las對(duì)草千金急性毒性及超氧化物歧化酶活性的影響

隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們生活水平的提高，不同的洗劑在工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用，每年都產(chǎn)生了很大的價(jià)值。洗滌劑的重要組成成分是表面活性劑,十二烷基苯磺酸鈉(LAS)是目前使用最普遍的陰離子表面活性劑。陰離子表面活性劑十二烷基苯磺酸鈉(LAS)隨著生活污水和工業(yè)廢料等大量排入自然水體,造成水生生物不能正常生長(zhǎng),破壞了水體環(huán)境的生態(tài)平衡。十二烷基苯磺酸鈉(LAS)作為水體中的常見污染物,已被列為《城鎮(zhèn)污水處理廠污染物排放標(biāo)準(zhǔn)》(GB18918-2002)的基本控制項(xiàng)目。盡管十二烷基苯磺酸鈉(LAS)在水體中易生物降解,但是LAS在環(huán)境中的吸附、沉淀和生物降解等遷移行為十分復(fù)雜。已有研究表明,LAS在環(huán)境和生物體內(nèi)有累積,在低濃度條件下對(duì)魚類產(chǎn)生慢性毒性。河流和湖泊中的表面活性劑污染十分嚴(yán)重,對(duì)漁業(yè)和人們的生活健康具有潛在危害。因此研究陰離子表面活性劑(LAS)對(duì)魚類的毒性效應(yīng)十分必要。水生生物毒性試驗(yàn)在研究水體中化學(xué)污染物的環(huán)境效應(yīng)方面有著重要作用。魚類作為對(duì)水中發(fā)生的各種物理、化學(xué)和生物性的變化反應(yīng)十分靈敏的一種水生生物,是水生生物毒性試驗(yàn)經(jīng)常選取的受試對(duì)象之一。表面活性劑對(duì)魚的急性毒性研究和對(duì)魚的各項(xiàng)生理指標(biāo)的影響不斷被報(bào)道,研究結(jié)果表明表面活性劑對(duì)魚類有較大毒性,會(huì)對(duì)魚的生理指標(biāo)產(chǎn)生影響因此,本研究以草金魚為試驗(yàn)對(duì)象,通過(guò)急性毒性試驗(yàn)研究LAS對(duì)魚類產(chǎn)生毒害作用的表現(xiàn),找出產(chǎn)生不良影響的閾濃度。為進(jìn)一步研究陰離子表面活性劑對(duì)草金魚的毒性機(jī)制,本試驗(yàn)以SOD活性變化為評(píng)價(jià)指標(biāo),通過(guò)采用暴露實(shí)驗(yàn)法,研究在亞急性條件下陰離子表面活性劑對(duì)草金魚肝臟組織中SOD活性的影響,目的是為了利用魚體內(nèi)的酶活性變化來(lái)評(píng)價(jià)陰離子表面活性劑對(duì)水生生物的毒性效應(yīng),為水環(huán)境中該類化合物污染的早期預(yù)報(bào)和防治提供參考依據(jù)。1試驗(yàn)材料和方法1.1放養(yǎng)和飼養(yǎng)水水質(zhì)好的魚本試驗(yàn)受試魚為草金魚,從鄭州市滎陽(yáng)市王村鎮(zhèn)北黃河灘養(yǎng)殖場(chǎng)購(gòu)買,平均體長(zhǎng)為3.4cm,平均體重為1.2g。試驗(yàn)用的草金魚是從養(yǎng)殖場(chǎng)運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室的魚苗,首先用自來(lái)水將魚苗馴養(yǎng)7天,自來(lái)水需經(jīng)曝氣脫氯24h才能使用。馴養(yǎng)水溫為(15±1.0)℃(預(yù)試驗(yàn)與正式試驗(yàn)水溫與馴養(yǎng)時(shí)相同),pH為7.0~8.0,溶解氧為9.0mg/L,馴養(yǎng)水水質(zhì)符合魚的生活水質(zhì)要求。馴養(yǎng)期間需喂食和換水。喂食頻率為兩天一次,定時(shí)喂取,換水頻率為一天一次。期間及時(shí)清理魚屎并撈出死魚。試驗(yàn)前1d和試驗(yàn)期間不再喂食和換水。試驗(yàn)所用表面活性劑為十二烷基苯磺酸鈉,純度為分析純,分子式C1.2測(cè)試方法1.2.1草咸魚ld患者正式試驗(yàn)前應(yīng)首先進(jìn)行預(yù)備試驗(yàn)試驗(yàn)期間,每天兩次定時(shí)測(cè)定試驗(yàn)數(shù)據(jù),詳細(xì)觀察草金魚中毒時(shí)的癥狀和活動(dòng)情況并記錄。在試驗(yàn)開始的24,48,72,96h分別記錄試驗(yàn)草金魚的死亡數(shù)(是用撈魚的網(wǎng)觸碰魚,無(wú)反應(yīng)即可判定為死亡),根據(jù)草金魚的死亡率,用直線內(nèi)插法求出半致死濃度。1.2.2las對(duì)sod活性的影響試驗(yàn)采用靜水式試驗(yàn),根據(jù)96h半致死濃度(LC1.2.3組織活性的測(cè)定在試驗(yàn)開始96h后,撈出魚缸內(nèi)活魚殺死,迅速將魚的肝臟組織取出,放入冰冷的生理鹽水中洗凈血液,再用濾紙吸干水分。準(zhǔn)確稱取組織重量,按照重量(g):體積(ml)=1:9的比例加入9倍體積的生理鹽水,剪碎組織,在研缽中充分研磨制備勻漿。以3000r/min的轉(zhuǎn)速用離心機(jī)離心10min,取上清液即10%勻漿上清液測(cè)定SOD。SOD活性的測(cè)定采用SOD試劑盒及酶標(biāo)儀介紹的方法。在本反應(yīng)體系中,SOD以每毫克組織中SOD抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的酶量為一個(gè)SOD活力單位(U),即U/mg組織。2結(jié)果分析2.1身體擺動(dòng)情況對(duì)草金魚的急性毒性試驗(yàn)表明,水中的LAS質(zhì)量濃度越高,草金魚的中毒現(xiàn)象越明顯,死亡的速度越快數(shù)量越多。試驗(yàn)開始時(shí),魚缸內(nèi)的魚表現(xiàn)出不同的活動(dòng)情況,一部分魚活動(dòng)遲緩,另一部分魚易受驚嚇在魚缸內(nèi)亂竄。隨著中毒時(shí)間的延長(zhǎng),一部分魚游動(dòng)出現(xiàn)傾斜的情況,逐步喪失活動(dòng)能力,活動(dòng)進(jìn)一步遲緩,即使用網(wǎng)去觸碰也不躲避;另一部分魚則出現(xiàn)發(fā)顫的情況,游動(dòng)過(guò)程中身體搖動(dòng)不止。高濃度區(qū)的草金魚慢慢停止活動(dòng),直至死亡。表1記錄了LAS對(duì)草金魚急性毒性試驗(yàn)的致死數(shù)據(jù)和LAS對(duì)草金魚的半致死濃度。以LAS的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),草金魚的死亡率為縱坐標(biāo)繪制死亡百分率對(duì)試驗(yàn)物質(zhì)濃度的曲線,該曲線為一條S形的關(guān)系曲線,從引起50%死亡率的內(nèi)插濃度值得到值。由表1可知,LAS對(duì)草金魚24h,48h,72h,96h的半致死質(zhì)量濃度分別為12.2mg/L,9.8mg/L,8.8mg/L,8.6mg/L,LAS對(duì)魚表現(xiàn)出較強(qiáng)的毒性。表面活性劑是一種可溶特殊的脂類化合物。其分子結(jié)構(gòu)一端為親水基團(tuán),一端為疏水基團(tuán),因此具有親水性和親脂性。程呂柏2.2las對(duì)草咸魚體內(nèi)sod酶活性的影響由表2可知,肝臟組織中SOD酶活性在LAS質(zhì)量濃度為3.6mg/L時(shí)影響顯著。LAS質(zhì)量濃度低于3.6mg/L時(shí),肝臟組織中SOD酶活性高于空白組的SOD酶活性。LAS質(zhì)量濃度高于3.6mg/L時(shí),肝臟組織中的SOD酶活性迅速降低且低于空白組的SOD酶活性。雷鳴LAS質(zhì)量濃度低于3.6mg/L時(shí),由試驗(yàn)組和空白組的酶活力值對(duì)比結(jié)果可知,LAS肝臟中SOD酶活性得到提高。這是因?yàn)槭榛交撬徕c(LAS)對(duì)草金魚的細(xì)胞造成傷害,產(chǎn)生高于正常值的超氧自由基,為了維持細(xì)胞的正常生理功能SOD酶提高活性以清除多余的超氧自由基。但是SOD酶消除能力是有限的,且其正常發(fā)揮功能必須滿足酶蛋白結(jié)構(gòu)不被破壞。LAS質(zhì)量高于3.6mg/L時(shí),草金魚肝臟中產(chǎn)生的超氧自由基過(guò)多,超出了SOD酶的消除能力,同時(shí)酶蛋白結(jié)構(gòu)被破壞,SOD酶功能受損,SOD