PAGEIIPAGE血液中酒精含量的檢測(cè)方法及結(jié)果分析摘要為了保證人們的外出安全，隨著馬路上汽車數(shù)量的增多，當(dāng)前社會(huì)對(duì)于汽車駕駛的要求相對(duì)較高，尤其對(duì)于酒駕的懲處力度較大。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，當(dāng)駕駛員血液中的酒精含量超過一定的度，就認(rèn)定為酒駕范圍。常見的酒駕的檢測(cè)方式比較簡(jiǎn)單，一般通過常規(guī)的呼吸儀器從而檢測(cè)駕駛員呼出的氣體中酒精的比例基本確定酒駕范圍。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域針對(duì)酒駕的檢測(cè)手段更加專業(yè)，不僅僅通過呼出的氣體分析其中的酒精比例，同時(shí)還可以通過一定的專業(yè)儀器測(cè)量血液中酒精成分的比例，近幾年生物方式也發(fā)展的如火如荼，就想通過酒精轉(zhuǎn)換酶的方式確定酒精含量都是可行的檢測(cè)方式。當(dāng)前在試驗(yàn)階段比較高端的檢測(cè)方式就是頂空色相色譜法，這一方式利用了酒精成分消耗其中的有效成分的比例從而確定酒精比例，這樣的方式比較精確，一般出現(xiàn)誤差的概率較小。但是當(dāng)前這一技術(shù)的實(shí)驗(yàn)條件并不穩(wěn)定，一般檢測(cè)的時(shí)間偏長(zhǎng)，同時(shí)對(duì)于操作人員的專業(yè)技能要求較高，經(jīng)濟(jì)成本也相對(duì)較大，在實(shí)際應(yīng)用中并沒有得到廣泛普及。但是從研究領(lǐng)域來看，該方式的研究?jī)r(jià)值很大，需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)改善其存在的各項(xiàng)不穩(wěn)定因素，讓這一方式進(jìn)一步走向市場(chǎng)。為方便全市交警執(zhí)法執(zhí)勤工作，本研究從臨床快速檢驗(yàn)的實(shí)際出發(fā)，參考蒸餾酒中衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法（GB/T5009.48-2003）。在有限的實(shí)驗(yàn)條件下在特定的地區(qū)進(jìn)行小范圍實(shí)驗(yàn)，以該檢測(cè)方式為輔助檢測(cè)手段，計(jì)算實(shí)驗(yàn)樣本的有效數(shù)據(jù)信息，確定該方式檢測(cè)酒精成分的成功概率，進(jìn)一步檢測(cè)該方式的使用價(jià)值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，頂空進(jìn)樣氣象色譜法可對(duì)樣品中乙醇的含量進(jìn)行更快速準(zhǔn)確的分析。關(guān)鍵詞：氣相色譜；血中乙醇

目錄摘要 I1緒論 11.1研究背景 11.2研究現(xiàn)狀 11.2酒精檢測(cè)方法研究現(xiàn)狀 21.3相關(guān)概念 41.3.1乙醇的代謝 41.3.2氣相色譜法 42氣相色譜法檢測(cè)血液中的酒精含量 62.1材料與方法 62.1.1儀器和試劑 62.1.2樣本來源 62.1.3色譜條件 62.1.4血液中乙醇含量檢測(cè) 62.2結(jié)果 72.2.1建立血液中乙醇濃度檢測(cè)的校正曲線 72.2.2選擇合適的內(nèi)標(biāo)物 72.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線 72.2.4回收率 72.2結(jié)論 83結(jié)論 8參考文獻(xiàn) 9致謝 10PAGE11緒論1.1研究背景二零零八年，世界相關(guān)組織出臺(tái)了一系列的安全出行管理?xiàng)l例。隨著私家車的普及，為了保證人們的外出安全，當(dāng)前社會(huì)對(duì)于汽車駕駛的要求相對(duì)較高，尤其對(duì)于酒駕的懲處力度較大。相關(guān)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，二零零八年一年間就發(fā)生了大約百分之五十點(diǎn)六的交通安全事故屬于酒駕出事，而且在車禍中致死的情況中，大部分都是因?yàn)榫坪篑{車。世界調(diào)查數(shù)據(jù)表明，這一年巴西國家百分之二十就得車禍致死狀況都是由于酒駕。事故發(fā)生之后，交警對(duì)駕駛員體內(nèi)的酒精含量進(jìn)行檢測(cè)。超過百分之八十四點(diǎn)一的車禍司機(jī)體內(nèi)的酒精含量都超過了一百毫升血液中含有一百毫克酒精比例，這一數(shù)據(jù)相當(dāng)令人震驚，同時(shí)也說明了酒駕的破壞力巨大。國內(nèi)每年因?yàn)榫岂{發(fā)生的車禍數(shù)目超過幾萬件，其中這些車禍司機(jī)中百分之四十六點(diǎn)一的司機(jī)是因?yàn)榫坪篑{駛。酒駕是馬路安全的第一大威脅因子，不僅是對(duì)自己的生命不負(fù)責(zé)任，同時(shí)也是對(duì)路人的生命安全不負(fù)責(zé)的表現(xiàn)。二零一零年八月，國家政府專門的管理機(jī)構(gòu)針對(duì)酒駕出臺(tái)了詳細(xì)的管理規(guī)范，同時(shí)以法律作為規(guī)范約束的準(zhǔn)繩。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，當(dāng)駕駛員血液中的酒精含量超過一定的度，就認(rèn)定為酒駕范圍。常見的酒駕的檢測(cè)方式比較簡(jiǎn)單，一般通過常規(guī)的呼吸儀器從而檢測(cè)駕駛員呼出的氣體中酒精的比例基本確定酒駕范圍。一般情況下認(rèn)為司機(jī)體內(nèi)的酒精含量都超過了一百毫升血液中含有二十毫克酒精比例，同時(shí)又低于一百毫升血液中含有八十毫克酒精比例就算做酒駕范圍，當(dāng)司機(jī)體內(nèi)的酒精含量都超過了一百毫升血液中含有八十毫克酒精比例就認(rèn)定為醉駕，具有較為嚴(yán)重的責(zé)任問題追究。很多時(shí)候，當(dāng)駕駛員血液中的酒精含量超過一定的度，就認(rèn)定為酒駕范圍。常見的酒駕的檢測(cè)方式比較簡(jiǎn)單，一般通過常規(guī)的呼吸儀器從而檢測(cè)駕駛員呼出的氣體中酒精的比例基本確定酒駕范圍。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域針對(duì)酒駕的檢測(cè)手段更加專業(yè)，不僅僅通過呼出的氣體分析其中的酒精比例，同時(shí)還可以通過一定的專業(yè)儀器測(cè)量血液中酒精成分的比例，近幾年生物方式也發(fā)展的如火如荼，就想通過酒精轉(zhuǎn)換酶的方式確定酒精含量都是可行的檢測(cè)方式。而且伴隨著法律的健全，專門針對(duì)酒駕的管理規(guī)范明確規(guī)定，依據(jù)司機(jī)的飲酒程度以及車禍的嚴(yán)重程度進(jìn)行司法管理。這樣就給酒駕的酒精飲用程度的判斷提出了較高的要求，不僅需要對(duì)車禍司機(jī)的酒駕程度進(jìn)行判定，還需要保證精確度，這樣才能進(jìn)一步保證這一交通安全管理規(guī)范的公平公正公開原則。1.2研究現(xiàn)狀隨著私家車的普及，為了保證人們的外出安全，當(dāng)前社會(huì)對(duì)于汽車駕駛的要求相對(duì)較高，尤其對(duì)于酒駕的懲處力度較大。相關(guān)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，二零零八年一年間就發(fā)生了大約百分之五十點(diǎn)六的交通安全事故屬于酒駕出事，而且在車禍中致死的情況中，大部分都是因?yàn)榫坪篑{車。世界調(diào)查數(shù)據(jù)表明，這一年巴西國家百分之二十就得車禍致死狀況都是由于酒駕。事故發(fā)生之后，交警對(duì)駕駛員體內(nèi)的酒精含量進(jìn)行檢測(cè)。超過百分之八十四點(diǎn)一的車禍司機(jī)體內(nèi)的酒精含量都超過了一百毫升血液中含有一百毫克酒精比例，這一數(shù)據(jù)相當(dāng)令人震驚，同時(shí)也說明了酒駕的破壞力巨大。常見的酒駕的檢測(cè)方式比較簡(jiǎn)單，一般通過常規(guī)的呼吸儀器從而檢測(cè)駕駛員呼出的氣體中酒精的比例基本確定酒駕范圍。具體的操作方式就是司機(jī)手拿著呼吸檢測(cè)儀器，對(duì)著呼吸儀器呼一口氣，從該儀器的顏色變化判斷是否為酒駕。同樣在醫(yī)學(xué)得到了廣泛應(yīng)用的就是最直接的血檢來判斷血液中的酒精比例。但是很多時(shí)候血檢有抽血的環(huán)節(jié)就存在一定的風(fēng)險(xiǎn)，需要的專業(yè)程度較高，同時(shí)也需要及時(shí)將血樣送檢才能保證時(shí)效性以及準(zhǔn)確性。毫無疑問，這樣的血檢方式對(duì)于司機(jī)的身體健康存在一定程度的威脅，而且血檢從送樣到分析出結(jié)果所需的時(shí)長(zhǎng)較長(zhǎng)，在實(shí)際應(yīng)用中會(huì)存在一定的限制，而且醫(yī)院血檢會(huì)收取一定的費(fèi)用，當(dāng)今法律對(duì)這一點(diǎn)的規(guī)范并不明確，所以爭(zhēng)議很大，很多時(shí)候司機(jī)對(duì)于血檢都有不同程度的不滿，相對(duì)而言，實(shí)際應(yīng)用性較差。很多時(shí)候，由于交警出勤的位置比較分散。這樣頻繁的送檢血樣從而抽查酒駕問題在一定程度上會(huì)影響交通，同時(shí)對(duì)于司機(jī)的時(shí)間要求也有限制，而且，這樣的實(shí)際操作起來，樣本數(shù)目很大，不僅存在費(fèi)用支付問題，同時(shí)對(duì)于司機(jī)的身體健康也有一定的風(fēng)險(xiǎn)，并不適用于廣泛普及使用。至于通過常規(guī)的呼吸儀器從而檢測(cè)駕駛員呼出的氣體中酒精的比例基本確定酒駕范圍的方式在當(dāng)前的實(shí)際應(yīng)用中得到了廣泛普及。具體的操作方式就是司機(jī)手拿著呼吸檢測(cè)儀器，對(duì)著呼吸儀器呼一口氣，從該儀器的顏色變化判斷是否為酒駕。但是這一方式在實(shí)際的應(yīng)用中的準(zhǔn)確性有待考察，這樣就可能會(huì)出現(xiàn)漏網(wǎng)之魚或者冤枉好人，在國家針對(duì)酒駕問題進(jìn)行一步加大監(jiān)管力度的同時(shí)，這一方式明顯不能得到大力推廣。這幾年除了血檢方式的進(jìn)一步優(yōu)化，隨著科技的發(fā)展。人們逐步開發(fā)出新的檢測(cè)方式，就想利用物理學(xué)知識(shí)開發(fā)的新型紅外檢測(cè)儀就是當(dāng)前酒駕檢測(cè)技術(shù)的標(biāo)桿，這一技術(shù)從1980年開始研究開發(fā)，人們對(duì)這一技術(shù)的期待值也很高。相對(duì)于血檢方式對(duì)于司機(jī)的身體健康存在一定程度的威脅，實(shí)際操作起來，樣本數(shù)目很大，不僅存在費(fèi)用支付問題，同時(shí)對(duì)于司機(jī)的身體健康也有一定的風(fēng)險(xiǎn)，而通過常規(guī)的呼吸儀器從而檢測(cè)駕駛員呼出的氣體中酒精的比例這一方式在實(shí)際的應(yīng)用中的準(zhǔn)確性有待考察的缺點(diǎn)來說，紅外線檢測(cè)儀基本克服了這些缺點(diǎn)。因?yàn)榧t外檢測(cè)的樣本收取時(shí)間很短，而且準(zhǔn)確性很高。從經(jīng)濟(jì)成本角度考慮，紅外線檢測(cè)儀只需要考慮儀器本身的制作成本，對(duì)于后期的檢測(cè)并不存在費(fèi)用問題。從生物學(xué)健康角度來說，紅外線檢測(cè)儀對(duì)于生物體的并沒有損傷，能保證生命體的健康。集合這些優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)克服了既定的檢測(cè)方式所存在的缺陷，這一方式上處于研究階段，并沒有在市面上流行，但是值得期待。1.2酒精檢測(cè)方法研究現(xiàn)狀在很早以前。國際上就有很多學(xué)者針對(duì)酒駕問題提出了很多研究看法，同時(shí)詳細(xì)分析了酒精在人體內(nèi)的運(yùn)作方式，以及從醫(yī)學(xué)角度上剖析了酒精對(duì)司機(jī)的駕駛技術(shù)以及頭腦的清醒程度，并進(jìn)行系統(tǒng)化分析歸納。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域針對(duì)酒駕的檢測(cè)手段更加專業(yè)，不僅僅通過呼出的氣體分析其中的酒精比例，同時(shí)還可以通過一定的專業(yè)儀器測(cè)量血液中酒精成分的比例，近幾年生物方式也發(fā)展的如火如荼，就想通過酒精轉(zhuǎn)換酶的方式確定酒精含量都是可行的檢測(cè)方式。隨著科技的發(fā)展，紅外檢測(cè)儀的問世也為酒駕檢測(cè)帶來了福音。國內(nèi)外的學(xué)者專家對(duì)于酒精在人生體內(nèi)的代謝方式進(jìn)行了分析，就像英國學(xué)者通過化學(xué)的方式檢測(cè)人體呼出的氣體中酒精成分。而一八九六年法國學(xué)者則通過通過生理學(xué)上酒精成分在人體內(nèi)的運(yùn)轉(zhuǎn)代謝的特征性因素發(fā)表了相關(guān)的論文研究成果。除此之外還有很多專業(yè)研究學(xué)針對(duì)酒精成分在人體的代謝的中間產(chǎn)物以及生物學(xué)或者化學(xué)上能檢測(cè)出人體呼出氣體的酒精成分的方式研究了一系列的酒駕檢測(cè)方式。直到一九六八年，紅外線檢測(cè)儀器的誕生，最初紅外檢測(cè)法主要用于生物學(xué)上農(nóng)產(chǎn)品的相關(guān)成分因子等問題的檢測(cè)。在一九七七年，該研究人員發(fā)現(xiàn)紅外線的波長(zhǎng)范圍能夠確定不同有機(jī)成分的含量，主要通過紅外線掃描之后不同的有機(jī)物自身所攜帶的特征性基團(tuán)原子所對(duì)應(yīng)的特征吸收峰不同，這一發(fā)現(xiàn)讓紅外線在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域得到了廣泛發(fā)展。之后紅外檢測(cè)在多個(gè)領(lǐng)域的實(shí)際應(yīng)用中得到了更加完善系統(tǒng)的開發(fā)。1978年美國和加拿大采用近紅外作為分析小麥蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)方法1990年，Amold和Small采用近紅外光譜法進(jìn)行了葡萄糖水溶液的濃度測(cè)量。1992年，Pollard和Hall采用近紅外分析技術(shù)定量地檢測(cè)血清中葡萄糖、蛋白質(zhì)等重要成分的含量。l998年美國材料實(shí)驗(yàn)學(xué)會(huì)制訂了近紅外光譜測(cè)定多元醇中經(jīng)值含量的標(biāo)準(zhǔn)方法。l999年，Kevin等科學(xué)研究人員定量檢測(cè)和分析了血清中葡萄糖、蛋白質(zhì)、膽固醇及尿素等成分的含量與構(gòu)成。新世紀(jì)以來，徐可欣在天津大學(xué)成立了無創(chuàng)血糖測(cè)量小組，進(jìn)行近紅外無創(chuàng)傷人體血糖濃度測(cè)量的專項(xiàng)研究。2003年我國正式實(shí)施了近紅外光譜方法測(cè)定飼料中水分、粗蛋白、粗纖維、粗脂肪等的國家標(biāo)準(zhǔn)。近年來，近紅外光譜分析技術(shù)已在許多領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。清華大學(xué)醫(yī)學(xué)院生物醫(yī)學(xué)工程系丁海曙采用近紅外吸收光譜方法進(jìn)行血氧飽和度測(cè)量就是成功的先例，該方法可直接測(cè)量組織或血管等部位。正是由于近紅外檢測(cè)具有實(shí)時(shí)、無創(chuàng)、速度快、準(zhǔn)確性好的優(yōu)點(diǎn)，可以克服抽血檢測(cè)和護(hù)旗法檢測(cè)方法的缺點(diǎn)，并具有抽血檢測(cè)的精度，呼氣檢測(cè)的快速，所以近紅外光譜法被認(rèn)為是一種比較有應(yīng)用前景的人體內(nèi)酒精無損檢測(cè)技術(shù)，國內(nèi)外都十分重視該技術(shù)的開發(fā)與應(yīng)用。1.3相關(guān)概念1.3.1乙醇的代謝乙醇的分子式為CH3CH20H，其中含有能與水分子結(jié)合形成氫鍵的極性基團(tuán)，因此乙醇可以跟水以任意比例互溶。乙醇通過口腔進(jìn)入人體后，經(jīng)過食道、胃腸等器官直接透過生物膜進(jìn)入血液循環(huán)，可以立即被運(yùn)送到全身各個(gè)組織器官。人們?cè)诤染七^后，對(duì)駕駛車輛有六項(xiàng)很重要的影響，主要表現(xiàn)為：視覺障礙、運(yùn)動(dòng)反射神經(jīng)遲鈍、觸覺能力降低、判斷能力和操作能力降低、心理變態(tài)、易疲勞。飲酒后造成的生理變化與乙醇的代謝密不可分。從生理學(xué)角度來看，人體內(nèi)大約百分之九十點(diǎn)九五的酒精成分在肝臟中進(jìn)行分解消化，肝臟看做人體的解毒器官。乙醇在體內(nèi)的代謝主要分為乙醇被氧化為乙醛，乙醛被氧化為乙酸，乙酸再被徹底氧化三個(gè)過程。代謝過程中乙醛氧化成乙酸的過程相對(duì)緩慢，由于乙醛的毒性比乙醇更大，它能加速血液循環(huán)，而且還阻礙氧化鎂的氧化作用。因此，乙醛在胃腸中滯留時(shí)間長(zhǎng)，含量高，會(huì)刺激大腦神經(jīng)，引起長(zhǎng)時(shí)間的頭痛，國外有學(xué)者證實(shí)了這一點(diǎn)是飲酒造成死亡的原因之一。在成年人體內(nèi)，乙醇的平均氧化速度為120mg/kg，一般情況下，人們?cè)陲嬀坪?分鐘便可以從血液中檢出，血液中的乙醇濃度在30-60分鐘內(nèi)達(dá)到峰值，隨后逐漸降低，乙醇代謝的時(shí)間規(guī)律，為司法鑒定提供了相當(dāng)必要的參考依據(jù)。在司法鑒定過程中，有些采血不夠及時(shí)的，鑒定人員可以通過采血時(shí)間，來估算駕駛員在車輛駕駛時(shí)體內(nèi)的乙醇濃度。1.3.2氣相色譜法氣相色譜法（gaschromatography簡(jiǎn)稱GC）是色譜法的一種。色譜法中有兩個(gè)相，一個(gè)相是流動(dòng)相，另一個(gè)相是固定相。如果用液體作流動(dòng)相，就叫液相色譜，用氣體作流動(dòng)相，就叫氣相色譜。氣相色譜法由于所用的固定相不同，可以分為兩種，用固體吸附劑作固定相的叫氣固色譜，用涂有固定液的單體作固定相的叫氣液色譜。按色譜分離原理來分，氣相色譜法亦可分為吸附色譜和分配色譜兩類，在氣固色譜中，固定相為吸附劑，氣固色譜屬于吸附色譜，氣液色譜屬于分配色譜。按色譜操作形式來分，氣相色譜屬于柱色譜，根據(jù)所使用的色譜柱粗細(xì)不同，可分為一般填充柱和毛細(xì)管柱兩類。一般填充柱是將固定相裝在一根玻璃或金屬的管中，管內(nèi)徑為2～6毫米。毛細(xì)管柱則又可分為空心毛細(xì)管柱和填充毛細(xì)管柱兩種。空心毛細(xì)管柱是將固定液直接涂在內(nèi)徑只有0.1～0.5毫米的玻璃或金屬毛細(xì)管的內(nèi)壁上，填充毛細(xì)管柱是近幾年才發(fā)展起來的，它是將某些多孔性固體顆粒裝入厚壁玻管中，然后加熱拉制成毛細(xì)管，一般內(nèi)徑為0.25～0.5毫米。在實(shí)際工作中，氣相色譜法是以氣液色譜為主。氣相色譜法的發(fā)展與兩個(gè)方面的發(fā)展是密不可分，一是氣相色譜分離技術(shù)的發(fā)展，二是其他學(xué)科和技術(shù)的發(fā)展。1952年James和Martin提出氣液相色譜法，同時(shí)也發(fā)明了第一個(gè)氣相色譜檢測(cè)器。這是一個(gè)接在填充柱出口的滴定裝置，用來檢測(cè)脂肪酸的分離，用滴定溶液體積對(duì)時(shí)間做圖，得到積分色譜圖。之后，他們又發(fā)明了氣體密度天平。1954年Ray提出熱導(dǎo)計(jì)，開創(chuàng)了現(xiàn)代氣相色譜檢測(cè)器的時(shí)代。此后至1957年，則進(jìn)入填充柱、TCD的年代。1958年Gloay首次提出毛細(xì)管，同年，Mcwillian和Harley同時(shí)發(fā)明了FID，Lovelock發(fā)明了氬電離檢測(cè)器（AID）使檢測(cè)方法的靈敏度提高了2～3個(gè)數(shù)量級(jí)。1950年到1970年間，由于氣相色譜技術(shù)的發(fā)展，柱效大為提高，環(huán)境科學(xué)等學(xué)科的發(fā)展，提出了痕量分析的要求，又陸續(xù)出現(xiàn)了一些高靈敏度、高選擇性的檢測(cè)器，如1960年Lovelock提出電子俘獲檢測(cè)器（ECD）；1966年Brody等發(fā)明了FPD；1974年Kolb和Bischoff提出了電加熱的NPD；1976年美國HNU公司推出了實(shí)用的窗式光電離檢測(cè)器（PID）等。同時(shí)，由于電子技術(shù)的發(fā)展，原有的檢測(cè)器在結(jié)構(gòu)和電路上又作了重大的改進(jìn)，如TCD出現(xiàn)了衡電流、橫熱絲溫度及衡熱絲溫度檢測(cè)電路；ECD出現(xiàn)衡頻率變電流、衡電流脈沖調(diào)制檢測(cè)電路等，從而使性能又有所提高。1970年開始，由于彈性石英毛細(xì)管柱的快速廣泛應(yīng)用，對(duì)檢測(cè)器提出了體積小、響應(yīng)快、靈敏度高、選擇性好的要求，特別是計(jì)算機(jī)和軟件的發(fā)展，使TCD、FID、ECD、和NPD的靈敏度和穩(wěn)定性均有很大提高，TCD和ECD的檢測(cè)池體積大大縮小。進(jìn)入1980年，由于電子技術(shù)、計(jì)算機(jī)和軟件的飛速發(fā)展使MSD生產(chǎn)成本和復(fù)雜性下降，以及穩(wěn)定性和耐用性增加，從而成為最通用的氣相色譜檢測(cè)器之一。期間出現(xiàn)了非放射性的脈沖放電電子俘獲檢測(cè)器（PDECD）、脈沖放電氦電離檢測(cè)器（PDHID）和脈沖放電光電離檢測(cè)器（PDECD）以及集次三者為一體的脈沖放電檢測(cè)器（PDD）。四年后，美國Varian公司推出了商品儀器，它比通常FPD靈敏度高100倍。另外，快速GC和全二維GC等快速分離技術(shù)的迅猛發(fā)展，也促使快速GC檢測(cè)方法逐漸成熟。2氣相色譜法檢測(cè)血液中的酒精含量2.1材料與方法2.1.1儀器和試劑天美7890型氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測(cè)器，mx3mmGDX-103不銹鋼填充色譜柱，KYS-688A型中文色譜記錄儀。乙醇色譜分析純、正丁醇色譜分析純，乙醇用于制備標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品，繪制曲線，正丁醇作為內(nèi)標(biāo)溶液，4°C密封保存。2.1.2樣本來源蕪湖市交警支隊(duì)各大隊(duì)送來的可疑酒精中毒駕駛員，肘靜脈采血3-5mL于真空采血管中（內(nèi)有肝素抗凝劑），密封，立即送檢。2.1.3色譜條件色譜條件為柱溫150C，進(jìn)樣室和檢測(cè)器溫度190C，載氣、氫氣流速比1：1.5，載氣為氮?dú)?。進(jìn)樣方式：柱頭直接進(jìn)樣，進(jìn)樣量1.0uL。色譜柱：柱長(zhǎng)30m、液膜厚1μm、內(nèi)徑為530μm，柱溫為40℃，進(jìn)樣方式：柱頭直接進(jìn)樣；加熱器溫度300℃；分流比為10:1；載氣流速分別為：氮?dú)?ml/min，氫氣30ml/min，空氣400ml/min。2.1.4血液中乙醇含量檢測(cè)將采集的血液樣本于2500r/min離心5min，取上清液1.0mL，加入濃度為100mg/100mL內(nèi)標(biāo)溶液1.0mL，1：1稀釋，混勾，按前述色譜條件1.3直接進(jìn)樣1.0ul，得到氣相色譜檢測(cè)的譜圖（附后），記錄峰面積，計(jì)算乙醇/內(nèi)標(biāo)峰面積比，校正曲線法計(jì)算乙醇含量，每個(gè)樣本平行進(jìn)樣2次，其平均值即為樣本中乙醇含量，根據(jù)乙醇含量診斷酒精中毒及程度。2.1.5叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備用天平稱取1.050g叔丁醇置于500ml容量瓶中，加蒸餾水至刻度，搖勻，得到200mg/100ml叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，冷藏備用。該溶液為內(nèi)標(biāo)物。2.1.6乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液制備取8.008g的無水乙醇置于100ml容量瓶中，加蒸餾水定容至刻度線。即可得到8000mg/100ml的乙醇儲(chǔ)備液，冷藏備用。然后將儲(chǔ)備液稀釋，分別得到五組不同濃度的乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液。2.2實(shí)驗(yàn)步驟2.2.1定性分析采集不飲酒者血樣為空白血樣，用移液槍移取0.5ml空白全血兩份，分別加入兩個(gè)樣品瓶中。取其中一份加入2.1.6中100mg/100ml的乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液5μl，再加入2.1.5中的叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1ml，密封搖勻，作為乙醇的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照樣品；另一份只加入0.1ml叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，密封搖勻，作為空白對(duì)照樣品。把樣品瓶放入頂空進(jìn)樣器，按照前述2.1.3分析條件直接進(jìn)樣，進(jìn)行氣相色譜分析。每個(gè)樣品平行進(jìn)樣兩次。2.2.2定量分析用移液槍移取待測(cè)血液樣品0.5ml，置于頂空瓶中，加入制備200mg/100m叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)溶液（內(nèi)標(biāo)溶液）0.1ml，密封搖勻后放入頂空進(jìn)樣器中，按照上述分析條件開始進(jìn)行氣相色譜分析。并記錄每個(gè)樣品峰面積，計(jì)算乙醇/內(nèi)標(biāo)峰面積比。每個(gè)樣品平行進(jìn)樣2次。3結(jié)果討論3.1定性分析結(jié)果空白對(duì)照樣品的內(nèi)標(biāo)叔丁醇峰保留時(shí)間為2.672min；標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照樣品兩個(gè)峰的保留時(shí)間分別為1.973min和2.673min，比較兩個(gè)對(duì)照樣品的峰的保留時(shí)間，可知保留時(shí)間為1.973min的峰為乙醇峰。叔丁醇保留時(shí)間存在微小偏差，可能是因?yàn)闅庀笊V儀的靈敏度或是外界產(chǎn)生波動(dòng)引起的，經(jīng)過計(jì)算得知偏差小于3%，故此次定性具有準(zhǔn)確性。3.2結(jié)果3.2.1建立血液中乙醇濃度檢測(cè)的校正曲線采集不飲酒者血樣為空白血樣，2500r/min離心5min，取其上清液配成含酒精成分的以下四組不同比例的標(biāo)準(zhǔn)系列，分別加入濃度為100mg/100mL內(nèi)標(biāo)溶液于標(biāo)準(zhǔn)系列中，1：1稀釋，混勻，按前述色譜條件1.3直接進(jìn)樣1.0ul檢測(cè)，得到氣相色譜檢測(cè)的譜圖，記錄峰面積，計(jì)算乙醇/內(nèi)標(biāo)物峰面積比。（表1）。每個(gè)標(biāo)本平行進(jìn)樣2次，取其平均值建立血液中乙醇濃度檢測(cè)的校正曲線。表1標(biāo)準(zhǔn)系列的濃度和乙醇/內(nèi)標(biāo)物峰面積比3.2.2選擇合適的內(nèi)標(biāo)物由得到的氣相色譜圖顯示待測(cè)物乙醇（酒精）和內(nèi)標(biāo)物（正丁醇）峰形等稱，分離完全，出峰時(shí)間分別為乙醇（1.02±0.03）min，正丁醇（4.87±0.09）min。3.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線經(jīng)計(jì)算血液中酒精濃度的校正曲線為y=0.006688x-0.00795，其中x代表樣品中乙醇的濃度，而y代表紅外線所對(duì)應(yīng)的特征吸收峰的面積比例大小。其中線性靠近的比例為零點(diǎn)九九六六，在線性范圍內(nèi)都符合規(guī)范。相對(duì)偏差小于百分之四，可以用此方法檢測(cè)血液中酒精含量。3.2.4回收率在實(shí)際實(shí)驗(yàn)過程中，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)的殘留樣品進(jìn)行回收，也就是需要進(jìn)行空白對(duì)照，從而進(jìn)一步計(jì)算其中的回收比例。至于空白對(duì)照試驗(yàn)的制備就是取三組不同酒精濃度的標(biāo)準(zhǔn)血樣，那就是每一百毫升血樣中含有二十克、八十克、一百二十克三組空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)組，依次進(jìn)行試驗(yàn)，從而進(jìn)一步對(duì)比確定實(shí)驗(yàn)中酒精的回收比例。以紅外檢測(cè)儀分別進(jìn)行其他變量相同的實(shí)驗(yàn)，每次都重復(fù)進(jìn)行三次，保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性，每次都詳細(xì)記錄紅外反射的特征峰的特征面積，然后計(jì)算面積比例，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行校準(zhǔn)，這樣進(jìn)行試驗(yàn)之后，可以得到四組實(shí)驗(yàn)值的回收比例以及各自的誤差范圍，那就是105.0%±2.9%、97.5%±3.0%、96.9%±2.7%和96.7±2.8%，總體而言，四組實(shí)驗(yàn)的回收比例都在百分之九十六之上，平均值為百分之九十九，具體數(shù)據(jù)如下表。表2血液中乙醇加標(biāo)回收率2.2結(jié)論這一氣相色譜檢測(cè)方式對(duì)于儀器設(shè)備的要求并不高，而且時(shí)間很短，基本維持在十分鐘。相對(duì)于簡(jiǎn)單的頂空方式進(jìn)行測(cè)量，這樣的方式更加易于操作，不僅經(jīng)濟(jì)劃算，而且時(shí)效性很高，在實(shí)際應(yīng)用中有著很大的發(fā)展?jié)摿Α?結(jié)論隨著私家車的普及，為了保證人們的外出安全，當(dāng)前社會(huì)對(duì)于汽車駕駛的要求相對(duì)較高，尤其對(duì)于酒駕的懲處力度較大。相關(guān)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，二零零八年一年間就發(fā)生了大約百分之五十點(diǎn)六的交通安全事故屬于酒駕出事，而且在車禍中致死的情況中，大部分都是因?yàn)榫坪篑{車。世界調(diào)查數(shù)據(jù)表明，這一年巴西國家百分之二十就得車禍致死狀況都是由于酒駕。事故發(fā)生之后，交警對(duì)駕駛員體內(nèi)的酒精含量進(jìn)行檢測(cè)。超過百分之八十四點(diǎn)一的車禍司機(jī)體內(nèi)的酒精含量都超過了一百毫升血液中含有一百毫克酒精比例，這一數(shù)據(jù)相當(dāng)令人震驚，同時(shí)也說明了酒駕的破壞力巨大。國內(nèi)每年因?yàn)榫岂{發(fā)生的車禍數(shù)目超過幾萬件，其中這些車禍司機(jī)中百分之四十六點(diǎn)一的司機(jī)是因?yàn)榫坪篑{駛。酒駕是馬路安全的第一大威脅因子，不僅是對(duì)自己的生命不負(fù)責(zé)任，同時(shí)也是對(duì)路人的生命安全不負(fù)責(zé)的表現(xiàn)。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，當(dāng)駕駛員血液中的酒精含量超過一定的度，就認(rèn)定為酒駕范圍。常見的酒駕的檢測(cè)方式比較簡(jiǎn)單，一般通過常規(guī)的呼吸儀器從而檢測(cè)駕駛員呼出的氣體中酒精的比例基本確定酒駕范圍。一般情況下認(rèn)為司機(jī)體內(nèi)的酒精含量都超過了一百毫升血液中含有二十毫克酒精比例，同時(shí)又低于一百毫升血液中含有八十毫克酒精比例就算做酒駕范圍，當(dāng)司機(jī)體內(nèi)的酒精含量都超過了一百毫升血液中含有八十毫克酒精比例就認(rèn)定為醉駕，具有較為嚴(yán)重的責(zé)任問題追究。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域針對(duì)酒駕的檢測(cè)手段更加專業(yè)，不僅僅通過呼出的氣體分析其中的酒精比例，同時(shí)還可以通過一定的專業(yè)儀器測(cè)量血液中酒精成分的比例，近幾年生物方式也發(fā)展的如火如荼，就想通過酒精轉(zhuǎn)換酶的方式確定酒精含量都是可行的檢測(cè)方式。而且伴隨著法律的健全，專門針對(duì)酒駕的管理規(guī)范明確規(guī)定，依據(jù)司機(jī)的飲酒程度以及車禍的嚴(yán)重程度進(jìn)行司法管理。這樣就給酒駕的酒精飲用程度的判斷提出了較高的要求，不僅需要對(duì)車禍司機(jī)的酒駕程度進(jìn)行判定，還需要保證精確度，這樣才能進(jìn)一步保證這一交通安全管理規(guī)范的公平公正公開原則。相對(duì)于血檢方式對(duì)于司機(jī)的身體健康存在一定程度的威脅，實(shí)際操作起來，樣本數(shù)目很大，不僅存在費(fèi)用支付問題，同時(shí)對(duì)于司機(jī)的身體健康也有一定的風(fēng)險(xiǎn)，而通過常規(guī)的呼吸儀器從而檢測(cè)駕駛員呼出的氣體中酒精的比例這一方式在實(shí)際的應(yīng)用中的準(zhǔn)確性有待考察的缺點(diǎn)來說，紅外線檢測(cè)儀基本克服了這些缺點(diǎn)。因?yàn)榧t外檢測(cè)的樣本收取時(shí)間很短，而且準(zhǔn)確性很高。從經(jīng)濟(jì)成本角度考慮，紅外線檢測(cè)儀只需要考慮儀器本身的制作成本，對(duì)于后期的檢測(cè)并不存在費(fèi)用問題。從生物學(xué)健康角度來說，紅外線檢測(cè)儀對(duì)于生物體的并沒有損傷，能保證生命體的健康。集合這些優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)克服了既定的檢測(cè)方式所存在的缺陷，這一方式上處于研究階段，并沒有在市面上流行，但是值得期待。這一氣相色譜檢測(cè)方式對(duì)于儀器設(shè)備的要求并不高，而且時(shí)間很短，基本維持在十分鐘。相對(duì)于簡(jiǎn)單的頂空方式進(jìn)行測(cè)量，這樣的方式更加易于操作，不僅經(jīng)濟(jì)劃算，而且時(shí)效性很高，在實(shí)際應(yīng)用中有著很大的發(fā)展?jié)摿?。參考文獻(xiàn)[1]董鵬，李修良，車輯，田鳴.術(shù)中自體回收洗滌紅細(xì)胞攜氧能力評(píng)價(jià)[J].中國輸血雜志，2016，（03）：235-238.[2]楊家麗，曾西，王曉敏，黃開勇，鄧宇，楊駿，楊莉.5-HTP和5-HT含量測(cè)定方法的建立[J].廣