ICS65.020

B01

DB41

河南省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB41/T1379—2017

小麥品種冬春季抗寒性鑒定與評價(jià)

2017-04-24發(fā)布2017-07-24實(shí)施

河南省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

DB41/T1379—2017

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院小麥研究所。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：許為鋼、方宇輝、齊學(xué)禮、王會偉、李艷、李春鑫、董海濱。

本標(biāo)準(zhǔn)參加起草人：張煜、張文超、趙明忠、李正玲、郭瑞。

I

DB41/T1379—2017

小麥品種冬春季抗寒性鑒定與評價(jià)

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了冬小麥品種冬春季抗寒性鑒定的術(shù)語和定義、鑒定方法及評價(jià)。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于小麥種質(zhì)資源和品種的抗寒性鑒定與評價(jià)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB4404.1-2008糧食作物種子第1部分：禾谷類

NY/T496-2010肥料合理使用準(zhǔn)則通則

NY525-2012有機(jī)肥

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

冬季凍害

小麥在越冬期經(jīng)歷0℃以下連續(xù)低溫或劇烈降溫天氣而導(dǎo)致的小麥生長停滯、葉片枯死或死苗的

現(xiàn)象。

3.2

春季寒害

又稱倒春寒，春季氣溫回暖后溫度驟降到0℃（冰點(diǎn)溫度）以上低溫對小麥造成的傷害。

3.3

隸屬函數(shù)

若對論域（研究的范圍）U中的任一元素x，都有一個(gè)數(shù)A(x)∈[0，1]與之對應(yīng)，則稱A為U上的模糊

集，A(x)稱為x對A的隸屬度。當(dāng)x在U中變動時(shí)，A(x)就是一個(gè)函數(shù)，稱為A的隸屬函數(shù)。

4抗寒性鑒定

4.1鑒定前準(zhǔn)備

4.1.1種子選擇

待測試小麥種質(zhì)資源和品種的種子質(zhì)量應(yīng)符合GB4404.1-2008的規(guī)定。

4.1.2播種

4.1.2.1大田

1

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播期為當(dāng)?shù)匦←溸m播期。田間種植方法為隨機(jī)區(qū)組排列，3次重復(fù)，小區(qū)面積約13.33m2，6行區(qū)，

行距20cm左右，播量確?；久缑?67m2為12～14萬。施肥按大田常規(guī)管理，有機(jī)肥應(yīng)符合NY525-2012

的規(guī)定，化肥應(yīng)符合NY/T496-2010的規(guī)定。

4.1.2.2盆栽

選擇直徑30cm，高35cm的圓柱形盆，裝肥沃表土并施足基肥，埋于試驗(yàn)田中，盆內(nèi)土壤與盆外大

田齊平。每個(gè)參試材料種植4盆，每盆點(diǎn)播20穴，每穴1粒，定苗10株，施肥管理參見4.1.2.1。

4.1.3人工氣候室設(shè)置

-2-1

溫度變幅為±0.5℃，白天（8:00～20:00）采用人工光源補(bǔ)光，光照強(qiáng)度為600μmol?m?s。

冬季凍害鑒定，溫度為白天-10℃，夜間-13℃。春季寒害鑒定，溫度為白天0℃，夜間-3℃。

4.1.4取樣

4.1.4.1基本要求

當(dāng)氣溫達(dá)到鑒定要求時(shí)，取小麥上部3片新鮮展開葉片。

4.1.4.2冬季凍害

自然條件下，當(dāng)氣溫降至最低溫度（低于-10℃）后，4h～8h內(nèi)取樣。

盆栽條件下，小麥進(jìn)入六葉一心時(shí)，將其移入人工氣候室進(jìn)行低溫處理，以不進(jìn)行低溫處理的材料

作為對照。植株經(jīng)低溫處理12h后進(jìn)行取樣。

4.1.4.3春季寒害

自然條件下，氣溫發(fā)生比正常溫度陡降8℃以上，4h～8h內(nèi)取樣。

盆栽條件下，進(jìn)入拔節(jié)期后對小麥進(jìn)行穗分化觀察，發(fā)育至藥隔期將其移入人工氣候室進(jìn)行低溫處

理,對照設(shè)置和取樣方法參見4.1.4.2。

4.1.5儀器與試劑

測定指標(biāo)所需儀器和試劑見附錄A中A.1.2和A.1.3、附錄B中B.1.2和B.1.3及附錄C中C.1.2和C.1.3。

4.2鑒定方法

4.2.1抗寒性指標(biāo)測定

4.2.1.1可溶性糖含量

采用蒽酮比色法。實(shí)驗(yàn)步驟和結(jié)果計(jì)算見附錄A中A.2和A.3。

4.2.1.2超氧化物歧化酶（SOD）活性

采用氮藍(lán)四唑(NBT)光化還原法。實(shí)驗(yàn)步驟和結(jié)果計(jì)算見附錄B中B.2和B.3。

4.2.1.3丙二醛（MDA）含量

采用硫代巴比妥酸（TBA）反應(yīng)法。實(shí)驗(yàn)步驟和結(jié)果計(jì)算見附錄C中C.2和B.3。

5抗寒性評價(jià)

2

DB41/T1379—2017

5.1性狀相對值計(jì)算

性狀相對值計(jì)算見公式（1）。

Xj=（xj/CKj）×100%…………（1）

式中：

Xj—第j個(gè)指標(biāo)的性狀相對值，作為評價(jià)材料抗寒性的指標(biāo)；

xj—低溫處理下第j個(gè)指標(biāo)的測定值；

CKj—第j個(gè)指標(biāo)的對照處理測定值。

5.2隸屬函數(shù)值計(jì)算

各參試小麥材料相對性狀的隸屬函數(shù)值計(jì)算見公式（2）和（3）。

ｕ（Xij）＝（Xij－Xmin）/（Xmax－Xmin）（與抗寒性呈正相關(guān)的指標(biāo)）…………（2）

ｕ（Xij）＝1－（Xij－Xmin）/（Xmax－Xmin）（與抗寒性呈負(fù)相關(guān)的指標(biāo)）…………（3）

式中：

ｕ（Xij）—第i個(gè)樣品，第j個(gè)指標(biāo)的隸屬函數(shù)值；

Xij—第i個(gè)樣品，第j個(gè)指標(biāo)的性狀相對值；

Xmax和Xmin—某指標(biāo)性狀相對值的最大值和最小值。

5.3抗寒性評價(jià)值計(jì)算

參試小麥材料的冬春季抗寒性評價(jià)值計(jì)算見公式（4）。

Di=∑ｕ（Xij）/n…………（4）

式中：

Di—第i個(gè)樣品的抗寒性評價(jià)值；

n—測定指標(biāo)數(shù)。

5.4抗寒性分級

根據(jù)抗寒性評價(jià)值D將小麥的抗寒性分為三個(gè)等級，見表1。

表1小麥抗寒性分級標(biāo)準(zhǔn)

級別抗寒性評價(jià)值（D）抗寒性

10.65<D≤1.00強(qiáng)

20.40<D≤0.65中等

30.00<D≤0.40弱

3

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AA

附錄A

（規(guī)范性附錄）

小麥葉片可溶性糖含量測定

A.1試驗(yàn)準(zhǔn)備

A.1.1材料

取被測小麥品種新鮮葉片，剪碎并混勻。

A.1.2儀器設(shè)備

分光光度計(jì)；電子分析天平；水浴鍋；100mL容量瓶；試管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。

A.1.3試劑及配制

蒽酮試劑：稱取蒽酮200mg溶于100mL濃硫酸中。該試劑不能久貯，宜用前配制。

100μg·mL-1蔗糖標(biāo)準(zhǔn)母液：準(zhǔn)確稱取蔗糖100mg于燒杯加少量水溶解后，洗入100mL容量瓶中定

容至刻度。

A.2實(shí)驗(yàn)步驟

A.2.1蔗糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

取6支試管，編號，按表A.1配制每管含量為0μg～100μg蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液。加入表中試劑后，向各管

沿管壁迅速加入蒽酮試劑6.5mL，并立即搖動使混合均勻，置試管架上室溫下顯色，冷卻后倒入比色杯，

以0號管作空白對照，在620nm波長處，以多點(diǎn)校準(zhǔn)總量法，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

表A.1蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液的配制

管號

試劑

012345

蔗糖標(biāo)準(zhǔn)母液/mL00.20.40.60.81

蒸餾水/mL2.52.32.11.91.71.5

每管蔗糖含量/μg020406080100

A.2.2樣品提取

取低溫脅迫后的新鮮小麥葉片約1g，剪碎混勻后放入試管中，加入蒸餾水10mL，置于沸水浴中提

取20min，冷卻后過濾入100mL容量瓶中，以熱水沖洗殘?jiān)?～3次，一并濾入容量瓶中，待冷至室溫，

定容至刻度，即為樣品待測液。

A.2.3可溶性糖含量測定

4

DB41/T1379—2017

吸取待測液0.2mL（含糖量30μg～80μg），加入試管中，再加蒸餾水2.3mL，搖勻。隨后沿試

管壁迅速加入蒽酮試劑6.5mL，立刻搖動混合均勻，置于試管架上顯色，冷卻至室溫后，以空白管作對

照，在620nm波長處，按多點(diǎn)校準(zhǔn)定量法測定待測管中提取液糖含量。

A.3結(jié)果計(jì)算

可溶性糖含量計(jì)算見公式（A.1）。

（m×Va）/(1000×Vb）

WSS=…………（A.1）

W×1000

式中：

-1

WSS—可溶性糖含量，mg·g；

m—提取液中糖含量，μg；

W—小麥葉片鮮重，g；

Va—提取液總量，mL；

Vb—待測液用量，mL。

5

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BB

附錄B

（規(guī)范性附錄）

小麥葉片SOD活性測定

B.1試驗(yàn)準(zhǔn)備

B.1.1材料

取被測小麥品種新鮮葉片（大田材料16:00取樣），剪碎并混勻。

B.1.2儀器設(shè)備

分光光度計(jì)；高速冷凍離心機(jī)；熒光燈（反應(yīng)試管處照度為4000Lx）、微量移液器等、離心管數(shù)

支。

B.1.3試劑及配制

磷酸緩沖液配制：A液：0.2M的KH2PO4溶液稱取分析純KH2PO427.216g，用蒸餾水定容至1000mL。

B液：0.2M的K2HPO4溶液稱取分析純K2HPO4?3H2O45.644g，用蒸餾水定容至1000mL。

0.05M磷酸緩沖液（pH=7.8）：A液21.25mL+B液228.25mL定容至1000mL。

130mMMet(甲硫氨酸)：取1.9399gMet,用磷酸緩沖液定容至100mL；棕色瓶避光4℃保存。

750μMNBT（氮藍(lán)四唑）：取0.06133gNBT,用磷酸緩沖液定容至100mL；棕色瓶避光4℃保存。

100μMEDTA-Na2：取0.0372gEDTA-Na2用磷酸緩沖液定容至1000mL，棕色瓶避光保存。

20μMFD(核黃素)：0.00753gFD用蒸餾水定容至1000mL。隨用隨配。棕色瓶避光保存。

B.2實(shí)驗(yàn)步驟

B.2.1酶液提取

取低溫脅迫后的新鮮小麥葉片約0.5g于預(yù)冷的研缽中，加1mL預(yù)冷的0.05M磷酸緩沖液（pH=7.8）

在冰浴上研磨成漿，加緩沖液使最終體積為5mL，在4℃冷凍離心4000r/min下離心20min，上清液即

為SOD酶粗提液，置于0℃～4℃下保存待用。

B.2.2顯色反應(yīng)

取透明度較好的5mL離心管4支，2支為測定管，2支為對照管，1支做光反應(yīng)對照，1支做空白（對

照、空白不加酶液，以緩沖液代替）。按表B.1依次加入各溶液：

表B.1各溶液顯色反應(yīng)用量

試劑用量/mL終濃度

0.05M磷酸緩沖液1.5–

130mMMet0.313mM

750μMNBT0.375μM

100μMEDTA-Na20.310μM

6

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表B.1各溶液顯色反應(yīng)用量（續(xù)）

試劑用量/mL終濃度

20μMFD0.32.0μM

酶液0.052支對照管以緩沖液代替酶液

蒸餾水0.25–

總體積3.0–

混勻后將空白管對照管置黑暗處，其它各管于4000Lx日光下反應(yīng)20min，要求各管受光情況一致，

根據(jù)溫度情況來調(diào)整反應(yīng)時(shí)間，溫度高，反應(yīng)時(shí)間縮短。反應(yīng)結(jié)束后遮光保存。

B.2.3SOD活性測定與計(jì)算

以空白管調(diào)零，560nm比色，分別測定其它管的吸光度。

B.3結(jié)果計(jì)算

已知SOD活性單位以抑制NBT光化還原的50%為一個(gè)酶活性單位表示，SOD活性計(jì)算見公式（B.1）。

（ACK—AE）×V

USOD=…………（B.1）

0.5W×Vt×ACK

式中:

-1

USOD—SOD總活性，U·g；

ACK—照光對照管的吸光度；

AE—樣品管的吸光度；

V—樣品液總體積，mL；

Vt—測定時(shí)的酶液用量，mL；

W—小麥葉片鮮重，g。

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CC

附錄C

（規(guī)范性附錄）

小麥葉片MDA含量測定

C.1試驗(yàn)準(zhǔn)備

C.1.1材料

取被測小麥品種新鮮葉片，剪碎并混勻。

C.1.2儀器設(shè)備

離心機(jī)，分光光度計(jì)；電子分析天平；恒溫水??；研缽；離心管；移液器（1mL、5mL）；洗耳球；

剪刀。

C.1.3試劑

10％三氯乙酸；0.6％硫代巴比妥酸（TBA）溶液；石英砂。

C.2實(shí)驗(yàn)步驟

C.2.1MDA的提取

稱取低溫脅迫后的小麥葉片1g，加入少量石英砂和10％三氯乙酸2mL，研磨至勻漿，再加8mL10％

三氯乙酸進(jìn)一步研磨，勻漿以4000r/min離心10min，其上清液為丙二醛提取液。

C.2.2顯色反應(yīng)及測定

取4支干凈試管，編號，3支為樣品管（三個(gè)重復(fù)），各加入提取液2mL，對照管加蒸餾水2mL，然

后各管再加入2mL0.6％硫代巴比妥酸溶液。搖勻，混合液在沸水浴中反應(yīng)15min，迅速冷卻后再離心。

取上清液分別在532、600和450nm波長下測定吸光度（A）值。

C.3MDA含量計(jì)算

C.3.1反應(yīng)混合液中MDA濃度

反應(yīng)混合液中MDA濃度計(jì)算見公式（C.1）。

Cm=6.45×（A532－A600）－0.56×A450…………

（C.1）

式中：

-1

Cm—反應(yīng)混合液中MDA濃度，μmol·L；

A450—在450nm波長下測得的吸光度值；

A532—在532nm波長下測得的吸光度值；

A600—在600nm波長下測得的吸光度值。

C.3.2提取液中MDA濃度

8

DB41/T1379—2017

提取液中MDA濃度計(jì)算見公式（C.2）。

Cm×Vr/1000

Ce=…………（C.2）

Vd

式中：

-1

Ce—提取液中MDA濃度，μmol·mL；

Vr—反應(yīng)液體積，mL；

Vd—測定時(shí)提取液用量，mL。

C.3.3樣品中MDA含量

樣品中MDA含量計(jì)算見公式（C.3）。

Ce×VT

WMDA=…………（C.3）

W

式中：

-1

WMDA—樣品中MDA含量，μmol·g；

VT—提取液總量，mL；

W—小麥葉片鮮重，g。

_________________________________

9

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前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。

本標(biāo)準(zhǔn)由河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院小麥研究所。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：許為鋼、方宇輝、齊學(xué)禮、王會偉、李艷、李春鑫、董海濱。

本標(biāo)準(zhǔn)參加起草人：張煜、張文超、趙明忠、李正玲、郭瑞。

I

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小麥品種冬春季抗寒性鑒定與評價(jià)

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了冬小麥品種冬春季抗寒性鑒定的術(shù)語和定義、鑒定方法及評價(jià)。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于小麥種質(zhì)資源和品種的抗寒性鑒定與評價(jià)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

GB4404.1-2008糧食作物種子第1部分：禾谷類

NY/T496-2010肥料合理使用準(zhǔn)則通則

NY525-2012有機(jī)肥

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1

冬季凍害

小麥在越冬期經(jīng)歷0℃以下連續(xù)低溫或劇烈降溫天氣而導(dǎo)致的小麥生長停滯、葉片枯死或死苗的

現(xiàn)象。

3.2

春季寒害

又稱倒春寒，春季氣溫回暖后溫度驟降到0℃（冰點(diǎn)溫度）以上低溫對小麥造成的傷害。

3.3

隸屬函數(shù)

若對論域（研究的范圍）U中的任一元素x，都有一個(gè)數(shù)A(x)∈[0，1]與之對應(yīng)，則稱A為U上的模糊

集，A(x)稱為x對A的隸屬度。當(dāng)x在U中變動時(shí)，A(x)就是一個(gè)函數(shù)，稱為A的隸屬函數(shù)。

4抗寒性鑒定

4.1鑒定前準(zhǔn)備

4.1.1種子選擇

待測試小麥種質(zhì)資源和品種的種子質(zhì)量應(yīng)符合GB4404.1-2008的規(guī)定。

4.1.