光譜分析法測定含量紫外-可見分光光度法概述光譜分析法：利用物質(zhì)與電磁輻射作用時，物質(zhì)內(nèi)部發(fā)生量子化能級躍遷而產(chǎn)生的電磁輻射的強度隨波長變化的定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法。光譜分析法原子光譜分析法分子光譜分析法原子吸收光譜原子發(fā)射光譜原子熒光光譜X射線熒光光譜紫外光譜法紅外光譜法分子熒光光譜法分子磷光光譜法核磁共振波譜法紫外-可見分光光度法波長200～400nm為紫外光區(qū)，400～760nm為可見光區(qū)。紫外-可見分光光度法：?

物質(zhì)吸收紫外和可見光區(qū)的電磁波而產(chǎn)生的吸收光譜

稱為紫外-可見吸收光譜。利用紫外-可見吸收光譜進行

定性和定量分析的方法，稱為紫外-可見分光光度法。?紫外-可見分光光度法可用于藥物的鑒別、檢查和含量測定，是藥品檢驗中應(yīng)用非常廣泛的一類儀器分析方法。方法特點（1）簡便易行：儀器價格較低廉，操作簡單；（2）靈敏度高：靈敏度10-7~10-4

g/ml，適用于低濃度測定；（3）準確度較高：相對誤差約為2%，適用于對測定結(jié)果的準確度有較高要求的試樣的分析；（4）專屬性較差：對結(jié)構(gòu)相近的有關(guān)物質(zhì)缺乏選擇性，多應(yīng)用于藥物制劑溶出度或含量均勻度測定；紫外-可見分光光度法目錄第一節(jié) 紫外-分光光度法基本原理第二節(jié)

紫外-分光光度計基本構(gòu)造第三節(jié)

紫外-分光光度法應(yīng)用分光光度法是通過測定物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)的吸光度或發(fā)光強度，對該物質(zhì)進行定性和定量分析的方法。圖Io吸光度A

透光率的負對數(shù)第一節(jié)

紫外-分光光度法基本原理透光率T 透過光的強度It與入射光強度I0之比T

It

lg

1

lgT,

T

10

AItA

lg

IOT1. 透光率與吸光度朗伯-比爾定律（光的吸收定律）單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時，在一定的濃度范圍內(nèi)被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度成正比朗伯-比爾定律是分光光度法進行定量分析的理論依據(jù)第一節(jié)

紫外-分光光度法基本原理2.

朗伯-比爾定律A

lg

1

EcLT2.

朗伯-比爾定律

朗伯-比爾定律（光的吸收定律）

朗伯-比爾定律是分光光度法進行定量分析的理論依據(jù)

吸收系數(shù)，溶液濃度（1g/100ml，

液層厚度為lcm時的吸光度值；為100ml溶液中所含被測物質(zhì)

的重量（按干燥品或無水物

計算）（g）；為液層厚度（cm）第一節(jié)

紫外-分光光度法基本原理第二節(jié)紫外-分光光度計基本構(gòu)造圖1.

分光光度計的基本構(gòu)造第二節(jié)

紫外-分光光度計基本構(gòu)造光源、單色器、吸收池、檢測器和信號處理及顯示器五部分由光源發(fā)出的復(fù)合光，經(jīng)過單色器轉(zhuǎn)變?yōu)閱紊?；待測的吸光物質(zhì)溶液放在吸收池中，當強度為I0的單色光通過時，一部分光被吸收，光強發(fā)生變化，強度為It的透射光照射到檢測器上，把接收到的光信號轉(zhuǎn)換成電信號，而由電流檢測計檢測，或經(jīng)A/D轉(zhuǎn)換由計算機對采集的信號進行處理并顯示。第三節(jié)紫外-分光光度法應(yīng)用1.

測定方法(1)

對照品比較法cRARAXcX

為供試品溶液的濃度為供試品溶液的吸光度為對照品溶液的濃度為對照品溶液的吸光度cXAXcRAR第三節(jié)

紫外-分光光度法應(yīng)用待測樣品標準樣品在相同條件下測定試樣溶液吸光度(Ax)和某一濃度的標準溶液的吸光度(As)，由標準溶液的濃度(cs)可計算出試樣中的被測物濃度(cx)1.

測定方法第三節(jié)

紫外-分光光度法應(yīng)用(2).吸收系數(shù)法在規(guī)定的波長處測定其吸光度，以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計算含量

按下式計算：1%1cmE ·L100Ac

式中，CX為供試品溶液的濃度（g/ml）；AX為供試品溶液的吸光度；

為供試品中被測成分的百分吸收系數(shù)；

100為濃度換算因數(shù)(系將g/100ml換算成g/ml)。(3).標準曲線法以吸光度與相應(yīng)的濃度繪制標準曲線，再根據(jù)供試品的吸光度在標準曲線上查得其相應(yīng)的濃度，并求出其含量1.

測定方法第三節(jié)

紫外-分光光度法應(yīng)用CxAxA0Concentration要求

1.r>0.9992.n=5-73.待測濃度盡量在標準曲線中間位置標準曲線(A=aC+b,r)(4).比色法供試品本身在紫外-可見區(qū)沒有強吸收，或在紫外區(qū)雖有吸收但為了避免干擾或提高靈敏度，可加入適當?shù)娘@色劑顯色后測定計算方式與對照品比較法相同：

CX=（AX/AR）CR

但當吸光度和濃度關(guān)系不成良好線性時，采用數(shù)份梯度量的對照品溶液，以吸光度對濃度繪制標準曲線，再根據(jù)回歸方程求得供試品溶液的濃度，并計算含量。(5).計算分光光度法1.

測定方法第三節(jié)

紫外-分光光度法應(yīng)用2.

操作步驟第三節(jié)

紫外-分光光度法應(yīng)用01.開機預(yù)熱02.儀器設(shè)定03.空白調(diào)零04.樣品測定3.

應(yīng)用注意第三節(jié)

紫外-分光光度法應(yīng)用

一般采用1cm的石英吸收池，以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對照，以最大吸收波長作為測定波長；

一般供試品溶液的吸光度讀數(shù)，以在0.3

~

0.7之間為宜；

由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品

的吸光度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，或由儀器自動扣除空白讀數(shù)后再計算含量；

當溶液的pH對測定結(jié)果有影響時，應(yīng)將供試品與對照品溶液的pH應(yīng)一致；石英吸收池4.

應(yīng)用實例第三節(jié)

紫外-分光光度法應(yīng)用（一）紫外分光光度法測定維生素B12的含量吸收系數(shù)法4.

應(yīng)用實例第三節(jié)

紫外-