細(xì)胞融合技術(shù)(jìshù)

第三節(jié)第一頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt本節(jié)目標(biāo)(mùbiāo)1．通過(guò)閱讀了解細(xì)胞融合技術(shù)的一般原理，知道細(xì)胞融合的幾種誘導(dǎo)方法(fāngfǎ)。

2．掌握細(xì)胞融合技術(shù)在育種上的應(yīng)用，比較細(xì)胞融合技術(shù)育種與常規(guī)的雜交育種的優(yōu)缺點(diǎn)。

3．提出自己的單克隆抗體的制備方案，通過(guò)討論和相互評(píng)價(jià)，在自主探究中，掌握單克隆抗體的制備技術(shù)及應(yīng)用，體驗(yàn)科學(xué)家的科學(xué)探索過(guò)程。4、植物體細(xì)胞雜交及應(yīng)用【重點(diǎn)、難點(diǎn)】1、細(xì)胞融合技術(shù)的一般原理，知道細(xì)胞融合的幾種誘導(dǎo)方法。2、單克隆抗體的制備方案。3、植物體細(xì)胞雜交及應(yīng)用第二頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt一.細(xì)胞融合技術(shù)(jìshù)閱讀課本第30-31頁(yè)內(nèi)容，回答問(wèn)題：1.什么(shénme)叫細(xì)胞融合技術(shù)？

2.常用的人工誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法有哪幾種？哪一種重復(fù)性強(qiáng)，對(duì)原生質(zhì)體傷害小，方法簡(jiǎn)單，可控性強(qiáng)？用人工方法誘導(dǎo)細(xì)胞融合，并在一定條件下使融合細(xì)胞分化再生(zàishēng)，形成新物種或新品種的過(guò)程。物理法：離心、振動(dòng)、電融合技術(shù)（電刺激。傷害小，可控性強(qiáng)）化學(xué)法：用聚乙二醇（ＰＥＧ）誘導(dǎo)滅活的病毒：仙臺(tái)病毒、皰疹病毒等（適合動(dòng)物）第三頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt動(dòng)物細(xì)胞(xìbāo)融合（細(xì)胞(xìbāo)雜交）－2個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程細(xì)胞(xìbāo)A細(xì)胞(xìbāo)B雜種細(xì)胞滅活的病毒物理法化學(xué)法仙臺(tái)病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒離心振動(dòng)電激聚乙二醇融合后形成的細(xì)胞稱(chēng)為雜交細(xì)胞第四頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt用滅活的病毒(bìngdú)誘導(dǎo)動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程細(xì)胞核病毒顆粒細(xì)胞核第五頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt細(xì)胞(xìbāo)電融合儀第六頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt第七頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt抗體(kàngtǐ)是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？2.抗體是如何產(chǎn)生的？？二.動(dòng)物(dòngwù)細(xì)胞融合與單克隆抗體第八頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt讀下面一段文字資料(zīliào)，思考以下問(wèn)題：長(zhǎng)期以來(lái)，為了獲得抗體，采用的是把某種抗原反復(fù)注射到動(dòng)物體內(nèi)，然后從動(dòng)物血清中分離出所需抗體的方法。用這種方法獲得的抗體，不僅產(chǎn)量低，而且抗體的特異性差，純度低，反應(yīng)(fǎnyìng)不夠靈敏。人們發(fā)現(xiàn)，在動(dòng)物發(fā)生免疫反應(yīng)的過(guò)程中，體內(nèi)的B細(xì)胞可以產(chǎn)生多達(dá)百萬(wàn)種以上的特異性抗體，但是每個(gè)B細(xì)胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個(gè)B細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖，即克隆。第九頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt

1、請(qǐng)從以上文字(wénzì)資料中找出單克隆抗體的概念用單個(gè)B細(xì)胞進(jìn)行克隆，得到(dédào)的細(xì)胞群能夠分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體，這種抗體就叫做單克隆抗體。（一）單克隆抗體(kàngtǐ)概念第十頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt1、如何(rúhé)獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？單克隆抗體(kàngtǐ)問(wèn)題(wèntí)討論提示：1.什么樣的細(xì)胞可以產(chǎn)生抗體？2.什么樣的細(xì)胞可以無(wú)限增殖？第十一頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt

設(shè)計(jì)方案：一個(gè)(yīɡè)B淋巴細(xì)胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞－－能無(wú)限增殖雜種(zázhǒng)細(xì)胞單克隆抗體(kàngtǐ)第十二頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選pptB淋巴細(xì)胞注射特定(tèdìng)抗原蛋白骨髓瘤細(xì)胞(xìbāo)培養(yǎng)(péiyǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種類(lèi)型？融合細(xì)胞幾種類(lèi)型？骨髓瘤細(xì)胞---骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞---B淋巴細(xì)胞B淋巴細(xì)胞---骨髓瘤細(xì)胞多種雜交細(xì)胞在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)專(zhuān)一抗體檢驗(yàn)陽(yáng)性克隆上述雜交細(xì)胞分開(kāi)不同雜交細(xì)胞，克隆專(zhuān)一抗體，檢驗(yàn)陽(yáng)性細(xì)胞單克隆抗體注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)（二）、單克隆抗體的制備過(guò)程第1次篩選目的：得到雜交瘤細(xì)胞（多種）。第2次篩選目的：在雜交瘤細(xì)胞中篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。該細(xì)胞繼承雙親細(xì)胞的遺傳特性，既能產(chǎn)生專(zhuān)一抗體又能無(wú)限增殖。雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？特異性強(qiáng)，靈敏度高第十三頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt腹腔(fùqiāng)注射法第十四頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt①診斷疾?。ㄗR(shí)別作用(zuòyòng)，如同位素標(biāo)記單克隆抗體，可診斷腫瘤、心血管畸形等）（三）單克隆抗體(kàngtǐ)的應(yīng)用優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易(jiǎnyì)、快速②用于治療疾病和運(yùn)載藥物（主要用于癌癥治療，也可運(yùn)載藥物，如“生物導(dǎo)彈”）（導(dǎo)向作用，作為載體，生物導(dǎo)彈=單克隆抗體+藥物，治療腫瘤）（位置準(zhǔn)確、療效高、副作用?。┰\斷乳腺癌單克隆抗體第十五頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt小結(jié)(xiǎojié)兩個(gè)(liǎnɡɡè)過(guò)程動(dòng)物(dòngwù)細(xì)胞融合過(guò)程動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程“一二三”二次篩選—篩選雜交瘤細(xì)胞、能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞一個(gè)新細(xì)胞——雜交瘤細(xì)胞三個(gè)優(yōu)勢(shì)——產(chǎn)量大、特異性強(qiáng)、靈敏度高(理化性質(zhì)單一)的優(yōu)勢(shì)單克隆抗體第十六頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt三、植物體細(xì)胞雜交技術(shù)(jìshù)與作物育種第十七頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt雜交的兩個(gè)(liǎnɡɡè)細(xì)胞用纖維素酶、果膠酶處理細(xì)胞壁（酶解法）原生質(zhì)體Ａ、Ｂ經(jīng)離心、振動(dòng)、電刺激用聚乙二醇（ＰＥＧ）誘導(dǎo)融合后的原生質(zhì)體再生(zàishēng)細(xì)胞壁雜種(zázhǒng)細(xì)胞脫分化細(xì)胞分裂愈傷組織雜種植株再分化（植物體細(xì)胞融合完成的標(biāo)志）植物細(xì)胞融合植物組織培養(yǎng)第十八頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt白菜甘藍(lán)白菜－甘藍(lán)第十九頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt植物體細(xì)胞(xìbāo)雜交意義？p33細(xì)胞融合技術(shù)可以避免受精過(guò)程，在親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的物種(wùzhǒng)間實(shí)現(xiàn)基因轉(zhuǎn)移，創(chuàng)造出自然界沒(méi)有的新物種(wùzhǒng)。意義：克服(kèfú)遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，實(shí)現(xiàn)種間遺傳物質(zhì)的重組第二十頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt2、動(dòng)植物細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們雜交(zájiāo)或融合過(guò)程有什么影響？3、植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合(rónghé)常用的方法有哪些？離心、振動(dòng)、電激等物理方法(fāngfǎ)；聚乙二醇誘導(dǎo)等化學(xué)方法問(wèn)題討論動(dòng)物細(xì)胞無(wú)細(xì)胞壁，動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程中不須去除細(xì)胞壁和再生出細(xì)胞壁。１、植物體細(xì)胞雜交最終得到的是完整的植物個(gè)體，動(dòng)物細(xì)胞融合后能形成雜種動(dòng)物個(gè)體嗎？

不能，只能得到雜交細(xì)胞第二十一頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt4、動(dòng)物細(xì)胞融合能利用(lìyòng)上述兩類(lèi)方法嗎？還有其他方法嗎？能，還可以(kěyǐ)利用滅活的病毒（生物方法）進(jìn)行誘導(dǎo)問(wèn)題(wèntí)討論５、動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？相同，都是細(xì)胞膜的流動(dòng)性第二十二頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt問(wèn)題(wèntí)討論7、植物(zhíwù)細(xì)胞融合有什么意義？6、為什么要用滅活的病毒(bìngdú)？病毒一般對(duì)生物體是有傷害的。仙臺(tái)病毒物理或化學(xué)方法喪失感染活性保留融合活性克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，實(shí)現(xiàn)種間遺傳物質(zhì)的重組。第二十三頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt免疫(miǎnyì)小鼠培養(yǎng)(péiyǎng)骨髓瘤細(xì)胞融合(rónghé)B淋巴細(xì)胞注射特定抗原蛋白選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)專(zhuān)一抗體檢驗(yàn)陽(yáng)性專(zhuān)一抗體檢驗(yàn)陽(yáng)性注射到小鼠體內(nèi)體外培養(yǎng)單克隆抗體克隆雜交細(xì)胞分開(kāi)不同雜交細(xì)胞，克隆專(zhuān)一抗體，檢驗(yàn)陽(yáng)性細(xì)胞多種雜交細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞有何特點(diǎn)？本過(guò)程利用的那些技術(shù)？動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是否注射抗原（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細(xì)胞有幾種類(lèi)型？幾種融合細(xì)胞？?jī)纱魏Y選的目的分別是什么？（二）、單克隆抗體制備過(guò)程與傳統(tǒng)制備的抗體相比具有什么特點(diǎn)？第二十四頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt植物體細(xì)胞雜交(zájiāo)與動(dòng)物細(xì)胞融合的比較細(xì)胞工程植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合實(shí)質(zhì)內(nèi)容改變遺傳物質(zhì)、產(chǎn)生新的性狀，獲得細(xì)胞產(chǎn)品(使后代具有雙親的特性)理論基礎(chǔ)細(xì)胞膜的流動(dòng)性;植物細(xì)胞全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性;細(xì)胞增殖誘導(dǎo)手段物理法：離心、振動(dòng)、電激化學(xué)法：聚乙二醇物理法：離心、振動(dòng)、電激化學(xué)法：聚乙二醇生物法：滅活的病毒誘導(dǎo)過(guò)程去細(xì)胞壁(纖維素酶、果膠酶)↓原生質(zhì)體融合(獲得雜種原生質(zhì)體)↓植物細(xì)胞培養(yǎng)(獲得植株)獲得分離的單個(gè)動(dòng)物細(xì)胞(胰蛋白酶處理)↓誘導(dǎo)融合↓動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)(細(xì)胞產(chǎn)品)應(yīng)用獲得白菜-甘藍(lán)等雜種植物主要用于單克隆抗體的制備(雜交瘤細(xì)胞)第二十五頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt

1.下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計(jì)(shèjì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中B為_(kāi)_______過(guò)程，常用_________作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承___________的遺傳特性，既能__________,又能___________。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是__________3、A是從小鼠的脾臟中取得_______,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生______5、C過(guò)程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過(guò)程包括_____培養(yǎng)和_____培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中_____代以?xún)?nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。制備(zhìbèi)單克隆抗體B細(xì)胞(xìbāo)抗體細(xì)胞融合滅活病毒雙親細(xì)胞分泌抗體無(wú)限增殖原代傳代50B骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群A體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔C體外培養(yǎng)不能，未對(duì)小鼠免疫處理第二十六頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt2.人CD20單克隆抗體是治療一些惡性腫瘤的特效藥物，目前主要是通過(guò)(tōngguò)培養(yǎng)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的方式生產(chǎn)。我國(guó)科學(xué)家已培育出世界上第一頭轉(zhuǎn)入了CD20抗體基因的轉(zhuǎn)基因牛，可以從它產(chǎn)的牛奶中直接提取CD20抗體。這項(xiàng)技術(shù)成熟后，有望使這一特效藥的生產(chǎn)成本降至現(xiàn)在的1/10。請(qǐng)回答：

(1)單克隆抗體的制備過(guò)程需先將_____________________和______________融合，這一過(guò)程的誘導(dǎo)方法與植物體細(xì)胞雜交不同的是_________________。(2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要在含__________________混合氣體的培養(yǎng)箱中進(jìn)行，培養(yǎng)液中通常需加入________________等一些天然成分。(3)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的核心是______________________。該過(guò)程用到的工具酶有____________________和_____________。經(jīng)過(guò)(jīngguò)免疫的B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞(xìbāo)用滅活的病毒誘導(dǎo)95%O2加5%CO2動(dòng)物血清重組載體的構(gòu)建限制性核酸內(nèi)切酶(限制酶)DNA連接酶第二十七頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt3.野生馬鈴薯品種的植株具有較強(qiáng)的抗病、抗蟲(chóng)、抗鹽堿、抗寒能力，但塊莖不能食用。俄、德、芬蘭專(zhuān)家共同做實(shí)驗(yàn)研究，用野生馬鈴薯與馬鈴薯的體細(xì)胞進(jìn)行雜交，培育出了生活(shēnghuó)能力強(qiáng)的雜交系馬鈴薯。據(jù)圖分析回答問(wèn)題：(1)①過(guò)程植物細(xì)胞原生質(zhì)體的分離需經(jīng)過(guò)酶解，其中“酶解”所用的酶應(yīng)該(yīnggāi)包括________________。(2)②過(guò)程可用聚乙二醇(PEG)，其目的是______________________。纖維素酶、果膠酶誘導(dǎo)(yòudǎo)原生質(zhì)體融合第二十八頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt(3)請(qǐng)用文字和箭頭表示出④⑤技術(shù)過(guò)程的實(shí)驗(yàn)流程：_____________________________________________。由此過(guò)程可以看出植物細(xì)胞有形成完整個(gè)體的可能性，這是__________________的表現(xiàn)。(4)在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時(shí)間后，原生質(zhì)體會(huì)再生出細(xì)胞壁。可以取樣，通過(guò)__________________________實(shí)驗(yàn)來(lái)鑒別細(xì)胞壁是否已經(jīng)再生。(5)請(qǐng)說(shuō)明運(yùn)用植物體細(xì)胞雜交(zájiāo)法的最大好處：_______________________________________________。融合(rónghé)細(xì)胞愈傷組織幼苗植物(zhíwù)細(xì)胞具有全能性植物細(xì)胞的質(zhì)壁分離與復(fù)原可以克服不同生物遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙第二十九頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt4．下圖為細(xì)胞融合的簡(jiǎn)略過(guò)程，請(qǐng)據(jù)圖回答：(1)若A、B是植物細(xì)胞，在細(xì)胞融合之前已用_______________處理，除去______；A、B到細(xì)胞C的過(guò)程中，常用的物理方法是________________。融合完成的標(biāo)志是_______________.(2)若A、B是植物細(xì)胞，則形成的D細(xì)胞還要應(yīng)用(yìngyòng)______________技術(shù)把D培養(yǎng)成植株。(3)若A、B是動(dòng)物細(xì)胞，一般取自___________________________________,然后用___________使其分散開(kāi)來(lái)，A、B到C的過(guò)程中，常用的不同于植物細(xì)胞的手段是________________，所形成的D稱(chēng)為_(kāi)_________(4)若該過(guò)程是制備單克隆抗體，A為小鼠B淋巴細(xì)胞，那么，在獲得此細(xì)胞之前，小鼠已被注射了_____，注射后小鼠身體產(chǎn)生了相應(yīng)的__________，生成了_______________。圖中B為_(kāi)________________。(5)若該過(guò)程仍是制備單克隆抗體，在A、B到C的過(guò)程中，所形成的C有______種，用來(lái)培養(yǎng)的D的細(xì)胞應(yīng)該是_____________。從中選擇出它的方法是________________培養(yǎng)，獲得D后，常用的培養(yǎng)方法是______________和________________。纖維素酶和果膠酶細(xì)胞壁電刺激、振動(dòng)(zhèndòng)、離心

產(chǎn)生(chǎnshēng)細(xì)胞壁植物組織培養(yǎng)動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的器官或組織胰蛋白酶滅活的病毒誘導(dǎo)雜交細(xì)胞效應(yīng)B細(xì)胞抗原抗體和記憶細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞3雜交瘤細(xì)胞用特定的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增殖(1)AB(2)CD第三十頁(yè)，共三十二頁(yè)。精選ppt5.（09山東）人類(lèi)在預(yù)防與診療傳染性疾病中，經(jīng)常使用疫苗和抗體。已知某傳染性疾