ICS07.080

CCSA21

CASME

中國中小商業(yè)企業(yè)協(xié)會團體標準

T/CASMEXXXX—2023

瓊脂糖-纖維素復(fù)合分離介質(zhì)

Agarose-cellulosecompositeseparationmedium

（征求意見稿）

在提交反饋意見時，請將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實施

中國中小商業(yè)企業(yè)協(xié)會??發(fā)布

T/CASMEXXXX—2023

瓊脂糖-纖維素復(fù)合分離介質(zhì)

1范圍

本文件規(guī)定了瓊脂糖-纖維素復(fù)合分離介質(zhì)的要求、試驗方法、檢驗規(guī)則、標簽、標志、包裝、運

輸、貯存和保質(zhì)期。

本文件適用于瓊脂糖-纖維素復(fù)合分離介質(zhì)的生產(chǎn)與檢測。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T191包裝儲運圖示標志

GB/T5475離子交換樹脂取樣方法

GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

GB/T38170—2019瓊脂糖分離介質(zhì)

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

瓊脂糖-纖維素復(fù)合分離介質(zhì)agarose-cellulosecompositeseparationmedium

以瓊脂糖、纖維素為主要原料制備的一類球形分離介質(zhì)。

3.2

非特異性吸附量amountofnon-specificadsorption

瓊脂糖-纖維素復(fù)合分離介質(zhì)對細胞色素C的吸附量。

4要求

4.1外觀要求

應(yīng)球形飽滿、表面光滑，在光學(xué)顯微鏡下應(yīng)具有透明性。

4.2性能要求

應(yīng)符合表1的規(guī)定。

1

T/CASMEXXXX—2023

表1性能要求

項目指標

范圍粒徑比（W粒徑）/%≥90

粒徑__

平均粒徑（d）/μm90±1037±5

最高流速/（cm/h）≥1200≥300

壓力/流速特性

0.1MPa柱壓下的流速≥300≥100

葡聚糖（Mw=102K）0.62±0.05

凝膠分配系數(shù)（Kav）葡聚糖（Mw=64K）0.71±0.05

葡聚糖（Mw=13K）0.88±0.05

非特異性吸附量/（μg/mL)≤18

固含量/%7.50±1.00

菌落總數(shù)/（CFU/mL)＜50

對應(yīng)基球的5-羥甲基糠醛脫落pH3.0≤0.25

數(shù)（μg/mL）pH13.0≤0.15

5試驗方法

5.1外觀要求

5.1.1樣品處理

按照GB/T5475直接從產(chǎn)品中抽取5mL樣品，置于50mLG3型號砂芯漏斗中抽干5min。用

符合GB/T6682的三級水清洗5次，每次2min，最后用真空泵在0.1MPa壓力下抽干5min。將

洗凈的分離介質(zhì)置于燒杯中，向其中補加三級水，保證分離個質(zhì)上應(yīng)有2cm的三級水?；靹蚝蟮玫椒?/p>

離介質(zhì)與水的混合體系。

5.1.2樣品觀測

用塑料吸管吸取混合體系置于載玻片上，調(diào)整顯微鏡放大倍數(shù)。以視野里80%以上面積均為瓊脂

糖分離介質(zhì)為標準，用塑料吸管增減載玻片上的瓊脂糖分離介質(zhì)，最后用蓋玻片壓上。調(diào)節(jié)光學(xué)顯微鏡

焦距，使視野中的影像清晰。拍攝瓊脂糖分離介質(zhì)照片并保存。

5.2性能要求

5.2.1粒徑

5.2.1.1樣品處理

方法同5.1.1。

5.2.1.2測試儀器

測試儀器包括：

a)激光粒度儀；

b)生物顯微鏡。

5.2.1.3平均粒徑

設(shè)置激光粒度儀參數(shù)如下：測量顆粒類型為通用型，分散劑類型為水，分析模式為通用模式，添加

樣品進行測定。結(jié)果以D50作為平均粒徑。

5.2.1.4范圍粒徑比

用生物顯微鏡觀察分離介質(zhì)形貌，顯微鏡放大倍數(shù)為40倍，拍攝3張圖像。圖像來自不同樣品，

每張圖像含100顆或分離介質(zhì)占視野的50%以上。用圖片處理軟件識別并統(tǒng)計分離介質(zhì)粒徑，計算粒

徑在45μm～165μm之間的分離介質(zhì)占所有分離介質(zhì)的體積比。

2

T/CASMEXXXX—2023

5.2.1.5結(jié)果計算

按GB/T38170—2019中6.2.3的方法計算。

5.2.2壓力/流速特性

5.2.2.1測試儀器

測試儀器包括:

a)蛋白層析系統(tǒng)；

b)層析柱：TRICORN10/100COLUMN。

5.2.2.2樣品裝柱

稱取8.0g重力柱抽干的分離介質(zhì)于50mL離心管，加純化水至16.0g。下端用堵頭堵住，用

塑料滴管將填料加入空柱中。裝上適配器，連接管路，取下下端堵頭，用0.65mL/min流速裝柱，至

高度、壓力穩(wěn)定。卸下裝柱器，重新安裝適配器，用6.5mL/min流速壓柱子5min，至高度、壓力再

次穩(wěn)定，與0.65mL/min裝柱后高度比，壓縮比在5%～10%。流速為0，下端用堵頭堵住，上端管路

斷開連接，將適配器下擰2mm左右。上端管路在一段時間后再連接柱子，以免引入氣泡。

5.2.2.3樣品測定

將層析柱連入蛋白層析系統(tǒng)。流速從0.5mL/min開始，檢測系統(tǒng)壓力。測定時，從0.5mL/min開

始設(shè)定一定流速v(mL/min),保持該流速5min后，記錄此時柱壓x(MPa)。每5min增加流速，

直到系統(tǒng)壓力急劇升高至3MPa,流速的升高順序依次為0.5mL/min、1.0mL/min、1.5mL/min、2.0

mL/min、3.5mL/min、4.0mL/min、4.5mL/min、5.0mL/min、6.0mL/pmin、7.0mL/min、8.0mL/min、

9.0mL/min、10.0mL/min、12.0mL/min、14.0mL/min、16.0mL/min、18.0mL/min……66.0mL/min。

測定壓力達到0.1MPa的對應(yīng)流速,記錄為0.1；測定壓力達到穩(wěn)定時的柱壓，記錄為max,壓力穩(wěn)定時

對應(yīng)的流速,記錄為vmax。

vp

5.2.2.4計算結(jié)果

按式（1）計算最高流速：

·····················································(1)

60????

式中：????=?

——最高流速，單位為厘米每小時（cm/h）；

Vmax——在壓力穩(wěn)定下的體積流速，單位為毫升每分（mL/min）；

SF——層析柱截面積，單位為平方厘米（cm2）；

60——分鐘轉(zhuǎn)化為小時的換算系數(shù)。

5.2.3凝膠分配系數(shù)

5.2.3.1測試儀器

測試儀器包括：

a)蛋白層析系統(tǒng)；

b)示差檢測器；

c)層析柱：TRICORN10/200COLUMN。

5.2.3.2樣品裝柱

稱取16.0g重力柱抽干的分離介質(zhì)于50mL離心管，加純化水至28.0g。下端用堵頭堵住，用

塑料滴管將填料加入空柱中。裝上適配器，連接管路，取下下端堵頭，用0.65mL/min流速裝柱，至

高度、壓力穩(wěn)定。卸下裝柱器，重新安裝適配器，用5.25mL/min流速壓柱子5min，至高度、壓力

3

T/CASMEXXXX—2023

再次穩(wěn)定，與0.65mL/min裝柱后高度比，壓縮比在5%～10%。流速為0，下端用堵頭堵住，上端管

路斷開連接，將適配器下擰2mm左右。上端管路在一段時間后再連接柱子，以免引入氣泡。

5.2.3.3進樣

20μL樣品中依次進樣3mg/mL藍色葡聚糖、2%丙酮、10mg/mL分子量為102K的葡聚糖標準

品、8mg/mL分子量為64K的葡聚糖標準品、8mg/mL分子量為13K的葡聚糖標準品，流速設(shè)定為

0.8mL/min。

5.2.3.4結(jié)果計算

按式（2）計算凝膠分配系數(shù)：

······················································(1)

????0

式中：???=????0

Kav——凝膠分配系數(shù)；

Ve——葡聚糖標準品的保留體積，單位為毫升（mL）；

V0——藍色葡聚糖的保留體積，單位為毫升（mL）；

Vc——丙酮的保留體積，單位為毫升（mL）。

在重復(fù)性條件下獲得的三次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。

5.2.4非特異性吸附量

5.2.4.1測試儀器

測試儀器包括：

a)蛋白層析系統(tǒng)；

b)1mL預(yù)裝柱。

5.2.4.2溶液

溶液包括：

a)緩沖液A，pH7.0：20mM磷酸鹽；

b)緩沖液B，pH7.0，20mM磷酸鹽，150mMNaCl；

c)細胞色素C標準工作溶液，用緩沖液A配置濃度為0.8mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL、

0.1mg/mL、0.05mg/mL的標準工作溶液。

5.2.4.3繪制標準曲線

利用蛋白層析系統(tǒng)，流動相緩沖液A，平衡后，依次測試0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.25mg/mL、

0.5mg/mL、0.8mg/mL的細胞色素C。進樣100μL，走旁路，即進樣質(zhì)量分別為0μg、5μg、10μg、

25μg、50μg、80μg，流速0.5mL/min，計算峰面積，用峰面積和進樣質(zhì)量作標準曲線。

5.2.4.4樣品測試

0.5mL/min流速，以mL為基準。用緩沖液A平衡10mL，進樣0.5mL細胞色素C標準工作溶

液（2mg/mL），柱沖洗10mL，用緩沖液B洗脫20mL。通過洗脫峰的峰面積計算非特異性吸附量。

5.2.4.5結(jié)果計算

按式（3）計算非特異性吸附量：

·······················································(1)

?E?E

式中：?N=?gel

——非特異性吸附量，單位為微克每毫升(μg/mL)；

N

W4

T/CASMEXXXX—2023

——洗脫峰蛋白濃度，單位為毫克每毫升(mg/mL),由標準曲線計算出；

E——洗脫峰體積，單位為毫升(mL)；

C

E——分離介質(zhì)的體積，單位為毫升(mL)。

V

gel

5.2.5V固含量

按GB/T38170—2019中6.4的規(guī)定執(zhí)行。

5.2.6菌落總數(shù)

按GB/T38170—2019中6.7的規(guī)定執(zhí)行。

5.2.7對應(yīng)基球的5-羥甲基糠醛脫落數(shù)

5.2.7.1樣品處理

用1mM的鹽酸和0.1M的NaOH處理分離介質(zhì)（分離介質(zhì)：溶液=1:1），于40℃下培養(yǎng)一

周后，測試上清液200nm～400nm的吸收。

5.2.7.2溶液配制

配制1μg/mL、5μg/mL、7.5μg/mL、10μg/mL、12.5μg/mL、15μg/mL、20μg/mL的5-HMF水

溶液。

5.2.7.3樣品測定

建立5-HMF標準曲線。配制1μg/mL、5μg/mL、7.5μg/mL、10μg/mL、12.5μg/mL、15μg/mL、

20μg/mL的5-HMF水溶液。以蒸餾水作為空白試樣，取1個已知質(zhì)量濃度的5-HMF標準溶液置于石

英比色皿中，在200nm～400nm波長范圍內(nèi)掃描，繪制光譜掃描曲線，根據(jù)掃描曲線確定最大吸收波

長。以蒸餾水作為空白，在最大吸收波長下測定其他已知濃度5-羥甲基糠醛水溶液的吸光度，繪制標準

曲線，建立回歸方程式。

6檢驗規(guī)則

6.1組批

同一工藝周期生產(chǎn)，質(zhì)量均一的產(chǎn)品為一批。

6.2抽樣

按GB/T5475的規(guī)定進行。

6.3出廠檢驗

6.3.1每批產(chǎn)品出廠前應(yīng)進行檢驗，檢驗合格的產(chǎn)品方可出廠。

6.3.2出廠檢驗項目為粒徑、壓力/流速特征和菌落總數(shù)。

6.4型式檢驗

6.4.1正常生產(chǎn)時，每半年進行一次型式檢驗，有下列情況之一時亦須進行型式檢驗：

a)新產(chǎn)品試制鑒定時；

b)正常生產(chǎn)后，如原料、工藝、設(shè)備有較大變化，可能影響產(chǎn)品性能時；

c)產(chǎn)品停產(chǎn)半年以上恢復(fù)生產(chǎn)時；

d)出廠檢驗結(jié)果與上次型式檢驗有較大差異時。

6.4.2型式檢驗項目為要求中的全部項目。

6.5判定規(guī)則