抗體檢測技術(shù)抗體檢測技術(shù)免疫酶技術(shù)免疫熒光技術(shù)凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)放射免疫測定蛋白印跡免疫共沉淀親和力測定

凝集反應(yīng)

凝集反應(yīng)是指顆?？乖c相應(yīng)抗體結(jié)合反應(yīng)出現(xiàn)的可見性現(xiàn)象。顆?？乖缤暾募?xì)菌、紅細(xì)胞等與相應(yīng)抗體相混合，在一定條件下出現(xiàn)凝集。凝集反應(yīng)中抗原稱為凝集原，抗體稱為凝集素。沉淀反應(yīng)1、絮狀沉淀反應(yīng)2、環(huán)狀沉淀反應(yīng)3、雙向擴(kuò)散4、單向免疫擴(kuò)散雙向擴(kuò)散法的操作：生理鹽水配制1%-5%的瓊脂，取4mL倒在顯微鏡用的載玻片上，凝固后打孔，中心孔滴入抗原，外周孔滴入抗體用于測定抗體效價，中心孔滴入抗體，外周孔滴入抗原，用于檢測抗原的存在和定性抗原。抗原抗體為單一體系時，抗原濃度不同，沉淀弧的特征不同：抗原抗體為多體系時，出現(xiàn)的沉淀弧有多條，彼此互不干擾。

酶聯(lián)免疫吸附測定實(shí)驗(yàn)

(ELISA)

Enzymelinkedimmunosorbentassay

實(shí)驗(yàn)原理ELISA利用了免疫反應(yīng)的高度特異性和酶促反應(yīng)的高度敏感性檢測抗原或抗體使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性按一定步驟進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)加底物顯色，根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺進(jìn)行定性或定量分析方法類型

ELISA既可測抗原又可測抗體，根據(jù)試劑來源、標(biāo)本性狀以及檢測的具體條件，可設(shè)計(jì)出不同類型的檢測方法：

1.直接法

2.間接法

3.雙抗體夾心法

4.雙夾心間接法A播sa謠nd證wi丹ch慣E唉LI趟SA.桑(1柄)范Pl莊at故e鑰is掏c闊oa瀉te集d擔(dān)wi請th瘡a斗c霸ap潑tu舊re趨a淋nt這ib賺od慨y;糧(疊2)傘s侵am搶pl脂e笨is屯a簽dd證ed劃,利an榴d舟an借y冤an愉ti絕ge去n攪pr恰es賭en斷t與bi肚nd甘s解to星c責(zé)ap聾tu蜻re僑a學(xué)nt滋ib結(jié)od刷y;山(槽3)龜d心et孕ec爬ti裹ng五a送nt近ib死od渣y賞is沿a鼻dd問ed批,則an忌d瓜bi殺nd后s極to豈a康nt時ig籠en湯;季(4綠)割en叮zy錢me盡-l窄in催ke窮d丸se家co價nd鑒ar符y雖an小ti疑bo允dy堵i殿s插ad剪de仿d,佛a洋nd皆b私in竄ds偶t托o頂de睬te窄ct漁in潤g緒an承ti認(rèn)bo芳dy曉;混(5仆)微su羽bs怎tr尖at坊e帶is掠a蒼dd均ed通,給an銳d定is愛c哨on恐ve襖rt至ed漆b街y眾en雜zy黃me惑t促o亞de書te做ct框ab暗le曾f電or仰m.一、晨試劑骨及儀潑器準(zhǔn)偶備（一倒）掀免犁疫吸誓附劑1.固相貪載體⑴箏要求者：①且吸附突力強(qiáng)②搞能念保持Ag或Ab活性③名不暗參與蟲化學(xué)賺反應(yīng)⑵載體井性能妥比較要求：載體踢材料+、-結(jié)果袋差別戚大檢測芹方法：10碧ug苗/L打I譜gG包被,加酶頂標(biāo)抗Ig狀G，顯污色后津，測20孔的OD，要屑求CV脊<1尋0%⑶常用嫌載體溉：材料：聚苯稻乙烯并、聚現(xiàn)乙烯扎、聚剪丙烯歪等形狀：小試敢管、償小珠驚、微遷量反晌應(yīng)板2.暢A刷g或Ab：純度火高、憤效價咬高、弄結(jié)合羅力高3.免疫信吸附奏劑(固相Ag或Ab照)：包被：將Ag或Ab固相絹化的零過程包被承緩沖拉液封閉：包被葡后在真用1-姨5%小?？缪逦瞻椎巴馨自倭焕?，以幣消除伐非特尤異吸開附的滲干擾㈡酶結(jié)想合物筒：1.要求臺：純度柔高、足催化團(tuán)轉(zhuǎn)化漿率高那、專虹一性軟強(qiáng)、罩性質(zhì)濾穩(wěn)定售、來替源豐致富、究標(biāo)記遺后穩(wěn)珠定2.常用違酶：HR揭P、AP、?-半乳餓糖苷純酶等3.底物咐：HR飯P可溶果性底眉物及榜呈色憐：鄰苯洗二胺(O憶PD液)：橙陷紅(4毛92蠅nm揮)；四怠甲基尤聯(lián)苯險胺(T受MB東)：藍(lán)剛色(4尿50掩nm進(jìn))5-氨基宵水楊岡酸(5鍵-A吹SA次)：棕端色(5職50耗nm診)魯咪購諾+H媽2O星2：熒型光HR途P不可近溶性珠底物釘及呈君色：DA山B：棕致黃色α-萘酚朝：紅負(fù)色3-氧基-9煮-乙基仿卡唑鑒：紅擺色4-氯-1止-萘酚傍：灰均藍(lán)色AP可溶較性底旨物及渠呈色羽：對硝影基苯容磷酸厚酯(P廉-N倡PP淘)：黃婦色(4貴05青nm卡)溪4-甲基泛傘基季磷酸悄酯(4爛-M絮uP訊)：熒昂光AP不可晃溶性賄底物棋及呈窄色：NB撲T和BC怒IP混合舉液：候紫色疲堅(jiān)導(dǎo)固紅武和萘槐酚AS拒MX混合能液：叫紅色?-半乳革糖苷繁酶：4-甲基工傘基-?-半乳餐糖苷館：熒優(yōu)光4.酶結(jié)枯合物訓(xùn)的制霉備：戊二經(jīng)醛交清聯(lián)法過碘墻酸鹽具氧化僚法（三紐奉）設(shè)何備：酶標(biāo)黃比色架儀簡稱酶標(biāo)酬儀指測雹讀EL冬IS紐奉A(yù)光度銅計(jì)；挎針對碧固相備載體道形式西的不終同，執(zhí)各有曲特制橋的適國用于門板、滲珠和賠小試萌管的別設(shè)計(jì)性能左指標(biāo)：測身讀速何度、絨讀數(shù)塵的準(zhǔn)潛確性猛、重勿復(fù)性迅、精積確度曾和可優(yōu)測范五圍、餅線性優(yōu)良課的酶填標(biāo)儀劣的讀神數(shù)一危般可殼精確0.尿00霧1，準(zhǔn)擠確性碗為±1蛾%，重魚復(fù)性然達(dá)0.送5%操作：室輕溫宜頃在15耍-3破0℃，使鍋用前雕先預(yù)辱熱儀條器15謙-3目0m茶in，測捆讀結(jié)肯果更裙穩(wěn)定盡。測輸讀A值時多，要庸選用塑產(chǎn)物漁的敏隱感吸惕收峰壇，如OP坊D用49窄2n迎m波長長。有船的酶跌標(biāo)儀景可用免雙波灑長式找測讀用途Dr促D材en問ni票s蹄E如Bi倍dw塵el涉l麗an幸d哈Al哭is糞te裹r哭Vo死ll裁er鳥c擠re木at恨ed夏t烘he劃E墳LI爭SA總t伙es斗t蔑to腦d昆et什ec謊t俗va矩ri凡ou限s舉ki腫nd裹o呆f啟di撲se漢as衡es敞,毯su堪ch無a詞s琴ma戰(zhàn)la貴ri蝴a,離C活ha驕ga謊s五di叢se磨as曬e,拐a營nd樸J耕oh業(yè)ne經(jīng)'s召d芝is斬ea綁se以.瓜EL診IS譯A檔te貝st吳s金al敏so劑a瓦re候u感se毀d統(tǒng)as噴i鵲n影in帶v剝it將ro證d醉ia閱gn蹄os使ti贊cs寶i敏n欣m(xù)e海di新ca增l麥la泡bo膚ra窄to廁ri蔬es送.蝕Th閱e依ot桂he頑r戚us蠻es旱o干f這EL哲IS乓A難in預(yù)cl反ud搭e:de砍te危ct匙io懸n魯of里M獅yc壯ob敬ac踐te標(biāo)ri猴um匙a梅nt勸ib壁od伙ie跟s幫in莖t化ub職er避cu攝lo朱si惡sde悠te瓣ct迅io須n臥of企r瓜ot傭av蔥ir仇us呢i悄n報(bào)fe喬ce菠sde軌te翅ct燃io社n較of關(guān)h獎ep今at棚it甚is泉B第m著ar啄ke態(tài)rs舅i大n茶se網(wǎng)ru膚mde徑te棟ct濫io術(shù)n徐of疊e控nt顏er采ot鉗ox瓶in丙o焰f付E.白c禮ol革i秀in互f魔ec中esWE扣ST頂ER突N監(jiān)BL盞OT步驟襪：試劑糖準(zhǔn)備能：1、SD吧S-足PA虛GE試劑:見電徐泳實(shí)低驗(yàn)。2、勻誤漿緩耕沖液位：1.貼0M禽T案ri晨s-逃HC航l(擦pH療6拴.8挺)1迅.O電ml；10柄%S肥DS味6滅.0產(chǎn)ml；β-巰基悶乙醇0.針2m專l；dd筒H2O妨2.糧8m顏l。3、轉(zhuǎn)由膜緩粘沖液背：甘郊氨酸2.陽9g；Tr城is稱5牲.8盤g；SD駛S尋0.臣37尋g；甲謝醇20鏡0m仗l；加dd殘H2O定容土至10厚00軌ml。4、0.先01盆M飯PB擴(kuò)S(纖pH涌7.椒4)：Na網(wǎng)Cl凝8邀.0趴g；KC想l鋤0.仔2g；Na2HP躍O4傍1陵.4往4g；KH2PO秩4睜0.匠24革g；加dd隨H2O至10具00迫ml。5、膜區(qū)染色近液：悅考馬燭斯亮爪蘭0.瘡2g；甲硬醇80勒ml；乙賀酸2m輪l；dd熊H2O1罩18耀m存l。包躬被液唇（5%脫脂橋奶粉繡，現(xiàn)碌配）犬：脫得脂奶碗粉1.鏡0g溶于20弊ml的0.暈01韻M向PB壘S中。6、顯結(jié)色液笑：DA撿B捎6.韻0m風(fēng)g；0.習(xí)01復(fù)M掃PB灑S素10飯.0宴ml；硫趟酸鎳極胺0.黨1m掙l；H2021.渣0μl。樣品認(rèn)制備含量恢測定SD遍S－PA泛GE電泳轉(zhuǎn)膜免疫醋反應(yīng)化學(xué)黑發(fā)光類風(fēng)錘濕因軍子類風(fēng)達(dá)濕因石子（rh冤eu峽ma落to削id也f誕ac臣to居r,細(xì)RF）可聚分為Ig救M、Ig截A、Ig堂G、Ig線D、Ig耀E五型晶（注尾：在開臨床圣內(nèi)科淋學(xué)中識描述獨(dú)為四含型，梢沒有Ig梳D型；煙但在沒實(shí)驗(yàn)云室診教斷學(xué)不中描著述為5型）策，是貴類風(fēng)炒濕關(guān)貨節(jié)炎蹤蝶血清拉中針禽對Ig掘G本FC片段曉上抗勺原表喂位的悄一類飯自身還抗體顯，類誘風(fēng)濕判因子浙陽性餡患者另較多部伴有火關(guān)節(jié)困外表挖現(xiàn)，秘如皮住下結(jié)鐘節(jié)及席血管駐炎等漢。類風(fēng)碑濕因播子約90肯%類風(fēng)抽濕性瞇關(guān)節(jié)全炎（RA）患柔者的RF呈陽凱性。Ig鹿A-昏RF與骨儀質(zhì)破痛壞有界關(guān)，府早期Ig相A-嚼RF升高沒常提贏示病婆情嚴(yán)伴重，中預(yù)后漠不良混；Ig辟E-序RF升高屑時，浸已屬擾病情質(zhì)晚期染。某些砍自身陸免疫做病，頭如冷縱球蛋吉白血改癥、球進(jìn)行患性全掛身性武硬化境癥、閃干燥奮綜合忽征、SL六E等患糞者都鳳有較杯高的披陽性癢率；孤一些秧其他熊疾病梅如血頂管炎患、肝廚病、理慢性削感染躬也可拼出現(xiàn)RF。類風(fēng)乎濕因市子近年辨來對Ig鄉(xiāng)豐M型類研風(fēng)濕旅因子酸的生脆物作纏用已步有所斯了解聽，這核些生磚物作耍用包畜括：1、調(diào)圖節(jié)體踢內(nèi)免贏疫反餡應(yīng)；2、激殲活補(bǔ)效體，奸加快它清除湊微生學(xué)物感族染