化妝品中 L-麥角硫因含量的測(cè)定高效液相色譜法_第1頁(yè)
化妝品中 L-麥角硫因含量的測(cè)定高效液相色譜法_第2頁(yè)
化妝品中 L-麥角硫因含量的測(cè)定高效液相色譜法_第3頁(yè)
化妝品中 L-麥角硫因含量的測(cè)定高效液相色譜法_第4頁(yè)
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化妝品中L-麥角硫因含量的測(cè)定高效液相色譜法本文件規(guī)定了化妝品中L-麥角硫因含量的高效液相色譜測(cè)定方法。本文件適用于膏霜乳類、液體類、凝膠類化妝品中L-麥角硫因含量的測(cè)定。本文件方法的檢出限為0.6μg/g,定量限為1.8μg/g。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法CNAS-TRL-011-2020輕工產(chǎn)品化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南3術(shù)語和定義3.1L-麥角硫因(L-ergothioneine)化學(xué)名為2-巰基組氨酸三甲基內(nèi)鹽,分子量為229.3,無色無味,極易溶于水、甲醇和乙醇,是一種具有重要生理活性的稀有天然手性氨基酸。4原理化妝品中L-麥角硫因經(jīng)5%甲醇水溶液提取,通過液相色譜分離后,用配有二極管陣列檢測(cè)器的高效液相色譜儀測(cè)定,采用保留時(shí)間和紫外光圖譜定性,用峰面積定量,以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。如液相色譜方法中檢出結(jié)果存在不確定因素,可采用液相色譜-質(zhì)譜法進(jìn)行確證。具體見附錄B。5試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格,實(shí)驗(yàn)室用水符合GB/T6682中一級(jí)水的規(guī)定。5.1甲醇(CH3OH,CAS號(hào):67-56-1):色譜純、質(zhì)譜純。5.2甲酸(HCOOH,CAS號(hào):64-18-6):色譜純。5.3二氯甲烷(CH2Cl2,CAS號(hào):75-09-2):分析純。5.4L-麥角硫因(C9H15N3O2S,CAS號(hào):497-30-3)標(biāo)準(zhǔn)品:純度≥98%。5.55%甲醇水溶液:取甲醇、水,按5:95的體積比混合,搖勻。25.60.1%甲酸水溶液:準(zhǔn)確吸取1mL甲酸(5.2)加水定容至1000mL,混勻。5.70.1%甲酸甲醇溶液:準(zhǔn)確吸取1mL甲酸(5.2)加甲醇定容至1000mL,混勻。5.8L-麥角硫因標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制:稱取L-麥角硫因標(biāo)準(zhǔn)品10mg(精確到0.00001g)置于10mL容量瓶中,用5%甲醇水溶液(5.5)溶解并定容至刻度,混勻,配制成濃度為1000μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液,現(xiàn)配現(xiàn)用。5.9L-麥角硫因標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制:準(zhǔn)確移取一定量的L-麥角硫因標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(5.8),用5%甲醇水溶液(5.5)逐級(jí)稀釋得到一系列的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(質(zhì)量濃度分別為0.18μg/mL、1.8μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、50.0μg/mL)。臨用現(xiàn)配。6.0水相系微孔濾膜:0.45μm。6儀器和設(shè)備6.1高效液相色譜儀:配有二極管陣列檢測(cè)器。6.2高效液相-三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀:配有電噴霧離子源(ESI)。6.3天平:感量0.0001g。6.4離心機(jī):轉(zhuǎn)速不低于11000r/min。6.5超聲波清洗器。6.6渦旋振蕩器。7試驗(yàn)步驟7.1樣品提取7.1.1液體類、凝膠類樣品稱取1.0g(精確到0.0001g)樣品于10mL容量瓶中,加入5%甲醇水溶液約4mL,渦旋60s,再加入5%甲醇水溶液至瓶頸處,常溫超聲提取20min,用5%甲醇水溶液定容至刻度,混勻,于11000rpm離心20min,吸取上層清液,采用0.45μm水膜過濾,濾液作為待測(cè)溶液。7.1.2膏霜乳類樣品稱取1.0g(精確到0.0001g)樣品于10mL容量瓶中,加入1mL二氯甲烷,再加入5%甲醇水溶液約3mL,渦旋60s,加入5%甲醇水溶液至瓶頸處,常溫超聲提取20min,用5%甲醇水溶液定容至刻度,混勻,于11000rpm離20min,吸取上層清液,采用0.45μm水膜過濾,濾液作為待測(cè)溶液。7.2測(cè)定7.2.1色譜參考條件色譜柱:ZORBAXSB-AQ-C18(4.6mm×250mm,5μm)或色譜柱效能相當(dāng)者;流動(dòng)相:A相為0.1%甲酸水溶液,B相為0.1%甲酸甲醇溶液,梯度洗脫條件見表1;柱溫:25℃;進(jìn)樣量:20μL;檢測(cè)波長(zhǎng):258nm;3表1流動(dòng)相梯度洗脫條件時(shí)間/minV(流動(dòng)相A)/%V(流動(dòng)相B)/%流速(mL/min)09910.699910.6505020505020.19910.6309910.67.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制用L-麥角硫因系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(5.9),參考上述色譜條件(7.2.1)進(jìn)行測(cè)定,以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制L-麥角硫因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。L-麥角硫因標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的色譜圖參見附錄A。7.2.3定量測(cè)定按照保留時(shí)間和紫外光譜圖進(jìn)行定性,樣品與相似濃度下標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間的相對(duì)偏差不大于2%,樣品與相似濃度下標(biāo)準(zhǔn)品的紫外光譜圖一致,標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。待測(cè)溶液中L-麥角硫因的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi),如超出標(biāo)準(zhǔn)工作曲線0.18μg/mL~50.0μg/mL的范圍,應(yīng)稀釋后再進(jìn)樣分析。7.2.4空白試驗(yàn)除不稱取試樣外,均按上述步驟進(jìn)行。8結(jié)果計(jì)算試樣中的L-麥角硫因含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω計(jì),數(shù)值以微克每克(μg/g)表示,按公式(1)進(jìn)行:式中:ω——試樣中L-麥角硫因含量,單位為微克每克(μg/g);c——試樣中L-麥角硫因的濃度,單位為微克每毫升(μg/mLV——試樣定容體積,單位為毫升(mL);K——稀釋倍數(shù);m——試樣質(zhì)量,單位為克(g)。計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。注:當(dāng)待測(cè)樣液中L-麥角硫因含量超過標(biāo)準(zhǔn)工作曲線范圍時(shí),進(jìn)行稀釋,即需進(jìn)行稀釋倍數(shù)換算。9精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。4附錄AL-麥角硫因標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(3.0μg/mL)的液相色譜圖L-麥角硫因標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(50μg/mL)的色譜圖見圖A.1。圖A.1L-麥角硫因標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(50μg/mL)的色譜圖L-麥角硫因的結(jié)果確證如液相色譜方法中檢出結(jié)果存在不確定因素,可采用液相色譜-質(zhì)譜法進(jìn)行確證。在相同的試驗(yàn)條件下,如果樣品中檢出的色譜峰保留時(shí)間和紫外光譜圖與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)成分一致,所選擇的監(jiān)測(cè)離子對(duì)的相對(duì)豐度比與相當(dāng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子對(duì)相對(duì)豐度比的偏差不超過表1規(guī)定范圍,則可判斷樣品中存在對(duì)應(yīng)的待測(cè)成分。表1結(jié)果確證時(shí)相對(duì)離子豐度比的最大允許偏差相對(duì)離子豐度(K)K>50%50%≥K>20%20%≥K>10%K≤10%允許的最大偏差±20%±25%±30%±50%B.1色譜參考條件流動(dòng)相:A相為水:B相為甲醇,梯度洗脫見下表2;進(jìn)樣量:1μL。2表2梯度洗脫程序時(shí)間/minV(流動(dòng)相A)/%V(流動(dòng)相B)/%流速(mL/min)09910.399910.350500.62050500.620.19910.3309910.3B.2質(zhì)譜條件離子源:電噴霧離子源(ESI源)。監(jiān)測(cè)模式:正離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式;監(jiān)測(cè)離子對(duì)及相關(guān)電壓參數(shù)設(shè)定見表3。毛細(xì)管電壓:4000V。離子源溫度:300℃。脫溶劑氣:氮?dú)?,流?1L/min,溫度30

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