ICS

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藍(lán)莓常見品種鑒定技術(shù)規(guī)程

分子標(biāo)記法

遼寧省市場監(jiān)督管理局??發(fā)

布

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本文件按照

《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則

歸口管理部門通訊地址：遼寧省林業(yè)和草原局（沈陽市和平區(qū)太原北街號），聯(lián)系電話：

本文件適用于分子標(biāo)記技術(shù)構(gòu)建個(gè)常見藍(lán)莓品種指紋圖譜過程中分子數(shù)據(jù)采集和

LY/T

聚合酶鏈反應(yīng)（

，是以為模板，在聚合酶、引物、

1~6

A

B

℃進(jìn)行長期保存。

mg

×

，將上清液移至新的離心管中；

×

×

×

i)

沖液（TE），室溫放置

×

離心

，將溶液收集到離心管中，以待檢測。

V

吸取

檢測濃度和是否有

的反應(yīng)體系：正反向引物（

）各

、模板

ng

℃預(yù)變性

將洗凈晾干的玻璃板用水平灌膠的方式組裝玻璃板，鐵夾固定，取

TBE

烯酰胺，

去離子水于燒杯中，加入

TEMED

聚丙烯酰胺加

TEMED)LY/T

方邊緣，將電源線正極接下槽，負(fù)極接上槽。電壓為

V，根據(jù)指示劑位置調(diào)整時(shí)間，電泳到樣品與

定膠：將在一起的丙烯酰胺長玻璃板入塑料淺中，加入定液，將璃板在搖

預(yù)冷顯色液的塑料盤中，并于搖床上緩慢搖動(dòng)持續(xù)顯色，直至全部條帶出現(xiàn)；

在選取的個(gè)常見藍(lán)莓品種中，對對核心引物個(gè)藍(lán)EAB

F

將需要進(jìn)行品種鑒定的材料根據(jù)操作程序進(jìn)行樣品準(zhǔn)備、提取、質(zhì)量檢測、擴(kuò)增與

高壓滅菌鍋（

℃～

℃，最大工作壓力

）；凝膠自動(dòng)掃描儀（百萬像素）；高速冷凍離心機(jī)（最大離心力不小于

g）；擴(kuò)增儀（

℃～

℃）；多功能酶標(biāo)儀；恒溫水

g

mm

試劑盒、液氮、無水乙醇、瓊脂糖、

bp

bp

EDTATEMED）、

g

g

L

g

L

EDTA

L

TBE緩沖液

g三羥基氨基甲烷，

g

EDTA

L

TBE緩沖液

TBE

L

g

mL）

TBE

TEMED

、加水

L

g

L

g

LFCCACCTTCGGTGGTCTCCCRTGGCAGCAGTTGAGGGAACAFTCTCCCTTCTCTCTCTGCACGRACTGTGTTTGTACTTCCGCCCTF:

TGCTTTCCCATTGACCTGCCR:

AGGACGAGATTTG