dǎo)率測定相對電導(dǎo)率指標(biāo)測定方法參照鄒琦《植物生理生化實驗指導(dǎo)》進行測定。相對電導(dǎo)率測定-半致死溫度(LT?0)的測定半致死溫度(LT?0):將處理溫度和相對電導(dǎo)率用Logistic方程擬合，求出該曲線出現(xiàn)拐點時的溫度，以此作為組織的低溫半致死溫度。半致死溫度計算方法如下：傷害率的飽和容量，a、b為方程參數(shù)。為確定a、b的值，將方程進行線性化處理，In[(K-y)y]=lna-bx,令y1=In[(K-y)y],則轉(zhuǎn)化為細胞傷害率(y1)與處理溫度(x)的直線方程。通過直線回歸的方法求得a、b值