2010-06-24發(fā)布貴州省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I I 1 2 2 2 2 2 5 5 612NY/T402-2000脫毒甘薯種薯（苗）病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)程甘薯脫毒試管苗sweetpotatovius-feepla是一種采用較溫和的理化因素，僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分有害的病原菌，而對(duì)被采用強(qiáng)烈的理化因素使任何物體內(nèi)外部的一切微生物永遠(yuǎn)喪失其生長(zhǎng)繁能力的措施，3原原種pe-elite選擇無病蟲、品種純正的健壯植株，切取帶生長(zhǎng)點(diǎn)的莖段2.0cm～3.0cm，去掉葉片，4.3.1將表面沖洗干凈的外植體置于超凈工作臺(tái)上，先用70%的酒精表面消毒10s，再用2%的次氯酸鈉溶液消毒10min～15min后，無菌水沖洗3次～5次，置于無菌濾紙上吸去4.3.2將消毒好的外植體置于超凈工作臺(tái)上的雙目解剖鏡下，用解剖針輕輕剝?nèi)ネ庵搀w上的未開小葉至露出莖尖生長(zhǎng)點(diǎn)，在僅留兩個(gè)葉原基（大小約0.2mm～0.4mm）處用解剖甘薯莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)2～4個(gè)月，莖尖生長(zhǎng)分化即可形成具有2～3片開葉的試管苗，將其轉(zhuǎn)接到固體增培養(yǎng)基（配制方法見附錄A）內(nèi)培養(yǎng)，培養(yǎng)條件是22℃~28℃,2000按NY/T1200中的6.1.3執(zhí)行，將部分檢測(cè)合格的脫毒株系種4每段留1～2片葉，葉面朝上插在固體增培養(yǎng)基（配制方法見附~16h，相對(duì)濕度70%～80%。按NY/T1200中的6.2.1.2進(jìn)行甘薯病毒檢測(cè)，檢測(cè)的病毒類型是甘薯羽狀斑駁病毒5A.1.6酸度計(jì)或pH試紙A.2.1莖尖組織培養(yǎng)所用試劑為分析純級(jí)別，培養(yǎng)基用水為蒸餾水d)有機(jī)物：甘氨酸2.0，鹽酸硫胺素(VBl)0.4，鹽酸吡哆醇(VB6)0.5，煙酸0.5，肌醇A.3.1莖尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+GA30.05mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂A.3.2固體增培養(yǎng)基：MS+白糖30g/L+瓊脂6-9g/LA.4.5鐵鹽配制：按100倍用量分別稱取兩種試劑，單獨(dú)加6A.4.6有機(jī)物配制：以100倍用量分別稱量分別溶解，再混合、A.4.8萘乙酸NAA配制：按0.1mg/ml濃度適量稱取萘乙酸NAA，先用少許95%酒精使之A.4.9赤霉素GA3配制：按0.05mg/ml濃度適量稱取赤霉素GA3，先用少許95%酒精使之A.4.106-氨基腺嘌呤6-BA配制：按0.5mg/ml濃度適量稱取6-氨基腺嘌呤6-BA.用少a)溶化瓊脂：按需量稱取瓊脂入不銹鋼鍋內(nèi)，加入所需配制培養(yǎng)基體積一半的水，加b)加母液：將稱量好的各種母液、糖加到溶解好的瓊脂液中，繼續(xù)加熱并攪拌，待糖c)調(diào)pH值：用酸度計(jì)或精密pH試紙測(cè)量所配制培養(yǎng)基的pH值，加0.1NHC1或d)分裝：趁熱將培養(yǎng)基分裝于試