基因工程的基本操作步驟（趙莉公開(kāi)課）ppt1、基因工程包括哪些步驟？3、基因工程中的核心環(huán)節(jié)是哪一步？4、基因表達(dá)載體導(dǎo)入到受體細(xì)胞有哪些方法？5、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞就會(huì)成功表達(dá)嗎？如何檢測(cè)和鑒定？2、什么是目的基因？獲取的方法有哪些方法？思考討論問(wèn)題：銀燭秋光冷畫(huà)屏，輕羅小扇撲流螢；天階夜色涼如水，坐看牛郎織女星?；蚬こ痰幕静僮鞒绦蛞?、目的基因的獲取二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞四、目的基因的檢測(cè)與鑒定主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因(一）目的基因

目前被廣泛提取使用的目的基因有：蘇云金桿菌抗蟲(chóng)基因、植物抗病基因（抗病毒、抗細(xì)菌)、人胰島素基因等。一、目的基因的獲取（二）獲取目的基因的方法1、從基因文庫(kù)中直接獲取2、PCR技術(shù)擴(kuò)增3、人工合成——核心二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建科學(xué)家在培育抗蟲(chóng)棉時(shí)，起初把蘇云金芽孢桿菌的抗蟲(chóng)基因插入載體質(zhì)粒中，然后導(dǎo)入棉花的受精卵中，結(jié)果抗蟲(chóng)基因在棉花體內(nèi)沒(méi)有表達(dá)。資料:然后在插入抗蟲(chóng)基因的質(zhì)粒中插入抗蟲(chóng)基因啟動(dòng)子，導(dǎo)入棉花受精卵，長(zhǎng)成的棉花植株還是沒(méi)有抗蟲(chóng)能力?？茖W(xué)家又在有啟動(dòng)子、抗蟲(chóng)基因的質(zhì)粒中插入抗蟲(chóng)基因終止子，導(dǎo)入棉花受精卵，結(jié)果成長(zhǎng)的植株，有了抗蟲(chóng)能力。

編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)啟動(dòng)子啟動(dòng)子：位于基因首端一段能與RNA聚合酶結(jié)合并能起始mRNA合成的序列。沒(méi)有啟動(dòng)子，基因就不能轉(zhuǎn)錄。RNA聚合酶:能夠識(shí)別啟動(dòng)子上的結(jié)合位點(diǎn)并與其結(jié)合的一種蛋白質(zhì).終止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片斷，它能阻礙RNA聚合酶的移動(dòng)，并使其從DNA模板鏈上脫離下來(lái)，使轉(zhuǎn)錄終止。終止子編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)啟動(dòng)子終止子AGGTCACGTCGTCCAGTGCAGCRNA聚合酶AGGUCACGUCG基因表達(dá)載體的組成：b、目的基因a、啟動(dòng)子c、終止子d、標(biāo)記基因e、復(fù)制原點(diǎn)1、下列屬于獲取目的基因的方法的是①利用mRNA反轉(zhuǎn)錄形成②從基因組文庫(kù)中提?、蹚氖荏w細(xì)胞中提取④利用PCR技術(shù)⑤利用DNA轉(zhuǎn)錄 ⑥人工合成A.①②③⑤B.①②⑤⑥C.①②③④D.①②④⑥小試牛刀2、有關(guān)基因工程的敘述中，錯(cuò)誤的是A、DNA連接酶將黏性末端的堿基對(duì)連接起來(lái)B、限制性?xún)?nèi)切酶用于目的基因的獲得C、目的基因須由運(yùn)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞D、人工合成目的基因不用限制性?xún)?nèi)切酶小試牛刀3、1997年，科學(xué)家將動(dòng)物體內(nèi)的能夠合成胰島素的基因與大腸桿菌的DNA分子重組，并且在大腸桿菌中表達(dá)成功。請(qǐng)據(jù)右下圖回答問(wèn)題。(1)此圖表示的是采取__________合成基因的方法獲取__________基因的過(guò)程。(2)圖中①DNA是以為_(kāi)_________________模板，形成單鏈DNA，在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得了所需要的目的基因。人工目的

控制胰島素合成的信使RNA

小試牛刀(3)圖中③代表

，它往往含

基因，以便對(duì)目的基因的檢測(cè)。重組DNA分子

標(biāo)記

歡迎各位領(lǐng)導(dǎo)老師蒞臨我校再見(jiàn)1、從基因文庫(kù)中直接獲?。?）基因文庫(kù)的概念部分基因文庫(kù)：基因組DNA文庫(kù)：將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導(dǎo)入到受體菌的群體中，各個(gè)受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱(chēng)為基因文庫(kù)含有一種生物的全部基因只包含了一種生物的部分基因，如:cDNA文庫(kù)（2）基因文庫(kù)的建立方法提取某種生物的全部DNA用適當(dāng)?shù)南拗泼该盖幸欢ù笮〉腄NA片段將DNA片段與運(yùn)載體連接導(dǎo)入受體菌中儲(chǔ)存基因組文庫(kù)方法一：直接分離法(鳥(niǎo)槍法)某種生物的單鏈mRNA單鏈互補(bǔ)DNA雙鏈cDNA片段導(dǎo)入受體菌中儲(chǔ)存與運(yùn)載體連接cDNA文庫(kù)反（逆）轉(zhuǎn)錄酶DNA聚合酶方法二：反轉(zhuǎn)錄法--cDNA的合成流程圖解PCR技術(shù)—聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR擴(kuò)增儀DNA雙鏈復(fù)制的基本原理一段已知目的基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸一對(duì)引物熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶）模板DNA2、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因原理：前提：原料：條件：利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因5’3’G—GT—C3’5’A—GC—C5’3’引物ⅡG—G高溫變性低溫退火中溫延伸1.目的基因DNA受熱變性，解鏈；5’3’A—G

引物Ⅰ2.引物與單鏈互補(bǔ)結(jié)合；3.合成鏈在DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸。蛋白質(zhì)的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列目的基因推測(cè)推測(cè)化學(xué)合成3、人工合成1.大葉性（肺泡性）肺炎為肺實(shí)質(zhì)炎癥，通常累及肺大葉的全部或大部，并不累及支氣管。病原體現(xiàn)在肺泡引起炎癥，繼之導(dǎo)致部分或整個(gè)肺段、肺葉發(fā)生炎癥改變，致病菌多為肺炎鏈球菌。本病多見(jiàn)于青壯年，臨床起病急，主要癥狀為寒顫高熱、咳嗽、胸痛、呼吸困難和咳鐵銹色痰。2.小葉性（支氣管）肺炎指病原體經(jīng)支氣管入侵，引起細(xì)支氣管、終末細(xì)支氣管和肺泡的炎癥。病原體有肺炎鏈球菌、葡萄球菌、病毒、肺炎支原體以及軍團(tuán)菌等。常繼發(fā)于支氣管炎、支氣管擴(kuò)張、上呼吸道病毒感染以及長(zhǎng)期臥床的危重病人。3.間質(zhì)性肺炎以肺間質(zhì)炎癥為主，病變累及支氣管壁及其周?chē)M織，有肺泡壁增生及間質(zhì)水腫。可由細(xì)菌、支原體、衣原體、病毒或卡氏肺囊蟲(chóng)等引起。病因?qū)W分類(lèi)1.細(xì)菌性肺炎如肺炎鏈球菌（即肺