精品文檔精品文檔AHA12GAGGAGAGGAFFFFAFAFAHA12GAGGAGAGGAFFFFAFAFAHA12GAGGAGAGGAFFFFAFAFAHA12GAGGAGAGGAFFFFAFAF移植性腫瘤動物模型目前臨床所使用的抗腫瘤藥物，大多數(shù)是通過動物移植性腫瘤實驗法篩選而被發(fā)現(xiàn)的，移植性腫瘤動物模型是現(xiàn)代腫瘤研究中應(yīng)用的最廣最有價值的模型。其優(yōu)點包括：（1）可使一群動物被同時接種同樣量的瘤細(xì)胞，生長速率比較一致，個體差異較小，接種成活率近100%；（2）對宿主的影響相類似，易于客觀判斷療效；（3）可在同種或同品系動物中連續(xù)移植，長期保留供試驗用；（4）試驗周期一般較短，試驗條件易于控制等。但是這類腫瘤生長速度快、增殖比高、體積倍增時間短、腫瘤生命性質(zhì)簡單，與人類腫瘤具有明顯不同；特別是與人類的致死性實體惡性腫瘤生命性質(zhì)、與生長發(fā)生機制差異更大。存在著能夠為現(xiàn)代腫瘤基礎(chǔ)生命科學(xué)研究模擬人類惡性腫瘤綜合生命性質(zhì)的局限性、片面性。現(xiàn)在世界上保有近500種的動物移植瘤，但常用于篩藥的不到40種，多數(shù)為小鼠腫瘤，其次是大鼠和倉鼠移植瘤，包括小鼠L1210淋巴白血病，艾氏腹水瘤，F(xiàn)riehd病毒白血病，肉瘤180，Lewis肺癌，腺癌755，白血病615，白血病P388，Walker-256,吉田肉瘤，肉瘤45,Liol淋巴瘤，Dunning白血病，白血病L5170Y,P1534淋巴白血病，P1798淋巴肉瘤，LPC-1漿細(xì)胞瘤，淋巴瘤8，Gardner淋巴肉瘤，B16或Cloadman黑色素瘤，Ridaway骨肉瘤，肉瘤37，P315白血病，Wagner癌肉瘤，Murhy-sturm淋巴肉瘤，Jensen肉瘤，Geurin氏癌，倉鼠十二指腸腺癌和人體肉瘤HSL第1代雜交鼠移植。它們對抗癌藥作用的敏感性大致可分為敏感，中度敏感，低敏感和不敏感瘤株四類，同樣敏感株對抗癌藥的療效水平也不相同。（1）實驗動物的選擇：移植性腫瘤常用的動物為清潔級小鼠、大鼠和地鼠等，每批動物都應(yīng)有一定的微生物及遺傳背景，來源明確，根據(jù)瘤株的要求選用近交系、遠(yuǎn)交系或雜交第一代（F1）動物，一般雌雄皆可（乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌必須用雌性動物），但每批實驗只用一個性別。（2）實驗一般要求：需在無菌環(huán)境下進行?？稍诮臃N罩、層流工作臺或無菌室內(nèi)操作。動物處死后，新潔爾滅或碘酊、酒精消毒，對每個實體瘤應(yīng)分別用滅菌的外科器械切??；對腹水瘤應(yīng)滅菌的空針筒抽吸。瘤塊污染常是接種失敗的主要原因。在高溫季節(jié)，應(yīng)注意瘤源的直接降溫，可在盛有瘤源的器皿周圍放置冰塊。3)常用的皮下接種部位為右前肢腋下；肌肉接種常注射于大腿肌肉部；腹水型接種于腹腔內(nèi)。3)精品文檔精品文檔精品文檔精品文檔AHA12GAGGAGAGGAFFFFAFAFAHA12GAGGAGAGGAFFFFAFAF【腫瘤移植操作步驟】腫瘤的移植1）瘤懸液移植法：（1）選擇接種后腫瘤生長旺盛且無潰破而且動物健康狀況較好的瘤源動物，頸椎脫臼處死，固定于蠟板上，用碘酊、酒精消毒操作部位皮膚（消毒面積要盡可能大一些）。切開皮膚，在無菌條件下取下瘤塊。（2）將瘤塊去除壞死組織，稱重，剪成小塊，用玻璃勻漿器或機械勻漿器研磨均勻后放入無菌容器內(nèi)，按照1：3~1：4的比例加入生理鹽水，稀釋成瘤細(xì)胞懸液，使其細(xì)胞數(shù)為（1~2）*107個/ml。（3）用碘酊、酒精消毒動物的接種部位，用空針筒抽吸0.2ml細(xì)胞懸液，注射于接種部位。每次抽吸前應(yīng)將細(xì)胞懸液混勻，整個操作應(yīng)在30min內(nèi)完成。2）培養(yǎng)細(xì)胞的移植法：（1）將單層培養(yǎng)的細(xì)胞消化脫壁后稀釋為一定濃度的細(xì)胞懸液2）對細(xì)胞懸液進行活細(xì)胞計數(shù)，方法如下：用新配制的2）0.05％伊紅或0.1％臺盼藍(lán)生理鹽水溶液．將細(xì)胞懸液稀釋、混勻后在血球計數(shù)盤上計數(shù)．染色者為死細(xì)胞、不染色為活細(xì)胞。按照計數(shù)結(jié)果將細(xì)胞懸液稀釋至每毫升（1~2）*107個細(xì)胞。（3）用碘酊、酒精消毒動物的接種部位，用空針筒抽吸0.2ml細(xì)胞懸液，注射于接種部位。每次抽吸前應(yīng)將細(xì)胞懸液混勻，整個操作應(yīng)在30min內(nèi)完成。【移植性腫瘤研究法舉例】1.腋皮下接種實體瘤模型：【實驗原理】以小鼠肉瘤S180為實驗?zāi)Ｐ?，接種于同種宿主的前肢腋皮下，給予一定劑量的有抗癌活性的藥物，可以抑制腫瘤在體內(nèi)的生長。本方法也適用于LL、B16、Hep等實體型移植性腫瘤模型，常用于抗腫瘤生長藥物的研究。【操作步驟】取接種于小鼠約7~10天的S180腫瘤，無菌條件操作，剔除包膜和壞死部分，選取完好的瘤塊，至于玻璃勻漿器或機械勻漿器內(nèi)，加入適量的生理鹽水，配制成瘤細(xì)胞懸液，細(xì)胞數(shù)為（1~2）*107/ml，接種于同種異體小AHA12GAGGAGAGGAFFFFAFAF鼠前肢腋皮下，雄性體重18~22g，雌性體重17~21g，每次實驗均用同一性別，每只小鼠注射0.2ml,—般實驗可用10只動物為一組。實驗第0天，接種動物。第一天，將動物稱體重及隨機分組并開始給藥,包括實驗用藥,陰性對照（相應(yīng)溶劑）及陽性對照藥,可用腹腔或灌胃給藥,。至第11~14天,動物稱體重,并剖取各組動物的腫瘤,稱重,最后統(tǒng)計各組動物的抑瘤率。精品文檔精品文檔精品文檔精品文檔Lewis肺癌自發(fā)肺轉(zhuǎn)移模型【實驗原理】Lewis肺癌為一株惡性程度較高的自發(fā)性肺內(nèi)未分化上皮樣癌，受體鼠為C57BL/6。移植瘤主要通過血行散播在肺部形成轉(zhuǎn)移灶。移植于皮下、肌肉或者足趾等特定部位，移植瘤增殖形成原位瘤，若給予一定劑量的有抗癌活性的藥物，則可抑制腫瘤在體內(nèi)的生長。隨后腫瘤細(xì)胞開始侵襲周圍的正常組織和血管，繼之癌細(xì)胞進入血液循環(huán)轉(zhuǎn)運至靶器官，粘附于血管壁上并穿過血管，癌細(xì)胞增殖成集落，最后形成轉(zhuǎn)移瘤。上述過程基本類似于人類腫瘤從生長到轉(zhuǎn)移瘤形成所經(jīng)歷的一系列步驟，故稱之為癌的自發(fā)肺轉(zhuǎn)移模型。常規(guī)接種對藥物的敏感性較低，但可向肺自發(fā)轉(zhuǎn)移。如采用其培養(yǎng)細(xì)胞或制成的單細(xì)胞懸液尾靜脈注射接種，則屬于人工肺轉(zhuǎn)移，也可在肺部形成腫瘤集落，它可用于腫瘤轉(zhuǎn)移機制的探討和抗腫瘤生長和轉(zhuǎn)移藥物的篩選和研究?！静僮鞑襟E】取皮下接種10~14d的腫瘤作為瘤源，制成(1~2)*107/ml單細(xì)胞懸液，進行常規(guī)腋皮下接種(2*106~4*106/0.2ml),接種于同種異體小鼠，體重18~24g,AHA12GAGGAGAGGAFFFFAFAF6~7周齡?；蛘呒?xì)胞數(shù)為2*106/ml，尾靜脈接種，每支小鼠0.2ml,接種次日開始治療。腋皮下或肌肉接種的實驗，其處理方法同S180。第21~30天結(jié)束實驗，稱動物體重，并剖取動物的腫瘤,稱重,統(tǒng)計各組動物的抑瘤率；觀察肺轉(zhuǎn)移瘤和小鼠的生命延長效應(yīng),數(shù)轉(zhuǎn)移瘤集落數(shù),稱肺重,計算自發(fā)性轉(zhuǎn)移肺集落的抑制率,還可計算肺平均重量。肺轉(zhuǎn)移率%=（1-給藥組平均肺集落數(shù)/對照組平均肺集落數(shù)）*100%【實驗說明】B16小鼠黑色素瘤人工肺轉(zhuǎn)移模型【實驗原理】B16是C57BL/6小鼠耳根部皮膚上發(fā)現(xiàn)的自發(fā)性黑色素瘤,以后又在該瘤株中篩選出肺部高轉(zhuǎn)移的集落株,小鼠靜脈內(nèi)移植后主要形成肺轉(zhuǎn)移瘤,肺外轉(zhuǎn)移極少。該瘤細(xì)胞注入靜脈內(nèi),在短時間內(nèi)直接把大量瘤細(xì)胞輸入血液循環(huán),不經(jīng)過癌轉(zhuǎn)移的前幾個過程,故稱為“人工轉(zhuǎn)移”模型,以區(qū)別于“自發(fā)性轉(zhuǎn)移”模型。該模型體現(xiàn)了腫瘤細(xì)胞進入血液循環(huán)后癌轉(zhuǎn)移的幾個步驟,對于研究腫瘤細(xì)胞在AHA12GAGGAGAGGAFFFFAFAF精品文檔精品文檔精品文檔精品文檔AHA12GAGGAGAGGAFFFFAFAFAHA12GAGGAGAGGAFFFFAFAFAHA12GAGGAGAGGAFFFFAFAFAHA12GAGGAGAGGAFFFFAFAF循環(huán)系統(tǒng)中的生成能力，瘤細(xì)胞附著、穿越靶器官血管的能力和探討癌轉(zhuǎn)移的器官特異性則有其獨特的優(yōu)勢?！静僮鞑襟E】取體外對數(shù)生長期的B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞，經(jīng)胰酶消化，以磷酸緩沖液配置成瘤細(xì)胞懸液，濃度為2.5*105/ml,相應(yīng)宿主尾靜脈接種0.2ml/只。隨機分組進行實驗，3周后以頸椎脫臼法處死小鼠，稱小鼠