醫(yī)學(xué)微生物學(xué)之病毒篇病毒學(xué)基本原理（二）病毒學(xué)基本理論二√√病毒致病作用病毒感染的檢查方法抗病毒免疫病毒感染的治療4病毒感染的特異性預(yù)防23病毒的感染與免疫第章每一個病毒必須決解的三個問題如何在感染細(xì)胞后進(jìn)行自身的增值；如何逃避宿主的防御性攻擊；如何從一個個體向另一個個體傳播；

病毒的致病作用只是它為了解決其復(fù)制、逃逸和傳播三個問題所采取策略造成的結(jié)果。一、病毒感染的傳播方式病毒感染的傳播方式水平傳播（horizontaltransmission):

病毒在人群不同個體間的傳播，引起水平感染。垂直傳播（verticaltransmission):病毒直接由親代傳給子代，引起垂直感染。

呼吸道消化道眼或泌尿生殖道破損皮膚輸血、注射或器官移植經(jīng)胎盤、圍產(chǎn)期水平傳播垂直傳播病毒感染的傳播方式

多數(shù)病毒單一途徑進(jìn)入機(jī)體，少數(shù)病毒可多途徑進(jìn)入機(jī)體，如HIV。二、病毒感染的致病機(jī)制病毒感染的致病機(jī)制1病毒在機(jī)體里的生命活動對宿主細(xì)胞的影響3病毒在機(jī)體里為了生存而采取的免疫逃逸策略2感染病毒后，機(jī)體免疫防御造成的免疫損傷

1、病毒對宿主細(xì)胞的致病作用穩(wěn)定感染狀態(tài)細(xì)胞凋亡包涵體形成243基因整合/細(xì)胞轉(zhuǎn)化51殺細(xì)胞效應(yīng)1.1殺細(xì)胞效應(yīng)（cytocidaleffect）又稱“殺細(xì)胞感染”（cytocidalinfection），無包膜病毒/殺傷性強病毒C.影響細(xì)胞溶酶體：釋放溶酶體酶——細(xì)胞溶解

(又稱溶細(xì)胞性感染)

A.阻斷細(xì)胞大分子合成：早期蛋白

B.某些病毒衣殼蛋白的直接殺傷作用Question病毒的殺細(xì)胞效應(yīng)可以觀察到嗎？細(xì)胞病變作用（cytopathiceffect,CPE）1.2穩(wěn)定感染狀態(tài)（steadystateinfection）多為有包膜病毒，如流感病毒、皰疹病毒等膜表面有病毒抗原細(xì)胞融合病毒感染后，形成多核巨細(xì)胞宿主細(xì)胞膜發(fā)生變化1.3包涵體（inclusionbody）形成

病毒復(fù)制或轉(zhuǎn)錄過程中形成的復(fù)合物、病毒裝配過程中出現(xiàn)的中間體，以及核衣殼等均可在宿主細(xì)胞的某一部分積聚形成包涵體。內(nèi)基小體（Negribody）1.4細(xì)胞凋亡（appotosis）細(xì)胞凋亡是由基因控制的程序性細(xì)胞死亡，為正常的生物學(xué)現(xiàn)象。病毒編碼蛋白可間接誘導(dǎo)、調(diào)控宿主細(xì)胞凋亡程序。1.5基因整合和細(xì)胞轉(zhuǎn)化

嗜肝DNA病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒，在其復(fù)制過程中，可將病毒DNA整合至細(xì)胞染色體中，導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)化。

這種轉(zhuǎn)化往往與腫瘤的形成密切相關(guān)。如EBV、HBV、HHV-2和-8、HPV-6、11、16和18、HTLV-1等可誘發(fā)15%的人類腫瘤；

至少100種病毒能引起動物惡性腫瘤。2、病毒感染的免疫病理作用炎性因子的病理作用31抗體介導(dǎo)的免疫病理損傷細(xì)胞介導(dǎo)的免疫病理損傷2免疫抑制作用42.1抗體介導(dǎo)的免疫病理作用Ⅱ型變態(tài)反應(yīng)

病毒侵入細(xì)胞誘發(fā)細(xì)胞表面出現(xiàn)新抗原與特異性抗體結(jié)合+補體參與

細(xì)胞破壞Ⅲ型變態(tài)反應(yīng)2.2細(xì)胞介導(dǎo)的免疫病理作用1細(xì)胞免疫也損傷宿主細(xì)胞，造成功能紊亂2與宿主細(xì)胞有共同的抗原，造成自身免疫疾病

Ⅳ型超敏反應(yīng)致敏T細(xì)胞(CTL)機(jī)體產(chǎn)生的抗體

共同抗原自身免疫病2.3致炎性細(xì)胞因子的病理作用INF-γ,TNF-α,IL-1

血管活化因子

休克、DIC等2.4免疫抑制作用病毒感染抑制免疫功能激活潛伏的病毒促進(jìn)腫瘤的生長病毒持續(xù)性感染3、病毒的免疫逃逸（escapeofimmuneresponses)反應(yīng)病毒毒力的重要因素免疫逃逸機(jī)制：

細(xì)胞內(nèi)寄生，或者形成合胞體抗原結(jié)構(gòu)多態(tài)性和變異損傷免疫細(xì)胞，或特異性抑制免疫反應(yīng)降低抗原的表達(dá)病毒的免疫增強作用

病毒進(jìn)入機(jī)體后，憑借其生命活動對宿主細(xì)胞、免疫系統(tǒng)造成各種各樣的損傷，同時，又不斷的進(jìn)化著自身的抗宿主免疫機(jī)制的能力，總之，其目的是為了保存它的生命力！而病毒能否對宿主造成實質(zhì)性的影響取決于：病毒株的毒力、病毒感染劑量、感染途徑以及宿主的免疫狀態(tài)！Question病毒進(jìn)入機(jī)體后會有怎樣的結(jié)局？三、病毒感染的類型病毒感染的類型流產(chǎn)感染：SV40－小鼠限制性感染：細(xì)胞暫時性感染，隨后不感染是否有臨床癥狀感染感染部位滯留時間★隱性感染（亞臨床感染）：不引起臨床癥狀；病毒攜帶者不產(chǎn)生免疫力，可成為重要傳染源。

顯性感染（臨床感染）：病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)大量增殖引起明顯的臨床癥狀。1、按是否有臨床癥狀：2、按感染部位：局部和全身性感染（局部增殖→血流→單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)增殖→血流→靶器官）3、按滯留時間急性病毒感染（actueviralinfection）

潛伏期短,發(fā)病急,病程短,病后體內(nèi)不留病毒，又稱病原消滅型感染?！锍掷m(xù)性病毒感染病毒持續(xù)存在體內(nèi),可有或無臨床癥狀而長期攜帶病毒,為重要傳染源。

持續(xù)性感染的原因機(jī)體免疫力弱1病毒隱蔽逃逸免疫2抗原性弱難以免疫3與宿主基因組整合5缺損性干擾顆粒4慢性感染(chronicinfection)

病程長病毒可檢出如HBV潛伏感染(latentinfection)經(jīng)感染后，病毒存在于組織細(xì)胞中，可反復(fù)激活，急性發(fā)作病毒只有在急性發(fā)作時才被檢出如VZV（水痘－帶狀皰疹病毒）慢發(fā)病毒感染(slowvriusinfection)潛伏期長，發(fā)病后為亞急性進(jìn)行性直至死亡尋常病毒：非尋常病毒：

盶粒

HIV、麻疹病毒持續(xù)性感染

病毒復(fù)制與機(jī)體免疫應(yīng)答

病毒感染類型病毒入侵?jǐn)?shù)量大且大量復(fù)制重癥臨床發(fā)病及死亡病毒侵入機(jī)體，大量復(fù)制和產(chǎn)生強免疫應(yīng)答，明顯病理反應(yīng)典型臨床感染輕型臨床癥狀病毒侵入機(jī)體復(fù)制和免疫應(yīng)答，但未引起明顯的病理反應(yīng)隱性感染或亞臨床感染病毒侵入機(jī)體清除且無免疫應(yīng)答暴露后未感染病毒感染結(jié)局的示意圖四、病毒與腫瘤病毒與腫瘤病毒與人類腫瘤發(fā)生關(guān)系密切。致腫瘤病毒：人乳頭瘤病毒HPV（良性人疣）人類嗜T細(xì)胞病毒HTLV（人T細(xì)胞白血病）腫瘤相關(guān)病毒：

HBV、HCV、EB、HPV、HSV-2、HHV-8等。病毒與腫瘤病毒是腫瘤誘導(dǎo)劑，但腫瘤不是病毒感染的必然結(jié)果。病毒使細(xì)胞生長去調(diào)節(jié)，細(xì)胞轉(zhuǎn)化成致癌表型，可致動物腫瘤，或僅轉(zhuǎn)化，不具備體內(nèi)致瘤能力。細(xì)胞轉(zhuǎn)化并非致瘤的必須步驟。長時間無限增殖細(xì)胞比正常細(xì)胞更易于突變或基因重排。Question還記得機(jī)體免疫系統(tǒng)的組成嗎？宿主的免疫防御系統(tǒng)天然屏障非特異性免疫系統(tǒng)特異性免疫系統(tǒng)侵襲性病原體五、抗病毒的固有免疫非特異性天然免疫-干擾素(interferon,INF)

在誘生劑和某些細(xì)胞因子的作用下，由宿主基因編碼產(chǎn)生的一組糖蛋白，具有高度的活性和多種功能。INF的生物活性作用

①抗病毒作用★種屬特異性

★廣譜

★產(chǎn)生早

②免疫調(diào)節(jié)作用

★活化NK細(xì)胞、Tc細(xì)胞③抗腫瘤作用★抑制細(xì)胞分裂INF種類干擾素(interferon,INF)

編碼基因位于人細(xì)胞中，Ⅰ型位于第9對染色體短臂上，Ⅱ型位于第12對染色體長臂上；正常處于抑制狀態(tài)。

病毒、細(xì)菌內(nèi)毒素、人工合成的雙鏈RNA等誘生劑可誘導(dǎo)INF的產(chǎn)生。INF的抗病毒作用機(jī)理

不直接作用于病毒，而作用于宿主細(xì)胞基因，合成抗病毒蛋白，抑制病毒蛋白合成。

抗病毒蛋白抑制病毒作用示意圖NK細(xì)胞

無特異性，無MHC限制，不依賴抗體，分泌穿孔素(perforin)。六、病毒感染的適應(yīng)性免疫適應(yīng)性免疫-徹底清除病毒體液免疫抗體中和病毒；血凝抑制抗體、補體結(jié)合抗體；預(yù)防病毒感染和再感染中起重要作用；細(xì)胞免疫毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）；CD4+Th1細(xì)胞；在病毒感染中起重要作用；

1、中和抗體中和抗體(virusneutralizingantibodies):由病毒衣殼或包膜抗原刺激產(chǎn)生；與病毒結(jié)合（封閉抗原表位或改變表面構(gòu)型），阻止吸附，保護(hù)細(xì)胞免受感染,防止病毒隨血流播散。

中和抗體的保護(hù)作用▲不能直接滅活病毒

▲起預(yù)防而非治療作用▲對細(xì)胞內(nèi)病毒無效血凝抑制抗體(haemagglutinationinhibitionantibodies，HIAb):含血凝素抗原誘發(fā)，如流感和乙腦病毒HIAb可中和病毒的感染性補體結(jié)合抗體(complementfixationantibodies):病毒內(nèi)部抗原或表面非中和抗原誘發(fā)，調(diào)理作用增強巨噬細(xì)胞的吞噬作用，輔助診斷。

其他抗體的作用2、細(xì)胞免疫針對細(xì)胞內(nèi)病毒細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)直接作用：識別病毒抗原的同時必須識別細(xì)胞膜上的MHC抗原，分泌細(xì)胞因子(cytotoxin)淋巴毒素,趨化因子，IL-2，γ-IFN，TNF等，殺傷靶細(xì)胞。CD4+Th1細(xì)胞：釋放細(xì)胞因子IL-2，γ-IFN，TNF等七、抗病毒免疫持續(xù)時間持續(xù)時間的影響因素有病毒血癥的全身性病毒感染：二次病毒血癥，病毒廣泛接觸免疫系統(tǒng)，病毒免疫牢固，持續(xù)時間長，如水痘、麻疹；只有單一血清型的病毒感染，免疫力牢固，時間長，如乙腦，而鼻病毒相反；易發(fā)生病毒抗原變異，短暫免疫；24病毒感染的檢查方法與防止原則第章一、病毒感染的檢查方法病毒感染的診斷原則原則：特異、敏感、快速、簡便

首先根據(jù)流行病學(xué)和臨床特點，初步判斷可能感染的病毒。然后根據(jù)可疑病毒的生物學(xué)特點、機(jī)體免疫應(yīng)答和臨床過程，以及病人當(dāng)前所處的時機(jī)，確定實驗診斷方法。標(biāo)本的采集與運送1、標(biāo)本的采集與送檢:檢查成敗的關(guān)鍵。2、標(biāo)本采集：急性期標(biāo)本標(biāo)本處理：使用抗生素標(biāo)本送檢：冷藏、快速送檢

血清學(xué)檢查應(yīng)采雙份標(biāo)病毒的分離病毒的人工培養(yǎng)必需在活細(xì)胞內(nèi)增殖。動物接種：早期對病毒生物學(xué)特性研究的主要方式，現(xiàn)僅限于研究病毒或毒株的致病性或為確切診斷病原體為病毒。雞胚接種細(xì)胞培養(yǎng)

登革病毒對新生乳鼠的致病作用1-3日齡乳鼠接種病毒6日后，小鼠陸續(xù)出現(xiàn)體弱、弓背、行動遲緩等癥狀。動物接種

9-14day，受精雞胚(embryonatedeggs)①絨毛尿囊膜接種(allantocherioninoculation)②尿囊腔接種(allantoiccavityinoculation)③羊膜腔接種(amnioticcavityinoculation)：流感病毒初次分離④卵黃囊接種(yolksacinocaulation)雞胚接種細(xì)胞培養(yǎng)是目前分離病毒及了解病毒生物學(xué)特性和病毒疫苗生產(chǎn)的主要工具。原代細(xì)胞培養(yǎng)：來自動物或人組織直接用蛋白酶消化所獲得的細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后可貼壁或懸浮生長。對病毒易感性高，主要作為從標(biāo)本中分離病毒的工具。二倍體細(xì)胞株：在體外連續(xù)50-100代后仍保持其二倍染色體數(shù)目的單層細(xì)胞。傳代細(xì)胞株：可連續(xù)傳代的細(xì)胞系或來自腫瘤組織或來自發(fā)生自動轉(zhuǎn)化的原代細(xì)胞系。

病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖的檢查與鑒定1、增殖指征：

細(xì)胞變化

紅細(xì)胞吸附

細(xì)胞代謝改變

Question細(xì)胞感染病毒后會有哪些變化？1、細(xì)胞病變效應(yīng)

(CPE)：細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等；2、多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞：如麻疹病毒作用于細(xì)胞膜，可使鄰近的細(xì)胞相互融合；3、包涵體：如狂犬病病毒、麻疹病毒等可在培養(yǎng)細(xì)胞中形成胞漿或核內(nèi)的包涵體；細(xì)胞的變化病毒包涵體的類型

紅細(xì)胞吸附流感或副流感病毒等感染細(xì)胞后，由于細(xì)胞膜上出現(xiàn)了血凝素，具有吸附脊椎動物(豚鼠、雞、猴等)紅細(xì)胞的能力，這一現(xiàn)象稱紅細(xì)胞吸附。測定正粘病毒與副粘病毒的增殖。若有相應(yīng)的抗血清，則能中和細(xì)胞膜上